Jasminum Sambac-celleekstrakt som antioxidant-booster mod hudens aldring, del 1

Abstrakt: Oxidativt stress spiller en stor rolle i hudens ældningsprocessen gennem produktion af reaktive oxygenarter og dannelse af avancerede glycation slutprodukter (AGEs). Antioxidantingredienser er derfor nødvendige på hudplejemarkedet, og brugen af ​​molekyler fra plantecellekulturer giver en unik mulighed. I dette papir blev funktionerne i en hydroethanolisk ekstrakt opnået af Jasminum sambac-celler (JasHEx) undersøgt. Antioxidant- og anti-AGE-egenskaberne blev undersøgt ved en multidisciplinær tilgang, der kombinerer massespektrometriske og bio-informatiske in vitro og ex vivo eksperimenter. JasHEx indeholder phenolsyrederivater, lignaner og triterpener, og det viste sig at reducere produktionen af ​​cytosoliske reaktive oxygenarter i keratinocytter udsat for eksogen stress. Det viste også evnen til at reducere AGE-dannelse og øge kollagen type I-produktion i den ekstracellulære matrix. Data viste, at JasHEx antioxidantegenskaber var relateret til dets frie radikaler og metalchelaterende aktiviteter og aktiveringen af ​​Nrf2/ARE-vejen. Dette kan godt forklare JasHEx antiinflammatorisk aktivitet relateret til faldet i NO-niveauer i LPS-stimulerede makrofager. Således kan JasHEx betragtes som en kraftfuld antioxidant-booster mod oxidativ stress-induceret hudældning.

Glycoside af cistanche kan også øge aktiviteten af ​​SOD i hjerte- og levervæv og signifikant reducere indholdet af lipofuscin og MDA i hvert væv, hvilket effektivt fjerner forskellige reaktive iltradikaler (OH-, H₂O₂ osv.) og beskytter mod DNA-skader forårsaget af OH-radikaler. Cistanche phenylethanoid glycosider har en robust fjernelsesevne af frie radikaler, en højere reducerende evne end C-vitamin, forbedrer aktiviteten af ​​SOD i spermsuspension, reducerer indholdet af MDA og har en vis beskyttende effekt på sædmembranens funktion. Cistanche polysaccharider kan øge aktiviteten af ​​SOD og GSH-Px i erytrocytter og lungevæv fra eksperimentelt senescent mus forårsaget af D-galactose, samt reducere indholdet af MDA og kollagen i lunge og plasma, og øge indholdet af elastin, har en god rensende effekt på DPPH, forlænge hypoksitiden hos senescent mus, forbedre aktiviteten af ​​SOD i serum og forsinke den fysiologiske degeneration af lunge hos eksperimentelt senescent mus Med cellulær morfologisk degeneration har forsøg vist, at Cistanche har den gode antioxidantevne og har potentialet til at være et lægemiddel til at forebygge og behandle hudaldringssygdomme. Samtidig har echinacosid i Cistanche en betydelig evne til at opfange DPPH-frie radikaler og kan opfange reaktive oxygenarter, forhindre frie radikal-induceret kollagennedbrydning og har også en god reparationseffekt på anionskader af thymin fra frie radikaler.

Klik på Hvor kan jeg købe Cistanche

【For mere information:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Nøgleord: ældning af huden; reaktive oxygenarter (ROS); avancerede glykeringsslutprodukter (AGE'er); Jasminum sambac hydroethanolisk ekstrakt (JasHEx); massespektrometri; metabolomics; Global Natural Product Social Molecular Networking (GNPS); nuklear faktor erythroid 2-relateret faktor 2 (Nrf2)

1. Introduktion

Genetiske iboende faktorer og ydre stoffer såsom ultraviolet bestråling, infrarød bestråling, xenobiotika og miljøforurenende stoffer forårsager produktionen af ​​reaktive oxygenarter (ROS). De genereres ved aktivering af den mitokondrielle respiratoriske kæde, cytochrom p450 og NADPH-oxidaser [1]. ROS omfatter frie radikaler (superoxidanion, hydroperoxylradikal, alkoxyradikal og hydroxylradikal) og ikke-radikalmolekyler (hydrogenperoxid og singlet oxygen) [2]. Når antioxidantsystemer overvældes, akkumuleres ROS i cellerne og genererer det såkaldte oxidative stress, der er en væsentlig bidragyder til hudens aldring [3].

Faktisk forårsager oxidativ stress både DNA-skade og lipid- og proteinoxidation sammen med udløsningen af ​​den mitogenaktiverede proteinkinaser (MAPK)-vej (AKT, JNK, ERK og p38) [4]. Dette fremmer igen ekspressionen af ​​pro-inflammatoriske cytokiner, vækstfaktorer og adhæsive molekyler gennem stimulering af transkriptionsfaktorerne AP-1 og NF-KB. Desuden forårsager MAPK pathway-aktivering dermale matrixændringer ved at reducere kollagenniveauet. Det accelererer kollagennedbrydning ved at modulere ekspressionen af ​​matrixmetalloproteinaser (MMP'er) og deres vævsinhibitorer TIMP'er, og det reducerer syntesen af ​​nyt kollagen ved at blokere TGF-type II-receptoren/Smad-signalering. Ud over dette ændrer oxidativ stress hudtilstande og forstyrrer den epidermale calciumgradient, der er afgørende for integriteten og funktionen af ​​den forhornede kappe, stimulerer talgkirtlernes funktion og inducerer melanocytdegeneration [5].

Parallelt hermed fremmer dannelsen af ​​modificerede biomolekyler kendt som avancerede glycation slutprodukter (AGEs) oxidativ stress i celler og væv [6]. Udviklingen af ​​disse aldrende biomarkører er induceret af forskellige miljøfaktorer såsom cigaretrøg, høje niveauer af raffinerede og simple kulhydratdiæter, højtemperatur kogte fødevarer og en stillesiddende livsstil; AGE'er er stabile og irreversible produkter afledt af den ikke-enzymatiske reaktion mellem reducerende sukkerarter og proteiner, nukleinsyrer eller lipider, efterfulgt af yderligere omlejringer [7]. Faktisk er udgangspunktet for AGE-dannelsen Maillard-reaktionen, hvor carbonylgrupper af reducerende sukkerarter reagerer reversibelt med frie aminogrupper af proteiner, nukleinsyrer eller aminophospholipid for at danne Schiff-baser. Disse iminer omarrangeres spontant til mere stabil ketamin, kaldet Amadori-produkter. De producerer reaktive dicarbonyler (som glyoxal eller methylglyoxal), der reagerer med lysin og arginin funktionelle grupper af proteiner, hvilket giver en lang række AGE'er [8,9]. De er klassificeret i forskellige grupper baseret på deres evne til at udsende fluorescens og danne tværbindinger.

AGE-virkning medieres af receptorerne for AGE'er (RAGE'er), som er transmembrane proteiner, der tilhører immunoglobulinsuperfamilien af ​​type I celleoverflademolekyler, udtrykt i forskellige celletyper, herunder keratinocytter, fibroblaster og makrofager. De bindende AGE'er/RAGE'er øger ROS-produktion hovedsageligt ved aktivering af NADPH-oxidaser (NOX'er) og den mitokondrielle respiratoriske kæde, hvilket fører til oxidativ stress og alle de ovenfor beskrevne følgevirkninger [6,8].

Desuden er ekstracellulære matrix (ECM) proteiner, især kollagen, meget følsomme over for glycation. Faktisk er niveauerne af AGE-strukturen pentosidin, afledt af kollagen, signifikant højere hos ældre end hos unge forsøgspersoner [10]. Kollagenglykering ændrer ikke kun de mekaniske egenskaber af selve kollagenet, som bliver stivere og mere skørt [11], men også egenskaberne af den ekstracellulære matrix, hvilket påvirker de residente cellers adfærd (vækst, differentiering, motilitet, genekspression og respons på cytokiner) og matrix-celle-interaktioner [12].

I dette scenarie er antioxidantingredienser i stor efterspørgsel på det kosmetiske område for at reducere AGE-dannelse og deres relaterede oxidative kaskade: ekstrakter afledt af arten Jasminum sambac, der tilhører Oleaceae-familien, er interessante for deres antioxidantegenskaber og deres fælles brug i folkemusik medicin til behandling af hudsygdomme [13]. Imidlertid udviser planteekstrakter adskillige ulemper, såsom dårlig bio-bæredygtighed, den potentielle forurening med pesticider, gødning eller patogener, og variationen i deres kvalitative og kvantitative sammensætning, påvirket af årstider og miljøforhold. Et gyldigt alternativ til planter, som en kilde til bioaktive kosmetiske ingredienser, er repræsenteret af plantecellekulturer, der tilbyder flere fordele: (i) høj bæredygtighed af produktionsprocessen, da der ikke er behov for landbrugsjord; ii) kontinuerlig forsyning af naturprodukter uden geografisk afhængighed, sæson og planters reproduktionscyklus; (iii) ingen risici for kontaminering med patogener, miljøforurenende stoffer og agrokemiske rester; (iv) standardiserede vækstbetingelser, der gør det muligt at opnå højere og mere reproducerbare hastigheder af biomasse og metabolitudbytte; (v) høj alsidighed, da koncentrationen af ​​forbindelser kan optimeres ved at ændre dyrkningsbetingelser og (vi) lettere og mindre tidskrævende ekstraktionsprotokoller, hvilket reducerer behovet for aggressive opløsningsmidler [14,15].

Her blev et hydroethanolisk ekstrakt afledt af Jasminum sambac cellekulturer (JasHEx) undersøgt. Formålet med vores undersøgelse er en bred kemisk og biologisk karakterisering af JasHEx, især udforskning af dets anti-glykerings- og anti-aldringsegenskaber. Først blev avancerede massespektrometrisk-baserede tilgange brugt til at opnå en detaljeret strukturel karakterisering af ekstraktet. Derefter blev der udført in vitro og ex vivo eksperimenter for at bevise JasHEx biologiske aktivitet som en antioxidant.

2. Materialer og metoder

2.1. Plantevævskulturer og ekstraktforberedelse

Certificeret arabisk jasmin (Jasminum sambac) blev opnået fra en lokal planteskole ("Ladre di Piante", Pistoia, Toscana-regionen, Italien). Jasminum sambac blade blev gennemblødt i 70 procent ethanol (Sigma Aldrich, St. Louis, MO, USA) i 1 min og overfladesteriliseret med 1 procent (v/v) kommercielt blegemiddel suppleret med Tween 2{{ 9}} (Sigma Aldrich, St. Louis, MO, USA) i 8 minutter, efterfulgt af tre skylninger i sterilt destilleret vand. Derefter blev bladene skåret ud i 0.5-1.0 cm stykker og dyrket på fuldstyrke MS-medium [16] indeholdende 3 procent (w/v) saccharose, 0 0,2 mg/L 2,4D og 8 g/L phyto-agar. Eksplantaterne blev månedligt subdyrket på et frisk medium i tre måneder. Når en gulgrøn, sprød og hurtigtvoksende callus var opnået, blev plantecellerne overført til det flydende MS-medium, suppleret med 3 procent (vægt/volumen) saccharose og 0,2 mg/L 2,4D. Suspensionen blev omrørt i en rystemaskine ved 110 pm og 27 ◦C i et mørkt klimarum. De mørkvoksne celler blev opskaleret hver uge fra små til storskala kolber, indtil flydende suspensionskulturer på ca. 177 g/l blev nået. Fremstillingen af ​​Jasminum sambac cellekultur hydroethanolekstrakt (JasHEx) blev udført ved tilsætning af 2000 ml af en opløsning af ethanol/vand (90/10, v/v) til 500 g celler. Blandingen blev homogeniseret i 3 minutter ved 1500 rpm og 6 minutter ved 3800 rpm under anvendelse af en Grindomix GM300 knivmølle (Retsch GmbH, Haan, Tyskland). Den opnåede suspension blev omrørt ved 400 rpm i 2 timer ved 25 ◦C, hvorved lyseksponering blev undgået. Suspensionen blev derefter centrifugeret ved 6300 rpm i 10 minutter ved 4 ◦C. Supernatanten blev fjernet, filtreret og derefter koncentreret under vakuum i en rotationsfordamper (IKA RV8, IKA-Werke GmbH & Co., Staufen, Tyskland) indstillet til 25 ◦C. Til sidst blev pH-værdien bragt til 7,0 med 10 N NaOH og derefter frysetørret, indtil der blev opnået et fint pulver.

2.2. UPLC–MS/MS-analyse til JasHEx kemisk karakterisering

En bifasisk butanol/vand-ekstraktion blev opnået. Butanolfraktionen blev tørret og optøet i methanol (10 mg/ml) før UPLC-MS/MS-analysen udført på et Q-Exactive Classic Mass Spectrometer udstyret med et UltiMate™ 3000 UPLC-system (Thermo Scientific, Waltham, MA, USA ). Alle de kromatografiske kørsler blev udført som allerede beskrevet af Ceccacci et al. [17].

2.3. Global Natural Products Social Molecular Networking Analyser

Til identifikation af metabolitter blev Global Natural Products Social Molecular Networking anvendt [18]. Alle de MS- og MSMS-signaler, der ikke var tildelt af GNPS, blev klogt undersøgt og tildelt i overensstemmelse med litteraturen. Råfiler blev konverteret til mzXML-format af MS Converter General User Interface-software før GNPS-spektralbibliotekssøgning. Det blev udført under anvendelse af precursorionmassetolerance på 0.025 Da, fragmentionmassetolerance på 0,02 Da, minimum matchede toppe på 2 og scoretærskel på 0,7. Resultaterne blev manuelt bekræftet.

Dataforbehandling blev udført af Mzmine (version 2.53, Softpedia, Bukarest, Rumænien) [19] og et funktionsbaseret molekylært netværk (FBMN) job [20] blev udført som rapporteret af Ceccacci et al. [17]. De opnåede netværksfiler blev importeret til Cytoscape (version 3.9.1, US National Institute of General Medical Sciences (NIGMS), Bethesda, MD, USA) [21].

2.4. Kvantitativ analyse af lignaner og triterpener

De samme UPLC-indstillinger angivet for de kvalitative eksperimenter blev anvendt til den kvantitative analyse af lignaner, mens de for triterpenerne blev forbedret til at adskille to par isomerer, arjunolsyre/asiatisk syre og oleanolsyre/ursolsyre. Analysen blev udført på et Q-Exactive Classic Mass Spectrometer som tidligere defineret. Adskillelsen blev udført af en Phenomenex Kinetex (Torrance, CA, USA) EVO C18 300 Å (150 × 2,1 mm, partikelstørrelse 5 µm). Den mobile fase bestod af A (5 mM vandig ammoniumacetatopløsning, pH 9.00 justeret med ammoniumhydroxid) og B (1{{40}}0 procent acetonitril) vha. en gradienteluering på 13-28 procent B efter 0-20 minutter, 28-65 procent B ved 20-24 minutter, 65-75 procent B ved 24-28 minutter, 75-95 procent ved 28-28,5 minutter, 95 procent ved 28,5 –32 min, 95-13 procent ved 32-32,1 min og 13 procent ved 32,1-44 min. Strømningshastigheden var 0,450 ml/min, og injektionsvolumenet var 5 µL. For både lignaner og triterpener blev data indsamlet med massemetoden beskrevet af Ceccacci et al. [17]. Vi købte nortachelogenin (#LCA52174) fra Biosynth Carbosynth, matairesinol (#80497) og maslinsyre (#83209) fra PhytoLab GmbH & Co.KG, secoisolariciresinol (#60372) og arjunolsyre (#SMB001) fra Sigint-Louis , MI, USA), asiatisk syre (#0027), oleanolsyre (#0041 S) og ursolsyre (#0037 S) fra Extrasynthèse (Genay, Frankrig). Kalibreringskurverne blev opnået ved at injicere standarder i en koncentration på 0,05 til 25 µM for lignaner og 0,1 til 25/250 µM for triterpener. Detektionsgrænsen (LOD) og kvantificeringsgrænsen (LOQ) for standarder blev bestemt baseret på signal-til-støj-forholdet (S/N).

2.5. Hudcellekulturer og -eksplantater

Udødeliggjorte humane keratinocytter (HaCaT), købt fra Addexbio Technologies (San Diego, CA, USA), blev konserveret i Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM; Sigma Aldrich, St. Louis, MO, USA), der blev suppleret med 10 procent føtalt bovint serum (FBS; Sigma Aldrich, St. Louis, MO, USA) i 95 procent luft, 5 procent CO2 og befugtet atmosfære ved 37 ◦C. Humane dermale fibroblaster (HDF) blev konserveret i Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM; Sigma–Aldrich, St. Louis, MO, USA) suppleret med 10 procent af føtalt bovint serum (FBS; Sigma–Aldrich, St. Louis, MO, USA) ) i 95 procent luft, 5 procent CO2 og befugtet atmosfære ved 37 ◦C. Hudeksplantater, opnået fra huden på raske kvindelige donorer (31 og 40 år) på operationscentret Villa Cinzia (Napoli, Italien), blev dyrket i 24-transwell plader i DMEM/FBS plus antibiotika under luft-væske forhold ved 37 ◦C i 5 procent CO2 befugtet luft. Alle donorer havde givet deres skriftlige informerede samtykke til brugen af ​​hudvævene ifølge Helsinki-erklæringen.

2.6. Cytosolic ROS-assay i H2O2-stressede HaCaT-celler

Til denne proces blev 1,8 × 104 HaCaT udsået i 96-brøndsplader og dyrket i 20 timer. Cellerne blev derefter behandlet i 2 timer med forskellige koncentrationer af JasHEx (0.0006 procent, 0.002 procent og 0.006 procent p/v) eller med 500 µM ascorbinsyre, brugt som den positive kontrol. Derefter blev de vasket i PBS (phosphatbufret saltvand) og inkuberet ved 37 ◦C med 100 µL/brønd af en opløsning indeholdende: 10 mM Hepes, 1,3 mM CaCl2, 1 mM MgSO4, 5 mM glucose og 5 µM CM-H2DCFDA (5-(og-6)-chlormethyl-20,70 -dichlordihydrofluoresceindiacetat, Invitrogen). Efter 45 minutter blev der udført en PBS-vask, og cellernes baseline-fluorescensintensitet blev målt ved 535 nm (excitation 485 nm) under anvendelse af instrumentet EnVision (PerkinElmer, Waltham, MA, USA). Derefter blev det oxidative stress induceret ved at tilsætte 450 µM H2O2, og fluorescensen af ​​prøverne blev målt efter 30 min.

2.7. Enzym-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) til AGE-detektion i Glyoxal Stressed Human Dermal Fibroblast (HDF) celler

Til dette trin blev 1,5 × 104 HDF udsået i 96-brøndsplader og dyrket i 2 dage. Efter vask med PBS blev celler fikseret i 1{{10}} min med 100 µL 4 procent formaldehyd i PBS. Efterfølgende blev de behandlet med JasHEx (0,0006 procent og 0,002 procent p/v) eller den positive kontrol af 1 µM Aminoguanidin i nærværelse af 0,5 procent glyoxal ved 50 ◦C i 1 uge. Efter inkubation blev de behandlet til en enzym-linked immunosorbent assay (ELISA) under anvendelse af et specifikt antistof mod AGE (Abcam ab23722).

2.8. ImmunoHistoFluorescence Assay på methyl-Glyoxal stressede hudeksplantater til fibrillin-1 påvisning

Hudeksplantater blev afledt fra to patienter, 31 og 40 år gamle. Fra hver hudbiopsi blev der genereret tre slag for hver behandling, der fandt sted ved luft-væske-grænsefladen. På den første dag blev stanserne behandlet med JasHEx (0.002 procent og 0,006 procent p/v) eller den positive kontrol (1 mM Aminoguanidin) og efter 24 timer, 500 µM methyl- glyoxal blev tilsat. Behandlingerne blev genopfrisket hver anden dag i i alt syv dage. Ved slutningen af ​​perioden blev stanserne behandlet til histologisk analyse, fikseret i 4 procent PFA, inkuberet i 15 procent saccharose, derefter i 30 procent saccharose og kryo-opbevaret i OCT-forbindelse (Optimal skæretemperatur) ved -80 ◦C . Kryosektion på 5 µm blev opnået med kryostaten CM1520 Leica (Leica Biosystems, Buffalo, IL, USA). Objektglas med kryosektioner blev hydreret i 30 minutter i PBS og anbragt i en "blokerende" opløsning (6 procent BSA, 5 procent serum, 20 mM MgCl2, 0,2 procent Tween) i 1 time. Efterfølgende blev de inkuberet med det primære anti-Fibrillin 1-antistof (MA5-12770, Thermo Scientific, Waltham, MA, USA). i 16 timer ved 4 ◦C. Objektglassene blev vasket med PBS i 30 minutter og derefter inkuberet med det sekundære anti-kanin Alexa-Fluor 546 antistof (A11035, Thermo Scientific, Waltham, MA, USA) i 1 time. Kernerne blev farvet med DAPI (40, 6-5 diamidino-2-phenylindol) 1 g/ml i PBS i 10 min. Billederne blev optaget med et fluorescensmikroskop og analyseret med ImageJ-softwaren (Version 1.53a, National Institutes of Health, USA).

2.9. AlphaLISA-analyse til måling af procollagen type I C-peptid (PIP) indhold

I dette trin blev 8 × 103 HDF udsået i en 96-brøndplade og behandlet i 24 timer med JasHEx (0.0006 procent , 0,002 procent , og 0,006 procent p/v) eller med TGF- (2,5 ng/ml). Efter behandling blev cellerne behandlet i overensstemmelse med instruktionerne fra alpha LISA hPIP collagen kit udbyderen (AL353HV, (PerkinElmer, Waltham, MA, USA)).

2.10. Nrf2 Luciferase-baseret transkriptionsaktiveringsassay

Her blev 6 × 103 HaCaT-celler i en 96-brøndsplade podet og dyrket i 16 timer. Derefter blev de udsat for et Nrf2 luciferase-baseret transkriptionsaktiveringsassay ved hjælp af ARE-reportersættet BPS Bioscience (San Diego, CA, USA, #60514). En transfektionsklar ARE-luciferase-reportervektor (indeholdende et ildflue-luciferasegen under kontrol af ARE-responsive elementer placeret opstrøms for en minimal promotor) sammen med en intern kontrol (en konstitutivt udtrykkende Renilla-luciferasevektor) blev transient co-transficeret ind i HaCaT-celler ved hjælp af X-TREME gen HP DNA-transfektionsreagens (Roche, Basilea, Schweiz, #6366244001). Efter transduktion i 24 timer blev celler behandlet i 2 timer med ekstraktet (0,0006 procent, 0,002 procent og 0,006 procent p/v) eller den positive kontrol Resveratrol (50 µM). Derefter blev de udsat for luciferaseassayet med Dual-Glo Luciferase Assay System (Promega, Rom, Italien #E2920). Kort fortalt blev celler inkuberet med ildflue-luciferasesubstrat i 10 minutter før måling af luminescens i en 96-brøndpladelæser (Victor Nivo, Waltham, MA, USA). Forholdet mellem luminescens fra ildflue og Renilla blev beregnet for at normalisere og sammenligne Nrf2 transkriptionel aktivitet.

2.11. Analyse af ekspressionen af ​​SOD-1(NM_000454.5) og OH-1(NM_002133.3) gener i HaCaT-celler

Til denne proces blev 1,5 × 105 HaCaT-celler pr. brønd dyrket i 6-brøndsplader i 16 timer og inkuberet i 6 timer med ekstraktet (0,002 procent og 0,006 procent p/v) eller 50 µM Resveratrol som den positive kontrol. Ved afslutningen af ​​inkubationen blev total-RNA ekstraheret ved hjælp af "GenElute™ Total RNA Purification"-kittet (fra Sigma-Aldrich (Saint Louis, MI, USA) og behandlet med DNase I (Thermo Scientific, Waltham, MA, USA) ved 37 ◦C i 30 min, for at fjerne genomisk DNA-kontaminant 500 ng total RNA blev retro-transskriberet ved hjælp af enzymet Reverse transcriptase (Thermo Scientific, Waltham, MA, USA). Semikvantitative RT-PCR'er blev udført under anvendelse af parret af universelle primere 18S primer/konkurrent (Invitrogen-Thermo Scientific, Waltham, MA, USA) som interne standarder PCR-produkterne blev separeret på 1,5 procent agarosegel og set under anvendelse af iBright-instrumentet (Invitrogen Thermo Scientific, Waltham, MA, USA). Sekvenserne af primerne anvendt til amplifikation var følgende: HsSOD1Fw: GAAAGTAATGGACCAGTGAAGG; HsSOD1Rv: ATTGGGCGATCCCAATTACACC; OH-1Fw GAACTTTCAGAAGGGTCAGG; OH-1Rv GCTCAATGTTGAGCA

2.12. Nitrogenoxidanalyse i LPS-stimuleret RAW 264.7

NO-koncentrationen blev bestemt i RAW 264.7 murine makrofager, podet i en koncentration på 1,5 × 105 celler/brønd i 96-brøndsplader i 24 timer og forbehandlet med ekstraktet ({{1 0}}.0006 procent, 0.002 procent og 0.006 procent p/v) eller med 10 µM TPCK (positiv kontrol) i 2 timer før inkubationen med 2 µg/ml LPS i 18 timer. Mængden af ​​NO, omdannet til nitrit, blev beregnet ved at tilsætte Griess-reagens (opløsning af N-(1-naphthyl)ethylendiamin og sulfanilsyre, Invitrogen-Thermo Scientific, Waltham, MA, USA) og efter 30 min. absorbansen blev målt ved 540 nm af multibrønd-pladelæseren (EnVision, PerkinElmer, Waltham, MA, USA)

3. Resultater

3.1. Kvalitativ og kvantitativ analyse af Jasminum sambac cellekultur hydro-ethanolekstrakt (JasHEx)

UPLC-MS/MS-analyse af JasHEx blev udført, og højopløsningsspektrometriske data blev analyseret ved hjælp af Global Natural Products Social Molecular Networking (GNPS), et webbaseret massespektrometrisystem, der hjælper med annotering af naturlige produkter (NP'er) [18] . Især blev et GNPS-spektralbibliotek udført for at opnå online dereplikation. Kemiske arter, der ikke er identificeret af GNPS, blev tildelt i overensstemmelse med litteraturen. Som vist i figur 1 og 2 og tabel 1 blev mere end 50 forbindelser, der tilhører flere klasser af sekundære metabolitter, hovedsageligt polyphenoler og terpener, identificeret. JasHEx-ekstrakt indeholder faktisk phenolsyrederivater, lignaner (secoisolariciresinol, nortrachelogenin og matairesinol) og triterpenoider (arjunolsyre, asparaginsyre, maslinsyre, oleanolsyre og ursolsyre).

【For mere information:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】