Forskningsfremskridt vedrørende klassificeringen af ​​diffust stort B-cellet lymfom

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Diffus storcellet B-celle lymfom (DLBCL) tegner sig for 25 procent til 35 procent af alle non-Hodgkin lymfomer og er en heterogen og aggressiv gruppe med forskellige kliniske, patologiske og biologiske træk. lymfom. Tidligere kliniske undersøgelser har identificeret rituximab, cyclophosphamid, doxorubicin, vincristin og prednison (R-CHOP) som den første linje standardbehandling for DLBCL-patienter, hvoraf 50 procent til 70 procent af patienterne kan, dog viser et stort antal patienter. refraktær eller fuldstændig remission og derefter tilbagefald, mens kun 10 procent af refraktære og recidiverende patienter kan helbredes ved traditionel salvage-immunokemoterapi kombineret med autolog hæmatopoietisk stamcelletransplantation, og de resterende 90 procent af patienterne har dårlige behandlingsresultater. Derfor er det blevet en kæmpe udfordring, hvordan man kan forbedre prognosen for disse patienter. På nuværende tidspunkt er der også kliniske undersøgelser, der diskuterer kombinationen af ​​andre lægemidler (såsom lenalidomid, ibrutinib osv.) på basis af R-CHOP for yderligere at forbedre effektiviteten, men der er ikke gjort væsentlige fremskridt. DLBCL har betydelig heterogenitet, så hvordan man stiller nøjagtige stratificerede diagnoser og vejleder individualiseret behandling er også et af de aktuelle forsknings-hotspots. Denne artikel opsummerer fremskridtet med DLBCL-klassificering.

cistamcheØg celleproliferationen

1. COO-typebestemmelse af DLBCL ved hjælp af genekspressionsprofileringschip

DLBCL har indlysende heterogenitet i cellemorfologi og prognose. I 2000 anvendte ALIZADEH og andre genchipteknologi til at screene og detektere 3 186 gener, der spiller en vigtig rolle i udviklingen, differentieringen og carcinogenese af lymfocytter og kortlagde genekspressionen af ​​DLBCL. Genekspressionsprofilen (GEP) viste, at DLBCL stammede fra B-lymfocytter på forskellige differentieringsstadier. Ifølge GEP kan DLBCL opdeles i to undertyper: germinal center B-celle-lignende (GCB) type og aktiveret B-celle-lignende (ABC) type. Efterfølgende undersøgelser af ROSENWALD et al. bekræftede også dette resultat. Efterfølgende undersøgelser omfattede flere tilfælde og flere typer genetisk screening og fandt, at nogle patienter ikke kunne bestemme kilden til celler, som var karakteriseret mellem to undertyper, kaldet type 3, også kendt som uklassificeret. For DLBCL af forskellig oprindelse fandt undersøgelsen, at den viste forskellige prognoser, blandt hvilke DLBCL afledt af GCB kunne opnå en længere overlevelsestid. Cellular-of-origin (COO) typning afslørede heterogeniteten af ​​DLBCL, og under R-CHOP-behandling var der signifikante forskelle i overlevelse blandt subtyper, hvilket gav et teoretisk grundlag for evaluering af prognose og regimevalg. GEP-testresultaterne baseret på genchipteknologi er i øjeblikket anerkendt som guldstandarden til at bedømme oprindelsen af ​​DLBCL-celler. Testresultaterne er de mest pålidelige, men de er dyre og kræver høje prøver, sædvanligvis friskfrosne levende vævsprøver, så operabiliteten er ikke stærk. Det er ikke udbredt i klinisk praksis.

2. Brug af NanoString-teknologi til COO-typning af DLBCL

NanoString (Fluorescent Barcode Labeled Single-Molecule Detection) er en ny high-throughput detektionsgenekspressionsprofileringsteknologi baseret på direkte måling af fluorescerende molekylære stregkoder på prober, efter at nukleinsyremolekyler hybridiserer til prober. Hvert stregkodemærke svarer til en specifik mRNA-sekvens, og op til 800 stregkoder kan måles i den samme prøve, mens det nødvendige prøvevolumen kan være så lavt som 100 ng RNA. NanoStrings digitale kvantificeringsteknologi eliminerer behovet for transskription, amplifikation eller bibliotekskonstruktion, eliminerer langvarige eksperimentelle procedurer og menneskelige ressourcer og minimerer potentiel skævhed introduceret af enzymatiske reaktioner. Til kliniske prøver med sparsomme prøver kan NanoString-teknologi direkte bruge paraffinindlejrede prøver til at kvantificere RNA uden RNA-ekstraktion. Denne tekniske fordel gør det mere praktisk i klinisk praksis. SCOTT et al. screenede 20 gener baseret på data fra GEP-typning og brugte NanoString-teknologi til at udføre COO-typning på 119 DLBCL-prøver. Konsistensen mellem forskningsresultaterne og "guldstandarden" nåede op på 95 procent, og patienter kan også opdeles i GCB-type, ABC-type og uklassificeret type, de to sidstnævnte omtales samlet som ikke-GCB-type, hvilket også viser, at prognosen for GCB-typen er bedre end den for ikke-GCB-typen. Andre undersøgelser baseret på NanoString-teknologi har yderligere bekræftet værdien af ​​denne teknologi i COO-typebestemmelsen af ​​DLBCL.

Traditionel kinesisk medicin urtcistamche, er også kendt som "ørkenginsengen"

3. COO-typning af DLBCL ved brug af kvantitativ PCR-teknologi

Både genchip-typning og NanoString-typning kræver dyrt specialudstyr, som er svært at anvende bredt i klinisk praksis. Kvantitativ PCR er en almindeligt anvendt metode til at verificere genekspression. Det har karakteristika af enkel betjening, høj følsomhed og præcision og kan fås fra paraffinindlejrede prøver. Li Xiaoqius team brugte kvantitativ PCR til at udføre storstilet klinisk validering i kinesiske patientpopulationer for første gang og udviklede et produkt, der er egnet til klinisk genetisk testning, nemlig DLBCL-COO Assay. I denne undersøgelse blev 32 gener signifikant relateret til DLBCL-COO-typning screenet i den offentlige database, og 160 patienter blev indskrevet, og derefter blev metoderne til immunhistokemi, kvantitativ PCR og genchip brugt til at påvise deres paraffin-indlejrede prøver og tilsvarende friske Vævsprøver, resultaterne viste, at DLBCL-COO-analyseresultaterne var 92 procent i overensstemmelse med "guldstandarden"; overlevelsesanalyse viste, at typebestemmelsesresultaterne af DLBCL-COO-analysen var signifikant korreleret med den samlede overlevelse, og prognosen for GCB-typen var signifikant bedre end for ABC-typen (P =0.023), hvilket er meget i overensstemmelse med indenlandsk og udenlandske forskningsresultater. Relativt set er metodeplatformen for typning ved brug af kvantitativ PCR-teknologi mere åben, operationen er enklere, og den er velegnet til rutineudvikling i de fleste molekylærpatologiske laboratorier.

4. COO-typebestemmelse af DLBCL ved immunhistokemi

For nogle områder, hvor midler og teknologier er knappe, er den GEP-baserede typningsteknologi svær at blive udbredt, så den mest udbredte klinisk er stadig typemetoden baseret på immunhistokemi (IHC). I 2005 anvendte HANS og andre vævsmikroarray-teknologi til typning og etablerede en IHC-typemodel ved at detektere CD10, BCL6 og MUM-1. DLBCL kan opdeles i GCB-type og ikke-GCB-type. Prognosen for førstnævnte er væsentligt bedre end for sidstnævnte. (S<0.001), the="" agreement="" of="" this="" typing="" method="" with="" the="" gold="" standard="" was="" 84%.="" in="" order="" to="" further="" improve="" the="" accuracy="" of="" prognostic="" judgment,="" new="" typing="" systems,="" such="" as="" choi="" and="" tally,="" have="" been="" proposed="">

Choi-typningen er baseret på fem biomarkører, herunder CD10, BCL6, MUM-1, FOXP1 og GCET1, og to markører, FOXP1 og GCET1 er tilføjet til Hans-typemetoden, som er 93 procent i overensstemmelse med "guldet". standard". Tidligere undersøgelser har vist, at FOXP1 er højt udtrykt i ABC-typen, og høj ekspression er forbundet med dårlig prognose. Når den kritiske værdi af FOXP1 er 80 procent, kan ABC type DLBCL skelnes specifikt. GCET1 er dog stærkt udtrykt i germinale center-afledte B-celler, så tilføjelse af GCET1 til Hans-typning er nyttigt at skelne mellem GCB-type og ABC-type DLBCL. Med hensyn til forudsigelse af prognose blev Choi-klassificeringen brugt til at forudsige 3-års overlevelsesraten for patienter, hvoraf GCB-typen var 88 procent, ABC-typen var 44 procent, og forudsigelsesresultaterne af "goldstandard" GEP-klassificeringen (GCB-typen var 92 procent, ABC-typen var 44 procent) 44 procent) er ret tæt på. Li Min et al. sammenlignede Choi-klassifikationens og Hans-klassifikationens forudsigelsesevne og viste også, at førstnævnte var mere nøjagtig. Den samlede overlevelse for GCB-gruppen og ikke-GCB-gruppen under Hans-klassifikationen viste ingen signifikant forskel (P=0.102), mens Choi-klassifikationen ikke viste nogen signifikant forskel i den samlede overlevelse (P=0 .102). Prognosen for GCB-gruppen var signifikant bedre end den for ikke-GCB-gruppen (3-års overlevelsesrater var henholdsvis 61,8 procent og 42,5 procent, P<0.05). however,="" it="" is="" worth="" noting="" that="" in="" recent="" years,="" with="" the="" high="" inconsistency="" of="" bcl6="" found="" by="" different="" research="" centers,="" the="" inclusion="" of="" bcl6="" in="" the="" improved="" classification="" of="" choi="" and="" hans="" has="" been="" canceled.="" operation="" and="" result="">

Som nævnt ovenfor har IHC-baseret Hans-typning og Choi-typning lignende funktioner, og resultaterne af flere antistoffer bedømmes i en bestemt rækkefølge, hvilket resulterer i, at nogle antistoffer har højere prioritet end andre. Typemetoden tillader udelukkelse af efterfølgende antistofresultater, hvis de tidligere betingelser er opfyldt. GEP-tastning følger dog ikke en bestemt rækkefølge eller udelukker visse resultater. For at reducere sådanne forskelle har MEYER et al. udviklet en typebestemmelsesmetode, der ikke bedømmer antistofresultater i en bestemt rækkefølge, nemlig Tally-typningsmetoden. Den højeste overensstemmelse med "guldstandarden" var 93 procent, mens både Hans og Choi maskinskrivning var 87 procent. Tally-metoden inkluderer lige store mængder af GCB (GCET1 og CD10) og ABC (FOXP1 og MUM-1) antistoffer, og klassificeringen bestemmes af det immunfænotypiske par, der er mere antigen-positivt. Der bruges to antistoffer for hver type, så i tilfælde af det samme positive resultat for hver type, er LMO2 nødvendig for at bestemme immunfænotypen (LMO2 Større end eller lig med 30 procent er cutoff-værdien). Undersøgelser har bekræftet, at LMO2 udtrykkes specifikt i GCB-afledte B-lymfocytter eller lymfomer, og dets høje ekspression er signifikant forbundet med en god prognose i DLBCL.

Som konklusion, selvom COO-typemetoden for DLBCL baseret på IHC ikke er så god som NanoString-typning og kvantitativ PCR-typning, er overensstemmelsen med "guldstandarden" også 74 procent -93 procent. Det har fordelene ved lave krav og andre fordele, som er praktiske for den rutinemæssige udvikling af forskellige hospitaler. Blandt dem er Choi og Tally's typemetoder mere i overensstemmelse med "guldstandarden", men GCET1, FOXP1 og LMO2 er ikke stående antistoffer, hvilket begrænser deres brede anvendelse til en vis grad.

cistamche skiver til dagligt forbrug for at forbedre celleproliferation og reducere celleapoptosen

5. Udforskning af DLBCL-typning baseret på genmutation

Næsten alle DLBCL-patienter har genmutationer, og patienter med visse mutationer kan påvirke effekten af ​​specifikke målrettede lægemidler og dermed påvirke prognosen. Derfor har DLBCL-subtypebestemmelse baseret på mutationssignaturer klinisk anvendelighed. SCHMITZ et al. udvalgte friske frosne prøver fra 574 DLBCL-patienter og brugte exom- og transkriptom-sekventering til at analysere DNA-kopinummeret på genchippen. Blandt dem blev 372 gener udvalgt til målrettet amplifikation og gensekventering for at identificere dem med reproducerbare gener. Seksuelt muterede gener. Undersøgelsesresultaterne inddelte DLBCL i 4 genotyper: MCD type (hovedsageligt MYD88L265P og CD79B co-mutation), BN2 type (hovedsageligt BCL6 fusion og NOTCH2 mutation), N1 type (hovedsageligt NOTCH1 mutation) og EZB type (hovedsageligt EZH2 mutation) Mutation og BCL2 mutation translokation), blandt hvilke MCD- og N1-typer hovedsageligt er afledt af ABC, EZB-typen er hovedsageligt afledt af GCB, og BN2-typen tegner sig for en vis andel af henholdsvis ABC, GCB og uklassificerede patienter (GCB-typen tegnede sig for 19 procent, ABC'en) type tegnede sig for 41 procent, og den uklassificerede type tegnede sig for 40 procent). Undersøgelsen fandt også, at de nye genotyper bedre kan bestemme prognosen, blandt hvilke BN2- og EZB-typer har en bedre prognose end MCD- og N1-typer. MCD, N1, BN2 og EZB typer forudsiger 5-år overlevelsesrater på 26 procent, 36 procent, 65 procent, 68 procent, multivariat analyse viste også, at den nye genotype var en uafhængig faktor, der påvirkede prognosen og ikke var påvirket ved IPI-score. Forskerholdet skabte LymphGen-algoritmen til at klassificere DLBCL i 7 genotyper baseret på tidligere forskning, tilføjelse af A53 (med TP53-inaktivering), ST2 (med SGK1- og TET2-mutationer) og andre uklassificerbare. Denne genotypemetode kunne identificere 63,1 procent af DLBCL-genotyperne . Blandt dem har BN2-undertypen den bedste prognose i ABC-typen, og ST2-undertypen i GCB-typen har en bedre prognose end EZB-undertypen. Derfor menes det, at den nye genotypning yderligere afslører patogenesen af ​​DLBCL, med forskellig patogenese blandt undertyper, og forskellige genotyper reagerer forskelligt på immunkemoterapi, hvilket kan påvirke valget af målrettet terapi, men den største begrænsning ved denne klassificeringsmetode er, at nogle patienter kan ikke klassificeres i nogen undertype, hvilket fortjener yderligere undersøgelse.

Gennem hel-eksom-sekventering af 3{{30}}4 DLBCL-patienter, CHAPUY et al. opnåede data om lavfrekvente mutationer, tilbagevendende mutationer, ændringer i somatisk kopiantal og strukturelle varianter og definerede patienter som fem genotyper: C1-type (hovedsageligt BCL10, TNFAIP3, UBE2A, CD70-mutation og BCL6-translokation, for det meste af ABC-oprindelse), C2 type (der er biallel inaktivering af TP53, som påvirker kromosomal stabilitet og cellecyklus, og har intet at gøre med ABC/GCB oprindelse), C3 type (hovedsageligt BCL2, CREBBP2, EZH2, KMT2D, TNFRSF14 mutationer, hovedsageligt GCB oprindelse), C4-type (hovedsageligt SGK1-, HIST1H1E-, NFKBIE-, BRAF- og CD83-mutationer, hovedsagelig GCB-oprindelse), C5-type (hovedsageligt CD79B, MYD88L265P, ETV6), PIM1- og TBL1XR1-mutationer, mest af ABC-oprindelse, almindelige i det primære centralnervesystem og testikel DLBCL) og C0-type (mangel på klare genetiske drivere). Undersøgelsen analyserede også yderligere forholdet mellem nye genotyper og prognose. Resultaterne viste, at C0, C1 og C4 havde bedre prognoser, mens C3 og C5 havde en dårlig prognose. Blandt de ABC-afledte patienter var prognosen for C1-typen signifikant bedre end for C5-typen. , mens C4-typen var signifikant bedre end C3-typen hos de GCB-afledte patienter. Den nye genotypning definerer også lavrisiko ABC-type DLBCL (type C1), hvis celler kan stamme fra den ekstrafollikulære marginalzone; og højrisiko GCB-type DLBCL med BCL2 strukturelle varianter og PETN og epigenetiske enzymer. Ændringer (type C3), hvorimod lavrisiko GCB-type DLBCL er forbundet med ændringer i kinaser og multiple rekombinante proteiner af flere veje (BCR/PI3K, JAK/STAT, BRAF) (type C4); typning, der ikke er relateret til ABC/GCB-oprindelse Med biallel inaktivering af TP53, ustabilitet af 9p21.3/CDKN2A og relaterede gener (type C2). Nøgleegenskaber ved disse DLBCL'er omfatter mutationer, ændringer i somatisk kopiantal og strukturelle variationer og ændringer i disse tre klasser af genetisk information, der kan bruges til at forklare forskelle i sygdoms- og behandlingsresultater.

Baseret på den målrettede sekventering af 293 gener, LACY et al. analyserede genmutationskarakteristika for 928 DLBCL-patienter og inddelte patienterne i 5 undertyper: MYD88-type (hovedsageligt MYD88L265P, PIM1, CD79B-mutationer, hovedsagelig ABC-oprindelse, de fleste originale DLBCL-patienter med centralnervesystemet, testikler og bryst tilhører denne undertype ); BCL2 type (med EZH2, BCL2, CREBBP, T

Mutationerne af NFRSF14, KMT2D og MEF2B er hovedsageligt, hovedsageligt fra GCB, nogle højgradigt lymfom og DLBCL-patienter transformeret fra follikulært lymfom tilhører denne type); SOCS1/SGK1 type (hovedsageligt inklusive SOCS1, CD83, SGK1, NFKBIA, HIST1H1E og STAT3 mutationer er hovedsageligt afledt af GCB, og de fleste primære mediastinale DLBCL tilhører denne type); TET2/SGK1 type (hovedsageligt TET2, SGK1, KLHL6, ZFP36L1, BRAF, MAP2K1 og KRAS mutationer, hovedsageligt GCB oprindelse); NOTCH2 type (hovedsageligt inklusiv NOTCH2, BCL10, TNFAIP3, CCND3, SPEN, TMEM30A FAS og CD70 mutationer, sammensat af ABC, GCB og uklassificeret oprindelse, med lignende træk som marginal zone lymfom); uklassificeret undertype (ikke andetsteds klassificeret, NEC). Undersøgelsen analyserede forholdet mellem forskellige genotyper og prognose, og resultaterne viste, at MYD88 havde den værste prognose med en 5-års overlevelsesrate på 42 procent; BCL2, SOCS1/SGK1 og TET2/SGK1 havde en god prognose med en 5-års overlevelsesrate på henholdsvis 64,9 procent, 62,5 procent og 60,1 procent; mens prognosen for NOTCH2- og NEC-typerne var mellem de to, og 5--årsoverlevelsesraterne var henholdsvis 48,1 procent og 53,6 procent.

For at opsummere kan det ses, at de tre klassifikationssystemer ikke kun er forskellige, men også har nogle overlappende indhold. Blandt dem er MYD88-, C5- og MCD-typer alle relateret til kilden til ABC. Primære centralnervesystem og testikellymfomer forekommer for det meste i disse tre typer, og prognosen er dårlig. Type C2 er karakteriseret ved TP53 mutation/deletion, og de fleste har en dårlig prognose, og A53 svarer til C2. BCL2-, C3- og EZB-typer er forbundet med kilden til GCB, har samme mutationssignatur som follikulært lymfom, og selvom dobbelt-hit og højgradige lymfomer er mere almindelige i denne type, er den overordnede prognose god. SOCS1/SGK1 og C4 typerne er hovedsageligt GCB-afledt DLBCL, som har lignende genetiske karakteristika som primært mediastinalt stort B-celle lymfom og har den bedste prognose. Den nuværende mutationstypning er dog kompleks, og metoderne og resultaterne af forskellige undersøgelser er forskellige. Derfor skal analyseprocessen stadig forenkles i fremtiden for yderligere at afklare virkningen af ​​kernemutationsgener på prognose og behandling.

cistamcheindeholder rig echinacosid og acteosid, der kan nære og forhindre kroppen mod vira og sygdomme

Resumé

GEP-baseret COO-typning er "guldstandarden", men det kræver høje prøver, er dyrt og er ikke let at udføre rutinemæssigt i klinisk praksis. Som et alternativ er COO-typning baseret på NanoString, kvantitativ PCR og immunhistokemiske teknikker blevet yderligere optimeret med hensyn til prøvekrav, tekniske vanskeligheder og eksperimentelle omkostninger, men nøjagtigheden af ​​prognostisk bedømmelse og rollen som vejledende behandling er stadig højere end guldstandarden. Der er et vist hul. Aktuelle undersøgelser har også vist, at næsten alle DLBCL-patienter indeholder genetiske mutationer, og ugunstige genetiske mutationer kan påvirke prognosen betydeligt. Målrettet terapi af nogle specifikke mutationer kan også forbedre prognosen, så den nye klassificering baseret på genmutationer har vigtig klinisk betydning. Genmutationstypning er komplementær til COO-typning, hvilket forklarer, at der også er betydelig heterogenitet inden for den samme COO-undertype. Genmutationstypning kan dog ikke omfatte alle patienter, og der er behov for yderligere forskning for at bekræfte den vejledende betydning af klinisk prognose, og om traditionelle og nye målrettede lægemidler, der i øjeblikket anvendes, kan guide behandlingen gennem denne typning.