Detektionsmetoderne til cirkulation af eksosomale PD-L1

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Der mangler stadig accepterede og almindelige metoder til påvisning af cirkulerende eksosomale PD-L1. Traditionelle exosomdetektionsmetoder såsom enzymbundet immunosorbentassay (ELISA) og flowanalyse kan bruges til at detektere PD-L1 i cirkulerende exosomer, og ELISA er i øjeblikket den mest anvendte metode. ELISA-metoden kan kvantitativt detektere indholdet af PD-L1 i cirkulerende exosomer og er let at betjene. Flowcytometri kan bruges til kvantitativt at detektere cirkulerende eksosomale PD-L1 i store prøver, men det kræver udstyr til høj detektion. Med den dybdegående forskning i exosomer er detektionsmetoderne for eksosomale proteiner og nukleinsyrer også beriget og udviklet, og nogle nye metoder er blevet introduceret inden for PD-L1-detektion i cirkulerende exosomer (figur).

Påvisning afCirkulerendeeksosomalePD-L1

1. Digital PCR

På grund af den lille mængde nukleinsyre indeholdt i exosomer er det vanskeligt for konventionelle detektionsmetoder nøjagtigt at detektere deres genkopinumre. Digital PCR-teknologi er en nukleinsyredetektionsmetode med ekstremt høj følsomhed og absolut kvantificering. Dens følsomhed kan nå niveauet for et enkelt nukleinsyremolekyle, så det har fordele ved at detektere nukleinsyreindholdet i exosomer. Forskerne brugte digital PCR-teknologi til nøjagtigt kvantitativt at analysere PD-L1 mRNA-kopinummeret i plasmaeksosomer hos patienter med melanom og ikke-småcellet lungekræft og afslørede forholdet mellem plasmaeksosomale PD-L1 mRNA-kopinummer og anti-PD1-korrelation mellem behandlingseffekter. Indførelsen af digital PCR-teknologi har signifikant forbedret detektionsevnen for eksosomal PD-L1 mRNA, hvilket er af stor betydning for forskningen i eksosomale PD-L1. Der kan dog være uoverensstemmelser mellem indholdet af exosomalt PD-L1 mRNA og ekspressionen af PD-L1-protein. Derfor kan påvisning af exosomal PD-L1 mRNA alene have visse defekter, som kræver yderligere forskning og afklaring.

Anti-cancer ørken cistanche fordele ved cistanche ekstrakt

2. ELISA

ELISA er en traditionel immunologisk analysemetode, som ofte bruges til at detektere små molekylære proteiner i plasma eller dyrkningsmedium. Det har høj følsomhed og kan analyseres kvantitativt. ELISA kan også bruges til at detektere exosomalt PD-L1-protein og kan opnå kvantitativ påvisning af store partier af prøver. PD-L1-proteindetektionssættet baseret på ELISA-metodens princip er også blevet anvendt til kvantitativ påvisning af plasmaeksosomale PD-L1-protein. Chen et al. konstruerede et eksosomale PD-L1-proteindetektionssystem baseret på ELISA-princippet, som blev anvendt til påvisning af exosomalt PD-L1-protein afledt af cellekulturmedium eller plasma. Det lineære detektionsområde var 0,2-12,0 ng/ml. ELISA er en god metode til påvisning af exosomalt PD-L1-protein, som er let at detektere kvantitativt og har god repeterbarhed. På grund af tilstedeværelsen af frit PD-L1-protein i plasma vil det imidlertid forstyrre dets nøjagtighed. Derfor registrerer denne metode cirkulation. Følsomheden og specificiteten af exosomalt PD-L1-protein skal stadig undersøges nærmere.

Herba cistanche rod: anti-cancer

3. Flowanalysemetode

Flowcytometri bruges ofte til at skrive og tælle celler eller andre biologiske partikler suspenderet i væske, så denne metode er også blevet introduceret i eksosomdetektion og tælling. THEODORAKIS et al. brugte først kromatografi til oprindeligt at adskille exosomer i plasmaet hos patienter med hoved- og halskræft og brugte derefter flowanalyse til at detektere og tælle PD-L1-positive exosomer. PD-L1-proteinekspressionen blev udtrykt som fluorescensintensitet. Resultaterne viser, at metoden har god reproducerbarhed til påvisning af exosomalt PD-L1-protein, og dens intra-individuelle variation er 7%, når flere parallelle assays udføres på en enkelt patientprøve. For at verificere nøjagtigheden af metoden brugte forskerne samtidig konfokal fluorescensanalyse som referencemetode til påvisning af det exosomale PD-L1-protein. Tre prøver blev testet parallelt, og resultaterne blev sammenlignet, og det blev konstateret, at resultaterne af flowcytometri og konfokal fluorescensanalyse var meget konsistente, hvilket indikerer, at flowcytometri var en nøjagtig metode til kvantitativ analyse af eksosomal PD-L1. Derudover påviste LUX et al. også med succes ekspressionen af eksosomale PD-L1- og c-Met-proteiner i serumet hos patienter med bugspytkirtelkræft ved flowcytometri, men udførelsen af detektionsmetoden skal undersøges yderligere. På nuværende tidspunkt er flowanalysatorer, der specielt anvendes til eksosomdetektion, også blevet lanceret, såsom Apogee ultrafølsom nano-flow analysator, som er mere velegnet til eksosomproteindetektion end traditionelle flowanalysatorer.

Fordelen ved cistanche tubulosa ekstrakt supplement: anti-tumor og kræft

4. Overfladeforbedret Raman Scattering Technology

Overfladeforstærket Raman-spredning (SERS) er en meget følsom fingeraftryksspektroskopiteknik, der har været meget udbredt inden for biomedicinske områder. På nuværende tidspunkt har forskere brugt SERS-teknologi til at detektere eksosomalt PD-L1-protein. Forskerne brugte først TiO2-modificerede magnetiske perler til ikke-specifikt at adsorbere exosomer i plasma og brugte derefter SERS-sonder forbundet med PD-L1-antistoffer til at modificere guldnanopartikler og derefter inkubere eksosomprøverne med guldnanopartikler. Det danner en magnetisk perle-exosom-guld nanopartikel kompleks struktur, og til sidst bruger et magnetfelt til at berige og adskille komplekset, og derefter placere på et laser konfokal Raman spektrometer til detektion, for at realisere påvisning af PD-L1 positive exosomer. Registrering af kropsindhold. Denne metode har høj detektionsfølsomhed, og dens laveste detektionsgrænse kan nå 1 PD-L1+ exosom / μL plasma. Derudover brugte forskerne denne metode til at detektere en gruppe prøver med forskellige koncentrationer. Resultaterne viste, at SERS-intensiteten var lineært relateret til logaritmen af koncentrationen af exosomprøver, hvilket indikerer, at detektionsmetoden har god stabilitet og kan anvendes direkte i plasma. Registrer exosomer uden et ekstra exosomisoleringstrin. På nuværende tidspunkt er der få undersøgelser af den direkte anvendelse af SERS-teknologi til påvisning af exosomalt PD-L1-protein, men forskningen i anvendelsen af SERS-teknologi til påvisning af andre exosomer er blevet udført, hvilket også har en vigtig reference til påvisning af eksosomal PD-L1-proteinværdi.

Ørkenlevende cistanche voksende situation

5. HOLMES-ExoPD-L1-metoden

HOLMES-ExoPD-L1-metoden er en ny detektionsmetode for det eksosomale PD-L1-protein. I denne metode blev der designet en ny MJ5C aptamer rettet mod PD-L1-protein, som effektivt kan binde PD-L1-protein på exosommembranen og ikke forstyrres af PD-L1-proteinglykosylering. I denne metode blev den fluorescerende mærkede MJ5C-aptamer og exosomer først co-inkuberet i en tynd kapillær for at binde til hinanden, og den infrarøde laser blev fokuseret ind i den tynde kapillær for at danne en mikronskala temperaturgradient. Termoforesehastighederne for de frie MJ5C-aptamer- og exosomale MJ5C-aptamerkomplekser var signifikant forskellige, og den termoforetiske udtømning af den frie aptamer var hurtigere end for exosom-aptamerkomplekset. adskilt ud. Derfor kan indholdet af eksosomalt PD-L1-protein under påvirkning af excitationslys bestemmes ved at detektere fluorescensintensiteten af fluorescerende mærkede aptamerer. Metoden har høj følsomhed og en detektionsgrænse på 17,6 pg/ml. Derudover har den også fordelene ved mindre prøvevolumen og kort detektionstid. Det er en meget original metode til påvisning af exosomalt PD-L1-protein, hvilket er meget vigtigt for udviklingen af nyt Den eksosomale PD-L1-proteindetektionsmetode har oplysende værdi.

Anti-tumor: cistanche supplement

Exosomal PD-L1 har brede anvendelsesmuligheder inden for malign tumorimmunterapi og er blevet et af hotspottene inden for exosomforskning. Sammenlignet med påvisning af vævs PD-L1-ekspression er påvisning af cirkulerende eksosomale PD-L1 lettere at opnå prøver og udføre detektion i realtid, samtidig med at problemet med vævsheterogenitet forårsaget af patologisk prøveudtagning undgås; exosomal PD-L1 fører også til tumorimmunitet. Det er en vigtig årsag til flugt og er relateret til udviklingen af maligne tumorer og kan blive en vigtig indikator for sygdomsvurdering og prognoseforudsigelse. Derudover forventes plasmaeksosomale PD-L1-niveauer også at blive brugt til at screene patienter, der er egnede til anti-PD-L1-immunterapi og forudsige deres respons på behandlingen. Der mangler dog stadig anerkendte og effektive metoder til påvisning af cirkulerende exosomer PD-L1. Det er nødvendigt at etablere et ideelt cirkulerende eksosom med enkel eller ingen adskillelse, mindre prøvebehov, høj følsomhed, god repeterbarhed og mindre modtagelige detektionssignaler. En metode til påvisning af PD-L1 in vivo. Detektionsmetoden til at cirkulere exosomal PD-L1 har stadig brug for yderligere dybdegående forskning, men det menes, at med udviklingen og anvendelsen af nye detektionsmetoder i fremtiden vil cirkulerende eksosomale PD-L1 bedre kunne guide anti-PD1-immunterapi og blive brugt til diagnosticering og behandling af maligne tumorer. spille en vigtigere rolle.