Proteomics landskabskortlægning af organopløst Behçets sygdom ved hjælp af dybdegående plasmaproteomik til identifikation af hyaluronisk bindende protein 2-ekspression associeret med vaskulær involvering

Objektiv.

Denne undersøgelse blev udført for at belyse patogenesen og heterogeniteten af ​​Behçets sygdom (BD), der involverer forskellige organer ved hjælp af dybdegående proteomik til at identificere biomarkørerne til klinisk vurdering og behandling af patienter med BD.

Metoder.

Vi målte ekspressionsniveauerne af proteiner i plasmaprøver fra 98 patienter med BD og 31 raske kontroller ved hjælp af vores dybdegående proteomikplatform med et datauafhængigt optagelsesmassespektrometer og antistofmikroarray. Vi udførte bioinformatiske analyser af de biologiske processer og signalveje, der blev ændret i BD-gruppen og konstruerede et proteomiklandskab af organopløst BD-patogenese. Derefter validerede vi biomarkørerne for sygdommens sværhedsgrad og den vaskulære undergruppe i en uafhængig kohorte af 108 BD-patienter og 29 raske kontroller ved hjælp af et enzymkoblet immunosorbent-assay.

cistanche tubulosa-forbedrer immunsystemet

Resultater.

BD-gruppen havde 220 differentielt udtrykte proteiner, som skelnede mellem BD-patienter (88,6%) og raske kontroller (95,5%). De bioinformatiske analyser afslørede forskellige biologiske processer forbundet med BD-patogeneser, herunder komplementaktivering, sårheling, angiogenese og leukocyt-medieret immunitet. Desuden identificerede det konstruerede proteomiske landskab af organopløst BD proteomiske træk ved BD forbundet med forskellige organer og proteinmål, der kunne bruges til udvikling af behandling. Hyaluronisk bindende protein 2, tenascin og serpin A3 blev valideret som potentielle biomarkører til den kliniske vurdering af vaskulær BD og behandlingsmål.

Konklusion.

Vores resultater giver værdifuld indsigt i patogenesen af ​​organopløst BD med hensyn til proteomiske karakteristika og potentielle biomarkører til klinisk vurdering og potentielle terapier for vaskulær BD.

INTRODUKTION

Behçets sygdom (BD) er en multisystemisk, kronisk vaskulitis, der er meget udbredt i befolkningen langs den gamle handelsrute kendt som Silkevejen. En undersøgelse fra 2016 viste, at prævalensen af ​​BD i Tyrkiet var 602 pr. 100,000 i den unge/voksne befolkning (1). BD er meget heterogen, og patienter har multiorganinvolvering, herunder orale ulcera, genitale ulcera, uveitis og hudlæsioner; BD kan være dødelig som følge af bristede vaskulære aneurismer eller alvorlige neurologiske komplikationer. De molekylære karakteristika af BD forbundet med forskellige organer er ukendte. De kliniske diagnostiske metoder og de efterfølgende behandlingsmuligheder er hovedsageligt afhængige af de kliniske symptomer. Der er dog ingen biomarkører tilgængelige, der tillader differentiering af BD baseret på involvering af forskellige organer. Sammenlignet med genomik tilbyder proteomics en alternativ tilgang til at indhente rigelig information om BD-patogenese og finde biomarkører til BD-diagnose og terapi. Lee et al opdagede 22 differentielt udtrykte proteiner ved hjælp af 2-dimensionel elektroforese kombineret med matrix-assisteret laserdesorption/ionisering tandem time-of-flight massespektrometri (2). Tre unikke proteiner i intestinal BD (fibrin, apolipoprotein A-IV og serumamyloid A) blev yderligere valideret i en uafhængig kohorte ved hjælp af enzym-linked immunosorbent assay (ELISA). Ved at bruge Bio-Rad-cytokinperlearrays indeholdende 25 inflammatoriske cytokiner fandt Lopalco et al., at gp130/udskilte interleukin-6 (IL-6)-receptor, udskilt IL-6-receptor, IL{{19} }, og thymusstromale lymfopoietinserumniveauer var signifikant forbedret i BD-undergruppen med mukokutane manifestationer og okulær involvering sammenlignet med undergruppen med kun mukokutan involvering (3). Imidlertid var informationen opnået i disse undersøgelser begrænset, fordi protein- og patientgrupperne var små, og de identificerede biomarkører ikke var blevet velvalideret. Til denne undersøgelse gennemførte vi, så vidt vi ved, den første omfattende plasmaproteomprofilering af BD ved hjælp af vores dybdegående proteomikplatform integreret med det data-uafhængige optagelsesmassespektrometer (DIA-MS) med tilpassede antistofmikroarrays (4). Med proteomikdataene analyserede vi proteiner, der var differentielt udtrykt mellem BD-patienter og en sund kontrolgruppe og de biologiske processer og veje for disse proteiner om BD-patogenese. Desuden konstruerede vi et organopløst BD-landskab og identificerede hvert organs proteomiske egenskaber. Biomarkører for vaskulær BD og sygdoms sværhedsgrad blev valideret i en uafhængig kohorte.

PATIENTER OG METODER

Denne undersøgelse blev godkendt af den medicinske etiske komité på Peking Union Medical College Hospital (JS-2049). Denne artikel indeholder ikke identificerbare data for nogen BD-patient eller rask kontroldeltager. Opdagelseskohorten omfattede 98 BD-patienter og 31 raske kontroller. Plasmaproteomet blev målt i dybden under anvendelse af DIA-MS og antistofmikroarray. Bioinformatiske analyser blev brugt til at identificere de ændrede biologiske mekanismer i BD-gruppen og til at konstruere proteomiklandskabet for den organopløste BD. Kandidatplasmabiomarkører blev valideret ved hjælp af ELISA i uafhængige kohorter bestående af raske kontroller og patienter med BD og Takayasu arteritis. De kliniske karakteristika og behandlingsoplysninger for opdagelses- og valideringskohorterne er vist i supplerende tabeller 1-6, og detaljerede eksperimentelle procedurer er beskrevet i det supplerende materiale, der er tilgængeligt på webstedet Arthritis & Rheumatology på https://onlinelibrary.wiley. com/doi/10.1002/art.42348.

RESULTATER

Patientkarakteristika. De kliniske karakteristika for patienter med BD og deres brug af glukokortikoider (GC'er) og immunsuppressiva på tidspunktet for blodopsamling er vist i supplerende tabel 1, tilgængelig på Arthritis & Rheumatology-webstedet på https://onlinelibrary.wiley.com/doi / 10.1002/art.42348. I vores proteomiske analyse blev der ikke observeret nogen signifikante forskelle i køn og alder mellem de 98 patienter med BD og de 31 raske kontroller (opdagelseskohorte) (Supplerende tabel 1). I BD-gruppen havde 45, 38 og 15 patienter henholdsvis mild, moderat og svær BD. Alle BD-patienterne havde mundsår, og > 20 % havde sår på kønsorganerne (80,6 %), hudlæsioner (65,3 %), øjenlæsioner (23,5 %) og vaskulær involvering (22,4 %). Den vaskulære involvering af BD-patienter i opdagelseskohorten er vist i supplerende tabel 2, og karakteristikaene for valideringskohorterne, der blev anvendt til at verificere ekspressionen af ​​kandidat-biomarkører, er vist i supplerende tabel 3-5 (tilgængelig på arthritis & Rheumatology-webstedet påhttps://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art.42348).

cistanche tubulosa-forbedrer immunsystemet

Klik her for at se produkter fra Cistanche Enhance Immunity

【Spørg om mere】 E-mail:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Dybdegående profilering af plasmaproteom hos patienter med BD ved hjælp af DIA-MS og antistofmikroarray. En skematisk illustration af proteinprofileringsundersøgelsen er vist i figur 1A og supplerende figur 1, som er tilgængelig på webstedet Arthritis & Rheumatology på https://onlinelibrary.wiley.com/doi/ 10.1{{11} }02/art.42348. Alle plasmaprøver fra BD-patienterne og raske kontroller blev målt ved hjælp af vores dybdegående plasmaproteomikplatform bestående af DIA-MS og antistofmikroarray med høj reproducerbarhed. Spearmans korrelationskoefficienter for plasmaproteindetektion ved hjælp af antistofmikroarray var 0.98 og 0.93 inden for og mellem forskellige arrays, henholdsvis (Supplerende figur 2A og 2B, tilgængelig på Arthritis & Rheumatology-webstedet på https ://onlinelibrary.wiley. com/doi/10.1002/art.42348). Spearmans korrelationskoefficient for plasmaproteindetektion ved hjælp af DIA-MS var 0,92 (interval 0,87-0,96; Supplerende figur 2C). Repræsentative scannede billeder af antistofmikroarray for BD-patienter og raske kontroller er vist i supplerende figur 3, tilgængelig på https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art.42348. Resultaterne viste, at plasmaproteinerne fra BD-patienter generelt var opregulerede sammenlignet med plasmaproteinerne fra raske kontroller. Med vores dybdegående plasmaproteomik-platform identificerede vi 759 proteiner (Supplerende figur 1, 4 og 5, tilgængelig på Arthritis & Rheumatology-webstedet på https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art.42348), som blev fordelt ved ca. 10 størrelsesordener i plasma (figur 1B). Disse proteiner omfattede 410 proteinbiomarkører (Human Disease Plasma Protein Biomarker Database, online på http://biokb.ncpsb.org. cn/hdpp/#/) og 388 terapeutiske mål, der i øjeblikket er godkendt eller undergår forskning i igangværende kliniske forsøg (Terapeutisk Target Database, online på http://db.idrblab.net/ttd/) (Figur 1B). De funktionelle annoteringer af disse biomarkører og terapeutiske mål indikerer, at disse proteiner tilhører forskellige autoimmune og autoinflammatoriske sygdomme, herunder BD, lupus nefritis, ankyloserende spondylitis og vaskulitis (figur 1C og 1D og supplerende tabel 7 og 8, tilgængelig på Arthritis & Rheumatology). websted på https://onlinelibrary.wiley.com/doi/ 10.1002/art.42348). Disse resultater tyder på, at plasmaproteinerne påvist med vores platform er tæt forbundet med forekomsten og udviklingen af ​​BD.

Figur 1. Proteomprofilering af plasmaprøver fra patienter med Behçets sygdom (BD) ved hjælp af en dybdegående proteomikplatform med datauafhængig opsamlingsmassespektrometri (DIA-MS) og antistofmikroarray-analyse. En arbejdsgang af vores proteomiske undersøgelse af BD. B, Fordeling af plasmaproteinkoncentrationer påvist med DIA-MS og antistofmikroarray i henhold til referencekoncentrationerne i en human plasmaproteomdatabase (http://www.plasmaproteomedatabase.org/). C, Sygdomme forbundet med de påviste proteinbiomarkører, som blev identificeret ved hjælp af en human disease plasma protein (HDPP) biomarkørdatabase (http://biokb.ncpsb.org.cn/hdpp/#/). D, Sygdomme forbundet med de påviste terapeutiske målproteiner, som blev identificeret ved hjælp af en terapeutisk måldatabase (TTD) (http://db.idrblab.net/ttd/). Cirkelstørrelser i C og D svarer til antallet af proteiner beriget i hver sygdom. HC=sund kontrol; FASP=filter-assisteret prøveforberedelse; QE-HF=Exactive HF Hybrid Quadrupole Orbitrap (ThermoFisher) massespektrometer; Strep-PE=streptavidin-phycoerythrin; ELISA=enzym-linked immunosorbent assay; IgA=immunoglobulin A.

Proteomdækkende analyse af differentielt udtrykte plasmaproteiner forbundet med BD. Supplerende figur 1, tilgængelig på https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/ art.42348, viser flowdiagrammet over, hvordan differentielt udtrykte proteiner fra DIA-MS- og antistofmikroarray-resultaterne blev identificeret og integreret. I alt 493 proteiner blev målrettet af DIA-MS, hvoraf 379 proteiner blev tilbageholdt med<29 missing values in the BD group and < 7 missing values in the healthy control group. After 36 proteins with potential contaminations from blood cells (5) were removed, we analyzed 343 additional proteins for hypothesis testing, of which 166 proteins showed a statistically significant difference between the BD and healthy control groups. The antibody microarray detected 549 proteins. After 5 control proteins were removed, we retained 544 proteins for further analysis; of these, 74 proteins showed statistically significant differences between the BD group and the healthy control group (Supplementary Figure 1). In total, 220 (29.0%) of 759 proteins were significantly differently expressed between the BD group and the healthy control group (P < 0.05), as shown using our in-depth proteomics platform comprising DIA-MS and the antibody microarray (Figure 2A and Supplementary Figures 1 and 5, available at https:// onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art.42348). The number of differentially expressed proteins is 10-fold more than previously reported (2,3,6). Among these proteins, 5 were identified as potential plasma or serum biomarkers in proteomics research for patients with BD, including haptoglobin, apoprotein, transthyretin, immunoglobulin light chain, and immunoglobulin heavy chain. Furthermore, growth arrest–specific 6, resistin, von Willebrand factor (VWF), and others were also identified to be increased in the BD group (Figure 2B). We identified 215 new proteins associated with BD, including serpin A3 (SERPINA3), glycosylphosphatidylinositol specific phospholipase D1 (GPLD1), and attractin (ATRN) (Figure 2C).

cistanche tubulosa-forbedrer immunsystemet

For at afgøre, om patienter med BD kan skelnes fra raske kontroller, udførte vi en ikke-biasisk hierarkisk klyngeanalyse af 220 differentielt udtrykte proteiner (P < 0.05), hvori 0 {3}},0 % af patienter med BD og 86,4 % af raske kontroller blev grupperet (Supplerende figur 6, tilgængelig på arthritis & Rheumatology-webstedet på https://onlinelibrary.wiley. com/doi/ 10.1002/art.42348). Blandt 130 differentielt udtrykte proteiner (P < 0,01) fandt vi, at 88,6% af patienterne med BD og 95,5% af raske kontroller var grupperet (figur 2D). Yderligere delvis mindste kvadraters diskriminantanalyse afslørede, at patienter i BD-gruppen klart kunne skelnes fra de raske kontroller i henhold til klassificeringen af ​​differentielt udtrykte proteiner (Supplerende figur 7, tilgængelig på Arthritis & Rheumatology-webstedet på https://onlinelibrary.wiley. com/doi/10.1002/art.42348). Berigelsen af ​​sygdomme ved hjælp af DisGeNET-platformen (7) indikerede yderligere, at disse differentielt udtrykte proteiner er signifikant forbundet med inflammation og autoimmune og vaskulære sygdomme, herunder BD og vaskulitis (Figur 2E og Supplerende Tabel 9, tilgængelig på Arthritis & Rheumatology-webstedet på https ://onlinelibrary.wiley. com/doi/10.1002/art.42348). I vores bioinformatikanalyse ved brug af Cytoscape og CluGo blev følgende 8 biologiske hovedprocesser i BD identificeret: 1) komplementaktivering, 2) regulering af plasmalipoproteinpartikelniveauer, 3) sårheling, 4) angiogenese, 5) leukocytmedieret immunitet, 6 ) peptidaseaktivitet, 7) positiv regulering af celleaktivering og 8) leukocytmigrering (figur 2F og supplerende tabel 10, tilgængelig på Arthritis & Rheumatology-webstedet på https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art.42348 ). Disse biologiske processer konvergerer til den patologiske mekanisme for inflammation og koagulation under BD-udvikling, hvor lipidprofilerne og modifikationen ved oxidativt stress under inflammation fører til endoteldysfunktion og vaskulære hændelser (8-11).

Konsekvent var den mest signifikante vej fra KEGG-databasen (tilgængelig på http://www.genome.ad.jp/kegg) komplement- og koagulationskaskader (figur 3A), hvor 38 proteiner (P < 0.05 ) blev identificeret, inklusive 19 komplement (C) komponenter (C1QA, C1QB, C1QC, C1S, C2, C4B, C4b-bindende protein alfakæde [C4BPA], C5, C6, C7, C8 alfakæde, C8 betakæde, C8 gammakæde kæde [C8G], C9, komplementfaktor [CF] B, CFH, CFH-relateret protein 4 [CFHR4], CFI og komponent receptor 1-lignende protein), 5 koagulationsfaktorer (F11, F12, F13B, F5 og F9 ), 4 koagulationsrelaterede proteiner (vævstype plasminogenaktivator [PLAT], protein C, antikoagulerende protein S [PROS1] og VWF) og 5 serpinfamilieproteiner (SERPINA1, SERPINC1, SERPIND1, SERPINF2 og SERPING1). Femogtyve proteiner i kaskaden var lægelige mål for terapeutisk behandling (figur 3B). Interessant nok overlappede de fleste proteiner inkluderet i KEGG-vejen og komplement- og koagulationskaskaderne med dem, der var involveret i de mest berigede biologiske processer af blodkoagulation/sårheling (figur 3B og supplerende tabel 10, tilgængelig på https://onlinelibrary.wiley.com/ doi/10.1002/art.42348.). Adskillige patogene infektionsveje blev identificeret ved hjælp af KEGG pathway-analyse i undersøgelsen, herunder Staphylococcus aureus-infektion, prionsygdom, pertussis, human papillomavirus-infektion, herpes simplex virus 1-infektion og virale proteininteraktioner med cytokin og cytokinreceptor, hvilket fremhæver rollen som patogen infektion i BD (Supplerende figur 8A, tilgængelig på Arthritis & Rheumatology-webstedet påhttps://onlinebibliotek.

Figur 2. Proteiner blev differentielt udtrykt mellem BD-patienten og raske kontrolgrupper identificeret ved DIA-MS og antistofmikroarray. Et vulkanplot, der illustrerer proteinerne dysreguleret i BD-patienten versus raske kontrolgrupper. Signifikant opregulerede og nedregulerede proteiner (P < 0.05) er angivet som henholdsvis røde og blå prikker. B, Scatter-plot, der viser ekspressionsintensiteten af ​​repræsentative proteiner i plasma fra BD-patienter og raske kontroller. Symboler repræsenterer individuelle prøver; vandrette linjer angiver medianen. C, Venn-diagram, der sammenligner antallet af differentielt udtrykte proteiner hos patienter med BD identificeret i vores undersøgelse med dem, der er identificeret i tidligere undersøgelser. D, Hierarkisk klyngeanalyse af differentielt udtrykte proteiner (P < 0.01) mellem BD og raske kontrolgrupper, hvor 88,6 % af patienterne med BD og 95,5 % af HC'er var grupperet. Det stiplede rektangulære område angiver hver gruppe sammen med tilsvarende højt udtrykte proteiner. E, Berigelse af sygdomme (afledt af DisGeNET-platformen) forbundet med dysregulerede proteiner hos BD-patienter i forhold til raske kontroller (log10 [q-værdi] < -15). F, Signifikant berigede biologiske processer identificeret ved hjælp af differentielt udtrykte proteiner i BD-patienter i forhold til sundhedskontrol (P < 0.05). *=P < 0,05; **=P < 0,01; ***=P < 0,001; ****=P < 0,0001. GAS6=vækststop-specifik 6; RETN=resistin; VWF=von Willebrand faktor; SERPINA3=serpin A3 (1-antichymotrypsin); GPLD1=glycosylphosphatidylinositol-specifik phospholipase D1; ATRN=attractin (se figur 1 for andre definitioner).

Figur 3. Signalveje forbundet med patogenesen af ​​BD. A, Signifikant berigede signalveje forbundet med differentielt udtrykte proteiner i BD-patienter i forhold til raske kontroller, der blev identificeret, brugte KEGG- og Reactome-databaserne (P < 0.01). Den røde skrift angiver veje relateret til blodkoagulation og komplementaktivering. B, Komplement- og koagulationskaskader, identificeret ved hjælp af KEGG-databasen, viser de mest signifikante associationer med differentielt udtrykte proteiner i BD-patienterne i forhold til raske kontroller. De signaturproteiner, der kan målrettes af kendte godkendte lægemidler, er angivet. C og D, det signifikant berigede proteindomæne (C) og de cellulære komponenter (D) identificeret af de signifikant udtrykte proteiner i BD-patienter i forhold til raske kontroller (P < 0,01). I A, C og D angiver søjlelængder logbase 10 af P-værdien, og tallene ved siden af ​​søjlerne angiver antallet af proteiner involveret i hver kategori. IGF=insulinlignende vækstfaktor; IGFBP=insulin-lignende vækstfaktor bindende protein; C=komplement; ER=endoplasmatisk retikulum; ECM=ekstracellulær matrix; CUB=komplementerer C1r/C1s, Uegf og Bmp1; EGF=epidermal vækstfaktor; Op=opreguleret; Ned=nedreguleret (se figur 1 for andre definitioner).

wiley.com/doi/10.1002/art.42348) (12-17). KEGG-vejen for Staphylococcus aureus-infektion, der involverer 13 differentielt udtrykte proteiner (P < 0,05) var signifikant beriget (nogle af dem er markeret i Supplerende Figur 8B), hvilket implicerer rollen af ​​Staphylococcus aureus-infektion i patogenesen af ​​BD (18,19). Endelig identificerede berigelsesanalysen komplementdomæner, inklusive domænet, der er rigeligt i komplementkontrolproteiner, Sushi repeat, membranangrebskomplekset/perforin, komplementkomponenten C1q-domænet og CUB-domænet (for komplementerne C1r/C1s, Uegf og Bmp1) (Figur 3C). Den cellulære komponentberigelsesanalyse afslørede, at de opregulerede proteiner var beriget i blandt andet den kollagenholdige ekstracellulære matrix, sekretorisk granulatlumen, blodplade-alfagranulat og plasmalipoproteinpartikel, men de nedregulerede proteiner var hovedsageligt beriget i ekstracellulært rum og exosom (figur 3D).

For at undersøge behandlingens indflydelse på plasmaproteiner grupperede vi patienter med BD efter behandling med GC'er og immunsuppressiva. Patienter med BD med eller uden behandling kunne tydeligt skelnes fra raske kontroller (Supplerende figur 9A, tilgængelig på Arthritis & Rheumatology-webstedet på https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art. 42348). Analysen viste, at de fleste biologiske processer, der ændrede sig hos patienter med BD, der blev behandlet versus BD-patienter, der ikke blev behandlet med GC'er og immunsuppressiva, var relateret til reguleringen af ​​immunologiske responser (Supplerende figur 9B). Vi sammenlignede også den differentielle ekspression af plasmaproteiner mellem BD-patienter uden behandling og BD-patienter, der modtog GC og immunsuppressiv behandling. Resultaterne identificerede 68 differentielt udtrykte proteiner (P < 0,05) involveret i f.eks. reguleringen af ​​plasmalipoproteinpartikelniveauer og clearance og serin-type endopeptidaseaktivitet (Supplerende figur 10, tilgængelig på arthritis & Rheumatology-webstedet på https:// onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art.42348).

Proteomics landskab af den orgelopløste BD. BD er en meget heterogen sygdom med involvering af flere organer, som viser sig med forskellige fænotypiske manifestationer (Supplerende tabel 1, tilgængelig på https://onlinelibrary.wiley. com/doi/10.1002/art .42348). Undersøgelser har forsøgt at underkategorisere BD baseret på kliniske manifestationer (20-23). For at undersøge heterogenitet blandt patienter med BD baseret på proteomikdata udførte vi uovervåget konsensusklyngning på de 220 differentielt udtrykte proteiner (figur 4A). Hovedkomponentanalyse afslørede en tydelig adskillelse af subtype I og subtype II fra subtype III (figur 4B). Subtype I-specifikke proteiner er hovedsageligt involveret i blodkoagulation og komplementaktivering, subtype II-specifikke proteiner er hovedsageligt involveret i glucose og protein-lipidmetabolisme, og subtype III-specifikke proteiner deltager i det inflammatoriske respons (Figur 4D og Supplerende Figur 11, tilgængelig på webstedet Arthritis & Rheumatology på https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art.42348). Selvom der ikke blev fundet statistisk signifikante forskelle med hensyn til de kliniske karakteristika blandt de proteomics-subtypede BD-grupper, fandt vi, at subtype I og subtype II var ens (figur 4B), hvilket var i overensstemmelse med resultaterne af hovedkomponentanalysen. Patienter med BD med subtype I og subtype II havde højere procentdel af alvorlige symptomer, herunder involvering af nervesystemet (13,8 % blandt subtype I og 8,2 % blandt subtype II versus 0 % blandt subtype III) og vaskulær involvering (27,6 % blandt subtype I og 22,4) % blandt undertype II mod 0 % blandt undertype III). Selvom patienter med BD med subtype III havde relativt milde til moderate symptomer, præsenterede de en højere procentdel af hudlæsioner (87,5 % blandt subtype III versus 51,7 % blandt subtype I og 65,3 % blandt subtype II) (Figur 4E, Supplerende tabel) 11, tilgængelig på webstedet Arthritis & Rheumatology på https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art.42348). Der er akkumuleret bevis, der viser ændringer i flere biologiske processer under BD-udvikling, herunder autoinflammation, redoxubalance, metabolomiske ændringer, dyslipidæmi og koagulationsdysfunktion (8,24-27). Derfor tyder vores resultater på, at selvom BD-patienter, der tilhører subtype I- og subtype II-proteomikgrupper, har højere BD-sværhedsgrad, kan de biologiske mekanismer for de 2 grupper være forskellige.

cistanche planteforøgende immunsystem

Vi udførte en klyngeanalyse af BD-kohorten baseret på kliniske data (køn, alder, sværhedsgrad og kliniske manifestationer) ved hjælp af en {{0}}trinsklyngeanalyse (23). Som vist i figur 4E blev BD-patienterne klassificeret i 2 klynger (klynger 1 og 2), hvor patienterne blev kategoriseret efter symptomer som orale sår, hudlæsioner, øjenlæsioner og genitale sår. BD-patienterne i klynge 1 havde en signifikant større forekomst af arthritis-fænotypen, der involverede symptomer på artralgi (40,0 %) og gastrointestinal (8,9 %), vaskulær (48,9 %) og nervøs (22,2 %) systeminvolvering sammenlignet med BD-patienterne i klynge 2. Dernæst sammenlignede vi den kliniske og proteomiske klassifikation i den samme BD-kohorte. Resultaterne indikerede, at patienterne i proteomics subtype I og II klassifikationer og i klinisk klynge 1 delte lignende kliniske karakteristika, hvor patienterne viste multiorgan (dvs. gastrointestinal, vaskulært og nervesystem) involvering og højere sygdomssværhedsgrad (Figur 4E). Omvendt udviste patienterne i proteomics subtype III-klassifikationen og i klinisk klynge 2 lignende kliniske karakteristika, hvor ingen viste gastrointestinal, vaskulær og nervesysteminvolvering. Disse resultater kan yderligere understøttes af ikke-biasiske hierarkiske klyngeanalyser (figur 4F), hvor patienter i proteomics subtype III blev grupperet med klinisk klynge 2, og patienter i proteomics subtype I og II blev klynget med klinisk klynge 1. Disse resultater viser den potentielle nytte af proteomikklassificering til at angive BD-heterogenitet og sværhedsgrad. Den terapeutiske strategi for patienter med BD er i høj grad afhængig af de kliniske træk og det involverede organ. Imidlertid er de proteomiske karakteristika for organopløst BD ukendte.

Figur 4. Klassificering af BD-patienter ved hjælp af plasmaproteomik og kliniske variabler. A, Heatmap af konsensusmatricen, der viser samtidige proportioner af BD-patienter med hver proteomikundertype. B, Hovedkomponentanalyse af proteomikundertyper I, II og III hos BD-patienter, der viser bemærkelsesværdige forskelle mellem klynger. C, Hierarkisk klyngeanalyse af differentielt udtrykte proteiner (P < 0.05, gennemsnitlig ekspressionsforskel P > 0,2) i de 3 proteomiske subtyper hos BD-patienter. D, Funktionelle grupper af biologiske processer i henhold til de specifikke proteiner relateret til de 3 undertyper. E, Fordeling af demografiske og kliniske karakteristika for BD-patienterne i henhold til proteomiske undertyper og kliniske klassifikationsklynger. F, Fordeling af hver klinisk karakteristik i henhold til proteomikundertyper og kliniske klassifikationsklynger i BD-kohorten, baseret på ikke-biasisk hierarkisk klyngeanalyse. Se figur 1 for definitioner.

Figur 5. Landskabskortlægning af organopløst BD ved hjælp af plasmaproteomik. A, Proteomics-landskab af orgelopløst BD. Til venstre: Diagram, der illustrerer foldændringen i proteinekspression hos BD-patienter i forhold til raske kontroller i henhold til fænotype. De 3 blokke repræsenterer, fra venstre mod højre, raske kontroller, BD-patienter uden (wo) tilsvarende symptomer og BD-patienter med tilsvarende symptomer. Farveintensiteten af ​​hver blok er proportional med foldændringen i proteinekspression mellem BD og raske kontrolgrupper. Rød og blå angiver henholdsvis opregulerede og nedregulerede proteiner. Til højre, den biologiske proces, der er forbundet med hvert differentielt udtrykt protein, med grå intensitet af firkanter, der indikerer log10--baseret P-værdi og tal, der angiver antallet af proteiner involveret i hver kategori. B, Korrelation (Pearsons eller Spearmans) mellem ekspressionen af ​​hyaluronan-bindende protein 2 (HABP2), tenascin C (TNC) og serpin A3 (1-antichymotrypsin) (SERPINA3) og sværhedsgraden af ​​BD-patienter. Skygge angiver 95 % CI. C, Violinplot, der viser intensiteten af ​​ekspression af HABP2, TNC og SERPINA3 versus sygdomssværhedsgrad i den raske kontrol og de milde, moderate og svære BD-grupper. Symboler repræsenterer individuelle prøver; den stiplede røde vandrette linje angiver medianen, hvor de øverste og nederste stiplede sorte linjer angiver interkvartilområdet. *=P < 0.{{20}}5; **=P < 0.01; ***=P < 0,001; ****=P < 0,0001. Se figur 1 for definitioner.

Således identificerede vi 58 proteiner specifikt udtrykt i forskellige grupper af patienter med BD, som viste forskellige organfænotyper (figur 5A). Vores søgning i DrugBank-databasen (tilgængelig på https://go.drugbank.com/) viste, at 26 proteiner, nemlig apolipoprotein A-IV, CFI, ceruloplasmin (CP), glutamatdehydrogenase 1 (GLUD1), hyaluronisk bindende protein 2 (HABP2), F5, SERPINC1, SERPINA3, transferrin receptor protein 1 (TFRC), VWF, SERPINF2, CD44, Fc region receptor III-A, alanin aminotransferase 1, leukotrien A-4 hydrolase, proprotein convertase subtilisin/kexin type 9, angiotensinogen, C8G, haptoglobin, peptidyl-prolyl cis-trans isomerase A, selenoprotein P, SERPIND1, SERPING1, C4BPA, lymfotoksin alfa, C4B og intertrypsin tung kæde 4, er mål for terapeutiske lægemidler, der anvendes i klinikker eller i klinikker. (Supplerende tabel 12, tilgængelig på webstedet Arthritis & Rheumatology på https://onlinelibrary.wiley.com/doi/ 10.1002/art.42348.). Blandt fænotyperne er arthritis-fænotypen, der involverer symptomer på artralgi, beriget med de biologiske processer, der er forbundet med autoimmunitet, herunder reguleringen af ​​humoral immunrespons medieret af cirkulerende immunglobuliner, regulering af B-celle-medieret immunitet og regulering af immunglobulin-medieret immunrespons. ; den gastrointestinale fænotype er forbundet med reguleringen af ​​komplementaktivering og B-celle-medieret immunitet; den involverede hjertefænotype er forbundet med cytokinreceptoraktiviteten, regulering af kollagenmetaboliske proces og ekstracellulær matrixadskillelse; epididymitis-fænotypen er forbundet med den akutte fase-respons; og hudlæsionsfænotypen er forbundet med serin-type endopeptidasehæmmeraktivitet, blodkoagulation, humoral immunrespons medieret af cirkulerende immunoglobulin og andre processer (Figur 5A og Supplerende Tabel 13, tilgængelig på Arthritis & Rheumatology-webstedet på https://onlinelibrary .wiley.com/doi/ 10.1002/art.42348).

Den vaskulære fænotype har det største antal differentielt udtrykte proteiner, herunder GLUD1, tenascin C (TNC), XC motiv kemokin ligand 2, epidermal vækstfaktor indeholdende fibulin ekstracellulær matrix protein 1, HABP2, F5, ATRN, SERPINC1, GPLD1, insulin-lignende vækstfaktorbindende protein 6, lectinmannosebindende 2, SEPRINA3, TFRC, VWF, SERPINF2 og ribonuklease A-familiemedlem 4 (figur 5A). Den bioinformatiske analyse afslørede yderligere, at disse differentielt udtrykte proteiner er involveret i blodpladedegranulering, blodkoagulation, posttranslationel proteinphosphorylering, serin-type endopeptidasehæmmeraktivitet og akut inflammatorisk respons, blandt andre funktioner. Alle disse resultater demonstrerer det proteomiske landskab af organopløst BD, hvorfra der kunne udvikles personlig medicin til målproteinerne i hver organfænotype.

cistanche fordele for mænd styrker immunsystemet

Identification of plasma proteins related to BD severity. Among the 220 unique differentially expressed proteins (P < 0.05), 28 were positively correlated with the severity of BD (Figures 5B and 5C and Supplementary Figure 12, available on the Arthritis & Rheumatology website at https://onlinelibrary. wiley.com/doi/10.1002/art.42348). Seven proteins displayed a linear correlation with the severity score, namely, TNC, HABP2, SERPINA3, F5, ATRN, C4B, and CFH (Figure 5B and Supplementary Figure 12A). The expression of these 7 proteins was up-regulated in the severe BD group compared with the mild and moderate BD groups and the healthy control group, as indicated in the scatter plot in Figure 5C (see also Supplementary Figure 12A). Next, we selected and validated 7 protein candidates (TNC, HABP2, SERPINA3, ATRN, C4BPA, GPLD1, and C5) in an independent cohort composed of 108 patients with BD and 29 healthy controls by using quantitative ELISA (Supplementary Table 3, available at https://onlinelibrary.wiley. com/doi/10.1002/art.42348). The reproducibility of the ELISA for the validation of plasma proteins was >0.9 (Supplerende figur 13, tilgængelig på https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/ art.42348). De forhøjede plasmaniveauer af HABP2, TNC og SERPINA3 blev bekræftet i BD-gruppen sammenlignet med den raske kontrolgruppe (figur 6A), såvel som deres korrelation med sygdommens sværhedsgrad (figur 6B og 6C). Vi sammenlignede også ekspressionen af ​​HABP2, som vurderet ved hjælp af ELISA, mellem BD-patienter (n=39) og kontrolgrupper af patienter med Takayasu arteritis (n=8) og raske kontroller (n=10 ) (Supplerende figur 14 og supplerende tabel 5, tilgængelig på webstedet Arthritis & Rheumatology på https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art.42348.). Resultaterne indikerede, at HABP2-koncentrationen var signifikant højere i BD-gruppen end koncentrationen i Takayasu-arteritis- og raske kontrolgrupper (Supplerende figur 14), hvilket indikerer specificiteten af ​​HABP2 som en potentiel biomarkør for BD-diagnose.

Ifølge Krauses sværhedsgrad har vaskulære symptomer maksimal vægt. Således inddelte vi patienterne i vaskulære BD- og nonvaskulære BD-grupper i henhold til tilstedeværelsen af ​​venøs trombose, arteriel stenose, okklusion, udvidelse eller aneurisme (Supplerende tabel 4, tilgængelig på https://onlinelibrary. wiley.com/doi/1 0.10{{20}}2/art.42348). Vi sammenlignede ekspressionsniveauerne for HABP2, TNC og SERPINA3 blandt de vaskulære BD, den ikke-vaskulære BD og de raske kontrolgrupper. Resultaterne viste, at de 3 proteiner var signifikant opreguleret i den vaskulære BD-gruppe (figur 6D). Modtagerdriftskarakteristikkurveanalyse for HABP2, TNC og SERPINA3 blev også udført, hvor cutoff, sensitivitet og specificitet blev bestemt (Supplerende tabel 14, tilgængelig på https://onlinelibrary.wiley.com/doi/1{{24 }}.1002/art. 42348.). Resultaterne indikerede, at HABP2 (areal under kurven [AUC] 0,68, sensitivitet 0,69 og specificitet 0,69) og TNC (AUC 0,71, sensitivitet 0,58 og specificitet 0,77) kan skelne vaskulær fra ikke-vaskulær BD. Niveauerne af de 3 biomarkører blev sammenlignet mellem patienter med inaktiv og aktiv vaskulær BD. Resultaterne viste, at ekspressionsniveauerne for HABP2, TNC og SERPINA3 konsekvent var højere hos patienter med BD uanset vaskulær BD-aktivitet (Supplerende figur 15, tilgængelig på Arthritis & Rheumatology-webstedet på https://onlinelibrary.wiley.com/doi /10.1002/art.42348).

Figur 6. Validering af de vaskulære BD-biomarkører som vurderet ved ELISA i den uafhængige kohorte. A, C og D, Plasmakoncentrationer (Conc) af hyaluronan-bindende protein 2 (HABP2), tenascin C (TNC) og serpin A3 (1-antichymotrypsin) (SERPINA3) i den raske kontrolgruppe versus alle BD patienter (A), versus BD-patienter i de milde, moderate og svære sygdomsgrupper (C) og versus ikke-vaskulær BD (N-VBD) og vaskulær BD (VBD) patienter (D). B, Korrelation (Pearsons eller Spearmans) mellem HABP2-, TNC- og SERPINA3-koncentrationerne og BD-sværhedsgradsscore. Skygge angiver 95 % CI. *=P < 0.05; **=P < 0.01; ***=P < 0,001; ****=P < 0,0001. Se figur 1 for definitioner.

Korrelationsanalyse mellem plasmaproteiner, Behçets sygdoms aktuelle aktivitetsform score og kliniske data. HABP2, TNC og SERPINA3 viste forhøjede niveauer i den aktive BD-gruppe sammenlignet med de inaktive BD- og raske kontrolgrupper (P < 0.001) (Supplerende figur 16A, tilgængelig på Arthritis & Rheumatology websted på https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/art.42348). Niveauet af SERPINA3 var forhøjet i grupper med høje Behçet's Disease Current Activity Form (BDCAF)-scores (Supplerende figur 16B). Hos patienter med BD var niveauerne af SERPINA3- og BDCAF-scorer desuden positivt korreleret (r=0.39, p=0.0036), hvorimod niveauerne af HABP2 og TNC ikke viste nogen positiv korrelation med BDCAF scorer. Vi analyserede yderligere korrelationen mellem patientplasmaniveauer og kliniske data (supplerende figur 17A og supplerende tabel 15, tilgængelig på https://onlinelibrary.wiley.com/doi/ 10.1002/art.42348.). En korrelationskoefficient på r > 0,3 blev fremhævet i akkordplottet. Repræsentative spredningsplot er vist i supplerende figurer S17B-G. Resultaterne viste, at HABP2-, TNC- og SERPINA3-niveauer var positivt korreleret med C-reaktivt proteinniveau, neutrofiltal, røde blodlegemers distributionsbredde, neutrofil-til-lymfocytforhold, blodpladetal og blodpladefordelingsbredde. Alle disse resultater viser, at HABP2, TNC og SERPINA3 er funktionelt forbundet med inflammation, endotelfunktion og blodpladeaktivering og kan tjene som biomarkører til at angive sværhedsgraden og aktiviteten af ​​BD, som bør valideres i en anden klinisk kohorte i fremtiden .

DISKUSSION

BD er en systemisk vaskulitis med en heterogen klinisk præsentation, der afspejler de forskellige patogene mekanismer, der er ansvarlige for at inducere inflammation i arterier og vener af alle størrelser i menneskelige væv og organer. I denne undersøgelse identificerede vi et stort sæt af dysregulerede proteiner (n=220) i BD-patientgruppen, der deltager i forskellige biologiske processer, og vi brugte bioinformatikanalyse til at bestemme immun-inflammationsinteraktionen, tilstedeværelsen af ​​trombose og den patologiske rolle medieret af komplementsystemet i BD. KEGG-analysen afslørede yderligere associationen af ​​BD med komplement- og koagulationskaskaderne og bakteriel infektion. Komplementsystemet medierer den medfødte immunitet og inflammation for at forsvare sig mod patogener ved degranulering, kemotaksi, fagocytose, B-celle-receptor-signalvej og cellelyse af membran-angrebskomplekset, hvorimod koagulationskaskaderne er impliceret i anti-inflammatorisk respons, vasodilatation, øget endotelpermeabilitet og blodpladeaktivering. Ved hjælp af genom-dækkende associationsdata viste Bakir-Gungor et al, at komplement- og koagulationskaskaderne er 1 af de 6 delte veje mellem tyrkiske og japanske BD-patienter, hvilket understøtter vores resultater fra den genetiske baggrund og yderligere demonstrerer den inflammatoriske mekanisme og vaskulopati/ trombofili i BD-patogenesen (28). Leukocyt-medieret immunitet, positiv regulering af celleaktivering og leukocytmigrering viser de aktive immun- og inflammationsreaktioner i BD. Neutrofiler aktiveres til at producere frie iltradikaler og neutrofile ekstracellulære fælder, hvilket forårsager inflammatorisk skade i vaskulære endotelceller, venøs trombose og aneurismer. Reaktive oxygenarter produceret af aktive neutrofiler kan også forårsage oxidation og modifikation af lipider og lipoproteiner, især low-density lipoprotein, som vist med øget lipidperoxidation (9,11), hvilket som følge heraf øger kardiovaskulær risiko (9,10) og i tur, øger inflammatorisk respons (10). Denne hændelse er i overensstemmelse med de biologiske processer til regulering af plasmalipoproteinpartikelniveauer og protein-lipidkompleksomdannelse observeret i vores undersøgelse. Beviser fra vores undersøgelse er i overensstemmelse med resultaterne fra Emmi et al, der forbinder leukocytreaktive oxygenarter produktion og plasmalipidperoxidation (8).

Konsensusklyngeanalyse ved hjælp af proteomik afslørede heterogeniteten af ​​patienter med BD. Patienter med subtype I havde mere alvorlige symptomer, som kan være forbundet med den aktive biologiske proces med blodkoagulation og komplementaktivering. I modsætning hertil havde patienter med subtype III relativt milde symptomer, og det inflammatoriske respons kan være den vigtigste patologiske proces i denne undergruppe. Desuden identificerede vi proteomiske karakteristika for patienter med BD med forskellig organinvolvering. Vores bioinformatikanalyser illustrerer effektivt funktionerne af proteinfunktionerne i hver organfænotype, som eksemplificeret ved sammenhængen mellem autoimmunitet og arthritisfænotypen med symptomer på artralgi (29-31). Større vaskulære hændelser, øjenlæsioner og neurologisk involvering er de vigtigste årsager til morbiditet og dødelighed (16). Behandling af BD afhænger af typen af ​​involveret organ og sværhedsgraden af ​​sygdommen i det pågældende organsystem. Men så vidt vi ved, er der til dato ingen målrettet terapi for BD tilgængelig. Vores resultater tyder på, at de diagnostiske procedurer og behandlingerne for hvert organ-opløst BD kan variere på grund af heterogeniteten af ​​patogene mekanismer. Nogle nøgleproteiner kan være lægelige mål for fænotyper, herunder gastrointestinale, neurale, okulære, led og vaskulære læsioner.

Andelen af ​​patienter med vaskulær BD blandt forskellige racer og etniciteter varierer fra 7,7 % til 43 % (32); sygdommen er næsten altid forbundet med højrisiko arteriovenøs trombose og/eller aneurisme, høj sygdomssværhedsgrad og en kumulativ 5-års-tilbagefaldsrate på 38,4 % (33). Immuniteten og inflammatoriske faktorer anses for at bidrage til vaskulær involvering og manifestationer i BD. Beskadigelse af endotelceller vides at resultere i en tendens til trombotisk risiko (34). Ydermere kan svækkede karvægge efter fibrose føre til svækkede arterievægge og udspilning af karvægge med efterfølgende aneurismer (35,36). Uregelmæssigheder, indsnævring og okklusion kan også induceres under akut inflammation og efter fibrose (37), mens kronisk inflammation yderligere fremmer endotelets dysfunktionelle vasodilatatoriske egenskaber (38). HABP2, også kaldet faktor VII-aktiverende protease, blev oprindeligt opdaget gennem sin evne til at binde til hyaluronsyre, en glycosaminoglycan, der har en rolle i endotelcellebarriereregulering (39), og er involveret i blodkoagulation og fibrinolyse (40). Tidligere undersøgelser har rapporteret, at HABP2 kan aktivere inflammation, apoptose og cellevækst i vaskulære glatte muskler og endotelceller (41-43) og kunne tjene som en regulator af vaskulær integritet og permeabilitet gennem de proteaseaktiverede receptorer (PAR'er; svarende til thrombin) )/RhoA/Rho-associeret proteinkinase (ROCK) signalvej (44). Silencing (ved brug af lille interfererende RNA) af HABP2 eller PAR/RhoA/ROCK hæmmer HABP2-medieret endotelcellebarriereafbrydelse (44). TNC er et proinflammatorisk ekstracellulært matrix-glycoprotein, der bidrager til plakdannelse og -ruptur ved at aktivere blodplader eller nedregulere vævsplasminogenaktivatoren (45). Serum-TNC-niveauer er blevet korreleret med sværhedsgraden af ​​aterosklerose (46), og forbigående TNC-ekspression har vist sig at være opreguleret under vaskulær skade, men ryddet efter reparationen var afsluttet (45).

SERPINA3, også kendt som 1-antichymotrypsin, hæmmer adskillige serinproteaser, især cathepsin G (47). Ud over inflammatoriske celler kunne mindre kontraktile glatte muskelceller dedifferentieres til en makrofaglignende fænotype, som også kan være kilden til cytokiner og SERPINA3 på stedet for karvægsskade (48). Tidligere undersøgelser har indikeret, at SERPINA3's aktive rolle i negativ regulering af proliferationen af ​​vaskulære glatte muskelceller (49) eller inhibering af neutrofilakkumulering (47) kunne være prædiktiv for forekomsten af ​​uønskede kardiovaskulære hændelser. Hvorvidt SERPINA3 spiller en rolle under patogenesen af ​​vaskulitis hos patienter med BD eller er et produkt af den patogene proces, er stadig uklart. Navnlig er HABP2-lægemidlet hyaluronsyre en anionisk, ikke-sulfateret glycosaminoglycan, der demonstrerer anti-inflammatorisk, sårreparation, vævsregenerering og andre vigtige egenskaber; hyaluronsyre er blevet undersøgt inden for cancer, oftalmologi, artrologi, pneumologi, rhinologi og urologibehandling og til andre formål (50). Der er flere små molekyler (zinkacetat, zinksulfat, zink, zinkchlorid) rettet mod SERPINA3 (Supplerende tabel 12, tilgængelig på https://onlinelibrary.wiley. com/doi/10.1002/art.42348). Disse resultater viser, at de biomarkører, der er identificeret i vores arbejde, også kan tjene som mål i udviklingen af ​​nye terapier til BD-patienter. Vores undersøgelse har flere begrænsninger. For det første var antallet af plasmaprøver begrænset; biomarkørerne identificeret i vores undersøgelse bør valideres i en anden og større kohorte med forskellige autoinflammatoriske og autoimmune sygdomme som kontroller. For det andet skal resultaterne verificeres i kohorter af BD-patienter, som er naive over for behandling. For det tredje bør de biologiske funktioner af biomarkørproteinerne i BD-patogenese undersøges i fremtidige undersøgelser ved hjælp af celle- og dyremodeller.

Tilsammen er dette, så vidt vi ved, den første undersøgelse til omfattende analyse af de proteomiske egenskaber ved organopløst BD. Resultaterne giver grundlæggende indsigt i heterogeniteten og patogenesen af ​​BD og fremhæver plasmaproteiner (HABP2, TNC og SERPINA3) som potentielle biomarkører til fremtidig klinisk vurdering og behandling af vaskulær BD.

REFERENCER

1. Bas¸Y, Seçkin HY, Kalkan G, et al. Undersøgelse af Behçets sygdom og tilbagevendende aphthous stomatitis frekvens: den højeste prævalens i Tyrkiet. Balkan Med J 2016;33:390–5.

2. Lee HJ, Kim JH, Kim SW, et al. Proteomisk analyse af serumamyloid som en potentiel markør i tarm Behçets sygdom. Dig Dis Sci 2017;62:1953–62.

3. Lopalco G, Lucherini OM, Lopalco A, et al. Cytokinsignaturer ved mukokutan og okulær Behçets sygdom. Front Immunol 2017; 8:200.

4. Xu M, Deng J, Xu K, et al. Dybdegående serumproteomik afslører biomarkører for psoriasis sværhedsgrad og respons på traditionel kinesisk medicin. Theranostics 2019;9:2475–88.

5. Geyer PE, Voytik E, Treit PV, et al. Plasmaproteomprofilering for at detektere og undgå prøverelaterede skævheder i biomarkørundersøgelser. EMBO Mol Med 2019;11:e10427.

6. Mao L, Dong H, Yang P, et al. MALDI-TOF/TOF-MS afslører forhøjet serumhaptoglobin og amyloid A ved Behcets sygdom. J Proteome Res 2008;7:4500–7.

7. Piñero J, Ramírez-Anguita JM, Saüch-Pitarch J, et al. DisGeNET vidensplatform for sygdomsgenomik: 2019-opdatering. Nucleic Acids Res 2020;48:D845-55.

8. Emmi G, Bagni G, Lastraioli E, et al. En unik cirkulerende miRNA-profil fremhæver trombo-inflammation i Behçets syndrom. Ann Rheum Dis 2022;81:386–97.

9. Orem A, Yandi YE, Vanizor B, et al. Evaluering af autoantistoffer mod oxidativt modificeret lavdensitetslipoprotein (LDL), modtagelighed af LDL over for oxidation, serumlipider og lipidhydroperoxidniveauer, total antioxidantstatus, antioxidantenzymaktiviteter og endoteldysfunktion hos patienter med Behçets sygdom. Clin Biochem 2002; 35:217-24.

10. Kayatas K, Karatoprak C, Cebeci F, et al. Tilstedeværelse af lave lipidniveauer hos patienter med Behcets sygdom som en beskytter mod åreforkalkning. Eur Rev Med Pharmacol Sci 2013;17:2330–4.

11. Buldanlioglu S, Turkmen S, Ayabakan HB, et al. Nitrogenoxid, lipidperoxidation og antioxidantforsvarssystem hos patienter med aktiv eller inaktiv Behçets sygdom. Br J Dermatol 2005;153:526-30.

12. Cho SB, Zheng Z, Ahn KJ, et al. Serum IgA-reaktivitet mod GroEL af Streptococcus sanguinis og humant heterogent nuklear ribonucleoprotein A2/B1 hos patienter med Behçet sygdom. Br J Dermatol 2013;168:977–83.

13. Zheng Z, Sohn S, Ahn KJ, et al. Serumreaktivitet mod herpes simplex virus type 1 UL48-protein hos Behçets sygdomspatienter og en Behçets sygdomslignende musemodel. Acta Derm Venereol 2015;95:952–8.

14. Lule S, Colpak AI, Balci-Peynircioglu B, et al. Behçets sygdomsserum er immunreaktivt over for neurofilamentmedium, som deler fælles epitoper med bakteriel HSP-65, en formodet trigger. J Autoimmun 2017;84: 87–96.

15. Tong B, Liu X, Xiao J, et al. Immunopatogenese af Behcets sygdom. Front Immunol 2019;10:665.

16. Greco A, De Virgilio A, Ralli M, et al. Behçets sygdom: ny indsigt i patofysiologi, kliniske træk og behandlingsmuligheder. Autoimmun Rev 2018;17:567–75.

17. Marta M, Santos E, Coutinho E, et al. Infektioners rolle i Behçets sygdom og neuro-Behçet syndrom. Autoimmun Rev 2015;14: 609–15.

18. Hatemi G, Bahar H, Uysal S, et al. De pustuløse hudlæsioner i Behcets syndrom er ikke sterile. Ann Rheum Dis 2004;63:1450–2.

19. Galeone M, Colucci R, D'Erme AM, et al. Potentiel infektiøs ætiologi af Behçets sygdom. Patholog Res Int 2012;2012:595380.

20. Karaca M, Hatemi G, Sut N, et al. Den papulopustulære læsion/arthritis-klynge af Behçets syndrom samler sig også i familier. Rheumatology (Oxford) 2012;51:1053–60.

21. Tascilar K, Melikoglu M, Ugurlu S, et al. Vaskulær involvering i Behçets syndrom: en retrospektiv analyse af associationer og tidsforløbet. Rheumatology (Oxford) 2014;53:2018–22.

22. Zou J, Luo JF, Shen Y, et al. Klyngeanalyse af fænotyper af patienter med Behçets syndrom: en stor kohorteundersøgelse fra et henvisningscenter i Kina. Arthritis Res Ther 2021;23:45.

23. Soejima Y, Kirino Y, Takeno M, et al. Ændringer i andelen af ​​kliniske klynger bidrager til den fænotypiske udvikling af Behçets sygdom i Japan. Arthritis Res Ther 2021;23:49.

24. Leiba M, Seligsohn U, Sidi Y, et al. Trombofile faktorer er ikke den førende årsag til trombose ved Behçets sygdom. Ann Rheum Dis 2004;63:1445–9.

25. Becatti M, Emmi G, Silvestri E, et al. Neutrofilaktivering fremmer fibrinogenoxidation og trombedannelse ved Behçets sygdom. Oplag 2016;133:302–11.

26. Zheng W, Wu X, Goudarzi M, et al. Metabolomiske ændringer forbundet med Behçets sygdom. Arthritis Res Ther 2018;20:214.

27. Xu J, Su G, Huang X, et al. Metabolomisk analyse af kammervand identificerer afvigende aminosyre- og fedtsyremetabolisme i VogtKoyanagi-Harada og Behcets sygdom. Front Immunol 2021;12: 587393.

28. Bakir-Gungor B, Remmers EF, Meguro A, et al. Identifikation af mulige patogene veje i Behçets sygdom ved hjælp af genom-dækkende associationsundersøgelsesdata fra to forskellige populationer. Eur J Hum Genet 2015;23:678–87.

29. Tong D, Lönnblom E, Yau AC, et al. En fælles epitop af kollagen type XI og type II genkendes af patogene antistoffer hos mus og mennesker med arthritis. Front Immunol 2018;9:451.

30. Durlik-Popinska K, _ Zarnowiec P, Lechowicz Ł, et al. Antistoffer isoleret fra reumatoid arthritispatienter mod lysinholdigt Proteus mirabilis O3 (S1959) lipopolysaccharid kan reagere med kollagen type I. Int J Mol Sci 2020;21:9635.

31. Jung JH, Han KD, Lee YB et al. Behçets sygdom er forbundet med multipel sklerose og reumatoid arthritis: en koreansk befolkningsbaseret undersøgelse. Dermatologi 2021:1–6.

32. Düzgün N, Ates¸ A, Aydintug OT, et al. Karakteristika for vaskulær involvering i Behçets sygdom. Scand J Rheumatol 2006;35:65–8.

33. Tascilar K, Melikoglu M, Ugurlu S, et al. Vaskulær involvering i Behçets syndrom: en retrospektiv analyse af associationer og tidsforløbet. Rheumatology (Oxford) 2014;53:2018–22.

34. Le Joncour A, Martos R, Loyau S, et al. Den kritiske rolle af neutrofile ekstracellulære fælder (NET'er) hos patienter med Behcets sygdom. Ann Rheum Dis 2019;78:1274–82.

35. Al-Basheer M, Hadadin F. Aneurismedannende type af vaskulær-Behcets sygdom. Heart Lung Circ 2007;16:407–9.

36. Chambers JC, Haskard DO, Kooner JS. Vaskulær endotelfunktion og oxidative stressmekanismer hos patienter med Behçets syndrom. J Am Coll Cardiol 2001;37:517-20.

37. Demirtürk OS, Tünel HS, Alemdaroglu U. Vaskulære manifestationer af Behçets sygdom. I: Gonul M, Kartal S, redaktører. Behcets sygdom. London: IntechOpen; 2017.

38. Aksu K, Donmez A, Keser G. Inflammationsinduceret trombose: mekanismer, sygdomssammenslutninger og håndtering. Curr Pharm Des 2012;18:1478–93.

39. Choi-Miura NH, Tobe T, Sumiya J, et al. Oprensning og karakterisering af et nyt hyaluronan-bindende protein (PHBP) fra humant plasma: det har tre EGF'er, et kringle- og et serinproteasedomæne, der ligner hepatocytvækstfaktoraktivator. J Biochem 1996;119: 1157-65.

40. Kanse SM, Parahuleva M, Muhl L, et al. Faktor VII-aktiverende protease (FSAP): vaskulære funktioner og rolle i aterosklerose. Thromb Haemost 2008;99:286–9.

41. Byskov K, Boettger T, Ruehle PF, et al. Faktor VII-aktiverende protease (FSAP) regulerer ekspressionen af ​​inflammatoriske gener i vaskulære glatte muskler og endotelceller. Åreforkalkning 2017;265: 133–9.

42. Parahuleva MS, Maj R, Hölschermann H, et al. Regulering af monocyt/makrofagefunktion ved faktor VII-aktiverende protease (FSAP). Åreforkalkning 2013;230:365–72.

43. Kannemeier C, Al-Fakhri N, Preissner KT et al. Faktor VII-aktiverende protease (FSAP) hæmmer vækstfaktor-medieret celleproliferation og migration af vaskulære glatte muskelceller. FASEB J 2004;18: 728–30.

44. Mambetsariev N, Mirzapoiazova T, Mambetsariev B, et al. Hyaluronsyrebindende protein 2 er en ny regulator af vaskulær integritet. Arterioscler Thromb Vasc Biol 2010;30:483-90.

45. Midwood KS, Husset T, Langlois B, et al. Fremskridt inden for tenascin-C biologi. Cell Mol Life Sci 2011;68:3175-99.

46. ​​Gao W, Li J, Ni H, et al. Tenascin C: en potentiel biomarkør til at forudsige sværhedsgraden af ​​koronar aterosklerose. J Atheroscler Thromb 2019;26:31–8.

47. Sanchez-Navarro A, Gonzalez-Soria I, Caldiño-Bohn R, et al. Et integreret syn på serpiner i sundhed og sygdom: bidraget fra SerpinA3. Am J Physiol Cell Physiol 2021;320:C106-18.

48. Sorokin V, Woo CC. Serpina3's rolle i vaskulær biologi. Int J Cardiol 2020;304:154–5.

49. Qian LL, Ji JJ, Guo JQ, et al. Serpina3c's beskyttende rolle som en ny thrombininhibitor mod åreforkalkning hos mus. Clin Sci (Lond) 2021;135:447–63.

50. Fallacara A, Baldini E, Manfredini S, et al. Hyaluronsyre i det tredje årtusinde. Polymers (Basel) 2018;10.