Phloridzin-følsom transport af Echinacosid og Acteosid og ændret tarmabsorptionsrute efter påføring af Cistanche Tubulosa-ekstrakt

For flere oplysninger:ali.ma@wecistanche.com

Tadatoshi Tanino et al

Abstrakte mål

Formålet med denne undersøgelse var at undersøge de gavnlige effekter afCistanche tubulosa ekstraktpå at forbedre den lave tarmpermeabilitet af echinacosid (ECH) og acteosid (ACT).

Metoder

Absorption af ECH og ACT iCistanche tubulosa ekstraktblev karakteriseret ved hjælp af humane tarm Caco-2 celle monolag med intakte forbindelser. Glucosetransporter-afhængig absorption af ECH og ACT blev bekræftet ved en in-situintestinal perfusionsteknik.

Nøglefund

Den tilsyneladende permeabilitet (Papp) var ikke signifikant forskellig mellem intakt ECH og intakt ACT. I nærvær af phloridzin blev Papp af ECH og ACT ved en høj dosis reduceret til 20 procent af den respektive ikke-behandling, men blev ikke ændret af phloretin og verapamil.Cistanche tubulosa ekstraktved lave og høje doser forbedrede Papp af ECH og ACT (begge tre gange), hvilket resulterede i deres store deltagelse i natriumafhængig glukosetransportøruafhængig absorption. Ved en lav koncentration blev samtidige ECH- og ACT-niveauer i portalblod signifikant undertrykt af phloridzin.

Konklusion

Den diætetiske og medicinskeCistanche tubulosa ekstraktforbedring af den intestinale absorption af ECH og ACT kan tjene til bedre at håndtere menneskers sundhed, selvom involveringen af ​​phloridzin-følsom transport bør reduceres.

Nøgleordakteosid; Caco-2 celle monolag;Cistanchetubulosa ekstrakt; echinacoside;phloridzin-følsom glukosetransportør

Cistanche tubulosa ekstrakt

Klik til Cistanche tubulosa pulver

Introduktion

Rødderne af Cistanche tubulosa er traditionelt blevet brugt til medicin og mad.Cistanche tubulosa ekstrakter kendt for at besidde farmakologiske effekter i forskellige hjernesygdomme, anti-aldringsfunktioner, fedtstofskifte og hårvækst.[1-4]For nylig er iridoider, monoterpenoider, phenylethanoidglycosider og lignaner blevet isoleret fraCistanche tubulosa.[5,6] Phenylethanoidglycosider, en klasse af polyphenoliske forbindelser, er de vigtigste kemiske ingredienser i Cistanche-arter,[7], selvom deres mængder varierer mellem forskellige arter. Echinacoside (ECH; figur 1) er et af de vigtigste phenylethanoidglycosider i HerbaCistanchis. Det hydrolyseres til acteosid (ACT; også kaldet verbascosid) af enzymer af bakteriel oprindelse i tyktarmen.[8,9] ECH og ACT har den gavnlige aktivitet af hepatobeskyttelse[10] og anti-inflammation[11] hos gnavere. Overraskende nok forbedrer meget vandopløseligt ECH adfærdsmæssige og neurokemiske resultater i en musemodel af Parkinsons sygdom og inhiberede caspase-3 ogcaspase-8 aktivering i cerebellare granula neuroner.[9] Det er velkendt, at blod-hjerne-barrieren strengt begrænser indtrængen og distributionen af ​​xenobiotika til hjernen fra blodet. Wu et al.[12] viste også, at vandopløselig ACT blev hurtigt fordelt i hjernevæv hos rotter. Derfor kan ECH og ACT transporteres ind i hjernen, tarmene og leveren af ​​det eller de specifikke systemer.

Selvom der er stærke beviser for, at forbrug afCistanche tubulosa ekstrakter gavnlig for menneskers sundhed, er permeabiliteten af ​​ren ECH på tværs af Caco{{0}} cellemonolag ved en apikal koncentration på 8,4 ± 1,6 ug/ml lig med eller under den for den paracellulære transportmarkørmannitol.[13] Når ren ECH indgives oralt til rotter (dosis, 1{{10}}0 mg/kg), er absorptionen ekstremt hurtig (Tmax,15 min), og den maksimale serumkoncentration er meget lav (Cmax, 0,61 ± 0,32 ug/ml).[14] Den absolutte biotilgængelighed af ECH er kun 0,83 procent. Tilsvarende, når Caco-2-celler inkuberes med en phenolfraktion, der er delvist oprenset fra olivenmøllespildevand, er ren ACT-optagelse hurtig med topakkumulering efter 30 minutter og en total akkumuleringseffektivitet på 0,1 procent, hvilket giver intracellulære niveauer på 130 pmol/mg celleprotein.[15] Hos rotter blev den maksimale koncentration (0,13 ± 0,03 ug/ml) af ren ACT nået inden for 30 minutter efter oral dosering med 100 mg/kg, [12], hvilket indebærer hurtig intestinal absorption. Den orale biotilgængelighed af ACT, såvel som ECH, er ret lav (0,12 ± 0,04 procent), hvilket tyder på muligheden for first-pass-effekter i tarmkanalen og leveren. I rottegalde er methylerings- og glukuronideringskonjugater af ECH hovedmetabolitter[16], selvom omfanget af levermetabolisme forbliver uklart. Vi fandt foreløbigt, at ECH og ACT var ret stabile i homogenaterne af rotte-tarmslimhinder og kunstig mavesyre (data ikke vist). Najar et al.[17] demonstreret, at ACT inhiberer P-glycoprotein (P-gp)-ATPase-aktivitet på en måde svarende til verapamil (en repræsentativ P-gp-hæmmer), hvilket indebærer en P-gp-modulator; det er dog usikkert, om ACT er tilgængelig som et P-gp-substrat. Interessant nok viste de nylige fund af flavonoid-D-glukosider i kosten, at multilægemiddelresistensprotein (MRP2) maskerede den natriumafhængige glucosetransportør (SGLT)1-medierede optagelse af quercetin 4'-O- -glukose,[18 ,19] som er ansvarlig for meget dårlig absorption. Der er dog meget lidt kendt om polyphenoliske glucosiders følsomhed over for absorberende transportører, herunder glucosetransportere. Oplysninger om absorptionsegenskaberne for quercetin4'-glucosid og hurtigt blod-hjerne-barriere-permeable ECH fik os til at undersøge den transportørfølsomme optagelse af dietoid-glycosilet tubulosa.

I denne undersøgelse undersøgte vi glucosetransportør-medieret absorption af intakt ECH og ACT ved hjælp af humantarm Caco-2 celle monolag. Samtidig absorptionstransport af ECH og ACT samtidig indietærtCistanche tubulosa ekstraktvar karakteriseret ved en in vitromodel og in-situ intestinalt perfusionssystem med portalblodprøvetagning, som let kan skelne mellem omfanget af absorption og undgåelse af hepatisk first-pass-disposition.

Materialer og metoder

Materialer

Intact ECH og ACT var generøse gaver fra EishinTrading Co., Ltd (Osaka, Japan). Phloridzin og phloretin blev købt fra Tokyo Kasei Co., Ltd. (Tokyo, Japan). Verapamil og p-cumarsyre, anvendt som interne standarder til højtydende væskekromatografi (HPLC)-assay, blev opnået fra Sigma-Aldrich (St. Louis, MO ,USA). Alle andre anvendte kemikalier var af analytisk kvalitet og kommercielt tilgængelige.

Plantemateriale og fremstilling af ethanolekstrakt

C. tubulosa (SCHRENK) R. WIGHT (Orobanchaceae) er en flerårig parasitisk plante, der vokser på rødderne af Salvadoraor Calotropis-arter og er udbredt i nordafrikanske, arabiske og asiatiske lande. Tørrede stilke af C. tubulosa blev pulveriseret og ekstraheret tre gange med methanol under tilbagesvaling i 3 timer. Afdampning af opløsningsmidlet under reduceret tryk gav den methanoliske ekstrakt. Themethanolisk ekstrakt (kommerciel kvalitet, batchnr. 20070130; registreret handelsnavn, Sabaku Ninnjinn Kanka) var en generøs gave fra Eishin Trading Co., Ltd via Muraoka og Morikawa (Kinki University, Japan), og botanisk identifikation blev foretaget af professor Jia Xiaoguang i Xinjiang Institute of Traditional Chinese and Ethnologic Medicines.

Planteekstraktanalyse: kromatografi

Vi bestemte ECH- og ACT-indhold iCistanche tubulosa ekstrakt(batch nr. 20070130) ved en HPLC-analyse beskrevet nedenfor. De opnåede data er vist i tabel 1.

Cellekultur

Caco{{0}}-celler, købt fra American Type CultureCollection (ATCC, Rockville, MD, USA), blev brugt ved passager 38-53. De blev dyrket i et dyrkningsmedium bestående af Dulbeccos modificerede Eagles medium (DMEM, Nacalai Tesque Co., Kyoto, Japan) suppleret med 0.1 mM ikke-essentielle aminosyrer, 10 procent varmeinaktiveret føtalt bovint serum, 100 U/ml penicillin G og 0,1 mg/ml streptomycinsulfat.

Transportstudier

Caco-2-celler blev udpladet med en tæthed på 6,4 × 103 celler/cm2 på polycarbonatfiltre. Monolag blev brugt til transportforsøg 21-25 dage efter podning. Intakt ECH ogACT, der svarede til deres indhold iCistanche tubulosa ekstrakt (4.5 and 13.5 mg/ml) were mixed with DMEM medium containing 0.5% dimethylsulfoxide to maintain the integrity of the cell monolayer over the periods of the experiments. Intact ACT equivalent to ECH content in the extract was also dosed in the incubation medium. The extract was suspended in a DMEM medium and was centrifuged to remove insoluble components. Supernatants were loaded to the apical side. At the indicated times, an aliquot of the incubation medium was withdrawn from the basolateral side and was mixed with acetonitrile containing an internal standard for the assay. In separate experiments, phloridzin (final concentration, 1 mM) and verapamil (final concentration, 0.2 mM) was added to the apical side of the monolayer; however, phloretin (final concentration, 0.3 mM) was treated on both sides of the monolayer. The integrity of monolayers was monitored by transepithelial electrical resistance (TEER) using Millicell-ERS (Millipore, Bedford, MA, USA) before and after transport experiments. TEER values of monolayers used were >300 Ω·cm2.

Echinacoside iCistanche tubulosa ekstrakt

In-situ intestinal perfusion

Wistar-hanrotter (230-250 g) blev opnået fra SLCJapan (Hamamatsu, Japan). Dyrene blev anbragt i et rum med aircondition under en 12 timers lys/mørke-cyklus i 1 uge før brug. Rotter blev fodret med standard laboratoriefoder (Oriental Yeast Co., Ltd., Tokyo, Japan) med vand ad libitum og blev fastet natten over før testen. Den in-situ-cirkulerende perfusionsundersøgelse blev udført i henhold til den modificerede procedure beskrevet af Mihara et al.[20] Kort fortalt blev rotter bedøvet med 25 procent urethanopløsning (1 mg/kg) for at undgå fald i blodtrykket. Et midlineabdominalt snit blev lavet, og tyndtarmen blev blotlagt. Galdegangen blev ligeret for at undgå galdesekretion i perfusatet. Hele tyndtarmen som ét segment (fra tolvfingertarmen til ileum) blev skyllet med normalt saltvand ved 37 grader i 10 minutter, indtil vasken var klar. Glasrør forbundet til silikoneslanger blev derefter kanyleret i begge ender af tyndtarmen og fastgjort med suturtråd. Derefter blev tyndtarmen udskiftet i maven, og kanylerne blev forbundet med en peristaltisk pumpe. Portvenen blev kanyleret med polyethylenrør (PE10).Cistanche tubulosa ekstraktkommercielt tilgængelig blev suspenderet i Krebs-Henseleit bicarbonatbuffer (pH 7,4) for at give en slutkoncentration på 4,5 mg/ml og blev centrifugeret i 1 0 min ved 8000 rpm for at fjerne uopløselige komponenter. Supernatant i fravær eller tilstedeværelse af phloridzin (1 mM) blev opsamlet i et reservoir, som blev holdt ved en temperatur på 37 ± 0,5 grader gennem hele forsøget. På de angivne tidspunkter blev der taget blod gennem portvenekanylen. Efter centrifugering af blodprøver blev det resulterende plasma deproteineret med acetonitril indeholdende den interne standard og blev centrifugeret ved 3000 rpm. Supernatanter blev inddampet, og remanensen blev opløst med en mobil fase bestående af acetonitril og 0,5 procent eddikesyre. Den blandede opløsning blev sat på en HPLC-søjle. Rotter blev brugt i overensstemmelse med etiske procedurer efter retningslinjerne for pleje og brug af forsøgsdyr udstedt af den japanske regering og Kinki University.

HPLC-analyse

HPLC-analyse blev udført på et system udstyret med aShimadzu SPD{{0}}A, UV-detektor, Shimadzu LC-10A-pumpe og Shimadzu C-R4A chromatopac-integrator (Kyoto, Japan). ECH og ACT blev adskilt ved hjælp af en Inertsil ODS-kolonne (5 μm, 4,6 × 15 0 mm, GL Sciences Inc., Osaka, Japan). En mobil fase af acetonitril og 0,5 procent eddikesyre i et forhold på 15:85 (v/v) blev anvendt ved en strømningshastighed på 1,0 ml/min. Detektion blev udført ved 334 nm

Kinetisk analyse

Tilsyneladende permeabilitetskoefficienter (Papp) blev estimeret ud fra hældningen af ​​den lineære del af tidsforløbet af sammensat transport på tværs af Caco-2 celle monolag, som følger: P dQ dt AC app=( ) ( )

hvor dQ/dt er permeabilitetshastigheden, C0 er startkoncentrationen af ​​det opløste stof i donorkammeret, og A er membranens overfladeareal (4,7 cm2).

I rotte-in-situ intestinal perfusionsundersøgelse blev arealet under plasmakoncentration-tid-kurven (AUC0-90) i portvenen fra tidspunkt nul til sidst målte beregnet i henhold til den lineære trapezformede regel.

Acteosid iCistanche tubulosa ekstrakt

Fysisk-kemiske egenskaber

Det polære overfladeareal og det ikke-polære overfladeareal af forbindelser blev beregnet ved hjælp af programmet SAS (version 0.8, Olsson, T.; Sherbukhin, V., Synthesis and Structure Administration, 1997-2001, AstraZeneca, Cary , NC, USA). Eksperimentelt bestemte log P- og pKa-værdier blev opnået fra litteraturen.

Statistisk analyse

Data blev analyseret ved en-vejs variansanalyse efterfulgt af Tukeys post-hoc test. Sandsynlighedsværdier mindre end 5 procent blev betragtet som signifikante.

Resultater

Absorptiv transport af echinacosid og akteosid gennem Caco-2 celle monolag

Hos mus og rotter administreres intakt ECH[10,14] og ACT[12,21] oralt i doser på 100-1000 mg/kg. DetCistanche tubulosa ekstraktbrugt indeholdt ca. 30 procent ECH og 15 procent ACT pr. dosis. Da ekstraktet ændrede osmotisk tryk og pH i inkubationsmediet, blev koncentrationer på 4,5 og 13,5 mg/ml bestemt baseret på den orale dosis (intakte forbindelser: 2-20 mg/2{{2{{31} }}} g kropsvægt) hos mus. Ekstrakten ved lave (4,5 mg/ml) og høje doser (13,5 mg/ml) indeholdt 2.0 og 6.1 mg for ECH og 1.0 og 3.0 mg for ACT, henholdsvis. Vi anvendte C. tubulosa-ekstraktmængder, der var meget lavere end den orale dosis af ECH og ACT rapporteret til mennesker (anbefalet kosttilførsel af ekstrakt: 150 mg indeholdende ca. 45 mg for ECH og 22,5 mg for ACT). Ved lave og høje doser af intakte forbindelser var absorptionsprofiler (figur 2) og Papp ikke signifikant forskellige mellem ECH og ACT som en ECH-ækvivalent (tabel 2). Når C. tubulosa-ekstrakt i en høj dosis på 13,5 mg/ml blev fyldt i mediet, blev Pappværdier (henholdsvis 1,27 ± 0.13 og 0.34 ± 0,03 × 10-6 cm/s) af ECH- og ACT-konkomitanter var tre gange højere end dem (henholdsvis 0,38 ± 0,09 og 0,10 ± 0,03 × 10-6 cm/s) af intakt ECH og ACT (tabel 2). Ekstraktet forbedrede, i modsætning til intakte forbindelser, signifikant absorptionstransporten af ​​ECH og ACT.

Hæmmende virkning af phloridzin, phloretin og verapamil

To characterize the intestinal absorption of ECH and ACT, Caco-2 cell monolayers were incubated with representative inhibitors. Apical glucose transporter 1-sensitive phloridzin dramatically reduced the Papp of intact ECH and ACT to 20% of non-treatment at the high dose (Table 2). Basolateral glucose transporter (GLUT) 2-sensitive phloretin did not decrease the transport of intact ECH and ACT (Figure 3). In this study, higher concentrations (>0,3 mM) phloretin kunne ikke bruges på grund af mærkbar celletoksicitet. Derudover er P-gp blevet identificeret som en vigtig aktør, der er ansvarlig for interaktionen mellem naturlægemidler og klinisk vigtige P-gp-substrater. Verapamil forbedrede ikke den absorberende transport af intakte forbindelser (figur 3).

Den absorberende transport af ECH og ACT i ekstraktet (lav dosis) blev signifikant hæmmet af phloridzin (tabel 2 og figur 4). Ekstraktet ved den høje dosis undertrykte phloridzin-følsom inhibering, selvom transporten af ​​intakt ECH og ACT var mere følsom over for phloridzin (tabel 2).

In-situ intestinal perfusionsundersøgelse

I en in-situ undersøgelse testede vi, om ECH og ACT iCistanche tubulosa ekstraktblev transporteret af SGLT1 placeret på den apikale side af tyndtarmen. Når kostekstrakten i den lave dosis (4,5 mg/ml) blev perfunderet, dukkede ECH og ACT hurtigt op i portalblodet (figur 5). AUC blev bestemt til 2702,8 ± 384,1 μm·min for ECH og 698,3 ± 197,2 μm·min for ACT. Efter at AUC blev normaliseret med indhold fraCistanche tubulosa ekstrakt, var den absorberede mængde ikke signifikant forskellig mellem ECH og ACT. SGLT1-sensitivt phloridzin undertrykte i modsætning til phloretin signifikant den absorptive transport af samtidig ECH (AUC, 649,4 ± 248,2 μm·min) og ACT (ikke påvist).

Diskussion

Nogle urteingredienser er substrater af P-gp, der er stærkt udtrykt i leveren, tarmen, hjernen og nyrerne. P-gp er afgørende faktor for in vivo biotilgængelighed, disposition og distribution af naturlægemidler, herunder perikon, curcumin, echinacea, ginseng, ginkgo og ingefær.[22,23]Biotilgængeligheden af ​​genistein{{5} }glucosid, et flavonoidderivat, var også begrænset af den intestinale MRP2-transportør.[24] Derfor blev denne undersøgelse designet til at undersøge absorptionsegenskaberne af ECH og ACT samtidig spise- og medicinskCistanche tubulosa ekstrakt.

Polariserede Caco{{0}}-cellemonolag, såvel som tarmen,[25], udtrykker vigtige tarmudstrømningstransportører, såsom P-gp, MRP'er og brystkræftresistensprotein.[26]Flavonoider i kosten. af quercetin[27] og myricetin[28] har vist sig at hæmme P-gp-medieret efflux både i cellelinjer og dyremodeller. Verapamil, en P-gp-hæmmer, ændrede ikke permeabiliteten af ​​ACT og ECH på tværs af Caco-2-cellemonolag (figur 3), hvilket indikerer, at intakt ECH og ACT ikke var begrænset af P-gp-udstrømningspumpen. Vores tidligere undersøgelser viste, at MRP2-proteiner ikke blev udtrykt i Caco-2-cellemonolag.[29] P-gp og MRP2-medieret efflux kunne udelukkes i ECH- og ACT-transport. Nogle glycosider af quercetin med lav lipofilicitet blev mere effektivt absorberet end quercetin selv.[30] Det er også vigtigt at bemærke, at ACT med en sukkerdel distribueres hurtigt i hjernevæv. Vores opmærksomhed har været fokuseret på den kombinerede virkning af to glucosetransportører inenterocytter: SGLT i børstegrænsemembranen og faciliteret diffusionsglukosetransport (GLUT) i den basolaterale membran. Caco-2-cellekultur kan bruges som en model til undersøgelse af phloretin-følsomme GLUT2- og phloridzin-følsomme SGLT1- og 2-transportører.[31-34]Glucose transporteres fra den apikale til den basolaterale side af Caco-2-monolag ved en høj hastighed med en Pappof 36,8 ± 1,1×10−6 cm/s.[35] Den har en højere Papptend end den transcellulære transportmarkør propranolol (23,4 ± 2,8 × 10-6 cm/s). Som vist i tabel 2 havde intakt ECH og ACT meget lavere Papp end det rapporterede i glucose og passiv propranolol. Vi beregnede logaritmen af ​​fordelingskoefficienten (oktanol-vand), log P, blev beregnet til at være -2,32 og 0,077 for henholdsvis ECH og ACT. Polaror hydrofile forbindelser menes at blive transporteret via en paracellulær vej (på tværs af tætte kryds). De to phenylethanoidglykosider, ligesom mannitol, ser ud til at blive transporteret gennem en paracellulær rute. Phloridzin reducerede imidlertid dramatisk den absorptive permeabilitet af intakt ECH og ACT (tabel 2), hvilket tyder på, at apicalSGLT1 spiller en stor rolle i den intestinale absorption af intakt ECH og ACT. Ved en ækvivalent dosis var højere hydrofob ACT-permeabilitet tæt på ECH-permeabilitet (figur 2 og tabel 2). Yoshikawa et al.[36] har vist, at facilitative transportere (GLUT 1 og 2) såvel som phloridzin-følsomme SGLT1, udtrykkes intensivt i tyndtarmen. Da absorberede mængder af forbindelser er baseret på massebalancen mellem optagelse og eliminering, evaluerede vi deltagelsen af ​​GLUT2. Glucose krydser de apikale membraner af enterocytter med SGLT1 med høj affinitet og lav kapacitet og går ud over den basolaterale membran gennem GLUT2 med lav affinitet og høj kapacitet. Phloretin (en specifik hæmmer af GLUT2) afskaffede ikke transporten af ​​intakt ECH og ACT (figur 3). Funes et al.[37] demonstrerede, at ACT interagerede stærkt med fosfatgrupperne i fosfolipidmembraner. Da der er rigelige hydroxylgrupper i ACT-strukturen, er hydrogenbindinger mellem disse grupper og de polære glycerolhoveder eller fosfatgrupper af fosfolipider de mest sandsynlige interaktioner, der finder sted. Når intakt ECH og dets ækvivalente ACT blev inkuberet med Caco-2-monolag i 11 timer, var cellulær akkumulering af ACT (0,24 ± 0,04 nmol/cm2) tre gange større end den for ECH (0,07 ± 0,01 nmol/cm2). Vi troede, at SGLT1-følsom ECH og ACT langsomt blev flyttet fra enterocytter til blodbanen, hvilket muligvis førte til den observerede lowPapp. Sammenlignet med meget hydrofil ECH kan den lave permeabilitet af ACT skyldes interkalation i cellemembraner.

Cistanche tubulosa ekstrakt

Polyphenoliske forbindelser indtages i urteblandinger under deres kliniske anvendelse og er kommercielt tilgængelige som kosttilskud. I en in vitro-undersøgelse blev det vist, at absorptionen af ​​phenolisk epicatechin ikke var påvirket af ingredienssammensætningen af ​​drikkevarematerialer.[38] I modsætning hertil har Hypericum perforatumL. produktmatricer påvirker transporten af ​​quercetinglucosider (rutin og isoquercitrin) og hyperoside på tværs af Caco-2-celler på grund af forskelle i matrixfytokemiske sammensætning og transportkarakteristika, dvs. paracellulær overførsel og bærermedieret eller aktiv transport.[39] I denne undersøgelse tilvejebragte C. tubulosa en tre gange højere transepiteltransport end intakt ECH og ACT (figur 2 og tabel 2). Vi spekulerer på, at komponenter iCistanche tubulosa ekstraktaktivere den phloridzin-følsomme transporter og/eller fremskynde elimineringen af ​​intracellulær ECH og ACT.Cistanche tubulosa ekstraktved den høje dosis syntes i høj grad at maskere styrken af ​​phloridzin-følsom transport (tabel 2). Kostkulhydrater[40] og proteiner[41]interagerer med nogle polyfenoler i mave-tarmkanalen. Morikawa et al.[10] demonstreret, at fem iridoider, kankanosider AD og kankanol, et monoterpenglycosid, kankanosid E, to phenylethanoid oligoglycosider, kankanosider F og G, og et acyleret oligo sukker, kankanose, kunne isoleres fraCistanche tubulosa ekstrakt

bruges i øjeblikket. Andre ingredienser, herunder proteiner iCistanche tubulosa ekstrakt, forbliver uklart. Sammen med ovenstående spekulationer er vi designet til at undersøge, om andre komponenter interagerer med SGLT1 og hæmmer absorptionen af ​​ECH og ACT.

In vivo eksperimenter kan ikke let skelne mellem omfanget af absorption og undgåelse af first-pass disposition gennem leveren. In-situ intestinal perfusionsmodellen har en fordel i forhold til in vivo og in vitro modeller på grund af den nemme kontrol af eksperimentparametre og udelukkelse af påvirkningen af ​​andre organer og vedligeholdelse af anintakt intestinal blodforsyning.[22] Inddragelsen af ​​den phloridzin-følsomme glucosetransportør blev evalueret i anin-situ intestinalt perfusionssystem. Som vist i figur 5, absorberede mængder af ECH- og ACT-koncomitanter iCistanche tubulosa ekstrakt (low dose) were greatly abolished by phloridzin, which agrees with our in-vitro data (Figure 4). Using peptides and 20 drugs passively absorbed, a good correlation is obtained between in-vivo drug absorption and the drug permeability of Caco-2 monolayers.[42] Drugs with a Papp of >1 × 10−6 cm/s absorberes fuldstændigt hos mennesker, mens lægemidler og peptider er dårligt absorberet (<1% of="" dose)="" have="" papp="" values="" of=""><1 ×="" 10−7="" cm/s.="" surprisingly,="" the="" papp="" of="" the="" ech="" concomitant="" (high="" dose)="" was="">1 × 10-6 cm/s (tabel 2), hvilket tyder på høj oral biotilgængelighed hos dyr og mennesker. Crespy et al.[43] viste, at efflux i en in-situ intestinal perfusionsundersøgelse ikke var signifikant forskellig mellem phloridzin og phloretin. De[44] viste også, at oral biotilgængelighed af phloridzin med høj følsomhed over for SGLT1 kun var 10 procent hos rotter. Fremtidige undersøgelser skal evaluere biotilgængeligheden og hepatisk first-pass effekt af ECH samtidig efter oral administration af diætekstraktet i den høje dosis. In-situ resultater indebærer, at indtaget afCistanche tubulosa ekstraktkan forbedre den lave orale absorption af intakt ECH og ACT.

Konklusion

Den diætetiske og medicinskeCistanche tubulosa ekstraktForøgelse af den intestinale absorption af ECH og ACT kan tjene til bedre at styre menneskers sundhed, selvom involveringen af ​​phloridzin-følsom transport bør reduceres.

Erklæringer

Interessekonflikter

Forfatteren/forfatterne erklærer/erklærer, at de ikke har nogen interessekonflikter at oplyse

Finansiering

Dette arbejde blev delvist støttet af High-Tech ResearchCenter fra Kinki University.

Anerkendelser

Forfatterne ønsker at takke Osamu Muraoka (Kinki University, Osaka, Japan) og Toshio Morikawa (Kinki University, Osaka, Japan) for leveringen afCistanche tubulosa ekstraktog rene bestanddele. Vi er Masahiro Iwaki (Kinki University) meget taknemmelige for studiestøtten.

Cistanche tubulosa ekstraktProdukter

Fra: Phloridzin-følsom transport af echinacosid og acteosid og ændret tarmabsorptionsvej efter påføring afCistanche tubulosa ekstrakt' vedTadatoshi Tanino et al

---© 2015 Royal Pharmaceutical Society, Journal of Pharmacy and Pharmacology, 67, s. 1457-1465,Phenylethanoid glucosider transporteret af SGLT1

Referencer

1. Tanaka J et al. Effekten afCistanche tubulosa ekstraktpå forskellige hjernesygdomme. Madstil 21 2008; 12:24–26.

2. Tanaka J et al. Anti-aging funktionerCistanche tubulosa ekstrakt. Madstil 21 2008; 12:27-29.
3. Tanaka J et al. Skønhed og hårvækst funktioner afCistanche tubulosa ekstrakt. Madstil 21 2008; 12:29-32.
4. Tanaka J et al. Fedtmetaboliserende effekt afCistanche tubulosa ekstrakt. Madstil 21 2008; 12:30-33.
5. Yoshizawa F et al. Bestanddelene af Cistanche tubulosa Schrenk (Krog) f.II. isolering og struktur af et nyt phenylethanoid glycosid og et nyt neolignan glycosid. Chem Pharm Bull 1990; 38: 1927–1930.
6. Yoshikawa M et al. Phenylethanoid oligoglycosider og acylerede oligosukkere med vasorelakserende aktivitet fra Cistanche tubulosa. Bioorg Med Chem 2006; 14: 7468-7475.
7. Tu PF et al. Analyse af phenylethanoid glycosider af Herba cistances ved RP-HPLC. Yao Xue Xue Bao 1997; 32: 294-300.
8. Lei L et al. Metabolisk regulering af phenylethanoid glycosider fra Herba cistanches i hundens mave-tarm. Yao Xue Xue Bao 2001; 36: 432-435.
9. Geng X et al. Neurobeskyttende virkninger af echinacosid i muse-MPTP-modellen af ​​Parkinsons sygdom. Eur J Pharmacol 2007; 564: 66-74.
10. Morikawa T et al. Acylerede phenylethanoid-oligoglycosider med hepatobeskyttende aktivitet fra ørkenplanten Cistanche tubulosa. Bioorg Med Chem 2010; 18: 1882-1890.
11. Paola RD et al. Virkninger af verbascoside, bioteknologisk oprenset af syringa Vulgaris plantecellekulturer, i en gnavermodel af paradentose. J Pharm Pharmacol 2011; 63: 707-717.
12. Wu YT et al. Bestemmelse af acteosid i Cistanche deserticola og Boschniakia rossica og dets farmakokinetik i frit bevægende rotter ved hjælp af LC-MS/MS. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci 2006; 844: 89-95.
13. Matthias A et al. Permeabilitetsundersøgelser af alkylamider og koffeinsyrekonjugater fra echinacea ved hjælp af en caco-2 celle monolagsmodel. J Clin Pharm Therapeut 2004; 29: 7–13.
14. Jia C et al. Bestemmelse af echinacosid i rotteserum ved omvendt fase højtydende væskekromatografi med ultraviolet detektion og dets anvendelse på farmakokinetik og biotilgængelighed. J Chromatogr 2006; 844: 308-313.
15. Cardinali A et al. Verbascosider fra olivenmøllevand: vurdering af deres biotilgængelighed og intestinal optagelse ved hjælp af et in vitro-fordøjelse/caco-2-modelsystem. J Food Sci 2011; 176: H48-H54.
16. Jia C et al. Metabolisme af echinacosid, en god antioxidant, hos rotter: isolering og identifikation af dets galdemetabolitter. Drug Metab Dispos 2009; 37: 431-438.
17. Najar IA et al. Modulering af P-glycoprotein ATPase-aktivitet med nogle phytobestanddele. Phytother Res 2009; 24: 454-458.
18. Walgren RA et al. Efflux af diæt-flavonoid-quercetin-4'-beta-glucosid på tværs af humane intestinale caco-2-cellemonolag af apikale multilægemiddelresistens-associeret protein-2. J Pharmacol Exp Ther 2000a; 294: 830-836.
19. Walgren RA et al. Cellulær optagelse af diæt-flavonoid quercetin 4'-beta-glucosidase af natriumafhængig glucosetransportør SGLT1. J Pharmacol Exp Ther 2000b; 294: 837-843.
20. Mihara K et al. Intestinal first-pass metabolisme af eperison hos rotter. Pharm Res 2001; 18: 1131-1137.
21. Isacchi B et al. Antihyperalgetisk aktivitet af verbascoside i to modeller af neuropatisk smerte. J Pharm Pharmacol 2011; 63: 594-601.

22. Cook TJ et al. Intestinal permeabilitet af chlorpyrifos ved hjælp af single-pass intestinal perfusionsmetode i rotte. Toksikologi 2003; 184: 125-133.

23. Kumar YS et al. P-glycoprotein- og cytochrom P-450-medieret urtelægemiddelinteraktion. Drug Metabol Drug Interact 2010; 25:3-16.
24. Walle UK et al. Transport af genistein-7-glucosid af humane intestinale CACO-2-celler: en potentiel rolle for MRP2. Res Commun Mol Pathol Pharmacol 1999; 103: 45-56.
25. Ito K et al. Apikal/basolateral overfladeekspression af lægemiddeltransportører og dens rolle i vektoriel lægemiddeltransport. Pharm Res 2005; 22: 1559-1577.
26. Laitinen L et al. Caco-2 cellekulturer i vurderingen af ​​intestinal absorption: virkninger af nogle co-administrerede lægemidler og naturlige forbindelser i biologiske matricer. (University of Helsinki, Finland, 2006) Akademisk afhandling, s. 1-66.
27. Scambia G et al. Quercetin forstærker virkningen af ​​adriamycin i en multiresistent MCF-7 human brystkræftcellelinje: P-glycoprotein som et muligt mål. Cancer Chemother Pharmacol 1994; 34: 459-464.
28. Choi DH et al. Effekt af myricetin, en antioxidant, på farmakokinetikken af ​​losartan og dets aktive metabolit, EXP-3174, hos rotter: mulig rolle af cytochrom P450 3A4, cytochrom P450 2C9 og P- glykoproteinhæmning af myricetin. J Pharm Pharmacol 2010; 62: 908-914.
29. Tanino T et al. Paclitaxel-2′-ethylcarbonat-prodrug kan omgå P-glycoprotein-medieret cellulær efflux for at øge lægemidlets cytotoksicitet. Pharm Res 2007; 24: 555-565.
30. Hollman PC et al. Absorption af diæt-quercetinglycosider og quercetin hos raske ileostomifrivillige. Am J Clin Nutr 1995; 62: 1276-1282.
31. Kellett GL et al. Den diffusive komponent af intestinal glucoseabsorption medieres af den glucoseinducerede rekruttering af GLUT2 til børstebrætmembranen. Biochem J 2000; 350: 155-162.
32. Sagen K et al. Sortering af endogene plasmamembranproteiner sker fra to steder i dyrkede humane tarmepitelceller (Caco-2). Cell 1990; 60: 429-437.
33. Mahraoui L et al. Tilstedeværelse og differentiel ekspression af SGLT1, GLUT1, GLUT2, GLUT3 og GLUT5 hexosetransporter-mRNA'er i Caco-2 cellekloner i forhold til cellevækst og glukoseforbrug. Biochem J 1994; 298: 629-633.

34. Mesonero J et al. Sukkerafhængig ekspression af fructosetransportøren GLUT 5 i Cac-2-celler. Biochem J 1995; 312: 757-762.

35. Walgren RA et al. Transport af quercetin og dets glucosider gennem humane tarmepitelceller Caco-2. Biochem Pharmacol 1998; 55: 1721-1727.
36. Yoshikawa T et al. Sammenlignende ekspression af hexosetransportører (SGLT1, GLUT1, GLUT2 og GLUT5) i hele musens mave-tarmkanal. Histochem Cell Biol 2011; 135: 183-194.
37. Funes L et al. Virkninger af verbascoside, et phenylpropanoidglycosid fra citronverbena, på phospholipider-modelmembraner. Chem Phys Lipids 2010; 163: 190-199.
38. Neilson AP et al. Indflydelse af chokoladematrixsammensætning på kakaoflavan-3-ols biotilgængelighed in vitro og biotilgængelighed hos mennesker. J Agric Food Chem 2009; 57: 9418-9426.
39. Gao S et al. Meget varierende indhold af phenolics i perikonprodukter påvirker deres transport i den humane intestinale Caco-2 cellemodel: farmaceutisk og biofarmaceutisk begrundelse for produktstandardisering. J Agric Food Chem 2010; 58: 6650-6659.
40. Schramm DD et al. Fødevareeffekter på absorption og farmakokinetik af kakaoflavanoler. Life Sci 2003; 73: 857–869.
41. Laurent C et al. Ethanol og polyphenolfri vinmatrix stimulerer differentieringen af ​​humane intestinale Caco-2-celler. Indflydelse af deres tilknytning til en procyanidin-rig druekerneekstrakt. J Agric Food Chem 2005; 53: 5541-5548.
42. Artursson P et al. Korrelation mellem oral lægemiddelabsorption hos mennesker og tilsyneladende lægemiddelpermeabilitetskoefficienter i humane indre epitelceller (Caco-2). Biochem Biophys Res Commun 1991; 175: 880-885.
43. Crespy V et al. Sammenligning af den intestinale absorption af quercetin, phloretin og deres glucosider hos rotter. J Nutr 2001a; 131: 2109-2114.
44. Crespy V et al. Biotilgængelighed af phloretin og phloridzin hos rotter. J Nutr 2001b; 131: 3227-3230.