Monoterpenbestanddele fra Cistanche Tubulosa - kemiske strukturer af kankanosider A-E og Kankanol -

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

Haihui XIE, Toshio MORIKAWA, Hisashi MATSUDA, Seikou NAKAMURA, Osamu MURAOKA og Masayuki YOSHIKAWA

Abstrakt

Fire nye iridoidglycosider, kankanosider A (1), B (2), C (3) og D (4), et chloreret iridoid, kankanol (5) og et acyklisk monoterpenglycosid, kankanosid E (6), blev isoleret fra det methanoliske ekstrakt af tørrede stængler af Cistanche tubulosa (SCHRENK) R. WIGHT (Orobanchaceae) sammen med 16 kendte forbindelser. Strukturerne af disse nye forbindelser (1-6) blev bestemt baseret på kemiske og fysisk-kemiske beviser.

Nøgleord:Cistanche tubulosa; kankanosid; kankanol; iridoid; monoterpen; Orobanchaceae

Cistanche tubulosa(SCHRENK) R. WIGHT (Orobanchaceae)er en flerårig parasitisk plante, der vokser på rødderne af Salvadora- eller Calotropis-arter og distribueres i Nordafrika, Arabien og asiatiske lande.1) Stænglerne af denne plante (Kanka-nikujuyou på japansk) er traditionelt blevet brugt til behandling af impotens, sterilitet , lumbago og kropssvaghed.2) Tidligere blev adskillige iridoider, monoterpenoider, phenylethanoider og lignaner isoleret fra kinesisk og pakistansk C. tubulosa. 1,3–7) I løbet af vores serielle undersøgelser af bioaktive bestanddele fra kinesisk naturmedicin,8–18) fire nye iridoidglykosider, kankanosider A (1), B (2), C (3) og D (4) ), en chloreret iridoid, kankanol (5) og et acyklisk monoterpenglycosid, kankanosid E (6), blev isoleret fra det methanoliske ekstrakt af denne urtemedicin sammen med 16 kendte forbindelser, herunder 12 monoterpener (7-18). Denne artikel omhandler isolering og strukturbelysning af nye monoterpenbestanddele (1-6).

Cistanche tubulosa

Det methanoliske ekstrakt fra tørrede stængler afCistanche tubulosa(26,8 procent fra denne urtemedicin) blev udsat for normal fase og omvendt fase silicagelsøjlekromatografi og gentagen HPLC for at give kankanosider A (1, 0.0{{10 }}54 procent ), B(2, 0.030 procent ), C (3, 0.00 27 procent ), og D (4, {{40}}.0015 procent ), kankanol (5, 0.0{ {66}}34 procent ), og kankanosid E (6, 0.027 procent ) sammen med mussaenosidinsyre19) (7, 0.020 procent ) , geniposidinsyre19) (8, 0,030 procent), 8-epilogansyre7) (9, 0,033 procent), glurosid19) (10, 0,14 procent), antirrhide20) (11, 0,0079 procent), ajugol19) (12, 0,11, 0,11, 0,14 procent). procent), bartsioside19) (13, 0,21 procent), 6-deoxycatalpol19) (14, 0,11 procent), argyol21) (15, 0,0030 procent), cistanin22,23) (16, 0,0040 procent), cis tachlorin 17, 0,0035 procent), (2E,6Z)-8-bD-glucopyranosyloxy-2,6-dimethyl-2,6-octadiensyre24) (18, 0,0028 procent ), D mannitol25) (4,19 s ercent ), uridin25) (0,0069 procent ), (3R)-3-hydroxy-2- pyrrolidinon26,27) (0,0020 procent) og (3R)-3-hydroxy-1-methyl{ {97}}pyrrolidinon27) (0,0059 procent).

Struktur af kankanosid A (1) Kankanosid A (1) blev opnået som et amorft pulver og udviste en negativ optisk rotation ([a]D 25 107,4 grader i MeOH). IR-spektret på 1 viste et absorptionsbånd ved 1647 cm 1, der kan tildeles olefinfunktion ud over stærke absorptionsbånd ved 341 0 og 1076 cm 1, hvilket tyder på en glycosiddel. I positiv- og negativ-ion hurtig atombombardement (FAB)-MS på 1 blev kvasimomolekylære iontoppe observeret ved m/z 369 (M Na) og 345 (MH), og højopløsnings-FAB-MS-analyse afslørede molekylet formlen 1 er C16H26O8. Syrehydrolyse af 1 med 1,0 M saltsyre (HCl) frigjorde D-glucose, som blev identificeret ved HPLC-analyse ved anvendelse af en optisk rotationsdetektor.8,10—12,15—18) 1H- (CD3OD, tabel 1) og 13C-NMR (tabel 2) spektre af 1, som blev tildelt ved forskellige NMR-eksperimenter,28) viste signaler, der kunne tildeles to methyler [d 1,31 (s, 10-H3), 1,51 (br s, {{47} }H3)], to methylener [d 1,49, 2,02 (både m, 6a- og 6b-H), 1,64, 1,67 (både m, 7b- og 7a-H)], to methiner [d 2,21 (dd, J 2,7) , 9,5 Hz, 9-H), 2,71 (m, 5-H)], og en a,b-umættet acetalgruppe [d 5,33 (d, J 2,7 Hz, 1-H ), 5,95 (br s, 3-H)] sammen med en b-glucopyranosyldel [d 4,62 (d, J 7,9 Hz, 1-H)]. Som vist i fig. 1 indikerede 1 H-1H korrelationsspektroskopi (1 H-1 H COSY) eksperimentet på 1 tilstedeværelsen af ​​delstrukturer skrevet med fed linjer. I eksperimentet med heteronukleære multiple-binding korrelationer (HMBC) på 1 blev der observeret lang rækkevidde korrelationer mellem følgende protoner og carbonatomer (3-H, 1 -H og 1-C; 11- H3 og 3-C; 3-H, 5-H, 6-H2, 9-H, 11-H3 og 4- C ; 11-H3 og 5-C; 10-H3 og 7-C; 1-H, 7-H2, 9-H, 10-H3 og 8-C; 10-H3 og 9-C; 7-H2 og 10-C) som vist i fig. 1. Enzymatisk hydrolyse af 1 med b-glucosidase gav et aglycon, kankagenin a (1a) som vist i fig. 3. Sammenligning af 13C NMR-spektret for 1 med dem for 1a afslørede glycosyleringsskiftet omkring 1--positionen i 1 [1: dC 94,1 (1-C), 134,6 (3-C), 53,3 (9-C); 1a: dC 92,9 (1-C), 135,3 (3-C), 54,7 (9-C)]. Konnektiviteten af ​​bD-glucopyranosyl-delen i 1 blev således også afklaret til at være i 1-positionen 1a. Dernæst blev den relative stereostruktur af 1 karakteriseret ved nuklear Overhauser enhancement spectroscopy (NOESY) eksperiment, som viste NOE korrelationer mellem følgende protonpar (1-H og 10-H3; 3-H og 11-H3; 5-H og 6b-H, 9-H; 6b-H og 7b-H; 7a-H og 10-H3; 7b-H og {{ 190}}H) som vist i fig. 2. Endelig blev den absolutte konfiguration af 1-positionen i 1 bestemt ved anvendelse af 13C NMR-glycosyleringsforskydningsreglen for 1,1-disaccharid,29), som blev fundet at anvende på hemiacetalforbindelserne.30,31) Stereostrukturen af ​​1-positionen i 1 blev bekræftet at være opretholdt i 1a ved sammenligning af 1H-NMR-analysen inklusive NOESY-eksperimentet. Glykosyleringsforskydningsværdierne [Dd 1,2 ppm (1 -C) og 0,9 ppm (1- C), i pyridin-d5] viste sig at være karakteristiske for R, Rhemiacetal-kombinationen, som svarede til den absolutte stereostruktur på 1 som vist i fig. 3. Følgelig blev den absolutte konfiguration ved 1-positionen af ​​1 bestemt til at være S-konfiguration, og den absolutte stereostruktur af 1 blev belyst som vist.

Strukturer af kankanosider B (2) og C (3) Kankanosid B (2) blev også isoleret som et amorft pulver med negativ optisk rotation ([a]D26 118,7 grader i MeOH). IR-spektret på 2 viste absorptionsbånd ved 3410, 1647 og 1{{5{{80}}}}85 cm1, der kan tilskrives hydroxyl-, olefin- og etherfunktioner. Den molekylære formel C15H24O10 af 2 blev bestemt af de kvasimomolekylære iontoppe i positiv-ion FAB-MS og ved højopløsnings-FAB-MS. Syrehydrolyse af 2 med 1,0 M HCl frigivet D-glucose, som blev identificeret ved HPLC-analyse ved anvendelse af en optisk rotationsdetektor.8,10—12,15—18) 1H- (CD3OD, tabel 1) og 13C-NMR ( Tabel 2) spektre28) af 2 viste signaler, der kan tildeles to methylener [d 1,40 (DDD, J 5,2, 7,3, 13,5 Hz, 6a-H), 2,52 (DDD, J 7,0, 9,2, 13,5 Hz, 6b-5), 3,8 , 3,99 (begge d, J 11,9 Hz, 10-H2)], fire metiner [d 2,21 (dd, J 6,4, 8,6 Hz, 9-H), 2,83 (m, 5- H), 4,02 (dd, J 5,2, 7,0 Hz, 7-H), 5,49 (d, J 6,4 Hz, 1-H)], og et cisolefifinpar [d 4,95 (dd, J 4,0) , 6,1 Hz, 4-H), 6,22 (dd, J 1,8, 6,1 Hz, 3-H)], sammen med en b-glucopyranosyldel [d 4,72 (d, J 7,9 Hz, 1 - H)]. Proton- og kulstofsignalerne i 1H- og 13C-NMR-dataene for 2 svarede til dem for 6-deoxycatalpol (14), bortset fra signalerne, der skyldes 7- og 8- stillinger. Som vist i fig. 1 indikerede 1 H-1 H COSY-eksperimentet på 2 tilstedeværelsen af ​​delstrukturer skrevet med fed linjer, og i HMBC-eksperimentet blev der observeret langdistancekorrelationer mellem følgende proton- og carbonpar ({{ 122}}H, 1 -H og 1-C; 1-H og 3-C; 10-H2 og 7- C; 1-H , 7-H, 9-H, 10-H2 og 8-C; 7-H, 10-H2 og 9-C ; 7-H og 10-C). Den relative stereostruktur af 2 blev karakteriseret ved NOESY-eksperimentet, som viste NOE-korrelationer mellem følgende protonpar (1-H og 10-H2; 3- H og 4-H; 5-H og 6b-H, 9-H; 6b-H og 7-H; 7-H og 9-H) som vist i fig. 2. Til sidst gav alkalisk behandling af 14 med 5 procent vandig kaliumhydroxid (KOH) 2 og 19, 32), således at stereostrukturen af ​​2 blev klarlagt.

Kankanosid C (3) blev isoleret som et amorft pulver med negativ optisk rotation ([a]D 26 34.0 grad i MeOH). I den negative ion FAB-MS på 3 blev et par isotop kvasimomolekylære iontoppe observeret ved m/z 399 og 401 (MH) . Molekylformlen for 3 blev bestemt til at være C15H25ClO10 ved højopløsnings-FAB-MS-måling. Syrehydrolyse af 3 med 1,0 M HCl frigivet D-glucose, som blev identificeret ved HPLC-analyse ved anvendelse af en optisk rotationsdetektor.8,10—12,15—18) 1H- (CD3OD, tabel 1) og 13C-NMR ( Tabel 2) spektre28) af 3 viste signaler, der kan tildeles tre methylener [d 1,70 (br dd, J ca. 3, 13 Hz, 4a-H), 2,70 (br dd, J ca. 6, 13 Hz, 4b-H) , 1,68 (br d, J ca. 13 Hz, 6a H), 2,44 (m, 6b-H), 4,01, 4,04 (begge d, J 11,3 Hz, 10-H2)], fem methiner [d 2,47 (dd, J 2,5, 7,9 Hz, 9-H), 2,61 (m, 5- H), 3,94 (br s, 7-H), 5,10 (br d, J ca. 3 Hz, 3-H), 5,48 (d, J 2,5 Hz, 1-H)], og en b-glucopyranosyldel [d 4,60 (d, J 8,0 Hz, 1-H)]. Proton- og kulstofsignalerne i 1H- og 13C-NMR-spektrene på 3 kunne overlejres på dem af 2, bortset fra signalerne på grund af 3-- og 4--positionerne. Positionerne af bD-glucopyranosyl og chlorfunktion i 3 blev belyst ud fra H-H COSY- og HMBC-eksperimenterne som vist i fig. 1. Følgelig blev den plane struktur af 3 konstrueret til at være som vist. Den relative stereostruktur af 3 blev bestemt ved et NOESY-eksperiment, hvor NOE-korrelationer blev observeret mellem følgende protonpar (1-H og 3-H, 10-H2; 3- H og 4a-H; 4b-H og 5- H; 5-H og 6b-H, 9-H; 6b-H og 7-H; {{121} }H og 9-H) som vist i fig. 2.

Strukturer af Kankanosid D (4) og Kankanol (5) Kankanosid D (4) blev isoleret som et amorft pulver med negativ optisk rotation ([a]D 25 30,6 grader i MeOH). IR-spektret på 4 viste et absorptionsbånd ved 1655 cm1, der kan tilskrives olefinfunktion, og stærke absorptionsbånd ved 3410 og 1078 cm1, hvilket tyder på dets glykosidstruktur. I positiv-ion FAB-MS på 4 blev en kvasimomolekylær iontop observeret ved m/z 341 (M Na). Molekylformlen C15H26O7 på 4 blev bestemt ved FAB-MS-måling i høj opløsning. Syrehydrolyse af 4 med 1,0 M HCl frigjorde D-glucose,8,10-12,15-18), hvorimod (R)-rotunditet (4a) 33,34) blev opnået ved enzymatisk hydrolyse af 4 med b-glucosidase. 1H-NMR (tabel 3, CD3OD) og 13C-NMR (tabel 4) spektre28) af 4 viste signaler, der kunne tildeles en methyl [d 1,69 (s, 10-H3)], tre methylener [d 1,41, 2,06 (begge m, 4-H2), 1,51, 2,01 (både m, 6a- og 6b-H), 2,23 (br dd, J ca. 8, 15 Hz, 7a-H), 2,37 (br dd , J ca. 8, 15 Hz, 7b-H)], en methin [d 2,90 (m, 5- H)] og to methylener, der bærer en oxygenfunktion {d [3,56 (DDD, J 2,8, 7,4) , 13,2 Hz), 3,97 (DDD, J 4,9, 8,0, 13,2 Hz), 3-H2], 4,04, 4,18 (begge d, J 12,2 Hz, 1-H2)} sammen med en b- glucopyranosyldel [d 4,25 (d, J 7,7 Hz, 1-H)]. Positionen af ​​bD-glucopyranosyl-delen i 4 blev afklaret af HMBC-eksperimentet til at være 3--position (fig. 1). Baseret på dette bevis blev den absolutte stereostruktur af 4 bestemt til at være som vist.

Kankanol (5) blev opnået som et amorft pulver med positiv optisk rotation ([a]D25 11,1 grader). Den kemiske ionisering (CI)-MS på 5 viste et par isotop-iontoppe ved m/z 221 og 223 på grund af en kvasimomolekylær ion (MH). Den højopløselige CI-MS-måling på 5 viste, at molekylformlen var C9H13ClO4. 1H-NMR (tabel 1, CD3OD) og 13C-NMR (tabel 2) spektrene 28) af 5 viste tilstedeværelsen af ​​følgende funktioner: tre methylener [d 1,60 (DDD, J 2,5, 5,5, 13,1 Hz, 4a-H), 1,80 (br dd, J ca. 3, 13 Hz, 4b H), 1,83 (br d, J ca. 12 Hz, 6a-H), 2,57 (m, 6b-H), 3,75 , 3,88 (begge d, J 9,2 Hz, 10-H2)], fem metiner [d 2,76 (dd, J 4,3, 8,0 Hz, 9-H), 2,50 (m, 5- H), 3,80 (br s, 7-H), 5,17 (br d, J ca. 3 Hz, 3-H), 5,26 (d, J 4,3 Hz, 1-H) ]. Den plane struktur af 5 blev bekræftet af 1 H-1 H COSY og HMBC eksperimenter. Det vil sige, at 1 H–1 H COSY-eksperimentet på 5 indikerede tilstedeværelsen af ​​de delstrukturer skrevet med fed linjer, og i HMBC-eksperimentet blev der observeret langdistancekorrelationer som vist i fig. 1. Den relative stereostruktur af 5 var bestemt af NOESY-eksperimentet, hvor NOE-korrelationer blev observeret mellem de følgende protonpar (1-H og 9-H; 3-H og 4a-H; 4b-H og {{ 93}} H; 5-H og 6b-H, 9-H; 6b-H og 7-H; 7-H og 9-H) som vist i fig. 2. Ved sammenligning af 1H- og 13C-NMR-data for 5 med dem for 14a, som blev opnået ved behandling af 14 med 5% vandig HCl som vist i diagram 1,35) chlorens position gruppe i 5 blev understøttet til at være 3-positionen. Ydermere gav acetylering af 5 med eddikesyreanhydrid (Ac2O) og pyridin 3,7--oxidet (5a), mens 14a gav diacetatet (14b) under samme acetyleringsbetingelser. Dette bevis fik os også til at bekræfte, at klorfunktionens position var 3b-positionen (diagram 3). Følgelig blev stereostrukturen af ​​5 bestemt til at være som vist.

Struktur af kankanosid E (6) Kankanosid E (6) blev isoleret som et amorft pulver med negativ optisk rotation ([a]D 25 20.0 grad i MeOH). IR-spektret på 6 viste absorptionsbånd ved 3410, 1647, 1085 cm1, der kan tilskrives glycosid- og carbonylfunktioner, mens dets UV-spektrum viste absorptionsmaksimum ved 211 nm (log e 4,63), hvilket indikerer tilstedeværelsen af ​​en b-umættet carboxylsyre. Den molekylære formel C16H28O8 på 6 var karakteriseret ved den positive og negative ion FAB-MS og ved højopløsnings MS-måling. Syrehydrolyse af 6 frigivet D-glucose,8,10—12,15—18), hvorimod (2E,6R)-8-hydroxy-2,6-dimethyl- 2-octansyre (6a) 36) blev opnået ved enzymatisk hydrolyse af 6 med b-glucosidase. 1H-NMR (tabel 3, CD3OD) og 13C-NMR (tabel 4) spektre28) på 6 indikerede tilstedeværelsen af ​​en (2E,6R)-8-hydroxy-2,6- dimethyl-2-octansyredel [d 0,95 (d, J 6,4 Hz, 10-H3), 1,30, 1,48 (begge m, 5-H2), 1,45, 1,70 (begge m, { {70}}H2), 1,65 (m, 6-H), 1,81 (s, 9-H3), 2,22 (2H, m, 4-H2), 3,61, 3,94 (begge m, 8-H2), 6,78 (dd, J 1,2, 7,3 Hz, 3-H)] sammen med en bD-glucopyranosyldel [d 4,26 (d, J 7,6 Hz, 1-H)] . Ved sammenligning af kulstofsignalerne i 13C-NMR-spektret på 6 med dem for 6a blev glykosyleringsskiftet observeret omkring 8-positionen på 6. Positionen af ​​glucosidbindingen blev også bekræftet af HMBC-eksperimenter som vist i Fig. 1. Følgelig blev den absolutte stereostruktur af 6 klarlagt til at være (2E,6R)-8-b-D-glucopyranosyloxy-2,6-dimethyl-2-octansyre.

cistanche ekstrakt fordel

Eksperimentel

Følgende instrumenter blev brugt til at opnå fysiske data: specifikke rotationer, Horiba SEPA-300 digitalt polarimeter (l 5 cm); UV-spektre, Shimadzu UV-1600-spektrometer; IR-spektre, Shimadzu FTIR-8100-spektrometer; EI-MS, CI-MS og højopløsnings CI-MS, JEOL JMS-GCMATE massespektrometer; FAB-MS og højopløsnings MS, JEOL JMS-SX 102A massespektrometer; 1H-NMR-spektrum, JEOL EX-270 (270 MHz) og JNM-LA500 (500 MHz) spektrometre; 13C-NMR-spektre, JEOL EX-270 (68 MHz) og JNM-LA500 (125 MHz) spektrometre med tetramethylsilan som intern standard; og HPLC-detektor, Shimadzu RID-6A brydningsindeks og SPD- 10Avp UV-VIS-detektorer. HPLC-søjle, YMC-Pack ODS-A (250 4,6 mm id) og (250 20 mm id) kolonner blev anvendt til henholdsvis analytiske og præparative formål.

Følgende eksperimentelle betingelser blev brugt til kromatografi: ordinær fase silicagelsøjlekromatografi, silicagel BW-200 (Fuji Silysia Chemical, Ltd., Aichi, Japan, 15{{10}}—35 0 mesh); omvendt fase silicagelsøjlekromatografi, Chromatorex ODS DM1020T (Fuji Silysia Chemical, Ltd., Aichi, Japan, 100-200 mesh); TLC, præcoatede TLC-plader med silicagel 60F254 (Merck, 0,25 mm) (almindelig fase) og silicagel RP- 18 F254S (Merck, 0,25 mm) (omvendt fase); omvendt fase HPTLC, præcoatede TLC-plader med silicagel RP-18 WF254S (Merck, 0,25 mm); og detektion blev opnået ved sprøjtning med 1 procent Ce(SO4)2-10 procent vandig H2SO4 efterfulgt af opvarmning.

Plantemateriale

Tørrede stængler af Cistanche tubulosa (SCHRENK) R. WIGHT blev købt i Urumqi, Xinjiang-provinsen, Kina i januar 2005 via Eishin Trading Co., Ltd. Osaka, Japan, og botanisk identifikation blev foretaget af professor Jia Xiaoguang i Xinjiang Institute of Traditional Chinese og etnologiske lægemidler. En kuponprøve (2005.01. Xinjiang-01) af denne plante er registreret i vores laboratorium.

Udvinding og isolering

Tørrede stilke af C. tubulosa (5,0 kg) blev pulveriseret og ekstraheret tre gange med methanol under tilbagesvaling i 3 timer. Fordampning af opløsningsmidlet under reduceret tryk gav methanolekstrakten (134 0 g, 26,8 procent fra denne urtemedicin). Den methanoliske ekstrakt (160 g) blev underkastet normalfase silicagelsøjlekromatografi [3,2 kg, CHCl3-MeOH-H2O (10: 3 : 1→7 : 3 : 1, lavere lag→6 : 4 : 1)MeOH] for at give seks fraktioner [Fr. 1 (5.04 g), Fr. 2 (9,84 g), Fr. 3 (7,80 g), Fr. 4 (13,28 g), Fr. 5 (113,6{{104}} g), og Fr. 6 (7,61 g)]. Fraktion 1 (5.00 g) blev adskilt ved omvendt fase silicagelsøjlekromatografi [150 g, MeOH–H2O (40 6: 60→ 5{{ 162}} : 50→60 : 40, v/v)→MeOH] for at give fem fraktioner [Fr. {{50}} (83{{201}} mg), Fr. 1-2 (590 mg), Fr. 1-3 (180 mg), Fr. 1-4 (124 mg) og Fr. 1-5 (3200 mg)]. Fr. {{60}} (830 mg) blev yderligere adskilt ved HPLC [MeOH–H2O (10: 90, v/v)] for at give kankanol (5, 20) mg, 0,0034 procent), argyol (15, 18 mg, 0,0030 procent), cistanin (16, 24 mg, 0,0040 procent) og Fr. 1-1-2 (62 mg), som blev yderligere adskilt ved HPLC [MeOH-H2O (2:98, v/v)] for at give (3R)-3-hydroxy-2-pyrrolidinon (0,0020 procent) ) og (3R)-3-hydroxy-1-methyl-2-pyrrolidinon (0,0059 procent). Fr. 1-2 (590 mg) blev oprenset ved HPLC [MeOH-H2O (35:65, v/v) og CH3CN-H2O (20:80, v/v)] for at give cistanchlorin (17, 21 mg, 0,0035) procent). Fraktion 2 (9,72 g) blev underkastet omvendt fase silicagelsøjlekromatografi [290 g, MeOH-H2O (20 : 80 → 30 : 70 → 40 : 60 → 60 : 40, v/v) → MeOH] til af ford syv fraktioner [Fr. 2-1 (1986 mg), Fr. 2-2 (1563 mg), Fr. 2-3 (3931 mg), Fr. 2-4 (375 mg), Fr. 2-5 (486 mg), Fr. 2-6 (460 mg) og Fr. 2-7 (336 mg)]. Fr. 2-1 (466 mg) blev adskilt ved HPLC [MeOH-H2O (5:95, v/v)] for at give uridin (0,0069 procent). Fr. 2-2 (535 mg) blev adskilt ved HPLC [MeOH–H2O (10:90, v/v)] for at give antirrhid (11, 15 mg, 0,0079 procent) og 6-deoxycatalpol (14, 214) mg, 0,11 procent). Fr. 2-3 (535 mg) blev adskilt ved HPLC [MeOH–H2O (20:80, v/v)] for at give glurosid (10, 110 mg, 0,14 procent) og bartsiosid (13, 164 mg, 0,21 procent) . Fr. 2-4 (375 mg) blev adskilt ved HPLC [MeOH–H2O (30:70, v/v)] for at give kankanosider A (1, 32 mg, 0,0054 procent) og D (4, 9 mg, 0,0015 procent). ). Fr. 2-6 (460 mg) blev yderligere adskilt ved HPLC [MeOH–H2O (45:55, v/v)] for at give kankanosid E (6, 161 mg, 0,027 procent) og (2E,6Z){{192 }}bD-glucopyranosyloxy-2,6-dimethyl-2,6-octadiensyre (18, 17 mg, 0,0028 procent). Fraktion 3 (7,60 g) blev underkastet omvendt-fase silicagelsøjlekromatografi [230 g, MeOH-H2O (20 : 80 → 40 : 60 → 50 : 50 → 60 : 40, v/v) → MeOH] for at give fem brøker [Fr. 3-1 (2652 mg), Fr. 3-2 (593 mg), Fr. 3-3 (3610 mg), Fr. 3-4 (190 mg) og Fr. 3-5 (336 mg)]. Fr. 3-1 (480 mg) blev oprenset ved HPLC [MeOH-H2O (10:90, v/v)] for at give kankanosid B (2, 19 mg, 0,018 procent), geniposidinsyre (8, 32 mg, 0,030) procent) og ajugol (12, 12 mg, 0,011 procent). Fraktion 4 (13,10 g) blev underkastet omvendt fase silicagelsøjlekromatografi [390 g, MeOH-H2O (10 : 90 → 20 : 80 → 30 : 70 → 40 : 60 → 50 : 50, v/v) → MeOH] for at give syv fraktioner [Fr. 4-1 (6114 mg), Fr. 4-2 (430 mg), Fr. 4-3 (1058 mg), Fr. 4-4 (170 mg), Fr. 4-5 (2595 mg), Fr. 4-6 (1635 mg) og Fr. 4-7 (1064 mg)]. Fr. 4-2 (430 mg) blev yderligere adskilt ved HPLC [MeOH-H2O (5:95, v/v)] for at give 2 (70 mg, 0,012 procent) og kankanosid C (3, 16 mg, 0,0027 procent) . Fr. 4-6 (1058 mg) blev også adskilt ved HPLC [MeOH–H2O (15:85, v/v)] for at give mussaenosidinsyre (7, 116 mg, 0,020 procent) og 8-epilogansyre (9, 193 mg, 0,033 procent). Fraktion 5 (15,15 g) blev underkastet omvendt fase silicagelsøjlekromatografi [455 g, MeOH-H2O (0 : 100 → 10 : 90 → 20 : 80 → 40 : 60 → 50 : 50, v/v) → MeOH ] for at give syv fraktioner [Fr. 5-1 (9311 mg), Fr. 5-2 (1114 mg), Fr. 5-3 (306 mg), Fr. 5-4 (347 mg), Fr. 5-5 (1620 mg), Fr. 5-6 (1453 mg) og Fr. 5-7 (1106 mg)]. Fr. 5-1 (9311 mg) blev krystalliseret fra MeOH for at give D-mannitol (3337 mg, 4,19 procent).

De kendte forbindelser (7-18) blev identificeret ved sammenligning af deres fysiske data ([a]D, IR, 1H-NMR, 13C-NMR, MS) med rapporterede værdier 1,7,19-24,26,27) eller dem fra kommercielle prøver.25) Kankanosid A (1): Et amorft pulver, [a]D 25 107,4 grader (c 1,50, MeOH). Højopløselig positiv-ion FAB-MS: Beregnet for C16H26O8Na (M Na) 369,1525; Fundet 369,1522. IR (KBr): 3410, 2940, 1647, 1076 cm1. 1H-NMR (500 MHz, CD3OD og pyridin-d5) d: angivet i tabel 1. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD og pyridin-d5) d C: givet i tabel 2. Positiv-ion FAB-MS: m /z 369 (M Na). Negativ-ion FAB-MS: m/z 345 (MH).

Kankanosid B (2): Et amorft pulver, [a]D 26 118,7 grader (c 0.10, MeOH). Højopløselig positiv-ion FAB-MS: Beregnet for C15H24O10Na (M Na) 387,1267; Fundet 387,1261. IR (KBr): 3410, 2940, 1647, 1085 cm1. 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: angivet i tabel 1. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) dC: givet i tabel 2. Positiv-ion FAB-MS: m/z 387 (M Na). Negativ-ion FAB-MS: m/z 363 (MH).

Kankanosid C (3): Et amorft pulver, [a]D 26 34.0 grad (c 1.00, MeOH). Højopløsnings negativ-ion FAB-MS: Beregnet for C15H24ClO10 (MH) 399,1058; Fundet 399,1077. IR (KBr): 3410, 2964, 1159, 1078, 1048, 949 cm1. 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: angivet i tabel 1. 13C NMR (125 MHz, CD3OD) dC: givet i tabel 2. Negativ-ion FAB-MS: m/z 399, 401 (MH).

Kankanosid D (4): Et amorft pulver, [a]D 25 30,6 grader (c 0,50, MeOH). Højopløselig positiv-ion FAB-MS: Beregnet for C15H26O7Na (M Na) 341,1204; Fundet 341,1210. IR (KBr): 3410, 2940, 1655, 1078, 1040 cm1. 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: angivet i tabel 3. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) dC: givet i tabel 4. Positiv-ion FAB-MS: m/z 341 (M Na). Negativ-ion FAB-MS: m/z 317 (MH).

Kankanol (5): Et amorft pulver, [a]D25 11,1 grader (c 1,40, MeOH). Højopløsnings-CI-MS: Beregnet for C9H14ClO4 (MH) 221,0580; Fundet 221,0582. IR (KBr): 3399, 3004, 1165, 1096, 1059, 1048, 955 cm1. 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: angivet i tabel 1. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) dC: givet i tabel 2. CI-MS m/z (procent): 221 (MH) (5 223 (MH) (2), 185 (88), 167 (100), 149 (71) og 57 (49).

Kankanosid E (6): Et amorft pulver, [a]D 25 20.0 grader (c 2.00, MeOH). Højopløsnings-positiv ion FAB-MS: Beregnet for C16H28O8Na (M Na) 371,1682; Fundet 371,1690. UV [MeOH, nm (log e)]: 215 (4,16). IR (KBr): 3410, 2940, 1647, 1085, 1043 cm1. 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: angivet i tabel 3. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) dC: givet i tabel 4. Positiv-ion FAB-MS: m/z 371 (M Na). Negativ-ion FAB-MS: m/z 347 (MH).

cistanche ekstrakt fordel

Syrehydrolyse af 1—4 og 6 med 1 M HCl

En opløsning af 1-4 eller 6 (hver 1,5 mg) i 1 M HCl (0,5 ml) blev opvarmet under tilbagesvaling i 3 timer. Efter afkøling blev reaktionsblandingen hældt i isvand og neutraliseret med Amberlite IRA-400 (OH-form), og harpiksen blev fjernet ved filtrering. Derefter blev filtratet ekstraheret med EtOAc. Det vandige lag blev underkastet HPLC-analyse under følgende betingelser: HPLC-søjle, Ka-sensor LC NH{{10}}, 4,6 mm id 250 mm (Tokyo Kasei Co., Ltd., Tokyo, Japan); detektion, optisk rotation [Shodex OR-2 (Showa Denko Co., Ltd., Tokyo, Japan)]; mobil fase, CH3CN-H2O (75:25, v/v); fælleshastighed 0,8 ml/min; kolonnetemperatur, stuetemperatur. Identifikation af D-glucose til stede i det vandige lag blev udført ved sammenligning af dets retentionstid og optiske rotation med dem for en autentisk prøve: tR 12,3 min (positiv optisk rotation)

Enzymatisk hydrolyse af 1, 4 og 6 med b-Glucosidase

En opløsning af 1 (7,7 mg) i H2O (1,5 ml) blev behandlet med b-glucosidase (5,0 mg, fra mandel, Oriental Yeast Co., Tokyo, Japan), og opløsningen blev omrørt ved 37 grader i 3 d. Efter at EtOH var tilsat til reaktionsblandingen, blev opløsningsmidlet fjernet under reduceret tryk, og remanensen blev oprenset ved HPLC [MeOH-H2O (55:45, v/v)] for at give kankagenin a (1a, 2,3 mg, 56 procent) . Gennem en lignende procedure, (R)-rotundiol33,34) (4a, 1,2 mg, 69 procent) og (2E,6R)-8-hydroxy-2,6-dimethyl{{30} }oktansyre36) (6a, 6,8 mg, 62 procent) blev opnået fra henholdsvis 4 (3,5 mg) og 6 (20,4 mg).

Kankagenin a (1a): Et hvidt pulver, [a]D25 18,4 grader (c 0.20, MeOH). Højopløsnings-EI-MS: Beregnet for C10H16O3 (M) 184,1099; Fundet 184,1106. IR (KBr): 3410, 2940, 1684 cm1. 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: angivet i tabel 1. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) dC: givet i tabel 2. EI MS: m/z (procent): 184 (M, 37) 95 (100).

Alkalisk behandling af 14 med 5 procent vandig KOH

En opløsning af 14 (23,0 mg) i 5 procent vandig KOH (1,0 ml) blev omrørt ved 80 grader i 2 timer. Reaktionsblandingen blev neutraliseret med Amberlite HCR-W2 (H-form). Fjernelse af opløsningsmidlet fra filtratet under reduceret tryk gav en remanens, som blev oprenset ved HPLC [MeOH-H2O (5:95, v/v)] for at give 2 (4,0 mg, 16 procent) og 1932) (10,5 mg) , 43 procent).

Syrebehandling af 14 med 5 procent vandig HCl

En opløsning af 14 (25,0 mg) i 5% vandig HCI (2,0 ml) blev omrørt ved stuetemperatur i 3 timer. Reaktionsblandingen blev hældt i isvand, og hele reaktionsblandingen blev ekstraheret med EtOAc. EtOAc-ekstrakten blev successivt vasket med mættet vandig NaHC03 og saltvand, derefter tørret over vandfrit MgS04-pulver og filtreret. Fjernelse af opløsningsmidlet fra filtratet under reduceret tryk gav en remanens, som blev adskilt ved HPLC [MeOH-H2O (20: 80, v/v)] for at give 14a (4,0 mg, 25 procent).

14a

Et hvidt pulver, [a]D 20 21,5 grader (c 0,30, MeOH). Højopløsnings-CI-MS: Beregnet for C9H14ClO4 (MH) 221,0580; Fundet 221,0587. IR (KBr): 3410, 2962, 1365, 1152, 1055, 945 cm1. 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: angivet i tabel 1. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) dC: givet i tabel 2. CI-MS: m/z (procent): 221 (MH) ( 7), 223 (MH) (3), 203 (M H20) (97), 205 (M H20) (33), 185 (7), 167 (12), 159 (32), 121 (27), 110 (48), 95 (64), 85 (100), 67 (56) og 57 (65).

Acetylering af 5 og 14a

En opløsning af 5 (2,5 mg) i pyridin (0,5 ml) blev behandlet med eddikesyreanhydrid (Ac2O, 0,4 ml), og blandingen blev omrørt ved stuetemperatur i 12 timer. Reaktionsblandingen blev hældt i isvand, og hele reaktionsblandingen blev ekstraheret med EtOAc. EtOAc-ekstrakten blev successivt vasket med 5% vandig HCI, mættet vandig NaHC03 og saltvand og derefter tørret over vandfrit MgS04-pulver og filtreret. Fjernelse af opløsningsmidlet fra filtratet under reduceret tryk gav en remanens, som blev oprenset ved HPLC [MeOH-H2O (35:65, v/v)] for at give 5a (2,3 mg, 77 procent). Gennem en lignende procedure blev 14b (2,7 mg, 87 procent) også fremstillet og oprenset ved HPLC [MeOH-H2O (55:45, v/v)] fra 14a (2,1 mg).

5a

Et hvidt pulver, [a]D 20 1,8 grader (c 0,18, MeOH). Højopløsnings-CI MS: Beregnet for C11H15O5 (MH) 227,0919; Fundet 227,0925. IR (KBr): 2962, 1734, 1374, 1258, 1237, 1169, 1103, 1053, 947 cm1. 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: angivet i tabel 1. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) dC: givet i tabel 2. CI-MS m/z (procent): 227 (MH) (28) ), 209 (M H2O) (4), 184 (3), 166 (45), 149 (22), 138 (38), 122 (44), 94 (31), 85 (100) og 57 (34). ).

14b

Et hvidt pulver, [a]D 20 23,7 grader (c 0,06, MeOH). Højopløsnings-CI-MS: Beregnet for C13H18ClO6 (MH) 305,0792; Fundet 305,0790. IR (KBr): 1744, 1376, 1243, 1231, 1001, 941 cm1. 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) d: angivet i tabel 1. 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) dC: givet i tabel 2. CI-MS: m/z (procent): 305 (MH) ( 2), 307 (MH) (1), 263 (MH C2H3O) (6), 265 (MH C2H3O) (3), 245 (30), 203 (8), 185 (100), 167 (7), 149 (33), 121 (26), 95 (15), 85 (37) og 57 (93).

Anerkendelser

Denne forskning blev støttet af det 21. COE-program, Academic Frontier Project og en Grant-in-Aid til videnskabelig forskning fra ministeriet for uddannelse, kultur, sport, videnskab og teknologi i Japan. Forfatterne takker professor Xiaoguang Jia fra Xinjiang Institut for Traditionel Kinesisk og Etnologisk Medicin i Urumqi, Kina, for identifikation af plantemateriale.

cistanche fordel

Referencer og noter

1) Kobayashi H., Oguchi H., Takizawa N., Miyase T., Ueno A., Usmanghani K., Ahmad M., Chem. Pharm. Bull., 35, 3309-3314 (1987).

2) Xinjiang Science and Technology Press, "Culture Techniques of Xinjiang Staple Medicinal Plants," Xinjiang Institute of Traditional Chinese and Ethnologic Medicines Ed., 2004, s. 84-88.

3) Du N., Zhou P., Wang J., Liu C., Li W., Zhongguo Yaoke Daxue Xue bao, 24, 46-48 (1993).

4) Xue D., Zhongguo Zhongyao Zazhi, 22, 170-171 (1997).

5) Song Z., Mo S., Chen Y., Tu P., Li W., Zhao Y., Zheng J., Zhongguo Zhongyao Zazhi, 25, 728—730 (2000).

6) Song Z., Tu P., Zhao Y., Zheng J., Zhongcaoyao, 31, 808-810 (2000).

7) Yoshizawa F., Deyama T., Takizawa N., Usmanghani K., Ahmad M., Chem. Pharm. Bull., 38, 1927-1930 (1990).

8) Matsuda H., Morikawa T., Tao J., Ueda K., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Bull., 50, 208-215 (2002).

9) Morikawa T., Matsuda H., Toguchida I., Ueda K., Yoshikawa M., J. Nat. Prod., 65, 1468—1474 (2002).

10) Tao J., Morikawa T., Toguchida I., Ando S., Matsuda H., Yoshikawa M., Bioorg. Med. Chem., 10, 4005-4012 (2002).

11) Morikawa T., Tao J., Ando S., Matsuda H., Yoshikawa M., J. Nat. Prod., 66, 638—645 (2003).

12) Tao J., Morikawa T., Ando S., Matsuda H., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Bull., 51, 654-662 (2003).

13) Matsuda H., Morikawa T., Xie H., Yoshikawa M., Planta Med., 70, 847-855 (2004).

14) Sun B., Morikawa T., Matsuda H., Tewtrakul S., Harima S., Yoshikawa M., J. Nat. Prod., 67, 1464—1469 (2004).

15) Morikawa T., Sun B., Matsuda H., Wu LJ, Harima S., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Bull., 52, 1194-1199 (2004).

16) Xie H., Wang T., Matsuda H., Morikawa T., Yoshikawa M., Tani T., Chem. Pharm. Bull., 53, 1416—1422 (2005).

17) Morikawa T., Xie H., Matsuda H., Yoshikawa M., J. Nat. Prod., 69 (2006) under tryk.

18) Morikawa T., Xie H., Matsuda H., Wang T., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Bull., 54, 506-513 (2006).

19) Kobayashi H., Karasawa H., Miyase T., Fukushima S., Chem. Pharm. Bull., 33, 3645-3650 (1985).

20) Otsuka H., Phytochemistry, 33, 617-622 (1993).

21) Zhao W., Yang G., Xu R., Qin G., Phytochemistry, 41, 1553-1555 (1996).

22) Kobayashi H., Karasawa H., Miyase T., Fukushima S., Chem. Pharm. Bull., 32, 1729-1734 (1984).

23) Xu Z., Yang S., Yang J., Lu R., Zhongcaoyao, 30, 244-246 (1999).

24) Wang SJ, Pei YH, Hua HM, Chin. Chem. Lett., 12, 343—344 (2001).

25) Disse kendte forbindelser blev identificeret ved sammenligning af deres fysiske data med kommercielt opnåede prøver.

26) Pires R., Burger K., Tetrahedron, 53, 9213-9218 (1997).

27) Kamal A., Ramana KV, Ramana AV, Babu AH, Tetrahedron: Asymmetry, 14, 2587—2594 (2003).

28) 1H- og 13C-NMR-spektrene for 1-6 og beslægtede forbindelser (19, 1a, 5a, 14a, 14b) blev tildelt ved hjælp af forvrængningsfri forstærkning ved polarisationsoverførsel (DEPT), dobbelt kvantefilterkorrelationsspektroskopi ( DQF COSY), heteronukleær multipel kvantekohærens (HMQC) og heteronukleær multiple bond connectivity (HMBC) eksperimenter.

29) Nishizawa M., Kodama S., Yamase Y., Kayano K., Hatakeyama S., Ya mada H., Chem. Pharm. Bull., 42, 982-984 (1994).

30) Yoshikawa M., Ueda T., Matsuda H., Yamahara J., Murakami N., Chem. Pharm. Bull., 42, 1691-1693 (1994).

31) Matsuda H., Shimoda H., Uemura T., Ueda T., Yamahara J., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Bull., 47, 1753-1758 (1999).

32) Damtoft S., Jensen SR, Nielsen BJ, Phytochemistry, 24, 2281— 2283 (1985).

33) Watanabe K., Takada Y., Matsuo N., Nishimura H., Biosci. Biotek. Biochem., 59, 1979-1980 (1995).

34) Takikawa H., Yamazaki Y., Mori K., Eur. J. Org. Chem., 229-232 (1998).

35) Kitagawa I., Fukuda Y., Taniyama T., Yoshikawa M., Chem. Pharm. Bull., 39, 1171-1176 (1991).

36) Yamaguchi K., Shinohara C., Kojima S., Sodeoka M., Tsuji T., Biosci. Biotek. Biochem., 63, 731-735 (1999).