Terapeutisk effekt af cistanoside A på knoglemetabolisme af ovariektomiserede mus

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

Abstrakt

Cistanoside A (Cis A), er et aktivt phenylethanoid glycosid isoleret fraCistanche deserticola YC Mahar fået vores opmærksomhed på grund af sin mulige rolle i behandlingen afosteoporose. I denne undersøgelse evaluerede vi virkningerne af Cis A på en ovariektomiseret (OVX) musemodel og undersøgte dens underliggende molekylære virkningsmekanismer. Efter 12 ugers oralt administreret indgreb udviste Cis A (20, 40 og 80 mg/kg kropsvægt/dag) signifikante antiosteoporotiske virkninger på OVX-mus, dokumenteret ved øget knoglestyrke, knoglemineraltæthed og forbedret trabekulær knoglemikroarkitektur. I mellemtiden blev aktiviteterne af knogleresorptionsmarkører, inklusive tartrat-resistent sur phosphatase (TRAP), deoxypyridinolin (DPD) og cathepsin K, reduceret, og bioaktiviteten af ​​knogledannelsesmarkør alkalisk phosphatase (ALP) blev øget. Mekanistisk hæmmede Cis A ekspressionen af ​​TNF-receptor-associeret faktor 6 (TRAF6), et opstrøms molekyle, der deles af både nuklear faktor kappa let kæde forstærker af aktiverede B-celler (NF-KB) og phosphatidylinositol 3-kinase ( PI3K)/Akt-veje og efterfølgende undertrykte niveauerne af receptoraktivatorer af nuklear faktor kappaB-ligand (RANKL), nedregulerede ekspressionen af ​​NF-KB og opregulerede osteoprotegerin (OPG), PI3K og Akt, hvilket betyder, at Cis A havde antiosteoporotisk aktivitet i ovariektomiserede mus via TRAF6-medieret NF-kappaB-inaktivering og PI3K/Akt-aktivering. Sammen præsenterer vi nye resultater om, at Cis A ved at nedregulere TRAF6 koordinerer hæmningen af ​​NF-KB og stimulering af PI3K/Akt-veje for at fremme knogledannelse og forhindre knogleresorption. Disse data demonstrerede potentialet af Cis A som et lovende middel til behandling afosteoporosesygdom.

Nøgleord: cistanoside A; ovariektomiserede mus; antiosteoporotisk; TRAF6; RANKL

Introduktion

Osteoporose, en systemisk skelet "stille dræber", er blevet en stor sundhedsfare, der har ramt over 2000 millioner mennesker verden over i de seneste år [1]. Det er karakteriseret ved lav knoglemassetæthed (BMD) og mikroarkitektonisk forringelse, som stammer fra en overskydende knogleresorption over knogledannelsen og til sidst resulterer i osteoporotisk fraktur [2,3]. I dag er identifikation af midler til at blokere osteoklastisk differentiering og resorption de almindelige og vellykkede strategier for udvikling af terapeutiske lægemidler tilosteoporose[4], og der er faktisk mange syntetiske midler, herunder østradiolvalerat og alendronatnatrium, der kan forebygge og behandleosteoporose. Lægemidlerne mod sygdommene er dog langt fra ideelle; nogle af disse lægemidler kan øge risikoen for endometrie- og brystkræft og også have en vis grad af bivirkninger, såsom hypercalcæmi, hypercalciuri, etc. [5], som begrænser deres kliniske anvendelser. Derfor har traditionel kinesisk medicin (TCM), især den spiselige TCM med de isolerede bioaktive forbindelser og fraktioner, i mere end et årtusinde været flittigt brugt sikkert og effektivt i asiatiske lande til at forebygge og behandle forskellige sygdomme, bl.a.osteoporose[6,7].

Osteoporoseer karakteriseret som øget knogleresorption på grund af øget osteoklastogenese, og denne proces involverer forpligtelsen af ​​hæmatopoietiske monocytter til osteoklastprækursorer, som smelter sammen til dannelse af multinukleerede osteoklaster, som er målrettet mod knoglesteder, der gennemgår ombygning [4]. Receptoraktivator for nuklear faktor-κB ligand (RANKL), en nøglefaktor, der udskilles fra osteoblaster, stimulerer monocytdifferentiering til osteoklaster [8,9]. Interaktionen af ​​RANKL med dens receptor RANK resulterer i en kaskade af intracellulære hændelser, herunder NF-KB, PI3K/Akt, calcium/calmodulin-afhængig kinase ved at rekruttere adaptersignalproteinet TNF-receptor-associeret faktor (TRAF6). Som følge heraf opreguleres adskillige osteoklast-relaterede markørgener, herunder TRAP, cathepsin K og DPD, og ​​processen med knogleresorption accelereres.

Phenylethanoidglycosider er karakteriseret ved kanelsyre- og hydroxyphenylethyldele, der er knyttet til en -glucopyranose (apiose, galactose, rhamnose, xylose osv.) via en glykosidbinding, som er vidt udbredt i lægeplanter [10]. Cistanoside A (Cis A) er et aktivt phenylethanoid glycosid iCistanche deserticola YC Ma. Ifølge optegnelsen af ​​kinesisk farmakopé blev C. deserticola traditionelt brugt til at behandle nyre-yin-mangel, muskelsvaghed, lændeevne osv., og phenylethanoidglycosider er de vigtigste bioaktive bestanddele i denne urt [11]. Baseret på 'nyre'-teorien om TCM, kunne nyren styre knoglesystemet, hvilket betyder, at udviklingen og funktionerne af knoglerne afhænger af nyreessensen, og denne nyreessens kan omdannes til knoglemarven for at nære knoglerne, fremme vækst og reparation af skelettet og styrke skelettet [12]. Da C. deserticola kunne styrke nyren, antog vi, at Cis A kunne forebygge og behandleosteoporose. Denne undersøgelse var derfor designet til at validere potentialet af Cis A til at forebyggeosteoporoseved at bruge en ovariektomiseret musemodel, og knogledannelses- og resorptionsmarkører, såvel som de relaterede potentielle mekanismer, blev bestemt til at estimere den antiosteoporotiske bioaktivitet af dette middel.

Resultater

Virkninger af Cis A på knogle-trepunktsbøjningstest

For at analysere, om behandling med Cis A gør knoglen stærkere, udsatte vi lårbenene for trepunktsbøjningstesten. Som vist i figur 1 var den maksimale belastning påført, når knoglebrudene var 21,5 procent og 22,0 procent højere hos dyrene behandlet med 20 mg/kg og 80 mg/ kg Cis A, henholdsvis sammenlignet med dyr i den ovariektomiserede (OVX) gruppe (p < 0.05).="" i="" mellemtiden="" forbedrede="" behandling="" med="" cis="" a="" også="" knoglestivheden;="" alle="" de="" cis="" a-behandlede="" mus="" viste="" signifikant="" øget="" stivhed="" med="" data="" på="" henholdsvis="" 121.="" 0="" ±="" 12,1="" (p="">< 0,05),="" 124,1="" ±="" 16,2="" (p="">< 0,05)="" og="" 127,7="" ±="" 9,6="" (p="">< 0,01)="" sammenlignet="" med="" 102,2="" ±="" 10,7="" af="" ovx-musene.="" resultaterne="" indikerer,="" at="" den="" øgede="" knoglestyrke="" i="" ovx-musene="" behandlet="" med="" cis="" a="" skyldtes="" en="" øget="" mængde="" knogle="" og="" en="" forbedring="" af="">

Virkninger af Cis A på knoglemikroarkitektur

Tredimensionel trabekulær knoglemikroarkitektur af mus målt ved mikro-CT (figur 2 og tabel 1) viser intuitivt, at musene i OVX-gruppen udviste en bemærkelsesværdig reduktion i det trabekulære område og trabekulære antal sammenlignet med sham-gruppen, hvilket indikerer, at ovariektomi kunne inducere et markant fald i knoglemassetæthed (BMD, -46 procent), knoglemineralindhold (BMC, -66 procent), vævsmineralindhold (TMC, -85 procent), knoglevolumenfraktion (BVF, -82 procent), trabekulært antal (Tb. N, -76 procent ) og en stigning i trabekulær separation (Tb. Sp, plus 80 procent ) uden nogen ændring i total vævsmineraltæthed (TMD) og trabekulær tykkelse (Tb. Th) efter operationen på 12 uger.

OVX-musene behandlet med Cis A resulterede dog i dosisafhængigt øget BMD (plus 43 procent ~57 procent), BMC (plus 65 procent ~73 procent), TMC (plus 83 procent ~90 procent), BVF (plus 80 procent). ~88 procent), større reduktion i Tb. Sp (−79 procent ~88 procent) og yderligere forstærket Tb. N (plus 73 procent ~82 procent) sammenlignet med OVX-gruppen. TMD syntes ikke at være påvirket af ovariektomien, men blev signifikant øget ved behandling med østradiolvalerat (EV).

Virkninger af Cis A på både knogledannelses- og resorptionsmarkører

Virkningerne af Cis A på knogleresorptionsmarkører, herunder TRAP, DPD, cathepsin K og knogledannelsesindeks ALP og knogle Gla-protein (BGP), er vist i figur 3. Efter 12 ugers ovariektomioperation er aktiviteterne af TRAP, DPD , og cathepsin K i OVX-gruppen var signifikant øget, især DPD, som steg med næsten 55,6 procent; TRAP og cathepsin K blev forstærket med henholdsvis 43,5 procent og 38,1 procent sammenlignet med den falske gruppe. Cis A, administreret oralt i 12 uger, viste et bemærkelsesværdigt potentiale til at forhindre alle de ovennævnte knogleresorptionsmarkører, især den høje dosis (80 mg/kg), der udviser en signifikant effekt på at undertrykke aktiviteterne af DPD med henholdsvis 45.0 procent, TRAP med 49.0 procent og cathepsin K med henholdsvis 44.0 procent (p < 0.01),="" sammenlignet="" med="" ovx-gruppe="" (figur="" 3).="" selvom="" en="" stigende="" tendens="" til="" alp-="" og="" bgp-aktiviteter="" blev="" påvist="" i="" ovx-gruppen,="" blev="" der="" ikke="" observeret="" nogen="" statistisk="" signifikante="" ændringer.="" imidlertid="" blev="" der="" observeret="" en="" signifikant="" forbedring="" af="" alp-aktivitet="" i="" lav-="" og="" høj="" cis="" a-behandlede="" grupper="" sammenlignet="" med="" sham-gruppen="" (p=""><>

Virkninger af Cis A på proteinekspressionsniveauer af TRAF6, NF-KB PI3K, Akt, OPG og RANKL

Western blot-analyse afslørede, at sammenlignet med sham-gruppen var proteinniveauerne af TRAF6, NF-KB og RANKL i OVX-gruppen signifikant øget (p < 0.05),="" mens="" opg,="" pi3k="" og="" akt="" blev="" signifikant="" reduceret="" (figur="" 4).="" cis="" a="" (20="" mg/kg="" eller="" 80="" mg/kg)="" nedregulerede="" traf6-ekspression="" signifikant="" (p="">< 0.05),="" efterfulgt="" af,="" at="" rankl-udtrykket="" er="" faldt="" og="" opg="" steg,="" hvilket="" betyder,="" at="" opg/rankl-forholdet="" blev="" opreguleret.="" som="" følge="" heraf="" blev="" signalkaskaderne="" af="" nf-kb="" nedreguleret,="" og="" pi3k/akt="" blev="" opreguleret="" ved="" cis="" a-behandling="" (p="">< 0,05).="" molecules="" 2017,="" 22,="" 197="" 5="" of="" 11="" 2.1.4.="" virkninger="" af="" cis="" a="" på="" proteinekspressionsniveauer="" af="" traf6,="" nf-kb="" pi3k,="" akt,="" opg="" og="" rankl="" western="" blot-analyse="" afslørede,="" at="" sammenlignet="" med="" sham-gruppen="" var="" proteinniveauerne="" af="" traf6,="" nf-kb="" og="" rankl="" i="" ovx-gruppen="" signifikant="" øget="" (p="">< 0,05),="" mens="" opg,="" pi3k="" og="" akt="" var="" signifikant="" reduceret="" (figur="" 4).="" cis="" a="" (20="" mg/kg="" eller="" 80="" mg/kg)="" nedregulerede="" traf6-ekspression="" signifikant="" (p="">< 0,05),="" efterfulgt="" af,="" at="" rankl-ekspressionen="" blev="" reduceret="" og="" opg="" øget,="" hvilket="" betyder,="" at="" opg/rankl-forholdet="" blev="" opreguleret.="" som="" følge="" heraf="" blev="" signaleringskaskaderne="" af="" nf-kb="" nedreguleret,="" og="" af="" pi3k/akt="" blev="" opreguleret="" ved="" cis="" a-behandling="" (p=""><>

Diskussion

I betragtning af begrænsningerne af de nuværende terapeutiske muligheder forosteoporosesygdom, er der behov for alternativer fra fødevarer eller naturlige spiselige lægeplanter. Som en del af vores igangværende bestræbelser på at opdage effektive antiosteoporotiske midler fra TCM, fandt vi en række ekstrakter, fraktioner og forbindelser, der har effekten af ​​antiosteoporotiske egenskaber [13,14].Cistanche deserticolaer en vigtig klassisk TCM, som viste sig at besidde en gunstig sikkerhedsprofil [15] og brede medicinske funktioner til behandling af nyremangel osv. [16]. Ifølge teorien om TCM blev TCM, der har virkningen af ​​opkvikkende nyrer, normalt brugt til at behandleosteoporose; phenylethanoid glycosider er de vigtigste bioaktive bestanddele i denne urt, hvilket betyder, at phenylethanoid glycosider indeholdt i C. deserticola kan have en antiosteoporotisk egenskab. Det blev bevist, at C. deserticola-ekstrakt signifikant kunne hæmme reduktionen i BMD og forhindre forringelsen af ​​trabekulær mikroarkitektur forårsaget af OVX [17]. I in vitro-eksperimentet øgede det også signifikant ALP, knoglemorfogenetisk protein-2 og osteopontin-mRNA, såvel som knoglemineralisering af dyrkede osteoblaster [18]. Echinacosid, en bioaktiv hovedkomponent i C. deserticola officielt registreret i den kinesiske farmakopé [11], udviste antiosteoporotisk aktivitet med en høj dosis på 30~270 mg/kg kropsvægt/dag [19], og yderligere in vitro-resultater viste, at det kunne fremme knogleregenerering ved at øge OPG/RANKL-forholdet i MC3T3-E1 Subklone 14-celler [20]. Cis A var et af phenylethanoidglycosiderne isoleret fra C. deserticola, og flere rapporter viste, at denne forbindelse havde antioxidativ aktivitet [21] og antiinflammatoriske egenskaber [22,23]. Et nyligt offentliggjort papir opdagede, at Cis A udviste beskyttende aktiviteter på både CCl4 og alkohol-induceret hepatotoksicitet hos mus, og det viste også en beskyttende egenskab på ethanol-induceret skade i primære dyrkede mushepatocytter in vitro [24]. I vores nuværende undersøgelse viste resultaterne, at Cis A havde antiosteoporotisk aktivitet ved en lav dosis (20~80 mg/kg kropsvægt/dag) ved at bruge en ovariektomiseret musemodel, og denne bioaktivitet blev udøvet ved at nedregulere niveauet af TRAF6, undertrykke ekspressionen af ​​RANKL og NF-KB og stimulerende OPG, PI3K og Akt, hvilket betyder, at den terapeutiske effekt af Cis A i OVX-mus var gennem mekanismen TRAF6-medieret NF-kappaB-inaktivering og PI3K/Akt-aktivering.

Det er velkendt, at ovariektomi kan forårsageosteoporosemed et tydeligt fald i BMD, biomekanisk styrke, knoglekvalitet og trabekulær knoglemikroarkitektur, og ovenstående ændringer skyldes delvist østrogenmangel [25]. Nu, i det nuværende in vivo-eksperiment, viser vores undersøgelse, at ovariektomi-induceretosteoporoseresulterede i en signifikant reduktion i biomekanisk styrke og trabekulære strukturelle parametre, herunder BMD, BMC, TMC og Tb. N, og stigende Tb. Sp; og behandling af Cis A signifikant forbedrede knoglemekaniske egenskaber inklusive maksimal belastning og stivhed, forbedrede BMD og forbedrede de fleste af de knogle trabekulære mikroarkitektur strukturelle parametre sammenlignet med musene i OVX-gruppen, hvilket indikerer, at Cis A var effektiv til at forbedre knoglekvaliteten og trabekulær mikroarkitektur i OVX-mus.

Udover den totale BMD kunne trepunktsbøjningstesten og trabekulær knoglemikroarkitekturmåling direkte diagnosticereosteoporose, blev knogledannelsesmarkørerne, inklusive ALP og BGP, og knogleresorptionsindekset, inklusive TRAP, DPD og cathepsin K, også anvendt til at belyse de relaterede antiosteoporotiske mekanismer af Cis A. I vores undersøgelse, ALP-aktivitet i OVX-gruppemusene viste en ikke-signifikant stigende tendens, som indikerer en øget knogleomsætningshastighed [26,27] i postmenopausalosteoporose; den høje (80 mg/kg kropsvægt/dag) og lave (20 mg/kg kropsvægt/dag) dosis af Cis A-behandlinger viste signifikant forbedring af ALP-aktiviteten sammenlignet med den falske gruppe, hvorimod BGP-aktiviteten ikke syntes at være påvirket af ovariektomi i alle behandlede grupper; TRAP, DPD og cathepsin K var signifikant øget i OVX-gruppen, og Cis A-administration reducerede markant alle tre knogleresorptionsmarkører. Ovenstående data antydede, at Cis A havde potentiel antiosteoporotisk aktivitet, og denne virkning blev udøvet af reguleringen af ​​knoglemetabolisme, herunder både undertrykkelse af knogleresorption og forøgelse af knogledannelse.

Koordinationen mellem osteoblast og osteoklast er en kritisk faktor i opretholdelsen af ​​skeletintegritet. Osteoklaster, der udtrykker TRAP, binder sig til knogleoverfladen gennem dannelsen af ​​aktinbundne forseglingszoner, inden for hvilke proteolytiske enzymer, såsom cathepsin K, frigives, hvilket fører til dannelsen af ​​resorptionshuller. Modulationen af ​​osteoklastogenese af umodne celler af den osteoblastiske linje er medieret af RANKL og OPG [28]. OPG er en lokkereceptor, der hæmmer RANKL-aktivering af osteoklastogenese og derved mindsker knogleresorptionen. RANKL, som giver et vigtigt signal til osteoklast-progenitorer, er et membranbundet molekyle af tumornekrosefaktor-ligandfamilien, der fremmer dannelsen af ​​osteoklaster. Forholdet mellem OPG/RANKL-ekspression menes at være en nøgleparameter for osteoklastogen aktivitet, og signaleringskaskader aktiveret af RANKL inkluderer NF-KB- og PI3K-vejene [29]. Betydningen af ​​NF-KB-vejen til osteoklastogenese demonstreres af det faktum, at deletionen af ​​NF-KB i mus resulterede i fravær af modne osteoklaster [30]. TRAF6 blev bevist som et lovende mål for nye anti-osteoporotiske lægemidler. TRAF6-deficiente mus, der udviser defekt osteoklastogenese og svær osteopetrose, viste således vigtigheden af ​​TRAF6 i knoglemetabolismen. Nye beviser peger på en kritisk regulatorisk funktion for TRAF6 i RANKL/RANK-medierede signaleringskaskader [4,31]. Dataene fra den aktuelle undersøgelse indikerede, at Cis A-behandling på OVX-musene resulterede i nedregulering af TRAF6-proteinekspressionsniveauer, reducerede RANKL og øgede OPG-ekspressioner og derved forhindrede RANKL-aktivering af nedstrøms NF-KB og aktivering af PI3K/Akt-signalvejene , hvilket tyder på, at Cis A hæmmer osteoklastdifferentiering ved TRAF6-medieret NF-kappaB-inaktivering og PI3K/Akt-aktivering og øger OPG/RANKL-forholdet, hvilket efterfølgende hæmmer osteoklastogenese og fremmer knogledannelse.

Referencer

1. Lane, NE Epidemiologi, ætiologi og diagnose afosteoporose. Er. J. Obstet. Gynecol 2006, 194 (Suppl. S2), S3–S11. [CrossRef] [PubMed]

2. Kanis, JA; McCloskey, EV; Harvey, NC; Johansson, H.; Leslie, WD Interventionstærskler og diagnosticering afOsteoporose. J. Bone Miner. Res. 2015, 30, 1747-1753. [CrossRef] [PubMed]

3. Jiang, J.; Li, J.; Jia, X. Den antiosteoporotiske aktivitet af central-icaridin (CIT) på knoglemetabolisme hos ovariektomiserede rotter. Molecules 2014, 19, 18690-18704. [CrossRef] [PubMed]

4. Li, J.; Zeng, L.; Xie, J.; Yue, Z.; Deng, H.; Ma, X.; Zheng, C.; Wu, X.; Luo, J.; Liu, M. Inhibering af osteoklastogenese og knogleresorption in vitro og in vivo af et prenylflavonoid xanthohumol fra humle. Sci. Rep. 2015, 5, 1-14.

5. Barzel, US Østrogener i forebyggelse og behandling af postmenopausalosteoporose: En anmeldelse. Er. J. Med. 1988, 85, 847-850. [CrossRef]

6. Zhu, Z.; Xue, LM; Han, T.; Jiao, L.; Qin, LP; Li, YS; Zheng, HC; Zhang, QY Antiosteoporotiske virkninger og proteomisk karakterisering af målet og mekanismen for en Er-Xian Decoction på osteoblastisk UMR-106 og osteoklaster induceret fra RAW264.7. Molecules 2010, 15, 4695-4710. [CrossRef] [PubMed]

7. Wu, YB; Zheng, CJ; Qin, LP; Sun, LN; Han, T.; Jiao, L.; Zhang, QY; Wu, JZ Den antiosteoporotiske aktivitet af anthraquinoner fra Morinda Officinalis på osteoblaster og osteoklaster. Molecules 2009, 14, 573-583. [CrossRef] [PubMed]

8. Bonewald, LF Den fantastiske osteocyt. J. Bone Miner. Res. 2011, 26, 229-238. [CrossRef] [PubMed]

9. Banin Hirata, BK; Oda, JM; Losi Guembarovski, R.; Ariza, CB; de Oliveira, CE; Watanabe, MA Molekylær markører for brystkræft: forudsigelse om tumoradfærd. Dis. Markører 2014, 2014, 1-12. [CrossRef] [PubMed]

10. Alipieva, K.; Korkina, L.; Orhan, IE; Georgiev, MI Verbascoside - En gennemgang af dets forekomst, (bio)syntese og farmakologisk betydning. Biotechnol. Adv. 2014, 32, 1065-1076. [CrossRef] [PubMed]

11. Pharmacopoeia, Redaktionskomité for Chinese Pharmacopoeia. Farmakopé for Folkerepublikken Kina; China Medical Science and Technology Press: Beijing, Kina, 2015.

12. Zhang, H.; Xing, WW; Li, YS; Zhu, Z.; Wu, JZ; Zhang, QY; Zhang, W.; Qin, LP Effekter af et traditionelt kinesisk urtepræparat på osteoblaster og osteoklaster. Maturitas 2008, 61, 334-339. [CrossRef] [PubMed]

13. Ma, X.-Q.; Zheng, C.-J.; Zhang, Y.; Hu, C.-L.; Bing, L.; Fu, X.-Y.; Han, L.-Y.; Xu, L.-S.; Rahman, K.; Qin, L.-P. Antiosteoporotiske flflavonoider fra Podocarpium podocarpum. Phytochem. Lett. 2013, 6, 118-122. [CrossRef]

14. Ja, Q.; Ma, XQ; Hu, CL; Lin, B.; Xu, LS; Zheng, CJ; Qin, LP Antiosteoporotisk aktivitet og bestanddele af Podocarpium podocarpus. Fytomedicin 2015, 22, 94–102. [CrossRef] [PubMed]

15. Gao, Y.; Qin, G.; Wen, P.; Wang, Y.; Fu, W.; Han, L.; Yao, S.; Zhao, P. Sikkerhedsvurdering af pulveriseretCistanche deserticola YCMaved en 90-dages fodringstest i Sprague-Dawley-rotter. Drug Chem. Toxicol. 2016, 1-7. [CrossRef] [PubMed]

16. Huang, ZX; Chen, GM; Zhao, KT; Chen, R.; Lin, CF Undersøgelse af toksiciteten afCistanche Deserticola. Hage. J. Health Lab. Teknol. 2014, 24, 1098-1100.

17. Zhang, L.; Yue, X.; Zhang, L.; Zhao, J.; Chen, Y.; Cao, Z.; Liu, Y. Anti-osteoporose virkning afCistanche deserticola Ma ekstrakthos ovarieektomerede rotter. Trop. J. Pharm. Res. 2016, 15, 1929–1933. [CrossRef]

18. Li, TM; Huang, HC; Su, CM; Ho, TY; Wu, CM; Chen, WC; Fong, YC; Tang, CHCistanche deserticola ekstraktøger knogledannelsen i osteoblaster. J. Pharm. Pharmacol. 2012, 64, 897-907. [CrossRef] [PubMed]

19. Li, F.; Yang, X.; Yang, Y.; Guo, C.; Zhang, C.; Yang, Z.; Li, P. Antiosteoporotisk aktivitet af echinacosid i ovariektomiserede rotter. Phytomedicine 2013,

20, 549-557. [CrossRef] [PubMed] 20. Li, F.; Yang, Y.; Zhu, P.; Chen, W.; Qi, D.; Shi, X.; Zhang, C.; Yang, Z.; Li, P. Echinacoside fremmer knogleregenerering ved at øge OPG/RANKL-forholdet i MC3T3-E1-celler. Fitoterapia 2012, 83, 1443-1450. [CrossRef] [PubMed]

21. Xiong, Q.; Kadota, S.; Tani, T.; Namba, T. Antioxidative virkninger af phenylethanoider fraCistanche deserticola. Biol. Pharm. Tyr. 1996, 19, 1580-1585. [CrossRef] [PubMed]

22. Nan, ZD; Zeng, KW; Shi, SP; Zhao, MB; Jiang, Y.; Tu, PF Phenylethanoid glycosider med anti-inflammatoriske aktiviteter fra stænglerne afCistanche deserticoladyrket i Tarim-ørkenen. Fitoterapia 2013, 89, 167-174. [CrossRef] [PubMed]

23. Xiong, Q.; Tezuka, Y.; Kaneko, T.; Li, H.; Tran, LQ; Hase, K.; Namba, T.; Kadota, S. Hæmning af nitrogenoxid af phenylethanoider i aktiverede makrofager. Eur. J. Pharmacol. 2000, 400, 137-144. [CrossRef]. Luo, H.; Cao, R.; Wang, L.; Zhu, L. Beskyttende virkning af Cistanchis A på ethanol-induceret skade i primære dyrkede musehepatocytter. Biomed. Pharmacother. 2016, 83, 1071-1079. [CrossRef] [PubMed]

25. Nian, H.; Ma, MH; Nian, SS; Xu, LL Antiosteoporotisk aktivitet af icariin i ovariektomiserede rotter. Phytomedicine 2009, 16, 320-326. [CrossRef] [PubMed]

26. Swaminathan, R. Biokemiske markører for knogleomsætning. Clin. Chim. Acta 2001, 313, 95-105. [CrossRef]

27. Lim, DW; Kim, JG; Lee, Y.; Cha, SH; Kim, YT Forebyggende virkninger af Eleutherococcus senticosus barkekstrakt i OVX-induceretosteoporosehos rotter. Molecules 2013, 18, 7998-8008. [CrossRef] [PubMed]

28. Bord, S.; Irland, DC; Beavan, SR; Compston, JE Effekterne af østrogen på osteoprotegerin, RANKL og østrogenreceptorekspression i humane osteoblaster. Bone 2003, 32, 136-141. [CrossRef]

29. Takayanagi, H. Osteoimmunologi: fælles mekanismer og krydstale mellem immun- og knoglesystemer. Nat. Rev. Immunol. 2007, 7, 292-304. [CrossRef] [PubMed]

30. Franzoso, G.; Carlson, L.; Xing, L.; Poljak, L.; Shores, EW; Brown, KD; Leonardi, A.; Tran, T.; Boyce, BF; Siebenlist, U. Krav til NF-kappaB i osteoklast- og B-celleudvikling. Gene Dev. 1997, 11, 3482-3496. [CrossRef] [PubMed]

31. Tan, EM; Li, L.; Indran, IR; Chew, N.; Yong, EL TRAF6 medierer undertrykkelse af osteoklastogenese og forebyggelse af ovariektomi-induceret knogletab af et nyt prenylflavonoid. J. Bone Miner. Res. 2016. [CrossRef] [PubMed]

32. Jiao, L.; Cao, DP; Qin, LP; Han, T.; Zhang, QY; Zhu, Z.; Yan, F. Antiosteoporotisk aktivitet af phenolforbindelser fra Curculigo orchioides. Phytomedicine 2009, 16, 874–881. [CrossRef] [PubMed]