Isolering og oprensning af phenylethanoid glycosider fra Cistanche Deserticola ved højhastigheds modstrømskromatografi

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

Li a,b, Rong Tsao b,*, Raymond Yang b, Chunming Liu a, J. Christopher Young b, Honghui Zhu b.

Abstrakt

Fem phenylethanoidglycosider (PhG'er), echinacosid, cistanosid A, acteosid, isoacteosid og 20-acetylacteosid, blev isoleret og oprenset fraCistanche deserticolafor første gang ved højhastigheds modstrømskromatografi (HSCCC) ved brug af to bifasiske systemer, et bestående af ethylacetat-ethanol-vand (5:0.5:4.5, v/v/v) og et andet af ethylacetat-n-butanol-ethanol-vand ({{10}}.5:0.5:0.1:1, v/v/v/v). I alt 28,5 mg echinacosid, 18,4 mg cistanosid A, 14,6 mg acteosid, 30,1 mg isoacteosid og 25,2 mg 20-acetylacteosid blev oprenset fra 1412 mg af n-debutanolerticola C, hver ekstrakt. ved over 92,5% renhed som bestemt ved HPLC. Strukturerne blev identificeret ved deres retentionstid, UV, LC-ESI-MS i negativ ion-tilstand og bekræftet ved NMR-eksperimenter. Det karakteristiske LC-ESI-MSn-fragmenteringsmønster for de fem forbindelser diskuteres og findes at være et meget specifikt og nyttigt værktøj til den strukturelle identifikation af PhG'er fra denne vigtige lægeplante.

Nøgleord:Cistanche deserticola; Phenylethanoid; Echinacoside; Cistanoside A; Acteosid; Isoacteosid; 20-Acetylacteosid; HSCCC; LC-ESI-MS; NMR

1. Introduktion

Cistanche deserticola YC Maer en velkendt kinesisk urtemedicin og har været meget brugt i traditionelle præparater svarende til nutidens funktionelle fødevareingredienser eller kosttilskud (Wong, Li, Cheng, & Chen, 2006). De vigtigste bioaktive bestanddele i C. deserticola er phenylethanoidglycosider (PhGs), herunder echinacosid, acteosid, isoacteosid, 20-acetylacteosid og cistanosid A (Kobayashi, Karasawa, & Miyase, 1984; Kobayashi et al., 1987., 1987). PhG'er er vidt udbredt i planteriget og er blevet grundigt undersøgt for deres forskellige biologiske funktioner såsom hepatobeskyttende (Xiong et al., 1998), anti-inflammatorisk, antinociceptiv aktivitet (Schapoval et al., 1998) og antioxidantaktiviteter ( Cheng, Wei, Guo, Ni, & Liu, 2005; He, Lau, Xu, Li, & But, 2000; Li, Wang, & Wang, 1997; Li, Wang, Zheng, Liu, & Jia, 1993; Wang, Jiang, Wu, & Wang, 2001; Xiong, Kadota, Tani, & Namba, 1996), forbedring af seksuel funktion (Xie & Wu, 1993; Zong, He, Wu, & Chen, 1996) og beroligende effekt (Lu, 1998) ).

På grund af de ovennævnte betydelige bioaktiviteter er der et presserende behov for store mængder rene forbindelser som referencestandarder og til forskellige in vitro og in vivo undersøgelser relateret til brugen af ​​traditionel kinesisk medicin. Effektive metoder til isolering, oprensning og strukturel karakterisering af PhG'er bliver derfor nødvendige. Sådant arbejde kræver dog normalt brugen af ​​flere kromatografiske trin til prøveoprydning og isolering (Gross, Lahloub, Anklin, Schulten, & Sticher, 1988; Nishimura, Sasaki, Inagaki, Chin, & Mitsuhashi, 1991; Ravn, Nishibe , Sasahara, & Li, 1990; Shoyama, Matsumoto, & Nishioka, 1987), hvilket sædvanligvis resulterer i lave genvindingsrater på grund af irreversible adsorptioner af PhG'er på den faste bærer under separation (Lei et al., 2001). I modsætning hertil er højhastigheds modstrømskromatografi (HSCCC) blevet et effektivt alternativ til de konventionelle kromatografiske teknikker til adskillelse af nogle PhG'er fra planteekstrakter (Lei et al., 2001; Li et al., 2005). Lei et al. med succes adskilt acteosid og 20-acetylacteosid fraCistanches salsa(CA Mey.) G. Beck ved at bruge HSCCC (Lei et al., 2001). Forfatterne af dette papir har tidligere rapporteret adskillelsen af ​​acteosid og isoacteosid fra Plantago psyllium L. af HSCCC (Li et al., 2005). Der er dog ikke offentliggjort nogen rapport om adskillelse og oprensning af flere phG'er fra C. deserticola ved hjælp af HSCCC. På grund af manglen på standarder er LC-MS metoder blevet udviklet og brugt som et kraftfuldt analytisk værktøj til hurtig karakterisering og identifikation af nogle phG'er i planteekstrakt (Li et al., 2005; Wang et al., 2000).

I dette papir rapporterer vi en HSCCC-metode udviklet til fremstilling af echinacosid, cistanosid A, acteosid, isoacteosid og 20-acetylacteosid fra C. deserticola. Karakterisering og analyse af de fem adskilte PhG'er blev opnået ved brug af LC koblet med in-line ESI massespektrometri og NMR eksperimenter. Retentionstiden, molekylvægten og de karakteristiske fragmentioner af de fem PhG'er er præsenteret og diskuteret i dette papir. Strukturerne af de fem PhG'er identificeret i denne undersøgelse er vist i fig. 1.

Effektive ingredienser af Cistanche deserticola

2. Eksperimentel

2.1. Kemikalier og reagenser

Acteosid blev købt fra Sigma-Aldrich (Oak-Ville, ON), echinacosid blev købt fra ChromaDex (Santa Ana, CA). Isoacteosid blev isoleret fra P. psyllium L. (Li et al., 2005). C. deserticola blev købt fra Beijing TongRenTang Medicinal Store (Kina). Alle opløsningsmidler var af HPLC-kvalitet og købt fra Caledon Laboratories Ltd. (Georgetown, ON).

2.2. Prøveforberedelse

C. deserticola (20 g) blev ekstraheret fem gange ved stuetemperatur i 12 timer hver med 100 ml 80% vandig ethanol. Hver gang blev ekstraktionsblandingen filtreret gennem et Whatman No.1 filterpapir (Whatman International Ltd., Maidstone, England). Det kombinerede filtrat blev koncentreret til 100 ml i vakuum ved < 40="" grader.="" den="" resulterende="" vandige="" opløsning="" blev="" affedtet="" to="" gange,="" hver="" med="" 100="" ml="" hexan,="" og="" derefter="" ekstraheret="" successivt="" i="" fem="" gange,="" hver="" med="" 100="" ml="" n-butanol.="" n-butanollagene="" blev="" kombineret="" og="" koncentreret="" til="" tørhed="" i="" vakuum="" ved="">< 40="" grader,="" hvilket="" gav="" 2,2="" g="" n-butanolekstrakt.="" ekstraktet="" blev="" opbevaret="" ved="" -20="" grad="" før="">

2.3. HSCCC-separationsprocedure

Den præparative HSCCC blev udført i en Model CCC{{0}} højhastigheds modstrømskromatografi (Pharma-Tech Research, Baltimore, Maryland, USA). Dette apparat havde tre præparative spoler, forbundet i serie (samlet volumen, 325 ml). Apparatets omdrejningshastighed kunne reguleres mellem 0 og 2000 rpm. HSCCC-systemet var udstyret med en HPLC-pumpe (Pharma-Tech Research, Baltimore, Maryland, USA), en Model 450 UV-detektor (Alltech, USA), en Model L 120 E flad-bed-optager (Linseis Inc., Princeton Jct, USA), en fraktionssamler (Advantec MFS Inc., USA) og en prøveinjektionsventil med en 10-mL prøvesløjfe.

En blanding af ethylacetat-ethanol-vand (5:0.5:4,5, v/v/v) blev rystet kraftigt i en skilletragt og ladet stå og skille ved stuetemperatur. De to faser blev brugt i HSCCC, efter at de nåede ligevægt. Hele den oprullede søjle blev først fyldt med det øverste lag, som fungerer som den stationære fase. Det nedre lag (mobil fase) blev derefter pumpet ind i hovedenden af ​​søjlen med en strømningshastighed på 1,5 ml/min. Rotationshastigheden blev indstillet til 1050 rpm. En prøve (ca. 230 mg hver gang) opløst i 8 ml af blandingen af ​​ethylacetat-ethanol-vand (5:0,5:4,5, v/v/v) blev fyldt i injektionsventilen, efter at systemet nåede hydrodynamisk ligevægt. Dette bifasiske opløsningsmiddelsystem blev valgt baseret på fordelingskoefficienten (K), som var 0,87, 1,11 og 1,32 for henholdsvis acteosid, isoacteosid og 20 acetylacteosid. K-værdien var forholdet mellem koncentrationerne i det øverste og nederste lag af den samme forbindelse som bestemt ved HPLC (fig. 2). Udløbet fra søjlens udløb blev kontinuerligt overvåget af en UV-detektor ved 254 nm og opsamlet i reagensglas med en fraktionsopsamler indstillet til 4 minutter for hvert rør.

2.4. LC-forhold

statisk auto-sampler og en fotodiode array-detektor (DAD) blev brugt til analyse af PhG'er i n-butanolekstraktet af C. deserticola og fraktioner opsamlet fra HSCCC-separationen. Adskillelsen blev udført i en Phenomenex ODS-C18-søjle (250 × 4,6 mm, 5 lm) med en C18-beskyttelsessøjle. Den binære mobile fase bestod af acetonitril (opløsningsmiddel A) og vand indeholdende 2 procent eddikesyre (opløsningsmiddel B). Alle opløsningsmidler blev filtreret gennem en

{{0}}.45 lm filter før brug. Flowhastigheden blev holdt konstant på 1,0 mL/min i en samlet kørselstid på 25 min. Systemet blev kørt med et gradientprogram: 0–20 min: 90 procent B til 60 procent B; 20–22 min: 60 procent B til 0 procent B; og 22–25 minutter, 0 procent B til 90 procent B. Prøveinjektionsvolumenet var 10 l. Toppe af interesse blev overvåget ved 320 nm af en DAD-detektor.

2.5. LC-ESI-MS eksperimenter

LC-MS-eksperimenter blev udført under anvendelse af et Finnigan LCQ DECA ionfælde-massespektrometer (Thermo Finnigan, San Jose, CA, USA) udstyret med en elektrospray-ioniseringskilde (ESI). Prøverne blev analyseret i samme kromatografiske tilstand. En negativ model blev brugt til dataindsamling. Overtræksgas- og hjælpestrømningshastighederne blev indstillet til henholdsvis 96 og 7 (vilkårlig enhed). Kapillærspændingen blev indstillet til 29 V og dens temperatur blev styret til 350 grader. Indgangslinsespændingen blev fastsat til 40 V, og den multipolede RF-amplitude blev indstillet til 540 V. ESI-nålespændingen blev styret til 4,5 kV. Rørlinseforskydningen var 16 V, den multipolede linse 1 forskydning var 8,20 V og den multipolede linse 2 forskydning var 10,5 V. Elektronmultiplikatorspændingen blev indstillet til 980 V til iondetektion.

2.6. NMR til identifikation

NMR-spektre blev optaget på et Bruker Avance-600-spektrometer (Bruker BioSpin Ltd., Milton, Canada). Kun forbindelser 2 og 5 (ingen tilgængelige standarder) blev udsat for NMR-forsøg. Prøver blev opløst i CD3OD.

Aktive ingredienser i cistanche: echinacosid og acteosid

3. Resultater og diskussioner

En vellykket HSCCC-separation afhænger i høj grad af et passende tofaset opløsningsmiddelsystem, der giver en ideel fordelingskoefficient (K) omkring 1 for den ønskede forbindelse. Et sådant bifasisk system bør også give en rimelig kort afviklingstid (Chen, Games, & Jones, 2003; Foucault & Chevolot, 1998; Oka, Oka, & Ito, 1991). I vores eksperiment valgte vi fire serier af opløsningsmiddelsystemer i henhold til opløseligheden af ​​målforbindelserne i C. deserticola. HPLC blev brugt til at måle koncentrationen i hver fase, hvorfra målforbindelsernes K-værdier blev beregnet. To systemer, ethylacetat-n-butanol-ethanol-vand (4:0,6:0,6:5, v/v/v/v) og ethylacetat-vand (1:1, v/v), er tidligere blevet brugt i HSCCC til at adskille acteosid og 20-acetylacteosid fra

C. salsa og acteosid og isoacteosid fra P. Psyllium,

henholdsvis (Lei et al., 2001; Li et al., 2005). Selvom det første system havde en relativt kort bundfældningstid, havde det dårlig ydeevne til at adskille PhG'erne fra C. deserticola på grund af de lave K-værdier for forbindelser 1 og 2 og høje K-værdier for forbindelser 3-5. K-værdierne var meget lave for forbindelser 1-4 i det andet system, men meget høje for forbindelse 5 (tabel 1). Et modificeret system indeholdende ethylacetat-ethanol-vand (5:0,5:4,5, v/v/v) gav en ideel K-værdi for forbindelser 3-5 på henholdsvis 0,87, 1,11 og 1,32 og resulterede i den gode adskillelse af disse tre forbindelser (fig. 3A og B). Dette system producerede imidlertid

for lille en K-værdi for forbindelser 1 og 2, hvilket får de to forbindelser til at co-eluere nær opløsningsmiddelfronten (fraktion 1 i fig. 3A). En yderligere modifikation af systemet (ethylacetat-n-butanol-ethanol-vand (0.5:0.5:0.1:1, v/v/v/ v) hævede K-værdierne for forbindelse 1 og 2 til henholdsvis 0.52 og 0.92 og førte til fuldstændig adskillelse (fig. 3C). Fig. 3A viser HSCCC-separationen af ​​en prøve indeholdende 23 0 mg af n-butanolekstraktet af C. deserticola ved anvendelse af ethylacetat-ethanol-vand (5:0.5:4.5, v/v/v). Fraktioner, der blev bekræftet ved HPLC til kun at indeholde forbindelser 3, 4 eller 5 blev kombineret separat, og dem, der indeholdt forbindelser 3 og 4, blev samlet, frysetørret og genunderkastet HSCCC for yderligere adskillelse (fig. 3B). HSCCC-separation beskrevet ovenfor gav i alt 14,6 mg, 30,1 mg og 25,2 mg af forbindelserne 3-5 fra 1412 mg n-butanolekstrakt. Fig. 3C viser HSCCC-separationen af ​​en prøve indeholdende forbindelser 1 og 2 (fraktion 1 i den første separation) under anvendelse af ethylacetat-n-butanol-ethanol-vand (0.5:0.5:0.1:1, v/v/v/v). I alt 28,5 og 1 8,4 mg af forbindelserne 1 og 2 blev opnået. Den kromatografiske renhed af de frysetørrede forbindelser 1-5 var over 92,5 procent, som blev direkte brugt til LC-ESI-MS og NMR-analyser.

Tentativ identifikation af forbindelser 1, 3 og 4 blev opnået ved kongruente retentionstider og UV-spektrale data med dem for det autentiske echinacosid, acteosid og isoacteosid (fig. 2). Forbindelser 2 og 5 var ukendte, men UV-spektrene for alle fem forbindelser var meget ens, hvilket indikerer lignende strukturelle træk.

For yderligere at undersøge strukturerne af disse fem forbindelser blev LC-ESI-MSn eksperimenter forsøgt, og resultaterne er vist i fig. 4 og tabel 2. Forbindelser relateret til toppene (1-5) i fig. 2 udviste intense deprotonerede molekylære ioner [MH]— ved m/z henholdsvis 785, 799, 623, 623 og 665 i negativ tilstand. Dimeriske [2M H]-ioner blev også observeret for toppe 1-4 i fig. 2. Disse bekræftede, at molekylvægtene af toppe 1-5 var henholdsvis 786, 800, 624, 624 og 666. LC-MSN-dataene (tabel 2) gav meget nyttig strukturel information for de fem PhG'er, såsom det neutrale tab af en eksperimentel procedure: ca. 1 mg af hver prøve blev vejet i et 10 ml reagensglas, hvori 1 ml af hver fase af det præ-ækvilibrerede tofasede opløsningsmiddelsystem blev tilsat. Reagensglasset blev lukket og rystet kraftigt i 1 min og fik lov at stå, indtil det adskilte fuldstændigt. En alikvot på 100 l af hvert lag blev udtaget og inddampet separat til tørhed i vakuum kl.<40 °c.="" the="" residue="" was="" dissolved="" in="" 10="" ll="" methanol="" and="" analyzed="" by="" hplc="" for="" determining="" the="" partition="" coefficient="" (k)="" of="" compounds="" 1–5.="" the="" k="" value="" was="" expressed="" as="" the="" peak="" area="" of="" the="" target="" compound="" in="" the="" upper="" phase="" divided="" by="" that="" in="" the="" lower="">

LC-ESI-MS for top 1 er vist i fig. 4A. Den deprotonerede molekylære ion [MH] — ved m/z 785 med en høj overflod og et dimert deprotoneret molekyle.ion [2M H] — ved m/z 1571 blev observeret i negativ tilstand, hvilket tyder på en molekylvægt på 786, hvilket var det samme som echinacosid. Yderligere undersøgelse i LC-MS2-eksperimentet af m/z 785-ionerne gav en hoveddatterion ved m/z 623 (fig. 4B) produceret direkte fra m/z 785 ved tab af en caffeoyldel eller en hexosedel som [M 162 H]—. LC-MS3-spektret af m/z 623 udviste to hovedioner ved m/z 477 og 461 og to mindre ioner ved m/z 315 og 179 (fig. 3C, tabel 2). Masseforskellene mellem m/z 623 og fragmentionerne m/z 477 og 461 var henholdsvis 146 og 162, svarende til tabet af en rhamnoseenhed og en glucosedel eller en caffeoyldel [M 162 H]—. m/z 623-ionerne mistede også en caffeoyldel og en rhamnosedel for at producere m/z 315-ionerne. Ionen ved m/z 179 blev produceret fra spaltningen af ​​caffeoyldelen, med den negative ladning tilbage på den del af caffeoyldelen. LC-ESI-MSN-eksperiment på det autentiske echinacoside viste det samme fragmenteringsmønster. Top 1 blev derfor bekræftet at være echinacosid.

For top 2 viste LC–ESI-MS m/z 799 som den deprotonerede molekylære ion [MH]— og m/z 1599 som dens dimere ion, hvilket tyder på en molekylmasse på 800. Under MS2 eksperimenter blev m/z 799 ioner dannede tre døtre ved m/z 637, 623 og 475 (tabel 1). Ionen ved m/z 637 blev produceret direkte fra moderionen af ​​m/z 799 igen på grund af det neutrale tab af caffeoylen [M—162—H]— eller en glucosedel [M—162—H]—. Ionen ved m/z 623 var et resultat af tabet af et CH2-radikal. Ionen ved m/z 475 blev dannet ud fra det neutrale tab af både caffeoyldelen [M 162 H] – og glucosedelen fra moderionen. MS3-eksperimentet på m/z 637 producerede tre ioner ved m/z 619, 491 og 475, svarende til tabene af henholdsvis én vand, en rhamnoseenhed og en glucosedel. m/z 623-datterionen producerede m/z 461 og 315 i MS3-undersøgelsen, som fulgte de samme fragmenteringsveje som echinacosid som diskuteret ovenfor. LC-ESI-MSN-dataene understøttede en foreløbig identifikation for top 2 som cistanosid A. Begge toppe viste den samme [MH]-ion ved m/z 623 og dimer ved m/z 1247 i negativ tilstand (tabel 1), hvilket indikerer de er muligvis isomerer med samme molekylvægt på

624, det samme som acteosid og isoacteosid. MS2-spektrene for [MH]—-ionerne viste også en samme datterion på m/z 461, hvilket indikerede tabet af caffeoyldelen fra moderionen m/z 623 (tabel 1). Lignende MS3-spektre blev opnået for de to forbindelser. For top 3 dannede MS3-spektret af ionen ved m/z 461 tre ioner ved m/z 315, 161 og 135. M/z 315 er dannet efter at have mistet rhamnose som diskuteret tidligere. Ionen m/z 161 blev produceret fra spaltningen af ​​caffeoyldelen efterfulgt af et yderligere tab af et vand; ladningen forblev på den del af caffeoyldelen. Ionen ved m/z 135 [aglykone 18 H]- opstod fra spaltningen af ​​den glykosidiske binding ved C1-position med et yderligere tab af et vand, hvilket efterlod ladningen til at være på den del af aglycondelen. MS3-spektret af top 4 fulgte den samme fragmenteringsvej som top 3 bortset fra den manglende ion ved m/z 135. Den molekylære ion og fragmenteringsmønstrene for disse to forbindelser er i overensstemmelse med litteraturdataene om acteosid og isoacteosid (Wang et al. ., 2000), selvom der blev fundet en yderligere ion m/z 153, og proton-NMR-data for cistanosid A og 20-acetylacteosid blev tildelt som [aglycone H] — af Wang et al. (Wang et al., 2000). Denne ion kan have været ustabil og mistet vand for at give m/z 135 i vores eksperiment. Baseret på MS-dataene og de kongruente retentionstider for top 3 og 4 med standarderne, identificeres de derfor som henholdsvis acteosid og isoacteosid.

LC–ESI-MS dataene for top 5 er vist i tabel 2. En deprotoneret molekylær ion [MH]— (m/z 665) var den eneste ion fundet i den negative tilstand, hvilket indebærer en molekylmasse på 666. Tre datterioner blev observeret ved m/z 623, 503 og 461 i MS2-eksperimentet (tabel 2). Datterionerne ved m/z 623 og 503 blev dannet direkte fra moderionen ved tab af henholdsvis en COCH2-gruppe og en caffeoyldel. Ionen ved m/z 461 kom fra tabet af både caffeoyl- og COCH2-delen [M 162 42 H] - fra moderionen. I MS-eksperimentet producerede m/z 623 m/z 461, og m/z 503 gav tre ioner ved m/z 485, 461 og 315. MS3-spektret af datterionen m/z 461 gav to ioner ved 443 og 315. Ved at sammenligne LC-MSN-fragmenteringsmønsteret for top 5 med andre forbindelser rapporteret i denne undersøgelse og med andre rapporterede (Li et al., 2005; Wang et al., 2000), konkluderede vi, at top 5 var strukturelt meget relateret til akteosid, hvor den eneste forskel er COCH3-enheden på R3-positionen. En foreløbig identitet blev derfor givet til top 5 som 20-acetylacteosid (fig. 1).

Strukturerne af de to foreløbigt identificerede forbindelser, top 2 (som cistanosid A) og top 5 (som 20-acetylacteosid) blev bekræftet af deres strukturer ved 1H NMR. De kemiske skift og koblingskonstanter for alle protoner i forbindelse 2 og 5, som vist i tabel 3., matchede med de rapporterede NMR-data for henholdsvis cistanosid A og 20-acetylacteosid (Kobayashi et al., 1984, 1987) . 2D NMR-eksperimenter (langrækkende COSY-, ROESY- og CH-korrelation) blev også udført i denne undersøgelse, og de bekræftede yderligere identifikationen (data ikke vist).

Acteosid fra Cistanche deserticola

4 konklusioner

I denne artikel blev HSCCC med succes brugt til isolering og oprensning af echinacosid, cistanosid A, acteosid, isoacteosid og 20-acetylacteosid fra n-butanolekstraktet af C. deserticola. Det er derfor et gennemprøvet middel til semi-præparativ separation af bioaktiv. I mellemtiden er strukturerne af de fem PhG'er i C. deserticola blevet undersøgt ved hjælp af LC–ESI-MSN; nogle karakteristiske træk ved PhG'er blev fundet, som gjorde det muligt for os at bestemme de funktionelle grupper i strukturerne. LC-ESI-MSN-metoden er derfor et kraftfuldt værktøj til hurtig identifikation af phenylethanoider og deres glycosider i C. deserticola-ekstrakter, især når det er underbygget af NMR-data.

Anerkendelse

Forfatterne vil gerne takke Jun Gu fra Nuclear Magnetic Resonance Centre, University of Guelph, Ontario, Canada for hendes hjælp til NMR-eksperimenter. Dette projekt blev delvist støttet af finansiering fra Jilin-provinsen, Kina (nr. 20060904).

Referencer

Chen, LJ, Games, DE, & Jones, J. (2003). Isolering og identifikation af fire flavonoidbestanddele fra frøene af Oroxylum Indicum ved højhastighedsmodstrømskromatografi. Journal of Chromatography A, 988, 95-105.

Cheng, XY, Wei, T., Guo, B., Ni, W., & Liu, CZ (2005). Cistanche deserticola cellesuspensionskulturer: Phenylethanoid glycosider biosyntese og antioxidant aktivitet. Process Biochemistry, 40, 3119-3124.

Foucault, AP, & Chevolot, L. (1998). Modstrømskromatografi: instrumentering, opløsningsmiddelvalg og nogle nyere anvendelser til naturlig produktrensning. Journal of Chromatography A, 808, 3–22.

Gross, G.-A., Lahloub, MF, Anklin, C., Schulten, H.-R., & Sticher, O. (1988). Teucrioside, et phenylpropanoidglycosid fra Teucrium Chamaedrys. Phytochemistry, 27, 1459-1463.

He, ZD, Lau, KM, Xu, HX, Li, PC, & But, PPH (2000). Antioxidant aktivitet af phenylethanoid glycosider fra Brandisia chancer. Journal of Ethnopharmacology, 71, 483-486.

Kobayashi, H., Karasawa, H., & Miyase, T. (1984). Undersøgelser af bestanddelene i Cistanchis Herba. III. Isolering og strukturer af nye phenylpropanoidglycosider, Cistanoside A og B. Chemical & Pharmaceutical Bulletin, 32, 3009-3014.

Kobayashi, H., Oguchi, H., Takizawa, N., Miyase, T., Ueno, A., Usmanghani, K., et al. (1987). Nye phenylethanoid glycosider fra Cistanche tubulosa (Schrenk) Hook. FI. Chemical & Pharmaceutical Bulletin, 35, 3309-3314.

Lei, L., Yang, FQ, Zhang, TY, Tu, PF, Wu, LJ, & Ito, Y. (2001). Præparativ isolering og oprensning af acteosid og 2'-acetylacteosid fra Cistanches salsa (CA Mey) G. Beck ved modstrømskromatografi. Journal of Chromatography A, 912, 181–185.

Li, L., Tsao, R., Liu, ZQ, Liu, SY, Yang, R., Young, JC, et al. (2005). Isolering og oprensning af acteosid og isoacteosid fra Plantago psyllium L. ved højhastigheds modstrømskromatografi. Journal of Chromatography A, 1063, 161–169.

Li, LL, Wang, XW, & Wang, XF (1997). Antilipidperoxidation og antiradikal virkning af glycosider i herba Cistanches. China Journal of Chinese Materia Medica, 22, 364–367.

Li, J., Wang, PF, Zheng, RL, Liu, ZM, & Jia, ZJ (1993). Beskyttelse af phenylpropanoidglycosider fra Pedicularis mod oxidativ hæmolyse in vitro. Planta Medica, 59, 315-317.

Lu, MC (1998). Undersøgelser af den beroligende effekt af Cistanche deserticola. Journal of Ethnopharmacology, 59, 161-165.

Nishimura, H., Sasaki, H., Inagaki, N., Chin, M., & Mitsuhashi, H. (1991). Ni phenethylalkoholglykosider fra Stachys szeboldzz. Phytochemistry, 30, 965-969.

Oka, F., Oka, H., & Ito, Y. (1991). En systematisk søgning efter egnede tofasede opløsningsmiddelsystemer til højhastigheds modstrømskromatografi. Journal of Chromatography, 538, 99-108.

Ravn, H., Nishibe, S., Sasahara, M., & Li, X. (1990). Fenolforbindelser fra Plantago Asiatica. Phytochemistry, 29, 3627-3631.

Schapoval, EES, Winter de Vargas, MR, Chaves, CG, Bridi, R., Zuanazzi, JA, & Henriques, AT (1998). Antiinflammatoriske og antinociceptive aktiviteter af ekstrakter og isolerede forbindelser fra Stachytarpheta cayennensis. Journal of Ethnopharmacology, 60, 53–59.

Shoyama, Y., Matsumoto, M., & Nishioka, I. (1987). Fenolglykosider fra syge rødder af Rehmannia glutinosa Var. Purpurea. Phyto Chemistry, 26, 983-986.

Wang, XW, Jiang, XY, Wu, LY og Wang, XF (2001). Opfangende effekt af glycosider af Cistanche deserticola på frie radikaler og dets beskyttelse mod OH-induceret DNA-skade in vitro. Journal of Chinese Pharmacology, 36, 29-31.