Intratumor Childhood Vaccine-specifik CD4+ T-celle-genkaldelseskoordinater Antitumor CD8+ T-celler og eosinofiler
Oct 17, 2023
ABSTRAKT
Baggrund
Antitumormekanismer for CD4+ T-celler forbliver groft definerede, og der mangler midler til effektivt at udnytte CD4+ T-cellehjælp til cancerimmunterapi. Allerede eksisterende hukommelses-CD4+ T-celler har potentialet til at blive udnyttet til dette formål. Desuden forbliver den rolle, som allerede eksisterende immunitet spiller i viroterapi, især rekombinant poliovirus-immunterapi, hvor børnepoliovaccinespecifik immunitet er allestedsnærværende, uklar. Her testede vi hypotesen om, at børnevaccinespecifikke hukommelses-T-celler medierer antitumorimmunterapi og bidrager til antitumoreffektiviteten af polioviroterapi.
Fordele ved cistanche tubulosa-Antitumor
Metoder
Indvirkningen af polioimmunisering på polioviroterapi og antitumorvirkningerne af polio- og stivkrampetilbagekaldelse blev testet i syngene murine melanom- og brystkræftmodeller. CD8+ T-celle- og B-celle-knockout, CD4+ T-celle-udtømning, CD4+ T-celle-adoptiv overførsel, CD40L-blokade, vurderinger af antitumor-T-celle-immunitet og eosinofil udtømning definerede antitumormekanismer for recall-antigener. Pan-cancer transkriptom datasæt og polio viroterapi kliniske forsøg korrelater blev brugt til at vurdere relevansen af disse fund hos mennesker.
Resultater
Tidligere vaccination mod poliovirus forstærkede væsentligt antitumoreffektiviteten af polioviroterapi hos mus, og intratumor-tilbagekaldelse af poliovirus eller stivkrampeimmunitet forsinkede tumorvækst. Intratumor-tilbagekaldelsesantigener øgede antitumor-T-cellefunktionen, forårsagede markant tumorinfiltration af type 2 medfødte lymfoide celler og eosinofiler og nedsatte proportioner af regulatoriske T-celler (Tregs). Antitumoreffekter af recall-antigener blev medieret af CD4+ T-celler, begrænset af B-celler, uafhængig af CD40L og afhængig af eosinofiler og CD8+ T-celler. Et omvendt forhold mellem eosinofile og Treg-signaturer blev observeret på tværs af The Cancer Genome Atlas (TCGA) cancertyper, og eosinofil-udtømning forhindrede Treg-reduktioner efter tilbagekaldelse af polio. Forbehandling polio-neutraliserende antistoftitre var højere hos patienter, der levede længere, og eosinofile niveauer steg hos størstedelen af patienterne efter polio viroterapi
Konklusion
Eksisterende anti-polio-immunitet bidrager til antitumoreffektiviteten af polioviroterapi. Dette arbejde definerer cancerimmunterapipotentialet i børnevacciner, afslører deres nytte til at engagere CD4+ T-cellehjælp til antitumor CD8+ T-celler og implicerer eosinofiler som antitumoreffektorer af CD4+ T-celler.
INTRODUKTION
Selvom CD4+ T-celler er nøglemediatorer af adaptiv immunfunktion og hukommelse, mangler der 1-3 veje til at udnytte deres potentiale til cancerimmunterapi. Adaptiv immunhukommelse muliggør robuste immunresponser på tidligere stødte patogener. I overensstemmelse hermed, genkalde responser, det vil sige aktivering af adaptive hukommelsesceller med beslægtet antigen, orkestrere lokaliseret medfødt og adaptiv inflammation.4 5 Baseret på nyligt arbejde, der demonstrerer cancerimmunterapi anvendelighed af intratumorale antivirale CD8+ T-celleresponser , 6 7 antog vi, at tumorlokaliseret, børnevaccine-associeret CD4+ T-celle-genkaldelse kan involvere antitumorfunktioner af CD4+ T-celler. PVSRIPO (nu kendt som 'Lerapolturev'), den levende svækkede poliovirus type 1 (Sabin)-vaccine modificeret med det interne ribosomale indgangssted af human rhinovirus type 2,8 har vist tidlige beviser for effektivitet ved tilbagevendende glioblastom (rGBM)9 og recidiverende , ikke-operabelt melanom10 11 efter intratumor (it) administration. Poliovirus (polio) vaccination er en del af standard pædiatrisk immuniseringsplan på verdensplan, enten med de levende svækkede (Sabin) eller de inaktiverede (IPOL) vacciner. Den kodende sekvens af PVSRIPO er identisk med type 1 Sabin-vaccinen. Eksisterende serum-anti-PVSRIPO/polio-antistofreaktivitet blev bekræftet hos alle patienter, der fik PVSRIPO-behandling.9 10 12 Desuden indebærer klinisk brug af PVSRIPO forudgående boost med trivalent IPOL mindst 1 uge før dets administration, hvilket forårsagede serum-PVSRIPO-neutraliserende antistofstigninger hos alle patienter.9 10 Antitumoreffekterne af polioviroterapi omfatter neoplastisk cellebeskadigelse og subletal virusinfektion af myeloide celler, der driver vedvarende type I interferon (IFN)-signalering.12-15 Anti-polio-immunhukommelse hæmmer sandsynligvis PVSRIPO-replikation inde i tumoren, men kan give en alternativ antitumorvirkningsmekanisme gennem tilbagekaldelse af poliovaccinespecifikke T-celler. Ved hjælp af musetumormodeller af melanom og brystkræft demonstrerer vi, at allerede eksisterende immunitet mod polio forstærker antitumoreffektiviteten af polioviroterapi ved at engagere antitumorfunktioner af CD4+ T-celler. Det polio- eller tetanus-genkaldelse udløste markeret CD4+ T-celle, type 2 medfødt lymfoid celle (ILC2) og eosinofil influx; medierer antitumoreffektivitet gennem CD8+ T-celler og eosinofiler på en CD40L-uafhængig måde. I kohorter af patienter med rGBM behandlet med Lerapolturev (PVSRIPO) var højere niveauer af polioneutraliserende antistoffer før behandling forbundet med længere overlevelse, og perifer induktion af eosinofiler blev observeret hos patienter med melanom efter behandling med Lerapolturev. Således koordinerer polioviroterapi og børnevaccine-associerede antigener antitumor type I og II immunitet via CD4+ T-celle-tilbagekaldelse.
cistanche supplement fordele-øge immunitet
MATERIALER OG METODER
Udvidede materialer og metoder præsenteres i online supplerende information.
Mus, cellelinjer, vira, poly(I:C) og antistoffer af in vivo kvalitet
(Tokyo, Japan). Vildtype (wt) (#000664), CD8 knockout (k/o) (#002665), B-celle k/o (#002288), OT-I (#003831) og CD45.1 C57BL/6 mus (# 002014) var fra The Jackson Laboratory. OT-I og CD45.1 C57BL/6 mus blev krydset for at generere CD45.1+OT-I mus. B16.F10 (American Type Culture Collection), E0771 (G. Palmer, Duke University, USA), E0771hCD155, B16.F10hCD155 og B16. F10.9hCD155-OVA-celler blev dyrket i højglukose Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM, Gibco) indeholdende 10% føtalt bovint serum (FBS) (Sigma-Aldrich). B16. F10.9hCD155-OVA-, B16-F10hCD155- og E0771hCD155-celler blev tidligere afledt.12 13 Alle cellelinjer blev bekræftet at være mycoplasma-negative. PVSRIPO af laboratoriekvalitet, muse-tilpasset PVSRIPO (mRIPO) og UV-inaktiveret PVSRIPO (UVP) blev genereret i HeLa-celler efterfulgt af størrelsesudelukkelsesoprensning af den resulterende supernatant som tidligere beskrevet.12 13 PVSRIPO blev brugt til vaccination; UVP blev brugt til at isolere virkningerne af poliocapsid (som indeholder poliovaccinespecifikke epitoper); mRIPO er en musetilpasset version af PVSRIPO, der blev brugt til at teste den fulde effekt af polioviroterapi hos mus. VacciGrade højmolekylær poly(I:C) (InvivoGen) blev rekonstitueret i henhold til producentens instruktioner. In vivo antistoffer mod interleukin (IL)-5 (TRFK5) eller kontrol (HRPN), CD4 (GK1.5) eller kontrol (LTF-2), CD40L (MR-1) eller kontrol (#BP0091), og CD40 (FGK4.5) eller kontrol (2A3) var fra Bio X Cell.
Vacciner, immuniseringer og det virale titre
Medmindre andet er angivet, vacciner, der anvender PVSRIPO (1×107 plakdannende enheder (pfu)/mus), stivkrampe-toksoid (Tet) (MilliporeSigma; 0,5 µg/mus) eller hæmocyanin-keyhole limpet (KLH, Sigma) -Aldrich; 100 µg/mus) blev fortyndet i phosphatbufret saltvand (PBS) med Alhydrogel (1:1; InvivoGen); 50 µL vaccine blev administreret bilateralt i quadriceps-musklerne. Kombinerede immuniseringer af IPOL og Tenivac (Sanofi Pasteur) blev administreret unilateralt for hver vaccine. Vaccineforøgelser fandt sted 14 dage senere. For deres virale titere blev tumorer høstet, vejet og mekanisk homogeniseret i 1 ml PBS. Homogenat blev testet ved plakassay.16
Murine tumormodeleksperimenter
Fordele ved cistanche tubulosa-Antitumor
Til B16-implantationer blev 2×105 celler implanteret subkutant i flanken af han- og hunmus; til E0771-implantationer blev 5x105-celler implanteret i den fjerde brystfedtpude af hunmus. hCD155-tg C57BL/6-mus blev brugt med mRIPO til at rekapitulere polioviroterapi (aktiv viral replikation ± eksisterende immunitet); hvorimod wt C57BL/6-mus, som er ikke-permissive over for polio, blev brugt med UVP for at isolere virkningerne af polio-tilbagekaldelse. Tumorer blev behandlet med enten DMEM eller PBS (vehikel), mRIPO (1×107pfu), UVP (1×108 præ-inaktiveret pfu), Tet (0,5µg) og/eller poly(I:C) (30µg) som angivet i figurlegender. Behandlingsgrupper blev randomiseret efter tumorvolumen (caliper-målinger ved anvendelse af ligningen L × B × W/2) på den første behandlingsdag. Mus blev aflivet, når tumorvolumenet oversteg 1000 mm3, medmindre det var forudgået af ulceration (som var sjælden og ikke forbundet med nogen særlig behandling), i hvilket tilfælde mus blev udelukket fra undersøgelsen. Gruppestørrelser var baseret på effektvurderinger fra pilotforsøg eller tidligere erfaringer.12 Tumormålinger blev udført blindet for it-behandlingsgruppen, startende efter den sidste dosis af it-terapi/antigen. Mus med afvigende starttumorvolumen på tidspunktet for randomisering (1 SD fra gennemsnittet) blev udelukket.
Flowcytometrianalyse af tumorer
Tumorer blev høstet på tidspunkter angivet i figurforklaringer og dissocieret i RPMI-1640-medier (Thermo Fisher) indeholdende 100 µg/mL Liberase-TM (Sigma-Aldrich) og 10 µg/mL DNAse I (Roche) i 30 minutter ved 37 grader efterfulgt af passage gennem en 70 µM (Olympus Plastics) cellesi, centrifugering og vask i PBS. Til eksperimenter med Zombie Aqua (BioLegend) blev celler farvet med Zombie Aqua i PBS (1:500) efter producentens instruktioner. Cellesuspensioner blev derefter inkuberet med 1:50 mus TruStain FcX (BioLegend) efterfulgt af panelspecifik farvning i PBS indeholdende 2% FBS. Farvning af intracellulære transkriptionsfaktorer, cytokiner og granzym B blev opnået ved anvendelse af Foxp3/Transcription Factor-farvningsbuffersættet (Thermo Fisher) efter producentens instruktioner. Se supplerende onlineoplysninger for oplysninger om anvendte paneler og antistoffer. Data blev indsamlet på en Fortessa X20 på Duke Cancer Institute Flow Cytometri Core Facility; FCS-filer blev analyseret ved hjælp af FlowJo V.10 (BD Biosciences). Gating-strategier præsenteres i online supplerende information; isotypekontroller, fluorescens minus én kontroller og sammenligning med etablerede negative cellepopulationer blev brugt til at definere positivitet.
Kliniske forsøgsrelaterede analyser
PVSRIPO neutralisationstiter-assays blev udført i henhold til protokollen for kliniske forsøg9, og værdier for begge kliniske rGBM-forsøg blev brugt fra kliniske forsøgsindskrivningsassays. Fase I rGBM (NCT01491893) poliotitre blev tidligere rapporteret, og overlevelse blev opdateret fra 29. april 2020; fase II (NCT02986178) overlevelse blev opdateret den 27. april 2021. Melanom (NCT03712358)10 11 procentdel af hvide blodlegemer i kliniske forsøgsdeltagere blev opnået fra kliniske fuldstændige blodtællingstests (CBC).
Statistisk analyse og kliniske forsøgskohorter
Assay-specifikke statistiske test er angivet i de tilsvarende figurforklaringer. GraphPad Prism V.8 blev brugt til at udføre statistiske analyser. To-vejs variansanalyse (ANOVA) blev brugt til at vurdere forskellen i tumorvækst over tid mellem grupper, og ANOVA post hoc test blev brugt til at tage højde for flere sammenligninger, medmindre andet er angivet i figuren og/eller figurforklaringen. En statistisk sandsynlighed for (s<0.05) was used unless otherwise noted; all p values are two-tailed. All data points reflect individual mice or patients.
RESULTATER
Polio-immunisering forstærker polioviroterapi
Vi testede først anti-polio-antistofproduktion (dvs. serokonversion) i mus, der var transgene for den humane poliovirus-receptor CD155 (hCD155-tg) ved immunisering med IPOL eller PVSRIPO (for at efterligne type 1 Sabin) med og uden alunadjuvans ( Alhydrogel; ALH), en del af licenserede vaccineformuleringer (f.eks. Pentacel, Pediarix, Kinrix).17 45 dage mellem initial immunisering og tumorimplantation tillod etablering af immunologisk hukommelse.18 IPOL opnåede begrænset serokonversion, og PVSRIPO-immunisering fremkaldte en stærkere antistofrespons; ALH styrkede antistofresponser på begge (online supplerende figur S1A, B). For at rekapitulere høje niveauer af anti-polio-antistoffer hos patienter med cancer9 valgte vi PVSRIPO+ALH (herefter 'polio')-vaccination for at bestemme den rolle, som allerede eksisterende polioimmunitet spiller i PVSRIPO-immunterapi. Murine tumormodeller og mus, der udtrykker hCD155, blev tidligere udviklet til at tillade indgang og replikation af PVSRIPO, og PVSRIPO blev tilpasset til murine celler for at rekapitulere viral replikation i murine cancerceller (mRIPO).13 19 I tidligere undersøgelser af poliovaccine-naive, syngene musetumormodeller, en enkelt it-injektion af mRIPO krævede programmeret celledødsprotein-1 (PD1)/programmeret dødsligand-1 blokade eller tumorekspression af det immunogene ovalbumin (OVA) protein for at mediere varige antitumoreffekter .12 13 Det mRIPO-medierede imidlertid holdbar antitumoreffektivitet i polioimmuniserede mus i melanom (B16) og brystkræft (E0771) modeller, i forhold til kontrol (KLH) immuniserede modparter (figur 1A, B, online supplerende figur S1C) . Tidligere polioimmunisering styrker således antitumoreffektiviteten af polioviroterapi. Polioviroterapi er forbundet med T-celle-inflammation i tumoren.12 13 mRIPO-replikation i tumorer blev væsentligt reduceret i polio-immuniserede mus 2 dage og 5 dage efter behandling (figur 1C, D), i overensstemmelse med højt neutraliserende antistof titere (online supplerende figur S1B). Alligevel observerede vi øget total immuncelletæthed (CD45.2+) i polio-immuniserede mus efter mRIPO-terapi, hovedsagelig forklaret af en tilstrømning af konventionelle CD4+ T-celler og myeloidceller (CD11b+, Ly6GNeg, F4/80+ ) (figur 1E, online supplerende figurer S2A, S3). Efterfølgende analyse afslørede, at de øgede CD11b+-myeloidceller i polio-immuniserede mus behandlet med mRIPO var eosinofiler (figur 1F); niveauer af dendritiske celler (DC'er) var ikke signifikant ændret. Forhøjet tumornekrosefaktor (TNF), granulocyt-makrofag kolonistimulerende faktor (GM-CSF), IL-1 og IL-17A-niveauer i tumorhomogenat og højere IL-4 og IL{ {51}} i eksplanterede tumordrænende lymfeknudekulturer (TDLN) fra polioimmuniserede mus behandlet med mRIPO indikerede distinkte inflammatoriske responser efter mRIPO-terapi (online supplerende figur S2B). GM-CSF og IL-5 er kendte inducere af eosinofilproduktion og -rekruttering,20, hvilket muligvis forklarer eosinofiltilstrømning i tumorer (figur 1F). Konventionelle CD4+ T-celler og eosinofil infiltration som svar på mRIPO-behandling af polio-immuniserede mus blev også observeret i en separat model, E0771 (online supplerende figur S2C, D). Således accentuerer allerede eksisterende immunitet mod polio inflammatoriske reaktioner på mRIPO, der er forbundet med forbedret antitumoreffektivitet.
Figure 1 Polio immunization potentiates antitumor and inflammatory efficacy of polio virotherapy. (A) Polio or KLH-immunized hCD155-tg mice bearing hCD155-tg B16 or E0771 tumors were treated with DMEM (control) or mRIPO. (B) Survival cut-off was tumor volume >1000mm3; se online supplerende figur S1C; repræsentant fra to forsøg. (C) Skema for forsøg i D–H. (D) Tumorhomogeniserede virale titere efter mRIPO; ND, ikke fundet. (E) Flowcytometrianalyser af tumorer på dag 7 (n=13/gruppe mock; n=14/gruppe mRIPO). (F) Flowcytometrianalyser for myeloidceller og dendritiske celler (DC'er: Ly6CNeg, F480Neg, CD11c+, IA/IE+) på dag 11. (G) Aktiveringsmarkører i TIL'er på dag 7 og 12; blev samlet fra to eksperimenter; fold middelværdier for KLH-DMEM er vist. (H) TIL-transkriptionsfaktorekspression på dag 12; samme prøver som dag 12 i (A); repræsentative data for tre gentagelser er vist. Se online supplerende figurer S1–S4 for udvidede data. (E–H) Tukeys post hoc test s< 0.05 versus mock controls (*) or all other groups (#). Data bars and brackets indicate mean+SEM. mRIPO, mouse adapted PVSRIPO; DMEM, Dulbecco's Modified Eagle Medium; IFN, interferon; i.t., intratumor; KLH, hemocyanin keyhole limpet; OVA, ovalbumin; TIL, tumor-infiltrating lymphocyte; TNF, tumor necrosis factor.
Forstærkede T-celle funktionelle fænotyper i polio-immuniserede mus behandlet med mRIPO
CD8+ og CD4+ tumorinfiltrerende lymfocytter (TIL'er) i poliovaccinerede mus udtrykte højere niveauer af intracellulær IFN-, TNF og granzym B post-mRIPO behandling, hvilket indebærer forbedret funktionel status (figur 1G , online supplerende figur S4). TIL'er fra polioimmuniserede mus behandlet med mRIPO udviste også øget ekspression af transkriptionsfaktorerne T-bet, GATA3 og ROR t; samt induktion af IRF4, en promotor for T-celleaktivering og funktion (figur 1H).21 Ekspression af T-celleudmattelsesmarkørerne PD1 og T-celle-immunoglobulin og mucindomæne-holdigt protein 3 (TIM3) på CD{{20 }} T-celler i tumoren og TDLN'er fra poliovaccinerede mus behandlet med mRIPO blev reduceret (online supplerende figur S2E). Ændringer i T-celle aktiverings-/differentieringsmarkører var konsistente i E0771 ortotopisk brystkræftmodel (online supplerende figurer S2F, G). Således øger genkaldelsesresponser på polio funktionelle fænotyper i TIL'er efter intratumoral polioviroterapi.
Polio og stivkrampe tilbagekaldende antigener medierer antitumoreffektivitet
Reovirus-specifik hukommelses-CD8+ T-celler dræber direkte reovirus-inficerede cancerceller under onkolytisk reovirusterapi,22 og stivkrampespecifik hukommelses-CD4+ T-celler dræber cancerceller inficeret med Listeria, der udtrykker Tet.23. Alternativt, inflammatoriske reaktioner forårsaget af hukommelses-T-celle-tilbagekaldelse i tumormikromiljøet (TME) kan også styrke immunovervågningen.6 7 Vi antog, at recall-induceret inflammation forklarede accentueret antitumor-effektivitet af polioviroterapi i poliovaccinerede mus siden viral replikation— krævet til produktion af viralt antigen i tumorceller, onkolyse og antiviral inflammation12 - blev kraftigt reduceret i polioimmuniserede mus (figur 1D). For at undersøge antitumorvirkningerne af polio-tilbagekaldelse i TME brugte vi en model uden hCD155 (mus og tumorer; wt C57BL/6-mus) og behandlede tumorer med UV-inaktiveret PVSRIPO (UVP) for at udelukke viral infektion/replikation. Vi inkluderede sammenligninger med et andet vaccine-associeret recall-antigen, Tet, som har vist sig at mediere antitumor-effekter i andre undersøgelser.23 24 Det-terapi med UVP udøvede udelukkende antitumor-effekt i polio-immuniserede mus; Tet-behandling medierede forbigående antitumoreffekter i Tet-immuniserede mus (figur 2A-C, online supplerende fil 1). Naturlige genkaldelsesresponser forekommer i nærvær af et lokaliseret medfødt immunrespons på patogenreplikation. For at efterligne dette blev Tet eller polio-immuniserede mus behandlet med poly(I:C) alene eller i kombination med UVP eller Tet. Både UVP og Tet medierede udtalte antitumoreffekter i denne sammenhæng (figur 2D). Disse data afslører, at den genkaldelse af hukommelses-T-celler i TME - uafhængig af ekspression/major histocompatibility complex (MHC) præsentationen af deres beslægtede antigen af maligne celler - medierer antitumor-effektivitet.
CD4+ T-celler medierer antitumoreffektiviteten af recall-antigener
For at bestemme hvilke(t) adaptive kompartment(er), der forklarer antitumoreffektiviteten af polio-genkaldelsesresponser (uafhængig af viral replikation), sammenlignede vi dets behandling med UVP i CD8+ T-celle- og B-celle-k/o-mus i forhold til vægt mus (figur 3A). CD4 k/o mus blev ikke testet på grund af CD4+ T-cellernes rolle i at muliggøre både CD8+ T-celle- og B-celle-responser på vaccination. Som forventet førte polioimmunisering i WT- og CD8-k/o-mus, men ikke B-celle-k/o-mus, til anti-PVSRIPO-antistofproduktion (figur 3B). B16-tumorvækst var ens i hver genetisk sammenhæng efter falsk behandling. I forhold til wt-mus var antitumoreffektiviteten af UVP i polio-immuniserede mus begrænset i CD8 k/o-mus på senere tidspunkter, men blev forbedret i B-celle k/o-mus (figur 3C; p=0.007wt vs B-celle k/o UVP-behandlede kurver, to-vejs ANOVA). Desuden forhindrede B-celle k/o ikke tilstrømningen af eosinofiler eller CD4+ TIL'er (online supplerende figur S6A) forbundet med tilbagekaldelse af polio (figur 1). Således er antitumoreffektiviteten af polio-tilbagekaldelse delvist afhængig af CD8+ T-celler og er begrænset af B-celler. Disse observationer, sammen med øgede CD4+ TIL'er efter mRIPO-behandling i polioimmuniserede mus (figur 1E), antyder, at CD4+ T-celler dikterer antitumoreffektiviteten af polio-genkaldelsesresponser. Derfor testede vi derefter antitumoreffekten af tilbagekaldelse af polio med og uden forbigående CD4+ T-celleudtømning (figur 3D, startende 1-dags forbehandling). På trods af robust udtømning af CD4+ T-celler i TDLN, var CD4+ T-celleudtømning i tumoren ufuldstændig og fortrinsvis reducerede regulatoriske T-celle (Treg) populationer, hvilket muligvis forklarer beskedne antitumoreffekter og øget CD 8+ T-celletætheder efter CD4+ T-celleudtømning (figur 3D, online supplerende figur S6B). Ikke desto mindre fjernede CD4+ T-celleudtømning næsten antitumoreffektiviteten af UVP i polio-immuniserede mus og forhindrede rekruttering af eosinofiler som reaktion på UVP (figur 3D); CD4+ T-celleudtømning forhindrede også induktionen af granzym B i CD8+ T-celler efter UVP-behandling (online supplerende figur S6B). Tilsammen indikerer disse resultater, at de antitumor- og inflammatoriske virkninger af tilbagekaldelse af polio er CD4+ T-celleafhængige. Bekræftelse af, at poliospecifikke CD4+ T-celler er tilstrækkelige til at forstærke antitumoreffektiviteten af polioviroterapi (med aktiv viral replikation), adoptiv overførsel af CD4+ T-celler fra milte fra polioimmuniserede mus, men ikke den af Tet, styrkede antitumoreffektiviteten af mRIPO (figur 3E, online supplerende figur S6C).
Det husker antigenterapi forstærker antitumor CD8+ T-cellefunktion
Tumorspecifikke CD4+ T-celler blev vist direkte at dræbe tumorceller,25-27 engagerer cytotoksiske medfødte immunceller,28 29 og yde hjælp til effektor CD8+ T-celler.1-{ {7}} I overensstemmelse med sidstnævnte blev antitumoreffekter af recall-antigener observeret efter levering til TME (figur 2 og 3), var delvist afhængige af CD8+ T-celler (figur 3C) og CD{{12 }} TIL'er havde forbedrede polyfunktionelle fænotyper efter mRIPO-terapi i poliovaccinerede mus (figur 1G).
Figur 2 Polio- og tetanus-genkaldelsesantigener medierer antitumoreffektivitet. B16 (A) eller E0771 (B) tumorbærende mus immuniseret med polio eller Tet blev behandlet intratumor med Tet eller UV-inaktiveret PVSRIPO (UVP). (C) Aldersmatchede naive eller Tenivac- og IPOL-immuniserede mus blev behandlet med PBS, Tet eller UVP. (D) Mus immuniseret som i (A, B) blev behandlet intratumor med mock, poly(I:C) (30 µg), poly(I:C) + Tet eller poly(I:C) + UVP som vist. (A–D) Middel+SEM fra et repræsentativt eksperiment med mindst to gentagelser er vist; stjerner angiver Dunnetts test s< 0.05 versus all other groups; online supplemental figure S5 presents extended data. IPOL, inactivated polio vaccine; i.t., intratumor; PBS, phosphate buffered saline; UVP, UV-inactivated PVSRIPO; Tet, tetanus toxoid.
Derfor forsøgte vi dernæst at bestemme, om polio (UVP) og Tet-genkaldelse forbedrer funktionen af antitumor CD8+ T-celler. Til dette formål overførte vi adoptivt CD45.1+OT-I CD8+ T-celler (OVA-specifikke) til polio- eller Tet-vaccinerede mus og bestemte virkningen af UVP og Tet-induceret tilbagekaldelse på B{ {7}}OVA OT-I TIL fænotyper (figur 4A). Induktion af genkaldelsesresponser i tumoren efter UVP eller Tet var forbundet med forsinket tumorvækst og øget tumorinfiltration af endogene CD45.2+-celler, eosinofiler og konventionelle CD4+-T-celler; især var niveauer af antitumor OT-I T-celler ikke-signifikant forøget (figur 4B). Imidlertid afslørede analyse af tumorinfiltrerende OT-I CD8+ T-celler forstærket granzym B, TNF og IFN-; og reduceret ekspression af den terminale udmattelsesmarkør TIM3 efter polio eller Tet tilbagekaldelse (figur 4C). Varieret Th-associeret transkriptionsfaktorekspression i både OT-I og endogene T-celler blev observeret, herunder den for GATA3, ROR t og BCL6 (figur 4C). Transkriptomisk analyse af OT-I TIL'er efter tilbagekaldelse af polio afslørede øget ekspression af granzymer; gener forbundet med T-celleaktivering, funktion eller homeostase (Taok3, CD86, CCR5, Egr2, Adgre1, Vdr, IRF4 og BCL6); gener forbundet med Th1-immunitet (Ptger4, Fgl2); samt gener forbundet med Th2-immunitet (Alox15, Ccl8 og GATA3) (figur 4D, online supplerende figur 8C). Vi bekræftede disse observationer ved at teste virkningen af tilbagekaldelse af polio på endogen TRP2-specifik (et endogent B16-antigen) CD8+ TIL'er i B16-tumorer uden OVA-ekspression. TRP2-specifikke CD8+ TIL'er udviste øget granzym B og reduceret TIM3-ekspression efter tilbagekaldelse af polio på en CD4+ T-celleafhængig måde (online supplerende figur S9). Tilsammen indikerer disse data forbedrede cytolytiske og funktionelle fænotyper af antitumor-T-celler efter tilbagekaldelse af polio. Funktionelt demonstrerer forbedret antitumor T-celle-immunitet efter tilbagekaldelse, T-celler isoleret fra milte fra mus behandlet med det genkalder antigen (UVP i poliovaccineret eller Tet i Tenivac-vaccineret) forsinket tumorvækst efter overførsel til naive modtagere (figur 4E). CD4+ T-celler hjælper med at fremme antitumor CD8+ T-cellefunktion delvist gennem CD40L-signalering til CD40 på antigenpræsenterende celler1, men kan også hjælpe antitumor CD8+ T-celler uafhængige af CD40L.31 CD40L blokade forhindrede ikke UVP-induceret eosinofil, konventionel CD4+ T-celle eller antitumor OT-I T-tilstrømning; det modvirkede heller ikke antitumoreffekter (online supplerende figur S10). Derudover rekapitulerede CD40-ligering ikke den eosinofile tilstrømning, der blev observeret efter recall-antigenterapi (online supplerende figur S10). Det CD4+ T-celle-genkaldelse forstærker således antitumorfunktionen af antitumor CD8+ T-celler på en CD40L-uafhængig måde.
Figur 3 CD4+ T-celler medierer antitumoreffektiviteten af tilbagekaldelse af polio. (A) Design til eksperimenter i (B, C). (B) ELISA for anti-polio-antistoffer i hver genetisk baggrund på dag 0 (n=4/gruppe). (C) Gennemsnitlig tumorvolumen + SEM efter mock-behandling (venstre) eller mock versus UVP-behandling (højre paneler) for hver genotypekontekst; p-værdier er fra to-vejs variansanalyse (ANOVA) sammenligning af UVP til kontrolgruppen. (D) Mus immuniseret med polio blev behandlet med mock eller UVP som i (A), med intraperitoneale (ip) injektioner af IgG (kontrol) eller CD4+ T-celledepleterende antistof (250 µg leveret hver 3. dag startende på dagen) -1); middel tumorvolumen+SEM og flowcytometrianalyse af tumorinfiltrerende CD4 T-celler og eosinofiler er vist; n=9 pr. gruppe; p-værdi er fra en to-vejs ANOVA, der sammenligner UVP IgG versus UVP CD4; (*) angiver Tukeys post hoc p<0.05. (E) CD4+ T cells from spleens of mice immunized with Tet (control) or polio were adoptively transferred to naïve B16 tumor-bearing recipients 1day-prior to intratumor treatment with DMEM or mRIPO. Mean tumor volume+SEM for mock or mRIPO treated mice for each CD4+ T-cell transfer condition; p values are from two-way ANOVA comparison of the two curves shown in each panel. See online supplemental figure S6 for extended data. DMEM, Dulbecco's Modified Eagle Medium; i.t., intratumor; UVP, UVinactivated PVSRIPO; Tet, tetanus toxoid; mRIPO, mouse adapted PVSRIPO; Tconv, conventional CD4+ T cells.
Figur 4 Intratumor recall antigen terapi forstærker antitumor CD8+ T-celle funktion. (A) Polio eller Tet (Tenivac) immuniserede mus blev implanteret med B16-OVA tumorer, efterfulgt af adoptiv overførsel af aktiverede OT-I (CD45.1+) celler og behandling med enten Tet eller UVP . (B) Tumorvolumen og flowcytometri analyser af immunceller (B) og TIL undergrupper (C); online supplerende figur S7 præsenterer gating af OT-I TIL'er. (D) Transkriptomer af OT-I TIL'er isoleret fra polio-immuniserede mus 12 dage efter behandling (DMEM eller UVP) blev analyseret. Centeret og skaleret gennemsnitlig normaliseret tælling vises for transskriptioner, der var signifikant forskellige efter justering af p-værdi for falsk opdagelsesrate i to separate eksperimenter (øverste panel, henholdsvis n=4/gruppe og n=3/gruppe ) eller for funktioner, der er relevante for (C), der nærmede sig betydning i begge datasæt, herunder granzymer, IRF4, BCL6 og GATA3 (nederste panel); n=4 replikater/gruppe vises på et varmekort. Online supplerende figur S8B og C præsenterer normaliserede tællinger for individuelle prøver og udvidede data. (E) Tumorprogression i naive mus adoptivt overført med T-celler fra milten af mus i AC. Gennemsnitlig tumorvolumen+SEM er vist; p-værdien er fra en to-vejs variansanalyse. Alle databjælker repræsenterer middelværdi+SEM; varmekort i (C) blev normaliseret ved fold gennemsnit af den fejlparrede antigenkontrol; Tukeys post hoc test s<0.05 relative to all other groups (#) or respective DMEM control (*). (A–C) pooled results from two experiments; data in (E) were repeated twice. DMEM, Dulbecco's Modified Eagle Medium; TIM3, T cell immunoglobulin and mucin domain-containing protein 3; IFN, interferon; i.t., intratumor; OVA, ovalbumin; PD1, programmed cell death protein-1; UVP, UV inactivated PVSRIPO; Tet, tetanus toxoid; TIL, tumor-infiltrating lymphocytes; TNF, tumor necrosis factor.
Tumorinfiltrerende eosinofiler associerer omvendt med Tregs i humane tumorer
Engagement af andre antitumorimmuneffektorer via cytokinsekretion er en nøgle-CD40L-uafhængig mekanisme for CD4+ T-celler.31 32 Det poliocapsid (UVP) og viroterapi (mRIPO) forårsagede konsekvent robust it-infiltration af eosinofiler ( figur 1, 3 og 4), på en CD4+ T-celleafhængig måde (figur 3D). Tumor eosinofil influx associerer med immunterapi respons,33-35 og nyligt arbejde viste, at CD4+ T-celler får antitumorfunktioner af eosinofiler efter PD1 blokade via IL-5.36 Først spurgte vi, om eosinofildensitet korrelerer med den for CD4+ T-celler eller andre funktioner i TME af humane tumorer ved at forespørge et pan-cancer-datasæt fra The Cancer Genome Atlas (TCGA).37 Ved hjælp af CIBERSORT38 forudsigelse af celleinfiltrater, 37 prøver fra hver cancertype blev stratificeret ved tilstedeværelse eller fravær af påviste eosinofile genekspressionssignaturer (figur 5A, online supplerende figur S11,12); Testikulære kimcelletumorer (TGCT) og uveal melanom (UVM) blev udelukket på grund af begrænsede tilfælde med eosinofil berigelse (n<3). While limited association of eosinophil presence was observed with CD8+ or CD4+ T-cell enrichment, eosinophil presence was associated with significantly lower Treg signatures across all cancer types (figure 5A, online supplemental figure S11B, C). Eosinophil presence was associated with longer survival in Low-Grade Glioma (LGG), where eosinophil density was also the highest (online supplemental figure S11A), but not in other tumor types (figure 5B, online supplemental figure S11D). Importantly, significant differences in Treg density on stratification by eosinophil enrichment were observed within several cancer types, with heterogenous relationships between CD4+ and CD8+ T-cell density (online supplemental figure S12). Notably, eosinophil influx was associated with reduced Treg proportions after polio recall in our studies (figures 1E and 4B, online supplemental figure S2). Together, these data may reflect a role for eosinophils in countering tumor-infiltrating Tregs.
cistanche tubulosa-forbedrer immunsystemet
Klik her for at se produkter fra Cistanche Enhance Immunity
【Spørg om mere】 E-mail:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692
Antitumor type II immunitet efter mRIPO behandling af polio-immuniserede mus
Vi søgte derefter at bestemme betydningen af eosinofil infiltration efter polio tilbagekaldelse i mus. Eosinofiler er mediatorer af type II immunresponser, som spiller roller i anti-helminth immunitet og allergisk inflammation.39 Eosinofil rekruttering kan medieres af andre type II immun mediatorer, herunder ILC2'er, som koordinerer Th2 responser gennem direkte interaktioner med CD{{4} } T-celler,40 udtrykker transkriptionsfaktoren GATA3 og eosinofil-fremmende cytokin IL-5, men mangler T-celle-receptorekspression. Faktisk steg GATA3+ CD3Neg-celler i tumorer hos mus efter tilbagekaldelse (figur 5C), hvilket muligvis afspejler ILC2-tilstrømning. Vi testede derefter, hvordan eosinofiler påvirker polioviroterapi (mRIPO) i polioimmuniserede mus og målte ILC2'er direkte. Eosinofil-depletering (via IL-5-neutralisering41) mindskede antitumorvirkningerne af mRIPO i B16-OVAHCD155-bærende, polioimmuniserede mus (figur 5D, E); reducerede ikke CD4+ T-celletilstrømning; men blokerede reduktioner i Treg-andel (figur 5F). Desuden førte polioviroterapi (mRIPO) til ILC2-tilstrømning (figur 5F) og ændrede ILC2-fænotyper i polioimmuniserede mus med reduceret IL-5 og induceret PD1- og granzym B-ekspression (figur 5G). Bortset fra sin rolle i at kontrollere eosinofile niveauer, er IL-5 også kritisk for B-celledifferentiering.42 Men eftersom antitumorvirkningerne af polio-tilbagekaldelse er uafhængige af – og muligvis modvirket af – B-celler (figur 3C), og på grund af den konsekvent robuste eosinofilinfiltration ved polio-tilbagekaldelse, konkluderer vi, at IL-5-neutralisering mindsker antitumoreffekterne af polio-tilbagekaldelse via eosinofil-depletering. Samlet viser disse data antitumorroller for eosinofiler og rekruttering af ILC2'er med ændrede fænotyper efter tilbagekaldelse af polio og antyder, at eosinofiler regulerer det Treg-densiteter.
Præ-eksisterende anti-polio-antistoffer er forbundet med længere overlevelse efter Lerapolturev (PVSRIPO) behandling; perifere eosinofiler øges efter Lerapolturev
In trials of Lerapolturev in rGBM9 and melanoma,10 all patients were confirmed seropositive for anti-PVSRIPO neutralizing antibodies (from polio vaccine crossreacting antibodies) at the time of enrollment, a feature anticipated to correlate with pre-existing PVSRIPO specific CD4+ T-cell immunity. We queried both phase I (n=61)9 and II (n=72 at the time of data cut-off) clinical rGBM cohorts for the relationship between pretreatment Lerapolturev neutralizing antibodies and survival. In both cohorts, patients living >18 måneder efter Lerapolturev (typisk median overlevelse i rGBM er ~9 måneder) 9 43 havde signifikant højere neutraliserende antistoftitere før behandling (figur 6A, B). For at afklare, hvorvidt type II immunresponser kan være involveret i patienter behandlet med det polioviroterapi, analyserede vi longitudinelle CBC'er, der var tilgængelige fra et lille dosis-eskaleringsforsøg med Lerapolturev i tilbagevendende, uoperabelt melanom (fase I, n=12) .10 11 Disse data afslørede øgede eosinofilniveauer i blodet efter Lerapolturev hos 8/12 patienter (figur 6C), hvilket faldt sammen med en reduktion i neutrofiler (10/12 patienter). Disse resultater kan indikere, at allerede eksisterende immunitet bidrager til antitumoreffektiviteten af polioviroterapi, og at polioviroterapi inducerer type II immunrespons hos patienter med cancer.
Figur 5 Eosinofiler associerer omvendt med Tregs i humane tumorer; mRIPO inducerer antitumor type II immunitet i polio-immuniserede mus. (A) CIBERSORT dekonvoluterede T-celleundersæt i Cancer Genome Atlas cancertyper (n=29) stratificeret efter eosinofilstatus, p-værdier fra parret t-test. (B) HR'er (overlevelse) ± 95% CI'er for eosinofil status efter cancertype; kræfttyper med mindre end 20 dødsfald blev udelukket; p-værdier er fra Mantel-Cox log-rank test. (C) Procentdel af GATA3+ CD3Neg-celler fra data i figur 4C, p-værdier er fra uparret t-test. (D) Design for (E–H): polioimmuniserede, B16-OVAHCD155-tumorbærende hCD155-transgene mus blev behandlet med mock eller PVSRIPO ± eosinofil-depletering (anti-IL-5 eller kontrol IgG, 1 mg ugentligt). Gennemsnitlig tumorvolumen+SEM (E), eosinofil- og ILC2-densitet i tumorer (F) og fænotype af tumorinfiltrerende ILC2'er (lineageNegCD90+ CD127+ CD25+ versus afstamningsnegativ CD 90+ celler til sammenligning vises (G). (E) (*)Tovejs variansanalyse s<0.05; (F–G) (*)Tukey's post hoc test p< 0.05 versus mock+IgG control. Online supplemental figure S11–S13 presents extended data. IL, interleukin; ILC2, type 2 innate lymphoid cell; i.p., intraperitoneal; i.t., intratumor; OVA, ovalbumin; PD1, programmed cell death protein-1; UVP, UV-inactivated PVSRIPO; Tet, tetanus toxoid; Tregs, regulatory T cells; mRIPO, mouse-adapted PVSRIPO.
Kinesisk urt cistanche plante-Antitumor
DISKUSSION
Dette arbejde afslører cancerimmunterapipotentialet ved tumorlokaliseret CD4+ T-celle-genkaldelse. CD4+ T-cellehjælp er nøglen til at generere fuldt funktionel antitumor CD8+ T-celleimmunitet1 44 og langtidshukommelse.2 45 Antitumor CD8+ T-celler udviste større polyfunktionelle fænotyper efter tilbagekaldelse, adoptiv T-celleoverførsel fra recall-antigen-behandlede mus forsinkede tumorvækst hos naive modtagere, og UVP-antitumoreffekter blev sløvet i polioimmuniserede mus, der manglede CD8+ T-celler. Dette indikerer, at levering af CD4+ T-celler hjælper med at antitumor CD8+ T-celler. CD4+ T-cellehjælp er faktisk forbundet med udmattelsesmarkør nedregulering, forhøjet TNF/IFN-/granzyme B-ekspression og Tbet/IRF4-induktion i "hjælpe" effektor-T-celler3, som alle forekom med polio viroterapi hos immuniserede mus. Sådan T-cellehjælp er sandsynligvis mangesidet, herunder 'licensering' af DC'er; CD4+ T-celle-sekretion af cytokiner (f.eks. IL-21, IFN-); TME omprogrammering; eller gennem positive virkninger af rekrutterede eosinofiler på CD8+ T-celle-immunovervågning.36 46 Muligvis på grund af aktiviteten af polio-neutraliserende antistoffer, der begrænser CD4+ T-celleaktivering ved at reducere tilgængeligheden af recall-antigen eller vedholdenhed, var B-celler kontraproduktive i forhold til antitumoreffekter af tilbagekaldelse af polio. Polio husker konsekvent medierede stærkere antitumor- og inflammatoriske reaktioner end Tets i vores undersøgelser. En mulighed er, at dette skyldes forskelle i intensiteten og/eller kvaliteten af allerede eksisterende immunitet induceret efter polio versus Tet-vaccination i vores modelsystemer. Til støtte for denne mulighed var antitumoreffekterne af Tet og UVP ens, når mus blev immuniseret med klinisk kvalitet IPOL-vaccine (figur 2C), som inducerede svagere anti-polio-immunitet end polioimmuniseringsstrategien (PVSRIPO+ALH), der blev brugt til andre eksperimenter i vores undersøgelse (online supplerende figur S1B). Det er imidlertid også veletableret, at arten af antigen (f.eks. epitopdensitet, som sandsynligvis er højere i poliocapsidet) kan påvirke adaptive immunresponser. 47 48 Antitumoreffektiviteten af tilbagekaldelse af polio afhang kun delvist af CD8+ T-celler. Recall-antigenterapi forårsagede eosinofil- og ILC2-tilstrømning, og eosinofiludtømning reducerede antitumoreffekter i polioimmuniserede mus behandlet med mRIPO. For at fremhæve betydningen af kontekst blev både eosinofiler og ILC2'er også vist at mediere protumorigene effekter.49 50 Ved astma rekrutterer CD4+ T-celler eosinofiler51 via ILC2s.52 ILC2'er udtrykker MHC klasse II og udbreder Th2-responser i helminth-infektioner.40 I cancer er tumor-eosinofilinfiltration forbundet med immunterapirespons,33 34 eosinofiler blev vist at understøtte CD8+ T-celle-immunovervågning46, og ILC2'er bidrager til anti-PD1-antitumoreffektivitet. 35 53 Vores arbejde viser, at antitumorfunktioner af eosinofiler og muligvis ILC2'er kan aktiveres af CD4+ T-celler. Hvordan CD4+ T-celle-tilbagekaldelse rekrutterer eosinofiler til tumoren er stadig uafklaret, men nyligt arbejde giver en potentiel forklaring ved at vise, at under PD1-blokade IL-5-udskillelse af CD4+ T-celler inducerer ekspansion af eosinofiler og dets rekruttering.36 Ydermere afslørede cytokinanalyse af tumorhomogenater og TDLN-eksplantater efter polioviroterapi også øget eosinofil-fremmende GM-CSF og IL-5 i polioimmuniserede mus (online supplerende figur S2B ).
Figur 6 Præ-eksisterende anti-polio-antistoffer er forbundet med længere overlevelse efter Lerapolturev (PVSRIPO) terapi; perifere eosinofiler øges efter Lerapolturev. (A, B) Forbehandling Lerapolturev serumneutraliseringstitre blev målt i tilbagevendende glioblastom (rGBM) fase I (A, Ph1, NCT01491893) og fase II (B, Ph2, NCT02986178) forsøg. Overlevelse efter adskillelse med median neutralisationstiter (1:2000), sammen med middel+SEM titer for overlevende patienter
Vi opdagede også et omvendt forhold mellem tumor-eosinofil-tilstrømning og Treg-densitet i humane tumorer, og recall-antigenterapi førte til reducerede andele af Tregs, der samvarierede med eosinofil-tilstrømning, hvilket antyder en gensidig rolle for eosinofiler i kontrollen af CD4+ T-celle biologi. At bestemme præcist, hvordan eosinofiler medierer antitumoreffekter efter CD4+ T-celle-genkaldelse, og om ILC2'er bidrager til denne proces, kræver yderligere undersøgelse. Forskelle i eosinofildensitet alene ser ikke ud til at være prognostiske i de fleste cancertyper, med den potentielle undtagelse af LGG, hvor eosinofilniveauer også var de højeste blandt alle andre tumortyper. Interessant nok er der rapporteret en negativ korrelation mellem perifere eosinofiler og gliomgrad54; og respiratoriske allergier og atopi er forbundet med lavere gliomincidens.55 Vi brugte Th2 polariserende vaccinationsstrategier, i overensstemmelse med den kliniske brug af polio- og stivkrampevacciner, til at tyde antitumorpotentialet af CD4+ T-celle-tilbagekaldelse. Mens - kanonisk - Th1/Tc1-, Th2/Tc2- og Th17/Tc17-polariseringer er gensidigt udelukkende, husker antigenterapi i denne sammenhæng produceret Th1 (CD8+ T-celle-engagement, Tbet/IFN-ekspression i CD{{ 20}} T-celler); Th2 (eosinofil/ILC2-rekruttering, GATA3-ekspression i CD4+ T-celler); og i mindre grad Th17 (ROR t udtryk i CD4+ /CD8+ T-celler) polariserende træk. Disse data føjer til voksende beviser på, at forskellige CD4+ T-cellepolariseringer, ud over Th1, kan generere kompatible og produktive antitumorimmunresponser.56-58 Vores arbejde viser, at mens allerede eksisterende immunitet begrænser viral replikation inden for tumoren, øger den antitumoreffektiviteten af polioviroterapi. En begrænsning af dette arbejde er, at det blev udført i murine systemer, der ikke fanger heterogeniteten af hverken polio/Tet-hukommelse CD4+ T-celle-responser eller TME hos mennesker. På grund af den hurtige vækst af anvendte tumormodeller var tumorer desuden relativt små på tidspunktet for behandlingsstart. Ikke desto mindre, hvilket tyder på anvendeligheden af vores observationer på mennesker, var polio-neutraliserende antistoftitre før behandling højere hos patienter med rGBM, der levede længere efter polioviroterapi, og blodets eosinofilniveauer steg hos størstedelen af patienter med melanom (8/12) efter behandling med polio viroterapi (Lerapolturev). Som en advarsel kan højere neutraliserende polio-antistoftitere afspejle overlegen immunfunktionsstatus. Selvom vi ikke kan udelukke denne mulighed, afslører disse data som minimum, at allerede eksisterende immunitet ikke udelukker vellykket polioviroterapi hos patienter. Vores observationer indebærer også, at flere doser af Lerapolturev kan være berettiget for at fremhæve antitumorvirkningerne af polio-tilbagekaldelse. Faktisk var reaktioner hos patienter med melanom behandlet med Lerapolturev grupperet i den kohorte med det højeste antal it-behandlinger.10 I betragtning af CD4+ T-cellers eminente betydning i cancerimmunterapi,1 32 sigter den voksende indsats på at udnytte CD4+ T-celle hjælper i tumorer, for eksempel med CD40 agonistiske antistoffer,59 eller med peptidvacciner, herunder MHC klasse II epitoper44, der primer neoantigen-specifik CD4+ og CD8+ T celler.60 Vores arbejde afdækker potentialet i at udnytte børnevaccinespecifikke hukommelses-CD4+ T-celler til at engagere multifacetterede antitumormekanismer af CD4+ T-celler.
REFERENCER
1 Borst J, Ahrends T, Bąbała N, et al. Cd4+ T-celler hjælper med kræftimmunologi og immunterapi. Nat Rev Immunol 2018;18:635–47.
2 Ahrends T, Busselaar J, Severson TM, et al. Cd4+ T-celler hjælper med at skabe hukommelses-CD8+ T-celler med medfødte og hjælpeuafhængige genkaldelseskapaciteter. Nat Commun 2019;10:5531.
3 Ahrends T, Spanjaard A, Pilzecker B, et al. CD4+ t-celler hjælper med at give et cytotoksisk t-celle-effektorprogram, herunder coinhibitorisk receptornedregulering og øget vævsinvasivitet. Immunitet 2017;47:848–61.
4 Schenkel JM, Fraser KA, Beura LK, et al. T-cellehukommelse. resident memory CD8 T-celler udløser beskyttende medfødte og adaptive immunresponser. Science 2014;346:98–101.
5 Ariotti S, Hogenbirk MA, Dijkgraaf FE, et al. T-cellehukommelse. hudresident hukommelse cd8+t-celler udløser en tilstand af vævsdækkende patogenalarm. Science 2014;346:101–5.
6 Rosato PC, Wijeyesinghe S, Stolley JM, et al. Virusspecifikke hukommelses-t-celler befolker tumorer og kan genbruges til tumorimmunterapi. Nat Commun 2019;10:567.
7 Çuburu N, Bialkowski L, Pontejo SM, et al. Udnyttelse af anti-cytomegalovirus-immunitet til lokal immunterapi mod solide tumorer. Proc Natl Acad Sci USA 2022;119:e2116738119.
8 Gromeier M, Lachmann S, Rosenfeld MR, et al. Intergeneriske poliovirusrekombinanter til behandling af malignt gliom. Proc Natl Acad Sci USA 2000;97:6803–8.
9 Desjardins A, Gromeier M, Herndon JE 2nd, et al. Tilbagevendende glioblastom behandlet med rekombinant poliovirus. N Engl J Med 2018;379:150–61.
10 Beasley GM, Nair SK, Farrow NE, et al. Fase I forsøg med intratumoral PVSRIPO hos patienter med uoperabelt, behandlingsrefraktært melanom. J Immunother Cancer 2021;9:e002203.
11 Beasley GM, Brown MC, Farrow NE, et al. Multimodalitetsanalyse giver en prognostisk fordel ved et T-celle-infiltreret tumormikromiljø og perifer immunstatus hos patienter med melanom. J Immunother Cancer 2022;10:e005052.
12 Brown MC, Mosaheb MM, Mohme M, et al. Viral infektion af celler i tumormikromiljøet medierer antitumorimmunterapi via selektiv tbk1-irf3-signalering. Nat Commun 2021;12:1858.
13 Brown MC, Holl EK, Boczkowski D, et al. Kræftimmunterapi med rekombinant poliovirus inducerer IFN-dominant aktivering af dendritiske celler og tumorantigen-specifikke CTL'er. Sci Transl Med 2017;9:eaan4220.
14 Holl EK, Brown MC, Boczkowski D, et al. Rekombinant onkolytisk poliovirus, PVSRIPO, har potente cytotoksiske og medfødte inflammatoriske virkninger, som medierer terapi i humane bryst- og prostatacancer xenograft-modeller. Oncotarget 2016;7:79828–41.
15 Yang Y, Brown MC, Zhang G, et al. Polioviroterapi retter sig mod det maligne gliom myeloid infiltrat med diffus mikroglia-aktivering, der opsluger CNS. Neuro Oncol 2023:noad052.
16 Brown MC, Bryant JD, Dobrikova EY, et al. Induktion af viral, 7-methyl-guanosin cap-uafhængig translation og onkolyse ved mitogen-aktiveret proteinkinase-interagerende kinase-medierede effekter på den serin/arginin-rige proteinkinase. J Virol 2014;88:13135–48.
17 Hawken J, Troy SB. Adjuvanser og inaktiveret poliovaccine: en systematisk gennemgang. Vaccine 2012;30:6971–9.
18 Swain SL. Generering og in vivo persistens af polariserede th1 og th2 hukommelsesceller. Immunity 1994;1:543-52.
19 Mosaheb MMet al. Genetisk stabile poliovirusvektorer aktiverer dendritiske celler og primer antitumor CD8 T-celleimmunitet. Nat Commun 2020;11:524.
20 Blanchard C, Rothenberg ME. Eosinofilens biologi. Adv Immunol 2009;101:81-121.
21 Mittrücker HW, Matsuyama T, Grossman A, et al. Krav til transkriptionsfaktoren lsirf/irf4 for moden b- og t-lymfocytfunktion. Science 1997;275:540-3.
22 Groeneveldt C, Kinderman P, van Stigt Thans JJC, et al. Præinduceret reovirus-specifik t-celle-immunitet øger anticancer-effektiviteten af reovirusterapi. J Immunother Cancer 2022;10:e004464.
23 Selvanesan BC et al. Listeria leverer tetanustoksoidprotein til bugspytkirteltumorer og inducerer kræftcelledød hos mus. Sci Transl Med 2022;14:eabc1600.
24 Tähtinen S, Feola S, Capasso C, et al. Udnyttelse af allerede eksisterende immunitet til at forbedre onkolytisk cancerimmunterapi. Cancer Res 2020;80:2575–85.
25 Cachot A, Bilous M, Liu YC, et al. Tumorspecifikke cytolytiske cd4 t-celler medierer immunitet mod human cancer. Sci Adv 2021;7:eabe3348.
26 Oh DY, Kwek SS, Raju SS, et al. Intratumorale cd4+ t-celler medierer anti-tumor cytotoksicitet i human blærekræft. Cell 2020;181:1612–25. 27 Quezada SA, Simpson TR, Peggs KS, et al. Tumorreaktive CD4 (+) T-celler udvikler cytotoksisk aktivitet og udrydder store etablerede melanom efter overførsel til lymfopeniske værter. J Exp Med 2010;207:637–50.
28 Perez-Diez A, Joncker NT, Choi K, et al. Cd4-celler kan være mere effektive til tumorafstødning end CD8-celler. Blood 2007;109:5346–54.
29 Corthay A, Skovseth DK, Lundin KU, et al. Primær antitumorimmunrespons medieret af CD4+ T-celler. Immunitet 2005;22:371-83.
30 Kirke SE, Jensen SM, Antony PA, et al. Tumorspecifikke CD4+ T-celler opretholder effektor- og hukommelsetumorspecifikke CD8+ T-celler. Eur J Immunol 2014;44:69-79.
31 Lu Z, Yuan L, Zhou X, et al. Cd40-Uafhængige pathways for T-celler hjælper til priming af CD8 (+) cytotoksiske T-lymfocytter. J Exp Med 2000;191:541-50.
32 Hung K, Hayashi R, Lafond-Walker A, et al. CD4 (+) T-cellers centrale rolle i antitumorimmunresponset. J Exp Med 1998;188:2357-68.
33 Simon SCS, Hu X, Panten J, et al. Eosinofil akkumulering forudsiger respons på melanombehandling med immun checkpoint-hæmmere. Oncoimmunology 2020;9:1727116.
34 Mackensen A, Meidenbauer N, Vogl S, et al. Fase I undersøgelse af adoptiv T-celleterapi ved brug af antigenspecifikke CD8+ T-celler til behandling af patienter med metastatisk melanom. J Clin Oncol 2006;24:5060–9.
35 Jacquelot N, Seillet C, Wang M, et al. Blokering af det co-inhiberende molekyle PD-1 udløser ILC2-afhængig antitumorimmunitet i melanom. Nat Immunol 2021;22:851-64.
36 Blomberg OS, Spagnuolo L, Garner H, et al. IL-5-producerende cd4+ t-celler og eosinofiler samarbejder for at øge responsen på immunkontrolpunktblokade ved brystkræft. Cancer Cell 2023;41:106–23.
37 Thorsson V, Gibbs DL, Brown SD, et al. Kræftens immunlandskab. Immunitet 2018;48:812–30.
38 Newman AM, Steen CB, Liu CL, et al. Bestemmelse af celletypeoverflod og ekspression fra bulkvæv med digital cytometri. Nat Biotechnol 2019;37:773–82.
39 Lloyd CM, Snelgrove RJ. Type 2-immunitet: udvide vores syn. Sci Immunol 2018;3:eaat1604.
40 Oliphant CJ, Hwang YY, Walker JA, et al. MHCII-medieret dialog mellem gruppe 2 medfødte lymfoide celler og cd4(+) t-celler forstærker type 2-immunitet og fremmer parasitisk helminthuddrivelse. Immunitet 2014;41:283–95.
41 Moynihan KD, Opel CF, Szeto GL, et al. Udryddelse af store etablerede tumorer i mus ved kombinationsimmunterapi, der involverer medfødte og adaptive immunresponser. Nat Med 2016;22:1402–10.
42 Kouro T, Takatsu K. IL-5- og eosinofil-medieret inflammation: fra opdagelse til terapi. Int Immunol 2009;21:1303–9.
43 Barthel FP, Johnson KC, Varn FS, et al. Longitudinelle molekylære baner af diffust gliom hos voksne. Natur 2019;576:112–20.
44 Alspach E, Lussier DM, Miceli AP, et al. MHC-II neoantigener former tumorimmunitet og respons på immunterapi. Nature 2019;574:696–701.
45 Laidlaw BJ, Craft JE, Kaech SM. CD4 (+) T-cellernes mangefacetterede rolle i CD8 (+) T-cellehukommelsen. Nat Rev Immunol 2016;16:102-11.
46 Arnold IC, Artola-Boran M, Gurtner A, et al. GM-CSF-IRF5-signalaksen i eosinofiler fremmer antitumorimmunitet gennem aktivering af type 1 T-celleresponser. J Exp Med 2020;217:e20190706.
47 Bachmann MF, Rohrer UH, Kündig TM, et al. Indflydelsen af antigenorganisation på B-cellerespons. Science 1993;262:1448-51.
48 Link A, Zabel F, Schnetzler Y, et al. Medfødt immunitet medierer follikulær transport af partikelformige, men ikke opløselige proteinantigener. J Immunol 2012;188:3724-33.
49 Trabanelli S, Chevalier MF, Derré L, et al. ilc2s pro- og antitumorrolle. Semin Immunol 2019;41:101276.
50 Simon SCS, Utikal J, Umansky V. Eosinofilers modsatrettede roller i cancer. Cancer Immunol Immunother 2019;68:823–33.
51 Lloyd CM, Hessel EM. Funktioner af T-celler i astma: mere end blot T (H) 2-celler. Nat Rev Immunol 2010;10:838–48.
52 Smith SG, Chen R, Kjarsgaard M, et al. Øget antal aktiverede gruppe 2 medfødte lymfoide celler i luftvejene hos patienter med svær astma og vedvarende eosinofili i luftvejene. J Allergy Clin Immunol 2016;137:75–86.
53 Moral JA, Leung J, Rojas LA, et al. Ilc2S forstærker PD-1-blokaden ved at aktivere vævsspecifik cancerimmunitet. Nature 2020;579:130–5.
54 Huang Z, Wu L, Hou Z, et al. Eosinofiler og andre perifere blodbiomarkører i gliomklassificering: en foreløbig undersøgelse. BMC Neurol 2019;19:313.
55 Ostrom QT, Lu D, Lu R, et al. Forekomst af autoimmunitet og atopi hos amerikanske voksne med glioblastom og meningiom. Neuro Oncol 2022;24:1807–9.
56 Tuzlak S, Dejean AS, Iannacone M, et al. Repositionering af cellepolariseringen fra enkelte cytokiner til kompleks hjælper. Nat Immunol 2021;22:1210-7.
57 Nishimura T, Iwakabe K, Sekimoto M, et al. Distinkt rolle af antigenspecifik T-hjælper type 1 (Th1) og Th2 celler i tumorudryddelse in vivo. J Exp Med 1999;190:617-27.
58 Lorvik KB, Hammarström C, Fauskanger M, et al. Adoptiv overførsel af tumorspecifikke Th2-celler udrydder tumorer ved at udløse en in situ inflammatorisk immunrespons. Cancer Res 2016;76:6864–76.
59 Vonderheide RH. Cd40 agonist antistoffer i cancer immunterapi. Annu Rev Med 2020;71:47–58. 60 Ott PA, Hu Z, Keskin DB, et al. En immunogen personlig neoantigenvaccine til patienter med melanom. Nature 2017;547:217–21.
