Fedtrig kost forværrer nyreiskæmi-reperfusionsskade

for flere oplysninger:ali.ma@wecistanche.com

DEL Ⅰ: Kostændringer ændrer den intrarenale immunologiske mikromilieu og modtagelighed for iskæmisk akut nyreskade

Junseok Jeon'f, Kyungho Leef, Kyeong Eun Yang, Jung Eun Lee, Ghee Young Kwon, Wooseong Huh & et al.

INTRODUKTION

Iskæmiskakut nyreskade(AKI) er den mest almindelige årsag til AKI og bidrager ofte til udvikling og progression afkronisk nyresygdom (CKD) hos både indfødte og transplanteredenyrer(1,2). Iskæmi-reperfusionsskade(IRI) inducerer transplantatskade, en uundgåelig konsekvens afnyretransplantation (3). Væsentlige roller af immunologiske mekanismer, ud over simpel hypoxisk skade, i patogenesen af ​​iskæmisk AKI er blevet påvist i mange undersøgelser(4,5). I den postiskæmiskenyreefter IRI(Iskæmi-reperfusionsskade), resulterer en robust inflammatorisk reaktion forårsaget af både medfødte og adaptive immunsystemernyreskade(6). Ud over infiltration af cirkulerende immunceller bidrager det intrarenale immunologiske mikromiljø, herunder residente intrarenale immunceller(7) og Toll-lignende receptorer (TLR'er) på nyretubuli(8), væsentligt til nyreskade efter IRI(Iskæmi-reperfusionsskade) (6).

Nylige undersøgelser har rapporteret en sammenhæng mellem kost og immunfunktion (9). Ændringer i kostsammensætningen har potentiale til at forværre eller lindre sværhedsgraden af ​​sygdomme, hvor immunmekanismer spiller en vigtig rolle i patogenesen, såsom hypertension i en murin model af saltfølsom hypertension eller fedme-relateretnyreskadei enhøjt fedtindhold(HF) diæt-induceret fedmemodel(10-12). Det er dog endnu ikke afgjort, om kostmodifikation kan ændre det intrarenale immunologiske mikromiljø og modtagelighed for iskæmisk AKI, selvom kostens betydning for CKD er blevet rapporteret (13). I betragtning af potentialet for forebyggende eller terapeutiske virkninger af diætintervention i iskæmisk AKI, er det vigtigt at undersøge virkningerne af diætændringer i normalnyrer.

I denne undersøgelse havde vi til formål at afsløre virkningerne af HF(højt fedtindhold) eller højsalt (HS) diæt på normale nyrer og udvikling af iskæmisk AKI med fokus på det intrarenale immunologiske mikromiljø.

Klik til organiskCISTANCHE FOR NYRESYGDOM

MATERIALER OG METODER

Kostændringer og renal IRI(Iskæmi-reperfusionsskade)Model

Denne undersøgelse blev godkendt af Samsung Medical Center Animal Care and Use Committee og Institutional Review Board of Samsung Medical Center (IACUC nr. 20180314002) og blev udført i overensstemmelse med dyreforskningsretningslinjerne: rapportering af in vivo eksperimenter (14,15). Han 9-uge gamle C57BL/6 mus blev købt fra Orient Bio Inc. (Seongnam, Kyoungki-do, Korea). Alle mus blev anbragt i en specifik patogenfri barrierefacilitet.

Vi undersøgte virkningerne af HF(højt fedtindhold)eller HS-diæt på normale nyrer og postiskæmiske nyrer i en iskæmisk AKI-model induceret af bilateral IRI(Iskæmi-reperfusionsskade)kirurgi. I hver model blev mus tilfældigt fordelt i fire diætregimer; normal kost (0.25 vægtprocent NaCl, 10 procent fedt efter kalorier), HF(højt fedtindhold) diæt (0.25 vægtprocent NaCl, 60 procent fedt i kalorier), HS-diæt (8 vægtprocent NaCl, 10 procent fedt i kalorier) og fedtrig diæt med højt saltindhold (HF)(højt fedtindhold)plus HS) (8 vægtprocent NaCl, 60 vægtprocent fedt efter kalorier). Sammensætningen af ​​normal- og HS-diæterne var 20 procent protein (hovedkilden kasein), 70 procent kulhydrat (hovedkilden saccharose) og 10 procent fedt (hovedkilden sojabønneolie) (D12450B, Research Diets, New Brunswick, NJ). Sammensætningen af ​​HF(højt fedtindhold)diæt og HF(højt fedtindhold) plus HS diæt var 20 procent protein (hovedkilde kasein), 20 procent kulhydrat (hovedkilde Lodex 10) og 60 procent fedt (hovedkilde svinefedt) (D12492, Research Diets). Alle diætregimer havde samme mineral- og vitaminkoncentrationer bortset fra NaCl.

Som for normale mus blev hver gruppe holdt på den tildelte diæt i 42 dage og derefter skiftet til en normal diæt i 14 dage.

Med hensyn til den iskæmiske AKI-model brugte vi en etableret murin IRI(Iskæmi-reperfusionsskade)model med en laparotomi tilgang(16, 17). Bilateral IRI(Iskæmi-reperfusionsskade)blev induceret efter 1-ugers eller 6-ugers varighed af kostændringer. Kort fortalt blev mus bedøvet med en intraperitoneal injektion af ketamin (100 mg/kg; Yuhan, Seoul, Korea) og xylazin (10 mg/kg; Bayer, Leverkusen, Tyskland). Efter et abdominalt midtlinjesnit blev begge nyrepedikler isoleret og fastspændt i 27 minutter med en mikrovaskulær klemme (Roboz Surgical Instrument, Gaithersburg, MD). Under operationen blev bedøvede mus holdt godt hydreret med varmt sterilt saltvand og placeret på et termostatstyret varmebord. Efter 27 minutter blev de mikrovaskulære klemmer frigivet fra nyrernes pedikler til reperfusion. Efter påføring af suturer fik mus lov til at komme sig med fri adgang til den tildelte kost og vand. Alle mus blev aflivet på dag 2 efter IRI(Iskæmi-reperfusionsskade)operation, og postiskæmiske nyrer blev høstet efter blødning.

CISTANCHE UDDRAGKAN FORHINDRE NYRE I SKADER

Vurdering af nyrefunktion

Hos normale mus blev koncentrationer af urinstof-nitrogen i blodet (BUN; Fujifilm, Bedford, UK) og plasmakreatinin (Arbor Assays, Ann Arbor, MI) målt i plasmaprøver opsamlet fra halevener serielt på dagene 0,7,14 , 28, 42 og 56 efter kostændringer. Kolorimetriske sæt blev brugt i overensstemmelse med producentens anbefalede metoder. I IRI(Iskæmi-reperfusionsskade)model blev plasmaprøver målt på dag 0, 1 og 2 efter operationen ved hjælp af de samme metoder.

Vævshistologisk analyse

I IRI(Iskæmi-reperfusionsskade)model, blev postiskæmiske nyrevævssnit fikseret med 10 procent bufferet formalin og farvet med hæmatoxylin og eosin. En nyrepatolog, der var blindet for diætallokeringen, opnåede renal tubulær nekrose i cortex og ydre medulla af postiskæmiske nyrer.

CD45 immunhistokemi og vævsfaxanalyse

Formalinfikserede nyrevævssnit blev immunfarvet til påvisning af CD45 som følger. Sektioner (4-μm-tykke) blev afparaffineret med xylen, rehydreret i en graderet alkoholserie og anbragt i en citratbufferopløsning (pH6.0). Objektglassene blev anbragt i en trykkoger og opvarmet til 10 minutter for at øge antigen-genfindingen. Efter afkøling blev nyresektionerne nedsænket i en hydrogenperoxidopløsning (Dako, Carpinteria, CA) i 30 minutter for at blokere endogen peroxidaseaktivitet, efterfulgt af inkubation natten over ved 4 grader med serumfri proteinblok (Dako). Den næste dag blev objektglassene inkuberet med en 1:100 fortynding af anti-muse CD45 monoklonalt antistof (BD Biosciences, San Jose, CA) i 1 time ved stuetemperatur. Efter skylning blev de CD45--farvede sektioner inkuberet i 30 minutter ved stuetemperatur med et sekundært antistof under anvendelse af et Dako REAL EnVison-kit (Dako). Efterfølgende blev 3,3'-diaminobenzidintetrahydrochlorid (Dako) påført til objektglassene for at frembringe en brun farve, og objektglassene blev modfarvet med Mayers hæmatoxylinopløsning (Dako).

En TissueFAXS-arbejdsstation (Tissue Gnostics, Wien, Østrig) blev brugt til at analysere og beregne procentdelen af ​​CD45-positive celler i nyreprøver, som beskrevet tidligere (18).

Flowcytometrisk analyse af nyre-infiltrerende mononukleære celler

Isolering af mononukleære nyreceller (KMNC'er) var baseret på en etableret protokol(19). Kort fortalt blev dekapsulerede nyrer nedsænket i RPMI-buffer (Mediatech, Manassas, VA) indeholdende 5 procent FBS og afbrudt mekanisk ved hjælp af en Stomacher 80 Biomaster (Seward, Worthing) , Storbritannien). Prøver blev sigtet, vasket og resuspenderet i 36 procent Percoll (Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ) efterfulgt af forsigtig overlejring på 72 procent Percoll. Prøverne blev centrifugeret ved 1,000g i 30 minutter ved stuetemperatur. KMNC'er blev indsamlet fra grænsefladen på 36 procent og 72 procent Percoll.

Isolerede KMNC'er blev resuspenderet i FACS-buffer og præ-inkuberet med anti-CD16/CD32-antistoffer i 10 minutter for at minimere ikke-specifik binding gennem Fc-receptorer. KMNC'er blev inkuberet med anti-muse anti-CD3, CD4, CD8, CD19, CD21, CD25, CD44, CD45, CD62L, CD69, CD126, CD138, Gr-1, F4/80, FoxP3 og NK1.1 (alle fra BD Biosciences, San Jose, CA) i 25 minutter ved 4 grader, vasket med FACS-buffer og fikseret med 1 procent paraformaldehydopløsning. Prøver blev erhvervet ved hjælp af et BD FACSVerse flowcytometer. Data blev analyseret ved hjælp af FACSuite-programmet (BD Biosciences).

Multiplex cytokin/kemokin-assay

Multiplex cytokin- og kemokinanalyse i helnyreproteinekstrakter blev udført under anvendelse af et Milliplex MAP Mouse Cytokine/Chemokine Kit (Luminex, Austin, TX) efter producentens instruktioner. Anti-cytokin monoklonale antistoffer knyttet til mikrosfærer, der inkorporerer særskilte egenskaber af to fluorescerende farvestoffer, blev anvendt i dette multipleksede partikelbaserede flowcytometriske assay. Vores assay blev designet til at kvantificere interleukin(I)-2;IL-4; IL-6; I-10;interferon (IFN)-y; monocyt kemoattraktant protein (MCP)-1; reguleret ved aktivering, normal T-celle udtrykt og udskilt (RANTES/CCL5); tumornekrosefaktor(TNF)-; og vaskulær endotelvækstfaktor (VEGF). Værdien af ​​hvert cytokin eller kemokin blev normaliseret ved at dividere den rå koncentration (pg/ml) med nyreproteinkoncentrationen (mg/ml, målt ved brug af et Pierce BCA-proteinassaykit, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA).

Western Blot-analyse af intrarenale toll-lignende receptorer 2 og 4

Intrarenale Toll-lignende receptorer 2 og 4(TLR-2 og TLR-4) blev analyseret ved western blot-analyse. Ifølge producentens instruktioner blev lige store mængder helnyreproteinekstrakt (30 ug) adskilt ved elektroforese på et NuPAGE Bolt-minigelsystem (Thermo Fisher Scientific). Gelerne blev overført til en nitrocellulosemembran under anvendelse af et iBlot 2 Dry Blotting System (Thermo Fisher Scientific) efter elektroforese. Membraner blev blokeret med 5 procent skummetmælk tris-bufret saltvandsopløsning med 0,1 procent Tween20 (TBST) i 1 time ved stuetemperatur og derefter inkuberet natten over ved 4 grader med et af følgende antistoffer: muse monoklonalt anti-TLR2 antistof (MyBioSource, San Diego ,CA) eller anti-TLR4-antistof (Novus Biologicals, Centennial, CO). Det peberrodsperoxidase-konjugerede sekundære antistof blev påført i 30 minutter ved stuetemperatur efter vask med TBST. Signalet blev visualiseret ved hjælp af et Amersham ECL-detektionssystem (GE Healthcare, Chicago, IL), efter producentens instruktioner. Bånd blev densitometrisk analyseret ved hjælp af ImageJ 1.8-software (Wayne Rasband, National Institutes of Health, MD) og normaliseret mod tilsvarende -actin-båndintensitet som en intern kontrol.

HK-2 cellehypoximodel og proliferationsassay

Human nyre-2(HK-2) celle (en udødeliggjort proksimal tubuli-epitellinje fra en normal voksen human nyre) hypoximodel blev brugt til in vitro undersøgelse for at undersøge virkningerne af en HS eller HF(højt fedtindhold) miljø på cellulært niveau.

Humane nyre-2(HK-2)celler blev købt fra American Type Culture Collection(CRL-2190, Manassas, VA) og dyrket i keratinocytserumfri medier (Thermo Fisher Scientific) suppleret med bovint hypofyseekstrakt og human rekombinant epidermal vækstfaktor. Celler blev inkuberet ved 37 grader i en befugtet atmosfære på 5 procent CO2 med mediet skiftet hver 2-3 dag. Hypoxi blev induceret ved eksponering for 1 procent O2 og 5 procent CO2 balanceret med nitrogen i en multi-gas inkubator (APM-30D,Astec, Fukuoka, Japan) i 48 timer.

HK-2-celler blev opdelt i fire grupper. Den første og anden gruppe var kontroller under henholdsvis normoksi (21 procent O2) og hypoxi (1 procent O2). Den tredje og fjerde gruppe blev behandlet med yderligere NaCl 25 mM og 1:250 fortyndet lipidkoncentrat (Thermo Fisher Scientific) , før og efter hypoxisk fornærmelse.

Graden af ​​HK{0}} celleproliferation på dag 0,1 og 2 efter hypoxi blev vurderet med en Cell Titer96 vandig én opløsning celleproliferation assay (Promega, Madison, WI) i henhold til producentens instruktioner.

Til kvantificering af inflammatorisk signalmolekyleekspression i de hypoxiske HK{0}}-celler blev TLR-2 og TLR-4 målt med western blot-analyse under anvendelse af muse monoklonalt anti-TLR2 (Santa Cruz Bioteknologi, Dallas, TX) og anti-TLR4 (Novus Biologicals, Centennial, CO) antistoffer på dag 0 og 2. Kort fortalt blev cellerne anbragt i RIPA-buffer (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) indeholdende en proteaseinhibitorcocktail (Sigma-Aldrich). Homogenatet blev centrifugeret ved 13,000g ved 4 grader i 10 minutter, og supernatanten blev udsat for de førnævnte western blot-procedurer.

Statistiske analyser

Alle data blev udtrykt som middelværdi ± standardfejl af middelværdien (SEM). Forskelle mellem grupper eller tidspunkter blev analyseret ved hjælp af Mann-Whitney U-test eller to-vejs variansanalyse (ANOVA) efterfulgt af Tukeys post-hoc analyse. Alle statistiske analyser blev udført ved hjælp af GraphPad Prism version 8-software (GraphPad Software, La Jolla, CA).P-værdier<0.05 were="" considered="" statistically="">

RESULTATER

Virkninger af kostændringer på fysiologiske ændringer i normale mus For at undersøge de fysiologiske ændringer forårsaget af kostændringer i normale mus blev kropsvægt, totalt plasmakolesterol, kreatinin og BUN-koncentration målt serielt. Den samlede mængde af diætindtag i HE, HF(højt fedtindhold)plus HS, og kontrolgrupperne var ens, mens HS-gruppen havde en tendens til at indtage lidt mere mad (Supplerende figur 1). Kropsvægten af ​​HF'en(højt fedtindhold)diætgruppen steg signifikant fra dag 7 efter start af HF(højt fedtindhold)kost. HS diætgruppen havde en lavere kropsvægt end kontrolgruppen på dag 42 og sammenlignelig kropsvægt med kontrolgruppen fra 1 uge efter skift til normal diæt (figur 1A). Totalt plasmakolesterolniveau i HF'en(højt fedtindhold)diætgruppen var signifikant højere sammenlignet med kontrolgruppen på dag 14 og blev sammenlignelig med kontrolgruppen 1 uge efter skift til normal diæt. Plasma kolesterolniveau i kontrollen, HS diæt og HF(højt fedtindhold)plus HS diætgrupper var sammenlignelige i løbet af de 6 ugers diætændring (figur 1B). BUN var højere i HF(højt fedtindhold)diætgruppe og HF(højt fedtindhold)plus HS diætgruppe på dag 7. Den samlede nyrefunktion var sammenlignelig blandt grupperne i 6 ugers diætændring (figur 1C).

FIGUR 1|Effekter af kostændringer på fysiologiske ændringer af normale mus.(A) HF(højt fedtindhold)diætgruppen tog markant på i vægt fra dag 7 efter start af HF(højt fedtindhold)kost og viste stationær kropsvægt efter skift til normal kost. HS diætgruppen havde en lavere kropsvægt end kontrolgruppen på dag 42 og vendte tilbage til en kropsvægt sammenlignelig med kontrolgruppen 1 uge efter skiftet til en normal diæt. (B) HF(højt fedtindhold)diæt øgede den totale plasmakoncentration af kolesterol signifikant fra dag 14 efter diætændring. Det totale kolesterolniveau i HF(højt fedtindhold)diætgruppen vendte tilbage til en sammenlignelig koncentration efter at have skiftet til en normal diæt. (C) BUN-niveauet på dag 7 var signifikant højere i HF(højt fedtindhold)diæt- og HS-diætgrupper. Den samlede nyrefunktion målt ved plasmakreatinin var sammenlignelig blandt grupper for hele undersøgelsesperioden.*P < {{0}}.05,="" sammenlignet="" med="" kontrolgruppen="" på="" hvert="" tidspunkt.="" †p="">< 0,05="" sammenlignet="" med="" dag="" 7="" i="" den="" samme="" gruppe="" (n="5" for="" hver="" gruppe="" på="" hvert="" tidspunkt).="" statistiske="" analyser="" blev="" udført="" med="" to-vejs="" anova="" test="" efterfulgt="" af="" tukeys="" test.="">(højt fedtindhold), højt fedtindhold; HS, højt saltindhold; HF(højt fedtindhold)plus HS, højt fedtindhold med højt saltindhold.

Virkninger af diætændringer på de intrarenale leukocytter af normale mus Handel med totale leukocytter til normale nyrer blev evalueret ved immunhistokemisk farvning af CD45 efterfulgt af semikvantitativ analyse med TissueFAXS (figur 2A). Andelen af ​​intrarenale totale leukocytter blandt de samlede kerneceller var sammenlignelige. grupper på hvert tidspunkt (figur 2B).

FIGUR 2|Effekter af kostændringer på intrarenale leukocytter fra normale mus.Residente leukocytter blev analyseret med immunhistokemi af CD45 og flflowcytometri på normalt nyrevæv. (A) Repræsentative resultater fra immunhistokemi og semikvantitativ analyse af CD45-positive leukocytter i normal nyre i kontrolgruppen på dag 0. Pile angiver CD45-positive leukocytter (×200). (B) Procentdelene af totale leukocytter, der udtrykker CD45 blandt de totale nukleerede celler, var sammenlignelige mellem diætfodrede grupper.

Større effektorceller fra både medfødte og adaptive immunsystemer, der blev transporteret ind i nyrerne efter kostmodifikation, blev analyseret med flowcytometri. Med hensyn til T-celle-subtype steg samlede CD8 T-celler, effektorhukommelse CD4T-celler og NK T-celler over tid under diætmodifikationen, hvorimod det samlede antal CD4 T-celler faldt. Med hensyn til forskelle mellem grupper på hvert tidspunkt var HF(højt fedtindhold)gruppe og HF(højt fedtindhold)plus HSgroup viste en større andel af CD8T-celler blandt totale T-celler på dag 42 efter diætændring sammenlignet med kontroldiætgruppen. HF(højt fedtindhold)plus HS-gruppen viste også større andele af effektorhukommelsesundersættene af CD4- og CD8T-celler og aktiverede CD4- og CD8-T-celler (figur 3A,B, Supplerende figur 2). Med hensyn til ikke-T-cellepopulationer faldt de totale B-celler, og NK-cellerne steg på dag 14 sammenlignet med dag 7 efter diætændring. Plasmaceller nåede toptal i HF(højt fedtindhold)diæt- og HS-diætgrupper på dag 42 og faldt til niveauer, der var sammenlignelige med kontrolgruppens niveauer efter en normal diæt i 2 uger. Andelen af ​​NK-celler og aktiverede modne B-celler blandt totale B-celler var signifikant højere i HF(højt fedtindhold)diæt og HF(højt fedtindhold)plus HS diætgrupper på dag 14 efter diætændring. HF(højt fedtindhold)diæt- og HS-diætgrupper viste højere intrarenal infiltration af neutrofiler på dag 14 efter kostmodifikation (figur 3C, D, supplerende figur 2).

FIGUR 3|Flowcytometrianalyser af KMNC'er isoleret fra nyrer fra normale mus.(A) Ændringer i den intrarenale T-celle subpopulation ved kostmodifikation. HF(højt fedtindhold)og HF plus HS diæter øgede andelen af ​​totale CD8 T-celler blandt totale T-celler på dag 42 efter kostmodifikation. HF(højt fedtindhold)plus HS diæt øgede også andelen af ​​effektorhukommelse CD4 og CD8 T-celler. (B) Den repræsentative prikplot, der analyserer T-celler på dag 42. Gated celler indikerer CD4 T-celler og CD8 T-celler blandt totale T-celler. (C) HF(højt fedtindhold)diæt og HS-diæt øgede infifiltrationen af ​​plasmaceller og neutrofiler på henholdsvis dag 42 og 14 efter diætændring. HF(højt fedtindhold)diæt og HF plus HS diæt øgede infifiltrationen af ​​aktiverede modne B-celler og NK-celler på dag 14 efter kostmodifikation. (D) Repræsentative prikplot, der analyserer plasmaceller på dag 42. Gated celler indikerer plasmaceller, der udtrykker CD138 og CD126 blandt total nyre mononukleære celler. *P < 0.05="" sammenlignet="" med="" kontrolgruppen="" på="" hvert="" tidspunkt.="" †p="">< 0,05="" sammenlignet="" med="" dag="" 7="" i="" den="" samme="" gruppe="" (n="5" for="" hver="" gruppe="" på="" hvert="" tidspunkt).="" statistiske="" analyser="" blev="" udført="" med="" to-vejs="" anova="" test="" efterfulgt="" af="" tukeys="" test.="">højt fedtindhold; HS, højt saltindhold; HF(højt fedtindhold)plus HS,højt fedtindholdmed højt saltindhold.

Effekter af kostændringer på intrarenale cytokiner/kemokiner fra normale mus

Sammenlignet med normal diæt, HS diæt eller HF(højt fedtindhold)plus HS diæt øgede den intrarenale ekspression af proinflammatoriske cytokiner/kemokiner, herunder TNF-, INF-y, MCP-1 og RANTES (figur 4A). Ekspression af IL-6 var højere i HF(højt fedtindhold)plus HS diætgruppe på dag 7 (Supplerende figur 3). Omvendt er den intrarenale ekspression af VEGF i mus fodret med HS-diæten og HF(højt fedtindhold)plus HS diæt var signifikant lavere end kontrolgruppens (figur 4B).

FIGUR 4|Effekter af kostmodifikation på intrarenale cytokiner og kemokiner fra normale mus.HS og HF(højt fedtindhold)plus HS diæter øgede intrarenale udtryk af TNF-, INF-, MCP-1 og RANTES på dag 42. HF(højt fedtindhold)plus HS-diæt øgede også ekspressionen af ​​IL-6 på dag 7 efter kostændringer. Selvom der ikke var nogen signifikante forskelle i ekspressionen af ​​IL-10, var den intrarenale ekspression af VEGF lavere i HS diætgruppen og HF(højt fedtindhold)plus HS diætgruppe på dag 7 og dag 42 efter diætændring. *P < 0.05="" sammenlignet="" med="" kontrolgruppen="" på="" hvert="" tidspunkt.="" †p="">< 0,05="" sammenlignet="" med="" dag="" 7="" i="" den="" samme="" gruppe="" (n="5" for="" hver="" gruppe="" på="" hvert="" tidspunkt).="" statistiske="" analyser="" blev="" udført="" med="" to-vejs="" anova="" test="" efterfulgt="" af="" tukeys="" test.="">højt fedtindhold; HS, højt saltindhold; HF plus HS,højt fedtindholdmed højt saltindhold.

Kostændringer påvirker modtageligheden for lskæmisk AKI

For at undersøge virkningerne af kostændringer på postiskæmiske nyrer, bilateral IRI(Iskæmi-reperfusionsskade)blev udført 1 eller 6 uger efter kostændring. Samlet set forværring af nyrefunktionen efter IRI(Iskæmi-reperfusionsskade)var mere fremtrædende hos de mus, der modtog den HS-baserede diætmodifikation i både 1 uge og 6 uger sammenlignet med kontrolgruppen. Både BUN- og plasmakreatininkoncentrationer var signifikant højere hos musene, der blev fodret med HS eller HF(højt fedtindhold)plus HS diæt i 1 uge sammenlignet med kontrolgruppen på dag 2 efter IRI(Iskæmi-reperfusionsskade)(Figur 5A). Plasma-kreatininkoncentration i musene, der blev fodret med HF(højt fedtindhold)plus HS diæt i 6 uger var signifikant højere end i kontrolgruppen på dag 1 og 2 efter IRI(Iskæmi-reperfusionsskade)(Figur 5B).

FIGUR 5|Effekter af kostændringer på udvikling af akut nyreskade (AKI) efter bilateral IRI(Iskæmi-reperfusionsskade)kirurgi.(A,B) De nyrefunktionelle ændringer efter IRI(Iskæmi-reperfusionsskade)i hver diætgruppe. Forringelse af nyrefunktionen efter IRI(Iskæmi-reperfusionsskade)havde tendens til at blive forværret af HF(højt fedtindhold)eller en HS diæt fodret i både 1 uge og 6 uger. BUN- og plasmakreatininniveauer var signifikant højere i HS og HF(højt fedtindhold)plus HS diætgrupper fodret i 1 uge efter IRI(Iskæmi-reperfusionsskade). Plasma kreatinin niveau i HF(højt fedtindhold)plus HS diætgruppen fodret i 6 uger var signifikant højere end kontrolgruppen på dag 2 efter IRI(Iskæmi-reperfusionsskade). *P < 0.05="" sammenlignet="" med="" kontrolgruppen="" på="" hvert="" tidspunkt="" (n="5–10" for="" hver="" gruppe).="" statistisk="" analyse="" blev="" udført="" under="" anvendelse="" af="" mann-whitney="" u-test.="">højt fedtindhold; HS, højt saltindhold; HF plus HS,højt fedtindholdmed højt saltindhold.

Andelene af nekrotiske tubuli havde en tendens til at være højere hos musene, der blev fodret med HS eller HF(højt fedtindhold)kost sammenlignet med kontrolgruppen (figur 6). Gruppen fodrede en HF(højt fedtindhold)plus HS diæt i 1 uge viste en signifikant større andel af nekrotiske tubuli end kontrolgruppen (figur 6C).

FIGUR 6|Effekter af kostændringer på strukturel skade efter IRI(Iskæmi-reperfusionsskade)kirurgi.(A,B) Hæmatoxylin og eosinfarvning af postiskæmiske nyrer på dag 2 efter IRI(Iskæmi-reperfusionsskade). Pile angiver beskadigede eller nekrotiske tubuli (×200). (C) Procentdelen af ​​nekrotiske tubuli havde en tendens til at være højere hos musene, der blev fodret med en HF(højt fedtindhold)eller HS diæt sammenlignet med kontrolgruppen. HF(højt fedtindhold)plus HS diætgruppe, der blev fodret i 1 uge, viste en signifikant højere procentdel af nekrotiske tubuli end kontrolgruppen. *P < 0.05="" sammenlignet="" med="" kontrolgruppen="" (n="5–10" for="" hver="" gruppe).="" statistisk="" analyse="" blev="" udført="" under="" anvendelse="" af="" mann-whitney="" u-test.="">højt fedtindhold; HS, højt saltindhold; HF plus HS,højt fedtindholdmed højt saltindhold.

Procentdelen af ​​totale leukocytter, der udtrykker CD45 blandt totale kerner i de postiskæmiske nyrer var signifikant højere i gruppen, der blev fodret med en HF(højt fedtindhold)plus HS diæt i både 1 uge og 6 uger (figur 7A,B). Gruppen fodrede en HF(højt fedtindhold)diæt i 6 uger viste også en større andel af CD45-positive celler end kontrolgruppen (figur 7C).

FIGUR 7|Effekter af diætmodifikation på leukocyttrafik ind i den postiskæmiske nyre.(A,B) Repræsentative immunhistokemiske fund og semikvantitative analyser af CD45-positive leukocytter i de postiskæmiske nyrer på dag 2 efter IRI(Iskæmi-reperfusionsskade). Der var mere udtalte infifiltrationer af leukocytter i de postiskæmiske nyrer hos mus fodret med en HF(højt fedtindhold)eller HS diæt i både 1 uge og 6 uger. Pile angiver CD45-positive leukocytter (×200). (C) Procentdelene af totale leukocytter, der udtrykker CD45 blandt de totale nukleerede celler var højere i de postiskæmiske nyrer af HF(højt fedtindhold)-eller HS-fodrede mus sammenlignet med mus fodret med en normal diæt. *P < 0.05="" sammenlignet="" med="" kontrolgruppen="" (n="5–10" for="" hver="" gruppe).="" statistisk="" analyse="" blev="" udført="" under="" anvendelse="" af="" mann-whitney="" u-test.="">højt fedtindhold; HS, højt saltindhold; HF plus HS,højt fedtindholdmed højt saltindhold.

Intrarenal ekspression af TLR-2 og TLR-4 på dag 2 efter IRI(Iskæmi-reperfusionsskade)blev evalueret med western blotting af proteinprøver ekstraheret fra postiskæmiske nyrer. Ekspressionen af ​​både TLR-2 og TLR-4 havde en tendens til at stige i mus fodret med HF(højt fedtindhold)eller HS diæt i 1 uge (figur 8A, C). Mus fodret med en HF(højt fedtindhold)plus HS diæt i 6 uger viste signifikant øget ekspression af både TLR-2 og TLR-4(figur 8B,C).

FIGUR 8|Western blotting af proteinprøver ekstraheret fra postiskæmiske nyrer på dag 2 efter IRI(Iskæmi-reperfusionsskade).(A) Den samlede ekspression af TLR2 og TLR4 havde en tendens til at være højere i postiskæmiske nyrer hos mus fodret med en HF- eller HS-diæt i 1 uge sammenlignet med dem hos musene, der blev fodret med en normal diæt. (B,C) Udtrykket af TLR-2 og TLR-4 var signifikant højere i HF(højt fedtindhold)HS og HF(højt fedtindhold)plus HS diætgrupper fodret i 6 uger sammenlignet med kontrolgruppen. *P < 0.05="" sammenlignet="" med="" kontrolgruppen="" (n="3–4" for="" hver="" gruppe).="" statistisk="" analyse="" blev="" udført="" under="" anvendelse="" af="" mann-whitney="" u-test.="">højt fedtindhold; HS, højt saltindhold; HF plus HS,højt fedtindholdmed højt saltindhold.

Effekter af højt natrium og lipid på hypoxiske HK-2 celler

Figur 9A viser graden af ​​HK-celleproliferation efter hypoxisk fornærmelse afhængig af yderligere NaClandlipid-behandling. Dag 0, slutningen af ​​hypoxi, var dagen, hvor HK-2-celler blev fjernet fra multi-gas-inkubatoren efter 48 timers hypoxi. Behandling med højt saltindhold (yderligere NaCl 25 mM) undertrykte proliferationen af ​​hypoxiske HK-2-celler. Omvendt lettede lipidbehandling spredningen af ​​hypoxiske HK-2celler.

Western blot-analyse af TLR-2 og TLR-4 i proteinekstrakter af hypoxiske HK-2-celler viste, at lipidbehandling reducerede ekspressionen af ​​TLR-2 og øgede ekspressionen af ​​TLR{ {4}} sammenlignet med hypoksikontrolgruppen på dag 2 efter hypoksisk fornærmelse (figur 9B,C). Den yderligere NaCl-behandling ændrede ikke signifikant ekspressionen af ​​TLR-2 ellerTLR-4 sammenlignet med hypoksikontrolgruppen.

FIGUR 9|Effekter af natrium- og lipidbehandling på hypoxiske HK-2-celler.(A) Yderligere NaCl-behandling hæmmede proliferationen af ​​HK{{0}}-celler efter hypoksisk fornærmelse sammenlignet med hypoxikontrolgruppen. Omvendt lettede yderligere lipidbehandling proliferationen af ​​HK-2-celler efter hypoxisk fornærmelse. (B,C) Western blotting af TLR-2 og TLR-4 viste, at lipidbehandling reducerede udtryk for TLR-2 og øgede ekspressionen af ​​TLR-4 sammenlignet med hypoxien kontrolgruppe på dag 2 efter hypoxisk fornærmelse. Dag 0: Dag, hvor HK-2-celler blev fjernet fra multi-gas-inkubatoren 48 timer efter hypoxi. *P < 0.05="" sammenlignet="" med="" normoksi-kontrolgruppen.="" †p="">< 0,05="" sammenlignet="" med="" hypoxikontrolgruppen.="" statistisk="" analyse="" blev="" udført="" under="" anvendelse="" af="" mann-whitney="">

Den traditionelle kinesiske lægeurt:cistanche

Bemærk: Det traditionelle kinesiske lægemiddelurtecistanche(også kendt som "drageurten" og "ørkenginseng"), vokser kun i de tørre og varme ørkener. Som en af ​​de ni udødelige urter,Cistanche(cistanche tubulosa/cistanche deserticola/desertliving cistanche/cistanche salsa)indhold med rige effektive ingredienser såsom echinacosid, acteosid, totale phenylethanoid glycosider, flavonoider, polysaccharider osv. disse effektive ingredienser gjorde cistanche til en dyrebar nærende urt og fødevaremateriale for menneskers immunitet og hjernecelleorganer, og neuroner osv. De moderne farmakologiske undersøgelser har bekræftet følgendevirkninger af cistanche(fordelene ved cistanche): forbedre immunitet; forbedre seksuel funktion og nyrefunktion; anti-træthed; anti aldring; forbedre hukommelsen; anti-Parkinsons sygdom; anti-Alzheimers sygdom; antioxidation; let-forstoppelse; anti-inflammatorisk; fremme knoglevækst, blegning af hud; beskytte leveren; etc.

KLIK HER FOR AT DEL Ⅱ