DNA-afhængig proteinkinase katalytisk underenhed (DNA-PKcs) driver kronisk nyresygdomsprogression hos hanmus

Nyreskadeinitierer epitelial dedifferentiering og myofibroblast aktivering underprogression af kronisk nyresygdom. Heri, vifiog at ekspressionen af ​​DNA-PKcs er signifinænsomt øget inyrevæv af både kronisk nyresygdompatienter og hanmusinduceret af unilateral ureteral obstruktionogensidig iskæmi-reperfusionsskade. In vivo, knockout af DNA-PKcs eller behandling med dets specific-hæmmer NU7441 hæmmerudvikling af kronisk nyresygdomhos hanmus. In vitro, DNA-PKcs deficiency bevarer epitelcellernes fænotype og hæmmerfibroblastaktivering induceret af transformation af vækstfaktor-beta 1. Derudover viser vores resultater, at TAF7, som et muligt substrat for DNA-PKcs, øger mTORC1-aktivering ved at opregulere RAPTOR-ekspression, som efterfølgende fremmer metabolisk omprogrammering i beskadigede epitelceller og myofibroblaster. Samlet kan DNA-PKcs inhiberes for at korrigere metabolisk omprogrammering via TAF7/mTORC1-signalering ikronisk nyresygdomog tjene som et potentielt mål for behandlingkronisk nyresygdom. 

KLIK HER FOR AT LÆRE OM URTEFORMULERINGEN AF CISTANCHE FORKRONISK NYRESYGDOM

Kronisk nyresygdom(CKD) påvirker 10 % af voksne på verdensplan1. CKD udgør en enorm byrde for den globale folkesundhed, da den har stor sandsynlighed for at udvikle signyresygdom i slutstadiet(ESRD), som kræver dialyse eller nyretransplantation1,2. Renal interstitiel fibrose er en af ​​de vigtigste patologiske karakteristika ved CKD2-4. Mange af de patofysiologiske træk ved nyrefibrose deles af andre fibrotiske sygdomme, såsom levercirrhose og kardiomyopatier5. Der er ingen effektive behandlinger for CKD, hvilket understreger et presserende behov for en bedre forståelse af de patologiske mekanismerunderliggende CKD.

I beskadigede nyrer involverer interstitiel fibrose den unormale ekspression af profibrotiske faktorer, såsom transformerende vækstfaktor-beta 1 (TGF- 1), epitelial dedifferentiering og myofibroblastaktivering2. Som en nøglemediator af interstitiel fibrose aktiverer TGF- 1 ikke kun ekspressionen af ​​fibrotiske gener, herunder -glatmuskelaktin (-SMA), fibronectin (FN) og kollagener, men fremmer også Warburg-effekt-lignende metabolisk omprogrammering af nyreceller6,7. For nylig har nye beviser påvist forholdet mellem metabolisk dysregulering og interstitiel fibrose, hvilket afslører, at metabolisk omprogrammering forekommer i nyreceller (renale tubulære epitelceller8,9 og myofibroblaster10) under nyreskade og bidrager til udviklingen af ​​CKD. Metabolisk omprogrammering i nyreceller forårsager en drastisk reduktion i fedtsyreoxidation (FAO) og et metabolisk skift til glykolyse, hvilket bidrager til immuncelleinfiltration og interstitiel fibrose7,11,12. Desuden har kliniske data afsløret, at metabolisme og inflammationsveje er dysregulerede hos CKD-patienter7. Gendannelse af FAO eller hæmning af glykolyse gennem genetiske eller farmakologiske metoder dæmper fibrose i forskellige dyremodeller af nyrefibrose11,13-15.

I de molekylære mekanismer for metabolisk omprogrammering virker pattedyrmålet for rapamycin (mTOR), som er en cytoplasmatisk serin/threoninproteinkinase, til at modulere cellemetabolisme og opretholde metabolisk homeostase16,17. To distinkte funktionelle komplekser af mTOR er blevet defineret i henhold til dets bindingsproteiner. MTOR-kompleks 1 (mTORC1) interagerer med dets specifikke regulator RAP TOR og er følsomt over for rapamycin18,19. mTOR kompleks 2 (mTORC2) er reguleret af RICTOR20. Kronisk mTORC1-aktivering fremmer metabolisk omprogrammering under forskellige patologiske tilstande, herunder renal interstitiel fibrose9,21-23, men de mekanismer, der regulerer denne aktivering, især i interstitiel fibrose, forbliver stort set ukendte.

DNA-afhængig proteinkinase (DNA-PK), et trimerisk kompleks sammensat af en katalytisk underenhed (DNA-PKcs) og en Ku70/80 heterodimer, aktiveres af DNA-dobbeltstrengede brud (DSBs)24,25 eller ROS26. En velkendt funktion af DNA-PK er at mediere ikke-homolog endesammenføjning (NHEJ), som forbinder programmerede DSB'er skabt under V(D)J-rekombination og spiller en nøglerolle i rekombinationen af ​​lymfocytter25. Som et resultat standser mutationer i DNA-PKcs udviklingen af ​​T- og B-lymfocytter på grund af mangel på V(D)J-rekombination27,28. Væksthæmningen eller høj frekvens af T-cellelymfomudvikling forekom dog ikke hos DNA-PKcs-knock-out-mus28. Selvom det er en DNA DSB-sensor, har DNA-PKcs nogle usædvanlige egenskaber, såsom akkumulering i celler til et niveau langt over, hvad der sandsynligvis er nødvendigt for NHEJ29. Desuden er DNA-PKcs placeret både i kernen og cytoplasmaet30. I overensstemmelse med dets usædvanlige egenskaber indikerer nyere beviser, at DNA-PKcs har andre funktioner end NHEJ31. For eksempel fremmer DNA-PKcs-medieret phosphorylering af transkriptionsfaktoren USF-1 fedtsyresyntese induceret af insulin32, og DNA-PKcs fremmer metabolisk nedgang under aldring33. Forskning i ikke-NHEJ-funktioner af DNA-PK'er, såsom metabolisme og aldring, er netop skudt i gang, og en række spørgsmål forbliver ubesvarede31. Derudover, som en af ​​de phosphoinositide 3-kinase (PI3K)-relaterede kinaser, var DNA-PK blevet fundet at regulere mTOR-aktivering34.

I dette arbejde viser vores resultater, at DNA-PKcs medierer aktiveringen af ​​RAPTOR/mTORC1-signalering gennem phosphorylering af TATA-box-bindende protein-associeret faktor 7 (TAF7) i CKD. Hæmningen af ​​DNA-PKcs korrigerer metabolisk omprogrammering i beskadigede epitelceller og myofibroblaster ved CKD. DNA-PKcs kan tjene som et nyt potentielt mål til behandling af CKD.

Resultater

DNA-PKcs er øget i nyrerne hos CKD-patienter og hos mus med nyrefibrose

Aktiviteten af ​​DNA-PKcs blev analyseret ved immunhistokemisk farvning af S2056 autophosphorylering i DNA-PKcs (p-DNA-PKcs) i sundt og CKD humant nyrevæv. Ikke-tumordelene af nefrektomiprøver blev brugt som "sundt" nyrevæv, som blev indsamlet fra patienter med nyrecellekarcinom. Resultaterne viste, at p-DNA-PKcs næsten ikke kunne påvises i disse normale nyrevæv, men proteinniveauerne af p-DNA-PKcs var markant forøget i CKD humant nyrevæv (fig. 1a). For at bestemme relevansen af ​​DNA-PKcs aktivitet og nyrefibrose in vivo blev ekspression af fibronectin (FN), et afgørende gen relateret til nyrefibrose, analyseret ved immunhistokemisk farvning, og Sirius rød farvning blev også udført for at analysere graden af ​​interstitiel fibrose hos CKD-patienter (fig. 1a). Vores resultater afslørede en positiv sammenhæng mellem proteinniveauerne af p-DNA-PKcs og graden af ​​interstitiel fibrose (P=0.005, Fig. 1b, c). Derudover blev ekspressionsniveauer af DNA-PKcs også analyseret ved hjælp af tidligere offentliggjorte humane CKD-mikroarray-datasæt (Nephroseq). Vi fandt, at mRNA-niveauer af DNA-PKcs var signifikant øget med mere end 1.6-fold i nyrebiopsivæv fra 48 CKD-patienter sammenlignet med kontroller (Supplerende Fig. 1a), hvilket udviste en signifikant positiv korrelation med graden af nyrefibrose hos patienter (Supplerende Fig. 1b). Ydermere viste resultaterne af immunofluorescens-farvning af p-DNA-PKcs med Lotus tetragonolobus lectin (LTL) (en renal tubuli-markør) eller -SMA (en markør for myofibroblaster), at DNA-PKcs var opreguleret i både tubulære epitelceller og myofibroblaster af nyrevævet fra CKD-patienter (fig. 1d, e). Analyse af en tilgængelig online nyre-enkeltcellet RNA-sekventeringsdatabase (http://humphreyslab.com/SingleCell/) 35 afslørede, at DNA-PKcs-mRNA var bredt udtrykt i nyreceller og opreguleret i humane diabetiske nyrer sammenlignet med kontrolnyrer (Supplerende Fig. 1c).

For yderligere at identificere sammenhængen mellem DNA-PKcs-aktivitet og udvikling af nyrefibrose undersøgte vi derefter ekspressionen og aktiviteten af ​​DNA-PKcs i to musemodeller af nyrefibrose, unilateral ureteral obstruktion (UUO) og unilateral iskæmi-reperfusion (UIR). Immunhistokemisk farvning af p-DNA-PKcs indikerede, at p-DNA-PKcs var markant induceret på dag 3 sammenlignet med sham-kontroller i UUO-modellen, og proteinniveauerne af p-DNA-PKcs blev yderligere øget, efterhånden som nyrefibrose udviklede sig fra dag 3 til dag 14 (fig. 1f). Western blot og qRT-PCR-resultater viste, at de totale protein- og mRNA-niveauer af DNA-PKcs også var signifikant opreguleret i nyrevæv fra UUO-mus sammenlignet med falske kontroller (fig. 1g og supplerende fig. 1e). Lignende resultater blev observeret i UIR-mus (fig. 1h og supplerende fig. ld, f). Den potentielle forbindelse mellem DNA-PKcs og CKD fik os til yderligere at undersøge rollen og mekanistiske implikationer af DNA PKcs i CKD.

DNA-PKcs-medieret progression af CKD i mus

Dernæst skabte vi DNA-PKcs knockout-mus, hvor det DNA-PKcs-kodede gen Prkdc blev slået ud ved hjælp af CRISPR/cas9 som beskrevet i metoderne (Supplerende Fig. 2a). DNA-PKcs heterozygote (+/−) og homozygote (−/−) knockout og vildtype (WT) mus blev skelnet ved genotypebestemmelse, som vist i Supplerende Fig. 2a. Prkdc-mRNA (Supplerende Fig. 2c) og DNA-PKcs-proteinniveauer (Fig. 2e) blev ikke påvist i nyrevæv fra DNA-PKcs-/- mus, hvilket indikerer vellykket knockout af DNA-PKcs i mus. For at evaluere effekten af ​​DNA-PKcs-knockout-strategien på nyreskade og fibrose blev voksne (6-8 uger gamle) DNA-PKcs-/- og WT kontrolhanmus udsat for UUO og aflivet 7 dage efter operationen. PAS-farvning afslørede, at graden af ​​tubulær atrofi og dilatation induceret af UUO blev markant forbedret i DNA-PKcs-/- mus sammenlignet med WT-kontroller (fig. 2a). Nyrefibrose blev også meget forbedret i DNA-PKcs-/- mus sammenlignet med WT-mus, som observeret og kvantificeret ved Masson-farvning (fig. 2b). Billeder af immunmærkning for interstitiel kollagen I-aflejring og -SMA viste, at begge klassiske profibrotiske markører var signifikant reduceret i UUO-nyrerne af DNA-PKcs-/- mus sammenlignet med WT-kontroller (fig. 2c, d). Proteinniveauer af profibrotiske markører, herunder FN og -SMA, blev også signifikant reduceret i UUO-nyrerne af DNA-PKcs-/- mus, som analyseret ved Western blot (fig. 2e). QRT-PCR-analyse viste, at udelukkelse af DNA-PKcs i mus markant reducerede ekspressionsniveauer af afgørende nyrefibrosegener, herunder Col1a1, Col3a1, Fn1 og Acta2, som var stærkt opreguleret i UUO nyrer. I overensstemmelse med reduceret fibrose reducerede DNA PKcs-knockout også mRNA-niveauer af nyreskademarkøren KIM-1 induceret af UUO (Supplerende Fig. 2c). Desuden er inflammation et væsentligt kendetegn for nyrefibrose og spiller en vigtig rolle i patogenesen af ​​nyrefibrose. Således analyserede vi inflammationsrelaterede markører, herunder cytokinerne Il1, Il6, Tnf og Mcp1, ved qRT-PCR. I UUO-modellen fandt vi, at opregulering af inflammatoriske cytokiner induceret af UUO blev markant reduceret af DNA-PKcs-knockout (Supplerende Fig. 2c). Da både kliniske undersøgelser og dyremodeller udviser en stærk korrelation mellem makrofager og omfanget af nyrefibrose, blev infiltrerede makrofager i UUOnyrevæv vurderet ved immunhistokemisk farvning for makrofagmarkøren F4/80. Billederne afslørede mange infiltrerede makrofager i obstruerede nyrer af WT-mus 7 dage efter UUO, som blev markant reduceret ved DNA-PKcs-knockout (fig. 2f). Interessant, DNA-PKcs

For yderligere at vurdere virkningen af ​​renal tubulær DNA-PKcs på renal fibrose konstruerede vi proksimal renal tubulær epitelcelle med specifik DNA-PKcs knockout in vivo ved at bruge CRISPR/cas9 knockin mus (Supplerende Fig. 2e, f). Efter subkapsulær injektion af adeno-associeret virus (AAV) indeholdende guide RNA (gRNA) for DNA-PKcs i tre uger, blev de proksimale renale tubulære cellespecifikke DNA-PKcs knockout-mus udsat for UUO og aflivet 7 dage efter operationen. Immunfluorescensfarvningen af ​​DNA-PKcs viste et fravær af DNA-PKcs i renale tubulære celler (fig. 2h), men det var stadig udtryk i -SMA positive myofibroblaster (Supplerende fig. 2g) fra cas9 mus injiceret med AAV-gRNA sammenlignet med dem i cas9 mus injiceret med en AAV uden gRNA for DNA PKcs. Western blot-analyse viste, at proteinniveauerne af DNA-PKcs og profibrotiske markører, herunder FN og -SMA, også var signifikant reduceret i UUO-nyrerne hos cas9-mus injiceret med AAV-sgRNA sammenlignet med dem i kontrolgruppen (fig. 2g). . I lighed med UUO-modellen blev DNA-PKcs knockout-mus også beskyttet mod UIR-induceret CKD (Supplerende Fig. 2h-m). Sammen tyder disse resultater på, at deletionen af ​​DNA-PKcs dæmper progressionen af ​​CKD i mus.

For at bestemme, om overekspression af DNA-PKcs i nyren er tilstrækkelig til at drive nyrefibrose, blev humane DNA-PKcs overekspressionsplasmider (Addgene: 83317) leveret til musenyrer gennem en halevene højtryks-injektionsmetode som beskrevet i flere tidligere undersøgelser36. Seksogtredive timer efter DNA-PKcs-plasmidinjektion blev musene administreret UUO-kirurgi i 7 dage. Samlet viser vores resultater, at ektopisk ekspression af humant DNA-PKcs er tilstrækkeligt til at drive progressionen af ​​nyrefibrose in vivo (Supplerende Fig. 3).

Inhibering af DNA-PKcs-aktivitet dæmper udviklingen af ​​CKD hos mus

Disse resultater fik os til at overveje muligheden for, at inhibitorer af DNA PKcs kunne bruges til at beskytte mod nyrefibrose. For at teste vores hypotese blev voksne (6-8 uger gamle) WT-hanmus behandlet dagligt med den meget specifikke DNA-PKcs-hæmmer NU7441 begyndende 1 dag efter UUO-kirurgi. NU7441--behandlede mus og kontrolmus blev aflivet 7 dage efter UUO-kirurgi, og DNA-PKcs-aktivitet blev analyseret ved immunhistokemisk farvning, og resultaterne viste, at NU7441-behandling markant hæmmede aktiveringen af ​​DNA-PKcs i UUO-nyrevæv ( Fig. 3a). Graden af ​​tubulær atrofi og dilatation induceret af UUO blev væsentligt forbedret efter behandling med NU7441 sammenlignet med vehikelkontrollen, som vist ved PAS-farvning (fig. 3b). Histopatologiske analyser af Masson-farvning afslørede en ca. 50 % reduktion i nyre-interstitiel fibrose i de obstruerede (UUO) nyrer fra NU7441--behandlede mus sammenlignet med vehikelkontrol-UUO-nyrer (fig. 3c). Billeder af immunfluorescensfarvning viste, at aflejringen af ​​interstitielt kollagen I induceret af UUO blev markant reduceret ved NU7441-behandling (fig. 3e). Proteinniveauerne af profibrotiske markører, herunder FN og -SMA, analyseret ved Western blot blev også signifikant reduceret i UUO-nyrerne hos NU7441--behandlede mus sammenlignet med vehikelkontroller (fig. 3f). QRT-PCR-analyse viste, at NU7441-behandling markant reducerede ekspressionsniveauer af afgørende nyrefibrosegener, herunder Col1a1, Col3a1, Fn1 og Acta2, i nyrevæv fra UUO-mus sammenlignet med vehikelkontroller (Supplerende Fig. 4a). Derudover var infiltrationen af ​​makrofager i nyrevæv fra UUO-mus stærkt reduceret efter behandling med NU7441 sammenlignet med vehikelkontroller (fig. 3d). NU7441 reducerede også ekspressionsniveauer af inflammationsrelaterede markører, herunder cytokinerne Il1, Il6, Tnf og Mcp1, i nyrevæv fra UUO-mus, som analyseret ved qRT-PCR (Supplerende Fig. 4a). Desuden blev DNA PKcs knockout-mus også behandlet med NU7441 for at undersøge det mulige off-target af NU7441. Vores resultater viste, at NU7441 ikke havde nogen åbenlys anti-fibrotisk effekt i DNA-PKcs knockout-mus (fig. 3g, h), hvilket tyder på en specifik virkning af NU7441 på DNA-PKcs i denne eksperimentelle indstilling.

Den beskyttende virkning af NU7441 mod UUO-induceret nyreskade og nyrefibrose blev udvidet til UIR-induceret CKD. Som forventet beskyttede NU7441-behandling også mod UIR-induceret nyreskade og fibrose sammenlignet med vehikelkontroller (Supplerende Fig. 4b-h). Tilsammen indikerer disse resultater, at inhibering af DNA-PKcs-aktivitet med NU7441 dæmper CKD-progression hos mus.

Fig. 3|Inhibering af DNA-PKcs-aktivitet dæmper udviklingen af ​​CKD i UUO-mus. a Immunhistokemisk farvning af p-DNA-PKcs i nyrer fra mus behandlet med NU7441 (40 mg/kg) eller vehikel udsat for UUO (dag 7), skala søjler: 20 μm. Søjler repræsenterer kvantificeringsresultater (gennemsnit ± SD, n=6 mus i hver gruppe). b PAS-farvning af nyrer fra mus behandlet med NU7441 eller vehikel udsat for UUO, skala søjler: 50 μm. Søjler repræsenterer kvantificeringsresultater (gennemsnit ± SD, n=6 mus i hver gruppe). c Masson-farvning af nyrer fra mus behandlet med NU7441 eller vehikel udsat for UUO, skala søjler: 50 μm. Søjler repræsenterer kvantificeringsresultater (gennemsnit ± SD, n=6 mus i hver gruppe). d Immunhistokemisk farvning af F4/80 i nyrer fra mus behandlet med NU7441 eller vehikel udsat for UUO, skala søjler: 20 μm. Søjler repræsenterer kvantificeringsresultater (gennemsnit ± SD, n=6 mus i hver gruppe). e Immunfluorescensfarvning af COL1A1 i nyrer fra mus behandlet med NU7441 eller vehikel udsat for UUO, skala søjler: 20 μm. Søjler repræsenterer kvantificeringsresultater (gennemsnit ± SD, n=6 mus i hver gruppe). f Proteinniveauer af FN og -SMA i nyrer fra mus behandlet med NU7441 eller vehikel udsat for UUO. Søjler repræsenterer kvantificeringsresultater (gennemsnit ± SD, n=6 mus i hver gruppe). g Proteinniveauer af FN og -SMA i nyrer fra DNA-PKcs-/- eller WT-mus behandlet med NU7441 eller vehikel udsat for UUO. Søjler repræsenterer kvantificeringsresultater (gennemsnit ± SD, n=6 mus i hver gruppe). h Sirius rød farvning af nyrer af DNA-PKcs-/- eller WT mus behandlet med NU7441 eller vehikel udsat for UUO. Søjler repræsenterer kvantificeringsresultater (gennemsnit ± SD, n=6 mus i hver gruppe). To-halet uparret t-test blev brugt til at bestemme p-værdierne for a, c, e. Envejs ANOVA efterfulgt af Tukeys multiple sammenligningstest blev brugt til at bestemme p-værdierne for b, d, h. To-vejs ANOVA'er efterfulgt af Šídáks multiple sammenligningstest blev brugt til at bestemme p-værdierne for f, g. Kildedata leveres som en kildedatafil.

Hæmning af DNA-PKcs bevarer den tubulære epitelcelle fænotype og regulerer interstitiel fibroblast aktivering in vitro

Epitelskade og myofibroblastaktivering er centrale begivenheder i patogenesen af ​​CKD2. Immunfarvning afslørede, at p-DNAPKcs tydeligvis blev induceret af TGF 1-stimulering i både HK-2-celler (fig. 4a) og primære tubulære epitelceller (supplerende fig. 5a). Western blot-resultater viste, at phosphorylerings- og totale proteinniveauer af DNA-PKcs også var signifikant opreguleret i TGF 1- eller H2O2-behandlede HK-2-celler (fig. 4i og supplerende fig. 5b). Derudover blev DNA-PKcs knockout HK-2-celler genereret ved hjælp af CRISPR-Cas9, og WT- og DNA-PKcs-/− primære tubulære epitelceller fra mus blev dyrket. Den vellykkede konstruktion af DNA-PKcs knockout HK-2-celler blev bekræftet ved Western blotting (Supplerende Fig. 5c). Vores resultater viste, at knockout af DNA-PKcs eller inhibering af DNA-PKcs af NU7441 forbedrede dedifferentieringen af ​​nyreepitelceller, som vist ved lavere niveauer af FN og Col1A1 produktion efter eksponering for TGF 1 i DNA-PKcs knockout eller NU{{27 }}behandlede celler (fig. 4b–d, k, l). Imidlertid øgede KU80-knockout FN-produktion induceret af TGF 1 i tubulære epitelceller (fig. 4m). Ligesom UUO-modellen forværrede DNA-PKcs-knockout ikke DNA-brud i HK-2-celler induceret af H2O2 (Supplerende Fig. 5d). KU70/80 genkender først DNA-brudte ender ved DSB og rekrutterer derefter DNA-PKcs til at danne DNA-PK, som er nødvendigt i reparationen af ​​DSB via NHEJ37. Disse resultater antydede, at DNA-PKcs forbedrede den profibrotiske virkning af nyreepitelceller i CKD uafhængigt af dets DSB-reparationsfunktion.

For at undersøge om DNA-PKcs er involveret i aktiveringen og proliferationen af ​​interstitielle fibroblaster blev dyrket. Western blot-resultater viste, at de phosphorylerede og totale proteinniveauer af DNA-PKcs også var signifikant opreguleret i TGF 1-behandlede NRK-49F-celler (fig. 4j). Immunfarvning afslørede, at aktiviteten af ​​DNA-PKcs blev markant induceret af TGF 1-behandling i NRK-49F-celler (fig. 4e), men blev markant hæmmet af NU7441-behandling. Behandling af NRK-49F-celler med TGF 1-induceret fibroblastaktivering og myofibroblastdifferentiering med opregulering af COL1, -SMA og FN, hvorimod forbehandling med NU7441 i høj grad gjorde den profibrotiske fænotype sløvede (fig. 4f, g, n). Desuden hæmmede NU7441-behandling signifikant NRK-49F-celleproliferation induceret af TGF 1 sammenlignet med vehikelkontroller, som angivet ved EdU-farvning (fig. 4h). Tilsammen indikerer disse data, at inhibering af DNA-PKcs bevarer den tubulære epitelcelle fænotype og regulerer interstitiel fibroblastaktivering induceret af TGF 1 in vitro.

Desuden undersøgte vi også mekanismen af ​​TGF 1-induceret DNA-PKcs-ekspression. For det første fandt vi flere mulige bindingssteder for SMAD2 i promotorregionen af ​​DNA-PKcs gennem JASPAR transkriptionsfaktor bindingsprofiler analyse 38. For det andet viste luciferase assay resultater, at overekspression af SMAD2 øgede transkriptionel aktivering af DNA-PKcs (Supplerende Fig. 5e). . Derudover blev effekten af ​​DNA-PKcs på aktiveringen af ​​SMAD-signalering også analyseret. Resultaterne viste, at DNA-PKcs-knockout hæmmede aktiveringen af ​​SMAD2/SMAD3 i UUO-musemodel (Supplerende Fig. 5f). Disse resultater antydede SMAD2/SMAD3 opreguleret DNA PKcs-ekspression, mens DNA-PKcs aktiverede SMAD2/SMAD3 (Supplerende Fig. 5g), der danner en positiv loop.

Supportive Service Of Wecistanche - Den største cistanche-eksportør i Kina:

E-mail:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tlf:+86 15292862950

Shop for flere specifikationer detaljer:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

KLIK HER FOR AT FÅ NATURLIG ORGANISK CISTANCHE EKSTRAKT MED 25% ECHINACOSID OG 9% ACTEOSIDE TIL NYRE