Brug af The Tissue Common Rejection Module-score ved nyretransplantation som et objektivt mål for allograft-inflammation

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

Arya Zarinsefat 1*, Jose M. Arreola Guerra2, Tara Sigdel 1, Izabella Damm1, Reuben Sarwal 1, Chitranon Chan-on1, Gyula Szabo3, Jorge L. Aguilar-Frasco4, Xicohtencatl Ixtlapale-Carmona4,

Carlos Salinas-Ramos 4, Leonardo Ramirez-Martinez 4, Claudio Ramirez 4, Mario Vilatoba4, Luis E. Morales Buenrostro4, Josefifina M. Alberu5 og Minnie M. Sarwal 1

Department of Surgery, University of California, San Francisco, CA, USA,

2 Institut for Intern Medicin, Centenario Hospital Miguel Hidalgo, Aguascalientes, Mexico,

3 Department of Pathology, University of California, San Francisco, CA, USA,

4 Instituto Nacional de Ciencias Medicas y Nutricio´n Salvador Zubira´n, Mexico City, Mexico,

5 Department of Medicine, Tecnologico de Monterrey, Escuela de Medicina y Ciencias de la Salud, Mexico City, Mexico

Langvarig nyretransplantation(KT)-allograft-resultater er ikke forbedret som forventet på trods af en bedre forståelse af afstødning og forbedret immunsuppression. Tidligere arbejde havde valideret en beregnet afstødningsscore, vævs almindelige afstødningsmodul (tCRM), målt ved amplifikationsbaseret vurdering af 11 gener fra formalinfikserede paraffinindlejrede (FFPE) biopsiprøver, som giver mulighed for kvantitativ, objektiv vurdering af immunforsvaret skade. Vi anvendte tCRM i et prospektivt forsøg med 124 KT-modtagere, og kontrasterede vurdering af tCRM og histologi fra 2 uafhængige patologer på protokol og forårsager biopsier efter transplantation. Fire 10- mm barberinger fra FFPE-biopsiprøver blev brugt til RNA-ekstraktion og amplifikation ved qPCR af de 11 tCRM-gener, hvorfra tCRM-scoren blev beregnet. Biopsidiagnoser af enten akut afstødning (AR) eller borderline afstødning (BL) blev anset for at have inflammation til stede, mens stabile biopsier ikke havde nogen inflammation. Ud af de 77 biopsier, der blev læst af begge patologer, var der i alt 40 uoverensstemmelser i diagnosen. Median tCRM-score for AR, BL og stabile diagnoser var henholdsvis 4,87, 1,85 og 1,27 med en overordnet signifikant forskel blandt alle histologiske grupper (Kruskal-Wallis, p < 0.0{="" {34}}01).="" der="" var="" signifikante="" forskelle="" i="" tcrm-score="" mellem="" patologer,="" der="" både="" fandt="" inflammation="" vs.="" uenighed="" (p="0.003)," og="" begge="" fandt="" inflammation="" vs.="" begge="" fandt="" ingen="" inflammation="" (p="">< 0,001),="" sammen="" med="" den="" overordnede="" signifikans="" mellem="" alle="" scores="" (="" kruskal-wallis,="" p="">< 0,001).="" en="" logistisk="" regressionsmodel,="" der="" forudsagde="" graft-inflammation="" ved="" hjælp="" af="" forskellige="" kliniske="" prædiktorvariabler="" og="" tcrm,="" afslørede="" tcrm-scoren="" som="" den="" eneste="" signifikante="" prædiktor="" for="" graft-inflammation="" (or:="" 1,90,="" 95="" procent="" ci:="" 1,40-2,68,="" p="">< 0,0001).="" nøjagtig,="" kvantitativ="" og="" objektiv="" vurdering="" af="" afvisning="" af="" den="" kliniske="" prøve="" er="" kritisk.="" i="" betragtning="" af="" de="" uoverensstemmende="" diagnoser="" mellem="" patologer="" på="" de="" samme="" prøver,="" kunne="" individer="" bruge="" tcrm-scoren="" som="" en="" tiebreaker="" i="" uklare="" situationer.="" vi="" foreslår,="" at="" den="" kvantitative="" tcrm-score="" kan="" give="" upartisk="" kvantificering="" af="" transplantatinflammation,="" og="" dens="" hurtige="" evaluering="" ved="" pcr="" på="" ffpe-barberingen="" kan="" blive="" et="" kritisk="" supplement="" til="" at="" hjælpe="" med="" at="" drive="" klinisk="" beslutningstagning="" og="">

Nøgleord:nyretransplantation, akut afstødning, biomarkører, transkriptomik, formalinfikseret paraffinindlejret (FFPE), transplantatbetændelse

Cistanche tubulosa forebygger nyresygdom, klik her for at få prøven

INTRODUKTION

Nyretransplantation(KT) er fortsat den foretrukne behandling for patienter med nyresygdom i slutstadiet, med reducerede dødsrater sammenlignet med ventelistepatienter og forbedret overlevelse blandt forskellige demografiske grupper (1-3). Trods markante forbedringer på et årnyreallotransplantatoverlevelse (4), forbliver frekvensen af ​​kronisk grafttab efter det første år efter transplantationen betydelig. Dette er blevet observeret på trods af en bedre forståelse af allotransplantatafstødning sammen med fremkomsten af ​​forbedret immunsuppression. Nuværende klassifikationsmetoder for histologisk afstødning lider af prøvetagningsfejl og en manglende evne til nøjagtigt at kvantificere den inflammatoriske byrde i allotransplantatet, en vigtig forudsigelse for langsigtet graftfunktion og overlevelse (5-9). Det er vigtigt, at tidligere undersøgelser har vist, at patologkorrelation af Banff-graderet renal allotransplantatpatologi har væsentlige uoverensstemmelser mellem biopsifortolkninger (10, 11).

Tidligere arbejde i vores laboratorium med at analysere mikroarray-data fra hele genomet fra 1.030nyre, hjerte-, lunge- og leverallotransplantatbiopsier identificerede enfælles immune responsmodul (CRM) af 11 gener, der definerer akut afstødning (AR) på tværs af forskellige allotransplantater (12-14) og blev efterfølgende valideret pånyreallotransplantatbiopsier (15, 16). Selvom disse data demonstrerede den potentielle nytte af at bruge et objektivt mål, såsom CRM-scoren, til at hjælpe med biopsidiagnose, var disse retrospektive analyser på tidligere banket væv. Derudover blev der ikke foretaget sammenligninger mellem flere blindede patologiske aflæsninger af den samme biopsi eller CRM-scorens potentielle evne til at blive brugt som en objektiv tiebreaker eller et hjælpedatapunkt for at hjælpe med at nå frem til en mere robust diagnose.

I denne analyse så vi på serielnyrebiopsier, der blev indhentet som led i et klinisk forsøg i KT. Vi anvendte vores protokol, der måler genekspression af de 11 CRM-gener fra RNA isoleret fra fire 10-mikron barberinger af en formalinfikseret paraffin-indlejret (FFPE) blok med histologisk bekræftede fænotyper af AR, borderline rejection (BL), og stabile diagnoser. Vi henviser til denne score som vævs-CRM (tCRM) givet anvendelsen af ​​CRM-scoren på biopsivæv (15, 16). Vi sammenlignede derefter diagnoser fra 2 blindede patologer og sammenlignede dem med tCRM-scoren for hver biopsi. Vi antog, at tCRM-scoren kunne bruges som et datapunkt til at hjælpe med biopsidiagnose og muligvis som en objektiv tiebreaker, når der er uenighed blandt patologer.

cistanche fordel: anti-inflammatorisk

METODER

Patienttilmelding og studiedesign

Patienter og prøver blev indsamlet som en del af det kliniske forsøg med TITRATE (Testing Immunosuppression Threshold in Renal Allografts To Extend eGFR). Dets metodologi kan konsulteres på ClinicalTrials.gov-portalen (Identifier: NCT02581436). Kort fortalt er dette et prospektivt, blindet, kontrolleret klinisk forsøg med 124 KT-modtagere, som blev tildelt to typer manøvrer for at evaluere effektiviteten og sikkerheden med hensyn til rettidig påvisning af AR, glomerulær filtrationshastighed (GFR) og fibroseindeks. i protokolbiopsier 12 måneder efter KT. Monitorering af nyrefunktionen var baseret på GFR og graftbiopsier udført efter protokol 3 og 12 måneder efter KT og for årsagen. Induktionsimmunsuppression (IS) blev tildelt baseret på immunologisk risiko med Basiliximab (lavrisiko), anti-thymocytglobulin (højrisiko) eller uden induktionsterapi hos patienter, der delte to haplotyper. Vedligeholdelses-IS var baseret på tacrolimus, mycophenolat og prednison.

Den aktuelle undersøgelse var en supplerende analyse for tCRM-generne (15) i alle tilgængelige KT-biopsier. Til vores undersøgelse, efter at have ekskluderet dag nul biopsier, var i alt 136 biopsier tilgængelige med matchet biopsi histologi, som alle blev fortolket af en patolog ved National Institute of Medical Sciences i Mexico. Af disse 136 biopsier blev 77 også sendt til UCSF for at få blindede læsninger for yderligere vurdering af patologkorrelation. Biopsier blev fortolket ud fra de seneste Banff-kriterier på tidspunktet for undersøgelsen (17). Enhver form for graft-AR (akut cellulær eller antistof-medieret) blev kombineret i én AR-kategori. For de UCSF-aflæste biopsier var mere granulære histopatologiske diagnosedata tilgængelige, inklusive antistofmedieret afstødning (ABMR) type og T-cellemedieret afstødning (TCMR).

Total RNA-ekstraktion

Vi fulgte tidligere offentliggjorte protokol for ekstraktion af RNA fra FFPE-væv (18). Baseret på vores tidligere erfaring brugte vi 4 × 10 mm tykke snit til at ekstrahere totalt RNA fra FFPE-prøver med PureLink FFPE Total RNA Isolation it (Thermo Fisher Scientific, Foster City, CA). RNA-datakvaliteten blev vurderet ved 260/280 absorptionssignalforholdet og RIN-nummeret.

cDNA-syntese og genekspression kvantificering ved hjælp af qPCR

I alt 50 ng RNA blev omvendt transskriberet til komplementært DNA (cDNA) ved hjælp af SuperScript VILO (Invitrogen, Thermo Fisher Scientific, Foster City, CA) og derefter amplificeret i et målspecifikt amplifikationstrin for alle 11 gener ved hjælp af TaqMan PreAmp Master Mix og TaqMan primere og prober (Thermo Fisher Scientific, Foster City, CA) til i alt 18 amplifikationscyklusser. qPCR-reaktioner blev udført i Fluidigm BioMark FD-systemet (Fluidigm, South San Francisco, CA) under anvendelse af et 18S-genhusholdningsgen og Human XpressRef Universal Total RNA (Qiagen, Valencia, CA) som reference-RNA i 40 cyklusser. De resulterende chipdata blev oprindeligt analyseret til kvalitetskontrol ved hjælp af BioMark Analysis Software Version 2.0 (Fluidigm, South San Francisco, CA), og Ct-værdier blev eksporteret til et regneark. Normalisering af dataene blev udført i to trin. Ct-værdier af individuelle gener blev normaliseret mod Ct-værdier på 18S for hvert gen for at få dCt-værdier. dCt-værdier for hver prøve blev normaliseret mod dCt-værdier af referenceprøven for at få ddCt-værdier, som efterfølgende blev brugt til at beregne fold change (RQ) værdier for hvert gen i hver prøve. tCRM-scoren blev beregnet ved at tage det geometriske gennemsnit af de 11 CRM-gener for hver prøve, som tidligere beskrevet (12).

Statistisk analyse

Alle data blev importeret til R version 3.6.2 (R Foundation, Wien, Østrig) til efterfølgende analyser. Patientdemografi (tabel 1) er vist baseret på tCRM-score større end eller mindre end 2,2, vores tidligere bestemte cutoff med optimal AUROC til forudsigelse af AR (15). Statistisk test blev udført med Students t-test for kontinuerte variable og chi-kvadrattest for kategoriske variable. Boble- og søjleplot af tCRM-score for hver patologisk diagnosegruppe blev lavet ved hjælp af ggplot2-pakken. Signifikante forskelle mellem alle patologiske grupper og parvise forskelle mellem hver gruppe blev bestemt ved Kruskal-Wallis-testen. Uovervåget hierarkisk klyngedannelse under anvendelse af de forskellige patologiske grupper og tCRM-gener blev udført, med efterfølgende heatmaps lavet ved hjælp af heatmap-pakken. Vi anså tCRM-score på mere end 2,2 for at have en molekylær diagnose af afstødning. Vi definerede en biopsi som værende positiv for inflammation, hvis den patologiske diagnose enten var AR eller BL og negativ for inflammation, hvis diagnosen var stabil. Vi lavede derefter en overensstemmelsesvariabel mellem patologer, hvor begge oplyste, at der var betændelse til stede, begge sagde, at der ikke var nogen inflammation, eller de var uenige om der var betændelse til stede. Søjleplot og heatmaps for tCRM-scorerne blandt overensstemmelsesvariablen blev derefter oprettet som beskrevet ovenfor.

Vi beregnede en logistisk regressionsmodel for at forudsige det binære resultat af inflammation på biopsi. Vi indtaster modtagerens alder, body mass index (BMI), forsinket graftfunktion (DGF), køn, induktionsregime, levende donorstatus, mandlig donor til kvindelig modtager, tidligere KT, pre-KT dialyse og tCRM-score som prædiktorvariabler i modellen.

Vi opnåede hver patients delta-GFR, beregnet som ændringen i deres biopsi-GFR-tidspunkt fra deres endelige GFR to år efter KT. Vi brugte Pearson-korrelationskoefficienten til at korrelere delta GFR til patientens tCRM-score, der blev opnået fra biopsien. Dette blev gentaget efter at have ekskluderet tCRM-score mindre end 2. Vi brugte de højeste donorspecifikke antistof-niveauer (DSA), som blev målt ved hjælp af andre cytometri for hver patient, repræsenteret som gennemsnitlig FL-fluorescensintensitet (MFI), til at udføre korrelation til tCRM-score og beregne den tilhørende Pearson korrelationskoefficient. Denne korrelation blev også præsenteret i scatter plot-format. Til analyse af serielle scores plottede vi patienter med serielle tCRM-scores efter post-transplantationsdage, med fokus på de fire patienter, der havde en original diagnose af AR, blev behandlet og blev derefter fulgt med en efterfølgende biopsi. To yderligere patienter, der havde forhøjede tCRM-score, som blev læst som havende en stabil diagnose, men derefter udviklede en ny diagnose af AR på deres opfølgende biopsier, blev også plottet. Undersøgelsesdesign og efterfølgende analyse er yderligere sammenfattet i en billedlig form (figur 1).

RESULTATER

Nyre allograft biopsi fund fra to uafhængige, blindede patologer

Patientdemografi og kliniske variabler af interesse viste ingen større forskelle mellem patienter, der havde tCRM-score større end eller mindre end 2,2, bortset fra højere donoralder hos patienter med forhøjede tCRM-score på post-transplantationsbiopsier (tabel 1). I alt 77 biopsier blev læst af begge centre, hvor patolog 1 (Mexico) diagnosticerede 16 AR, 21 BL og 40 stabile biopsier, mens patolog 2 (UCSF) diagnosticerede 10 AR, 39 BL og 28 stabile biopsier (tabel 2) . Der var i alt 40 mismatchede diagnoser mellem patologerne, hvor hovedparten af ​​disse mismatch kom fra forskelle i BL-kategorien.

Vævs fælles afvisningsmodul som en tiebreaker skelner mellem patologiske diagnoser

Vi så derefter på tCRM-scorens evne til at skelne mellem patologiske diagnoser for en enkelt patolog (ved at bruge biopsier læst på UCSF, da vi havde de mest detaljerede histopatologiske data tilgængelige). Når vi så på tCRM-scorerne ved histologisk diagnose, så vi en klar adskillelse med højere tCRM-scorer hos patienter med AR sammenlignet med BL/stabil, og med en højere andel af score > 2,2 hos AR-patienter (figur 2A). Median tCRM-score og interkvartilintervaller (IQR) for AR, BL og stabile diagnoser var 4,87 (IQR: 2,44-6,99), 1,85 (IQR: 1,21-2,48) og 1,27 (IQR: 0.96- 2.14). Derudover var der en overordnet signifikant forskel blandt alle histologiske grupper (p < 0.001),="" sammen="" med="" signifikante="" forskelle="" mellem="" ar="" vs.="" bl="" og="" ar="" vs.="" stabile="" parvise="" sammenligninger="" (figur="" 2b).="" dette="" fremhæver="" sammenhængen="" mellem="" tcrm-scoringer="" og="" banff-graderet="">

Når vi udfører uovervåget hierarkisk klyngedannelse af tCRM-generne, ser vi relativt nøjagtig klyngedannelse ved den patologiske diagnose (figur 2C). Når man undersøger hver biopsi nøje, selv hvor clustering ved diagnose viser heterogenitet i de klyngede grupper, har den tilsvarende tCRM-score (vist som en farvegradient) tendens til at korrelere med diagnosen. Vi ser højere score med diagnoser, der afspejler højere niveauer af inflammation, hvilket indikerer tCRMs evne til at skelne og objektivt kvantificere inflammation i allotransplantatet uden bias. Da vi brugte vores tCRM cutoff på 2,2 (molekylær diagnose af inflammation), ser vi stærk klyngedannelse ved molekylær diagnose. Uanset hvad klynger størstedelen af ​​AR og BL sammen med høj genekspression og høj tCRM-score, med det modsatte for de fleste histologisk graderede stabile biopsier.

Vævs fælles afstødningsmodul skelner mellem specifikke typer graftafstødning

Vi så derefter på tCRM-scorens evne til at skelne mellem forskellige typer afvisning: C4d-positiv (n=9) og negativ ABMR (n=4), TCMR (n=3) , BL (n=21) og stabile (n=40) biopsier. Median tCRM-score og IQR for C4d-positiv ABMR, C4d-negativ ABMR, TCMR, BL og stabile diagnoser var 4,22 (IQR: 3,80-5,98), 3,47 (IQR: 1,71-6,51), 2.{ {23}} (IQR: 2,58–3.05), henholdsvis 1,91 (IQR: 1,32–2,88) og 1,37 (IQR: 0,99–2.00). Derudover var der en overordnet signifikant forskel blandt alle histologiske grupper (p < 0,001),="" sammen="" med="" signifikante="" forskelle="" mellem="" parvise="" sammenligninger,="" der="" kiggede="" på="" c4d-positiv="" abmr="" vs.="" tcmr,="" c4d-positiv="" abmr="" vs.="" bl,="" c4d-positiv="" abmr="" vs.="" tcmr="" vs.="" stabile="" og="" bl="" vs.="" stabile="" grupper="" (figur="" 3a).="" dette="" fremhæver="" endnu="" en="" gang="" korrelationen="" mellem="" tcrm-scorer="" og="" specifik="" banff-graderet="">

Når vi udfører uovervåget hierarkisk klyngedannelse af tCRM-generne, ser vi lignende klyngemønstre baseret på transplantatinflammation som tidligere beskrevet (figur 3B). Med de mere specifikke diagnostiske kategorier af C4d-positive og negative ABMR og TCMR ser vi den mest bemærkelsesværdige homogene klyngedannelse blandt ABMR-grupper. Som før, når man undersøger hver biopsi nøje, selv hvor clustering ved diagnose viser heterogenitet i de klyngede grupper, har den tilsvarende tCRM-score (vist som en farvegradient) tendens til at korrelere med diagnosen. Vi ser højere score med diagnoser, der afspejler højere niveauer af inflammation, hvilket indikerer tCRMs evne til at skelne og objektivt kvantificere inflammation i allotransplantatet uden bias. I sidste ende indeholdt den første gren af ​​vores uovervågede clustering størstedelen af ​​prøver, der havde en hvilken som helst grad af transplantatbetændelse, specifikt alle ABMR-, TCMR- eller BL-tilfælde (figur 3B).

Vævs fælles afvisningsmodul diskriminerer efter patolog aftale/uenighed

Vi så derefter på tCRM-scorerne for enighed og uenighed blandt patologer, som blev defineret som tidligere forklaret. Af de 77 post-transplantationsbiopsier, der blev læst af begge patologer, sagde begge, at der var betændelse i 33,8 procent, ingen betændelse i 22,1 procent, og var uenige om tilstedeværelsen af ​​inflammation i 44,2 procent af prøverne. Når vi undersøgte tCRM-scorerne, bemærkede vi en stigning i scores, da overensstemmelsesvariablen udviklede sig fra ingen inflammation, uenighed og enighed om tilstedeværelsen af ​​inflammation (figur 4A). Der var signifikante forskelle i tCRM-score mellem patologer, der både fandt inflammation vs. uenighed (p=0.003), og begge fandt betændelse vs. begge fandt ingen inflammation (p < 0,001="" ),="" sammen="" med="" overordnet="" signifikans="" mellem="" alle="" scores="" (p=""><>

Når vi udførte uovervåget hierarkisk klyngedannelse af tCRM-generne, så vi klyngningen af ​​biopsiprøver baseret på overensstemmelsesvariablen (figur 4B). Vi kan se, at klyngerne af høj genekspression svarer til, at begge patologer er enige om tilstedeværelsen af ​​inflammation, mens lav genekspression i modsætning hertil svarer til, at begge patologer er enige om ingen betændelse eller uenighed mellem dem. Derudover ser vi, at den tilsvarende tCRM-score for hver biopsi har en tendens til at favorisere højere og lavere score, hvor patologer var enige om henholdsvis inflammation eller ingen inflammation. Selvom klyngningen ikke er perfekt, er der en klar tendens til at se.

Vævs fælles afstødningsmodul som en forudsigelse af afstødning og graftfunktion Ovenfor viser vi den kliniske nytte af tCRM, som det relaterer sig til at stille nøjagtige patologiske diagnoser. Selvom dets anvendelse dér relaterer sig til, hvad der traditionelt er en biopsi-bevist diagnose, ønskede vi at udforske tCRM's brug i en model til at forudsige afstødning/betændelse. Ved at bruge vores binære variabel for inflammation (AR- og BL-biopsier) skabte vi en logistisk regressionsmodel til at forudsige det binære resultat af inflammation på biopsi. De anvendte kliniske variabler er tidligere beskrevet (tabel 3). Interessant nok var den eneste signifikante prædiktor for inflammation diagnosticeret ved patologi tCRM-score (OR: 1,90, 95 procent CI: 1,40–2,68, p < 0.{{16="" }}01),="" mens="" det="" at="" have="" en="" mandlig="" donor="" til="" den="" kvindelige="" modtager="" var="" beskyttende="" med="" grænseoverskridende="" betydning="" (or:="" 0,27,="" 95="" procent="" ci:="" 0,07-0,98,="" s="">

Vi så derefter på tCRMs evne til at forudsige langsigtede ændringer i GFR. Vi korrelerede delta-GFR (fra GFR på biopsitidspunktet til den endelige GFR) til patientens tCRM-score fra den biopsi (Pearson-korrelationskoefficient=0.21, p=0.{{6} }25). Vi gentog derefter dette efter at have ekskluderet tCRM-score mindre end 2, så vi kun kiggede på de mest forhøjede tCRM-værdier for at se effekten på delta GFR, hvilket resulterede i en stigning i korrelationskoefficienten til 0,32 (p=0). 05). Vi så også på korrelationen mellem hver patients højeste DSA-niveau med deres tilknyttede tCRM-score (Supplerende figur 1), for at se, om der var nogen sammenhæng mellem DSA-niveauer og tCRM-score, som vi ikke fandt at være korrelerede (Pearson-korrelationskoefficient { {11}}, s=0.99).

Til sidst så vi på patienter, der havde serielle biopsier og tCRM-score. Serielle tCRM-scores blev plottet pr. patient efter post-transplantationsdage (figur 4C). Der var fire patienter, der havde en oprindelig diagnose af AR og blev behandlet, derefter fulgt af en efterfølgende biopsi (figur 4C, røde linjer). Vi bemærkede, at alle fire patienter oprindeligt havde en forhøjet tCRM-score, og efterbehandlingen havde et fald i deres score, hvor kun én patient blev diagnosticeret med AR ved den anden biopsi. Det skal bemærkes, at to patienter, der havde forhøjede tCRM-score, som blev læst af patologen som havende en stabil diagnose, udviklede en stigning i deres tCRM-score og en ny diagnose af AR på deres opfølgningsbiopsier (Figur 4C, blå linjer).

cistanche tubulosa ekstrakt:forbedre nyrefunktionen

DISKUSSION

Vi antog, at tCRM-scoren kunne bruges som et datapunkt til at hjælpe med biopsidiagnose og muligvis som en objektiv tiebreaker, når der er uenighed blandt patologer. Ovenfor viser vi, at tCRM-scoren kan skelne mellem patologiske diagnoser. tCRM er i stand til at skelne mellem kombinerede AR vs. BL vs. stabile prøver og er også i stand til at skelne mellem mere specifikke AR-diagnoser såsom ABMR vs. TCMR og ABMR vs. BL, som vi demonstrerede ovenfor. En af de kendte ulemper ved den kombinerede subjektive/objektive karakter af Banff-kriterierne er, at der kan eksistere uoverensstemmelser mellem patologer, der ser på identiske biopsiprøver. Vi påviste ovenfor, at uenighed mellem patologer om den inflammatoriske byrde i nyrebiopsier er almindelig. Vi viser, at når der er enighed blandt patologer om tilstedeværelsen eller fraværet af inflammation, har dette en tendens til at være i ekstremerne af tCRM-scoren. En del af nytten i tCRM-scoren kan ligge her, i dens evne til at give et objektivt mål for inflammation, men også fungere som tiebreaker i tilfælde, hvor diagnosen ikke er klar, men tCRM-scoren klart peger den ene eller den anden vej. For eksempel kan en patolog, der læser en biopsi, som ikke er sikker på at klassificere den som AR eller BL, men med en meget høj tCRM-score, være mere objektiv og præcis i forhold til at stille diagnosen AR.

Derudover indikerer denne undersøgelse, at tCRM-scoren kan bruges til at forudsige mere langsigtede kliniske resultater. Selvom korrelationen mellem ændringer i GFR og højere tCRM-score er svag, viste vi en statistisk signifikant positiv sammenhæng mellem dem, med en endnu større korrelation, når vi filtrerede for tCRM-score større end 2, hvilket tyder på, at mere forhøjede score tyder på en større grad af allograft skade, som kan forudsige langsigtet nedsat graftfunktion (større delta GFR). Interessant nok fandt vi ikke en sammenhæng mellem patientens DSA-niveauer og tCRM-scores. Dette kan til dels skyldes, at mange patienter med DSA'er ikke nødvendigvis fortsætter med at udvikle ABMR, sammen med at vide, at forskellige DSA'er kan give forskellige risici for faktisk at udvikle ABMR. Derudover viste vi ved at spore patienter med serielle biopsier og tCRM-scoringer, at størstedelen af ​​patienter med forhøjede tCRM-score og AR havde et efterfølgende fald i deres score, sammen med forbedring af graft-inflammation på efterfølgende biopsier (efterfølgende histologi gik fra AR til stabil ). Navnlig var der 2 tilfælde, hvor tCRM-scorerne var markant forhøjede, men alligevel var den patologiske diagnose stabil ved biopsi. Begge disse tilfælde resulterede i en endnu mere forhøjet tCRM-score på den efterfølgende biopsi med en tilsvarende patologisk diagnose af AR. Dette antyder muligheden for enten fejldiagnosticering på grund af den subjektive karakter af histologisk klassificering, eller at den forhøjede ekspression af tCRM-generne, der korrelerer med graft-inflammation, kan gå forud for faktiske patologiske fund, der ville resultere i en diagnose af AR. Uanset hvad, tyder dette på nytten af ​​den mere objektive tCRM-score til at hjælpe med at stille diagnosen AR.

Molekylær kvantificering af den samlede inflammatoriske byrde i nyre-allotransplantatet er vigtig at etablere på tidspunktet for en invasiv biopsi (5, 6, 9). Vores metode letter brugen af ​​allerede tilgængelige biopsiprøver på en effektiv måde (samlede eksperimenttider er 4-6 timer for de viste analyser). Mens ikke-invasive tests, såsom donorafledt cellefrit DNA (dd-cfDNA), foreslås til tidlig diagnose af AR (19-23), er en ulempe ved disse test, at de ikke direkte udspørger målvævet af interesse, selvom dd-cfDNA'et frigives fra allotransplantatet. Med tCRM kan biopsivæv, der allerede opnås, behandles med minimalt væv fra enten friske biopsier eller arkiverede FFPE-blokke, hvilket bevarer det meste af den overordnede FFPE-blok til yderligere histologiske analyser.

Vores undersøgelse er delvist begrænset af den invasive karakter af tCRM. Biopsier forbliver guldstandarden og opnås ofte, hvilket giver mulighed for molekylær profilering med tCRM, men i sidste ende vil en overgang til ikke-invasive tests på blod eller urin være mest ideel for patienter. Vores laboratorium arbejder i øjeblikket på brugen af ​​CRM-generne i urin for at hjælpe med diagnosticering af graftafstødning (14). Derudover, mens denne undersøgelse var et prospektivt forsøg, blev anvendelsen af ​​tCRM ikke brugt til klinisk beslutningstagning og var i stedet en eksplorativ analyse. Vores fremtidige arbejde ville drage fordel af at betragte tCRM-scoren som et muligt endepunkt, eller faktisk tage scoren med i betragtning, når vi beslutter os for den endelige patologiske diagnose for en biopsiprøve. Derudover, mens vores undersøgelsesprøver inkluderede TCMR-diagnoser, var størstedelen af ​​vores tilgængelige prøver til analyse ABMR-prøver. Selvom vi viser, at tCRM-scoren er forhøjet, uanset hvilken type AR der er til stede, vil fremtidigt arbejde være nødt til at bruge et større antal prøver inden for hver kategori af specifik AR-type.

Vi viste, at tCRM-scoren er i stand til at skelne mellem patologiske diagnoser ved at bruge allerede tilgængelige FFPE-prøver. Det er vigtigt, at der eksisterer variabilitet blandt forskellige patologer, hvilket blev påvist i vores data baseret på to blindede patologer, der stillede diagnoser. Som sådan demonstrerer vi, at tCRM ikke kun kan hjælpe med patologisk diagnose, men især når der er uenighed eller usikkerhed, kan scoren bruges til at nå frem til en endelig, mere robust konklusion.

cistanche tubulosa fordel: behandle nyresygdomme

ERKLÆRING AF DATA TILGÆNGELIGHED

De rå data, der understøtter konklusionerne i denne artikel, vil blive gjort tilgængelige af forfatterne uden unødigt forbehold.

ETISK ERKLÆRING

Studierne, der involverede menneskelige deltagere, blev gennemgået og godkendt af UCSF IRB. Patienterne/deltagerne gav deres skriftlige informerede samtykke til at deltage i denne undersøgelse.

FORFATTERS BIDRAG

AZ bidrog til analysedesign, dataanalyse, fortolkning, manuskriptskrivning og manuskriptredigering. JG bidrog til undersøgelsens design, dataindsamling og manuskriptgennemgang. TS bidrog til dataanalysen og manuskriptredigering. ID bidrog til prøvebehandlingen. RS og GS bidrog til prøvebehandlingen. CC bidrog til prøvebehandlingen og gennemgangen. JF, XC, CSR, LM og CR bidrog til prøve- og databaseindsamling. MV bidrog til patientindskrivning og transplantation. LB bidrog til patientindskrivningen. JA bidrog til undersøgelsens design, dataindsamling og manuskriptgennemgang. MS bidrog til undersøgelsens design, dataindsamling, analysedesign og manuskriptgennemgang. Alle forfattere bidrog til artiklen og godkendte den indsendte version.

forbedre nyrefunktionen cistanche tubulosa

REFERENCER

1. Wolfe RA, Ashby VB, Milford EL, Ojo AO, Ettenger RE, Agodoa LY, et al. Sammenligning af dødelighed hos alle dialysepatienter, patienter i dialyse, der afventer transplantation, og modtagere af en første kadavertransplantation.N EnglJ Med(1999) 341(23):1725-30. doi: 10.1056/NEJM 199912023412303

2. Meier-Kriesche HU, Ojo AO, Port FK, Arndorfer JA, Cibik DM, Kaplan B. Forbedring af overlevelse blandt patienter med nyresygdom i slutstadiet: tendenser over tid for transplanterede og ventelistede patienter.J Er Soc Nephrol(2001) 12(6):1293-6. DOI: 10.1111/j.1600-6143.2004.00332.x

3. Oniscu GC, Brown H, Forsythe JLR. Indvirkning af dødelig nyretransplantation på overlevelse hos patienter anført til transplantation.J Am Soc Nephrol(2005) 16 (6):1859-65. DOI: 10.1681/ASN.2004121092

4. Hariharan S, Johnson CP, Bresnahan BA, Taranto SE, McIntosh MJ, Stablein D. Forbedret transplantatoverlevelse efter nyretransplantation i USA, 1988 til 1996.N EnglJ Med(2000) 342(9):605-12. DOI: 10.1056/NEJM 200003023420901

5. Pineda S, Sigdel TK, Liberto JM, Vincenti F, Sirota M, Sarwal MM. Karakterisering af præ-transplantation og post-transplant nyreafstødningsrisiko ved B-celle immunrepertoire-sekventering.Nat Commun(2019) 10(1):1906. DOI: 10.1038/s41467-019-09930-3

6. Halloran PF, Famulski K, Reeve J. De molekylære fænotyper af afstødning i nyretransplantationsbiopsier.Curr Opin Organ Transplantation (2015) 20(3):359–67. DOI: 10.1097/MOT.00000000000000193

7. Li L, Khatri P, Sigdel TK, Tran T, Ying L, Vitalone MJ, et al. En perifer bloddiagnostisk test til akut afstødning ved nyretransplantation.Am JTransplantation(2012) 12(10):2710–8. DOI: 10.1111/j.1600-6143.2012. 04253.x

8. Roedder S, Sigdel T, Salomonis N, Hsieh S, Dai H, Bastard O, et al. Det korte assay til at opdage nyretransplanterede patienter med høj risiko for akut afstødning: resultater af multicenter AART-studiet.PloS Med(2014) 11(11): e1001759. DOI: 10.1371/journal.pmed.1001759

9. Naesens M, Khatri P, Li L, Sigdel TK, Vitalone MJ, Chen R, et al. Progressiv histologisk skade i nyre-allotransplantater er forbundet med ekspression af medfødte og adaptive immunitetsgener.Nyre Int(2011) 80(12):1364–76. DOI: 10.1038/ki.2011.245

10. Furness PN, Taub N, Assmann KJM, Ban G, Cosyns JP, Dorman AM, et al. International variation i histologisk gradering er stor, og vedvarende feedback forbedrer ikke reproducerbarheden.Er J Surg Pathol (2003) 27(6):805-10. doi: 10.1097/00000478-200306000-00012

11. Veronese FV, Manfro RC, Roman FR, Edelweiss MI, Rush DN, Dance S, et al. Reproducerbarhed af Banff-klassifikationen ved subklinisk nyretransplantatafstødning.ClinTransplantation(2005) 19(4):518-21. doi: 10.1111/j.1399- 0012.2005.00377.x

12. Khatri P, Roedder S, Kimura N, De Vusser K, Morgan AA, Gong Y, et al. Et fælles afstødningsmodul (CRM) til akut afstødning på tværs af flere organer identificerer nye terapier til organtransplantation.J Exp Med(2013) 210 (11):2205-21. doi: 10.1084/jem.20122709

13. Sacreas A, Yang JYC, Vanaudenaerde BM, Sigdel TK, Liberto JM, Damm I, et al. Det fælles afstødningsmodul i kronisk afstødning efter lungetransplantation.PloS One(2018) 13(10):e0205107. doi: 10.1371/ journal.pone.0205107

14. Sigdel TK, Yang JYC, Bestard O, Schroeder A, Hsieh SC, Liberto JM, et al. En urinal Common Rejection Module (CRM)-score til ikke-invasiv nyretransplantationsovervågning.PloS One(2019) 14(7):e0220052. doi: 10.1371/ journal.pone.0220052

15. Sigdel TK, Bestard O, Tran TQ, Hsieh SC, Roedder S, Damm I, et al. En beregningsmæssig genekspressionsscore til forudsigelse af immunskade i nyreallotransplantater.PloS One(2015) 10(9):e0138133. doi: 10.1371/journal. pone.0138133

16. Sigdel T, Nguyen M, Liberto J, Dobi D, Junger H, Vincenti F, et al. Vurdering af 19 gener og validering af CRM-genpanel til kvantitativ transkriptionel analyse af molekylær afstødning og inflammation i arkivnyretransplantationsbiopsier.Foran Med (2019) 6:213. doi: 10.3389/ feed.2019.00213

17. Haas M, Loupy A, Lefaucheur C, Roufosse C, Glotz D, Seron D, et al. Banff 2017 Kidney Meeting Report: Reviderede diagnostiske kriterier for kronisk aktiv T-cellemedieret afstødning, antistofmedieret afstødning og udsigter til integrerende endepunkter for næste generations kliniske forsøg.Am J Transplantation(2018) 18(2):293-307. doi: 10.1111/ajt.14625

18. Sigdel TK, Nguyen M, Dobi D, Hsieh SC, Liberto JM, Vincenti F, et al. Målrettet transkriptionel profilering af nyretransplantationsbiopsier.NyreIntRep(2018) 3(3):722-31. doi: 10.1016/j.ekir.2018.01.014

19. Bloom RD, Bromberg JS, Poggio ED, Bunnapradist S, Langone AJ, Sood P, et al. Cellefrit DNA og aktiv afstødning i nyreallotransplantater.J Am Soc Nephrol(2017) 28(7):2221-32. doi: 10.1681/ASN.2016091034

20. Lee H, Park YM, We YM, Han DJ, Seo JW, Moon H, et al. Evaluering af digital PCR som en teknik til overvågning af akut afstødning ved nyretransplantation.GenomikMeddele(2017) 15(1):2–10. doi: 10.5808/ GI.2017.15.1.2

21. Adamek M, Opelz G, Klein K, Morath C, Tran TH. En hurtig og enkel metode til at detektere og kvantificere donorafledt cellefrit DNA i sera fra faste organtransplanterede modtagere som en biomarkør for transplantatfunktion.Clin Chem Lab Med(2016) 54(7):1147-55. doi: 10.1515/cclm-2015-0622

22. Beck J, Oellerich M, Schulz U, Schauerte V, Reinhard L, Fuchs U, et al. Donorafledt cellefrit DNA er en ny universel biomarkør til allograftafstødning ved transplantation af faste organer.Transplantation Proc(2015) 47 (8):2400–3. doi: 10.1016/j.transproceed.2015.08.035

23. Beck J, Bureau S, Balzer S, Andag R, Kanzow P, Schmitz J, et al. Digital dråbe-PCR til hurtig kvantificering af donor-DNA i cirkulationen af ​​transplanterede modtagere som en potentiel universel biomarkør for transplantatskade.Clin Chem (2013) 59(12):1732-41. doi: 10.1373/clinchem.2013.210328