Urinsyre -sænkningseffekt og mekanisme af akteosid og echinacosid ekstraheret fra cistanche tubulosa
Mar 03, 2025
Abstrakt:Formålet er at udforske urinsyre -sænkningseffekter og mekanismer for akteosid (AS) og echinacosid (ECH) ekstraheret fraCistanche Tubulosa.
MetoderHyperuricæmi (HUA) rotte -model blev etableret under anvendelse af kaliumoxonat (1,5 g · kg -1 · d -1) kombineret med adenin (100 mg · kg -1 · d -1). HUA -modelrotterne blev tilfældigt opdelt i en modelkontrolgruppe, en allopurinolgruppe (30 mg · kg -1 · d -1), som lav og høj (50, 100 mg · kg -1 · d -1) dosisgrupper og ECH lav og høj (50, 100, 100 mg · kg -1 · d -1) dosisgrupper. En normal kontrolgruppe blev tidligere etableret. Efter fire ugers administration blev Blood Biochemistry Analyzer brugt til at detektere SUA -urinstof, Crea, adenosindeaminase (ADA) og urinsyre (UUA) niveauer i urin. Enzymbundet immunosorbentassay blev anvendt til at detektere xanthine oxidase (XOD) niveauer i serum. Nyrevæv blev opsamlet, og nyrekoefficienten blev vejet og beregnet. Hematoxylin eosin (HE) -farvning blev anvendt til at observere nyrepatologiske ændringer. Immunohistokemi (IHC) og PCR i realtid blev anvendt til at detektere protein- og mRNA -ekspressionsniveauerne af urattransportør 1 (URAT1), glukosetransportør 9 (GLUT9), organisk aniontransportør 1 (OAT1) og organisk aniontransportør 3 (OAT3) i nyvæv. Resultater As og ECH kunne forbedre nyrefunktionen i HUA -modelrotter, reducere urinsyreniveauet, fremme urinsyreudskillelse, nedregulere serumniveauer af ADA og XOD, og opregulerer protein og mRNA -ekspression af URAT1 og GLUT9 i nyrevæv, mens opregulering af protein- og mRNA -ekspression af OAT1 og OAT3 i nyvævet.
Konklusioner Phenylethanoid -glycosiderne som og ECH fra cistanche tubulosa kan udøve urinsyre -sænkningseffekter ved at forbedre nyrefunktionen i HUA -modelrotter, reducere ADA- og XOD -niveauer og regulere ekspressionen af URAT1, GLUT9, OAT1 og OAT3.
Nøgleord: Cistanche Tubulosa; Acteoside; Echinacosid; hyperuricæmi; reduktion af urinsyre; mekanisme
Cistanche tubulosa -ekstrakt med 16% acteosid
Hyperuricæmi (HUA) er en metabolisk sygdom forårsaget af forstyrret purinmetabolisme i den menneskelige krop, hvilket fører til forhøjede urinsyreniveauer [1]. Det diagnosticeres typisk, når urinsyreniveauet overstiger 7. 0 mg · dl⁻¹ (416. 0 μmol·L⁻¹) hos mænd og 6. {6}} mg · dl⁻¹ (357. {0 μmol·L⁻¹) i kvinder [2]. Udviklingen af hyperuricæmi er primært relateret til faktorer, såsom diæter med høj purin, kronisk alkoholforbrug, medicinbrug og hypothyreoidisme. Det øger ikke kun risikoen for hjerte -kar -sygdomme, diabetes og hypertension [3-4], men påvirker også markant patienternes helbred.
I øjeblikket inkluderer kliniske behandlinger til hyperuricæmi hovedsageligt medikamenter, der hæmmer urinsyreproduktion og fremmer udskillelse af urinsyre. Imidlertid har disse behandlinger visse begrænsninger for patienter med nedsat lever- eller nyrefunktion [5-6]. Derfor er det at undersøge effektive lægemidler med lave bivirkninger af stor betydning for forebyggelse og behandling af hyperuricæmi.
Cistanche Tubulosa (Schenk) R. Wight, ofte brugt i traditionel kinesisk medicin som en nyre-toniserende urt, anvendes til behandling af tilstande som impotens, infertilitet, mangel på essens og blod, svaghed i korsryggen og knæene, muskelsvaghed og forstoppelse på grund af tarmtørhed [7]. Undersøgelser har vist detCistanche Tubulosabesidder neurobeskyttende [8], antiinflammatorisk [9], knoglemetabolisme-regulerende [10] og effektivitetsforbedrende virkninger i kemoterapi for kræftpatienter [11]. Blandt dens forskellige aktive komponenter er phenylethanoid glycosider de mest rigelige.
Acteosid (AS) og echinacosid (ECH), to phenylethanoid glycosider med højt indhold iCistanche Tubulosa, udviser stærk biologisk aktivitet og har et betydeligt potentiale for udvikling og anvendelse. Derfor valgte vores forskningsgruppe som og ECH til videre undersøgelse. Gennem netværk Farmakologi-forudsigelser og præ-eksperimenter hos mus opdagede vi, at phenylethanoid glycosidekstrakter fraCistanche Tubulosakan have en vis urinsyrenænkende virkning. Veje og mekanismer for disse effekter forbliver imidlertid uklare.
Ved anvendelse af mekanismerne til urinsyreproduktion og dens primære udskillelsesveje som forskningsfokus undersøgte vi således de urinsyrenænkende virkninger af de phenylethanoid glycosidekstrakter som og ECH. Denne undersøgelse sigter mod at belyse de veje og mekanismer, som AS og ECH udøver deres urinsyrenænkende effekter.
1 materialer
1.1 Eksperimentelle dyr
Halvfjerds mandlige SPF-klasse Sprague-Dawley (SD) rotter, der vejer 150-180 g, blev købt fra det eksperimentelle dyrecenter på Xinjiang Medical University. Dyreproduktionslicensnummer: SCXK (xin) 2023-0001. Dette eksperiment blev godkendt af Animal Ethics Committee i Xinjiang Autonomous Region Uygur Medicine Research Institute, med Animal Ethics-godkendelsesnummeret: IACUC- (ZHUN) -2024-009.
1.2 Medicin og reagenser
Phenylethanoid glycosidekstrakter (AS og ECH)fraCistanche Tubulosa (purity >98%, verificeret ved højtydende væskekromatografi) blev ekstraheret, oprenset og fremstillet af det vigtigste laboratorium for Uygur-formuleringsvidenskab, Xinjiang Autonomous Region Uygur Medicine Research Institute. Batchnumre: 20220617 (AS) og 20220526 (ECH).
Allopurinol -tabletter, batchnummer: 62208726, fremstillet af Jiangsu Wanbang Biochemical Pharmaceutical Group Co., Ltd.
Kaliumoxonatogadenin, Batchnumre: I2130050 og C2202255, købt fra Shanghai Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd.
Crea (kreatinin), UA (urinsyre), urinstof og ADA (adenosindeaminase) assay -sæt, batchnumre: 141123010, 141223004, 141323008 og 043624005, købt fra Shenzhen Mindray Bio-Medical Electronics Co., Ltd.
XOD (Xanthine Oxidase) Aktivitetsassay Kit, Batchnummer: Y10001219, købt fra Shanghai Macklin Biochemical Technology Co., Ltd.
Antistoffer (URAT1, GLUT9, OAT1, OAT3), batchnumre: 3I5723 0, 92F0296/4, 0F33081/2I44618, købt fra Affinity Biosciences.
HRP-mærket gede-anti-kanin IgG, batchnummer: 245440113, købt fra ZSGB-BIO.
Hematoxylinfarvningsopløsning, Batchnummer: 24135741h, købt fra Beijing Lanjieke Technology Co., Ltd.
DAB CHROMOGENIC REAGENT KIT, Batchnummer: 240010512, købt fra ZSGB-BIO.
DEPC (diethyl pyrocarbonat), katalognummer: d 60029-500 ml, købt fra Amresco (USA).
M5 Hiclear DL2000 DNA -markør, katalognummer: MF025, købt fra Beijing Genomics Biotechnology Co., Ltd.
Trizol ™ reagens, katalognummer: 15596026, købt fra Thermo Fisher Scientific (USA).
5x alt-i-en RT MastermixogEvagren Express 2 × QPCR Mastermix-Low Rox, katalognumre: G492 og G891, begge købt fra Applied Biological Materials Inc. (ABM).
2 metoder
2.1 Model etablering og gruppering
Halvfjerds mandlige Sprague-Dawley (SD) rotter blev akklimatiseret og opdelt i to grupper: en normal kontrolgruppe (1 0 rotter) og en modelkontrolgruppe (60 rotter). Den normale kontrolgruppe blev administreret 0,5% CMC-NA via sonde. Modelkontrolgruppen blev administreret kaliumoxonat (1,5 g · kg⁻¹) kombineret med adenin (100 mg · kg⁻¹) i en dosis på 10 ml · kg⁻¹, en gang dagligt i 14 på hinanden følgende dage. Modellen blev betragtet som med succes etableret, når urinstof-, CREA- og SUA -niveauer steg signifikant, målt ved en biokemisk analysator.
Rotterne i hyperuricæmi-model blev yderligere opdelt i følgende grupper baseret på SUA-, urinstof- og CREA-niveauer: Modelkontrolgruppe, allopurinolgruppe (3 0 mg · kg⁻¹), lav dosis som gruppe (50 mg · kg⁻¹), høj dosis som gruppe (100 mg · kg⁻¹), lav dosis ECH-gruppe (50 mg · kg⁻¹), og høj dosering og høj dosering og høj doser og høj doser ECH-gruppe (50 mg · · kg⁻¹), og høj doser og høj doser og høj doser). ECH -gruppe (100 mg · kg⁻¹) med 10 rotter i hver gruppe. For at opretholde stabil hyperuricæmi blev alle grupper undtagen den normale kontrolgruppe administreret kaliumoxonat (500 mg · kg⁻¹) kombineret med adenin (100 mg · kg⁻¹) via sonde om morgenen, efterfulgt af administration af de respektive lægemidler i hver behandlingsgruppe om eftermiddagen. Den normale kontrolgruppe modtog 0,5% cmc-na-opløsning om morgenen og drikkevand om eftermiddagen i en dosis på 10 ml · kg⁻¹, en gang dagligt i 14 på hinanden følgende dage. Bagefter blev administration af modelleringsmidler stoppet, og de respektive lægemidler blev kontinuerligt administreret dagligt i yderligere 14 dage.
2.2 Prøvekollektion
Efter den endelige dosis blev rotterne fastet natten over (vand blev ikke begrænset). Urin fra hver gruppe blev opsamlet til urinsyretest. Kropsvægt blev målt efter faste, og blodprøver blev opsamlet under anæstesi. Serum blev adskilt ved centrifugering og opbevaret til fremtidig brug. Nyrevæv blev opsamlet og vejet. Den ene nyre blev fikseret i 4% paraformaldehydopløsning, mens den anden var snapfrosset i flydende nitrogen til yderligere analyse.
2.3 Måling af urinsyre i rotteurin
Urinprøver fra hver gruppe blev centrifugeret (3, 000 r · min⁻¹, 10 minutter, centrifuge radius 14 cm), og supernatanten blev opsamlet. Urinprøver blev fortyndet 1: 9 med saltvand og analyseret for urinsyreindhold under anvendelse af en biokemisk analysator.
2.4 Måling af ADA, Urea, Crea og SUA i rotte -serum
Blodprøver fra hver gruppe blev centrifugeret (3, 000 r · min⁻¹, 10 minutter, centrifuge radius 14 cm), og serum blev opsamlet. ADA-, urinstof-, CREA- og SUA -niveauer i serum blev målt under anvendelse af en biokemisk analysator.
2.5 Måling af XOD i rotte -serum
Ændringer i XOD -niveauer i rotte -serum blev målt under anvendelse af en enzymatisk assay i henhold til producentens instruktioner. Den oprindelige absorbans (A₁) og endelig absorbans (A₂) ved 290 nm blev registreret, og ΔA (ΔA=A₂ - A₁) blev beregnet. ΔA blev erstattet i formlen:
Xod (nmol⁻¹ · min⁻¹ · ml⁻¹)=[ΔA × reaktionssystem Samlet volumen ÷ (molær udryddelseskoefficient for urinsyre × optisk sti længde) × 10⁹] ÷ prøvevolumen ÷ tid=4262 × ΔA,
At beregne mængden af urinsyrekatalyserede pr. Minut pr. Ml serum.
2.6 Måling af nyrekoefficient
Nyrevæv blev opsamlet, vasket med saltvand, og overskydende vand blev fjernet. Organvægten blev målt nøjagtigt, og nyrekoefficienten blev beregnet som følger:
Nyrekoefficient=nyrevægt (Mg) / kropsvægt (G).
2.7 Histopatologisk observation af nyrevæv ved at farvning
Nyrevæv fikseret i 4% paraformaldehydopløsning blev dehydreret med graderede ethanolkoncentrationer, renset med xylen, indlejret i paraffin og sektioneret i 4- μm skiver. Sektionerne blev deparaffiniseret med xylen, hydreret med graderet ethanol, farvet med hæmatoxylin og eosin (HE) og forseglet med neutral tyggegummi. De morfologiske ændringer i nyrevæv blev observeret under et lysmikroskop, og billeder blev fanget ved 400 × forstørrelse.
2.8 Påvisning af URAT1, GLUT9, OAT1 og OAT3 proteinekspression i nyvæv ved IHC
Nyrevæv fikseret i 4% paraformaldehydopløsning blev dehydreret med graderede ethanolkoncentrationer, ryddet med xylen, indlejret i paraffin og sektioneret. Antigenindhentning og gedeserumblokering blev udført. Primære antistoffer (URAT1, GLUT9, OAT1, OAT3) blev tilsat ved en fortynding på 1: 200 og inkuberet natten over ved 4 grader. Den næste dag blev sektionerne vasket med PBS, lufttørret og inkuberet med biotinmærket gede-anti-kanin IgG ved 37 grader i 30 minutter. Sektionerne blev vasket med PBS og inkuberet med DAB -kromogene reagens i 10 minutter, efterfulgt af PBS -skylning, hæmatoxylinfarvning i 3 minutter, differentiering med hydrochlorsyreethanolopløsning, lithiumcarbonatblåning, dehydrering med gradientethanol, clearing med xylen og tætning med neutral gummi.
For hver rotte blev to tilfældige 4 0 0 × felter i nyresektioner valgt. Positiv farvning (brun-gul) blev analyseret, og den integrerede optiske densitet (IOD) af hvert felt blev målt under anvendelse af Image-Pro plus 6,0 til statistisk analyse.
