Studiet af Cistanche Deserticola-skiver og det vindampbearbejdede produkt fra Cistanche Deserticola

Forskellen mellem kemiske komponenter og biologiske aktiviteter af råproduktskiverne og det vindampbearbejdede produkt fra Cistanche

Kontakt: emily.li@wecistanche.com

Ying Zhang,1,2 Yuewu Wang,3 Song Yang,1 Yunfeng Xiao,3 Haibin Guan,2 Xin Yue,2 Xiaoqin Wang,2 og Xiangri Li 1

Abstrakt

Som en velkendt kinesisk urtemedicin, denCistanche deserticolahar været brugt til behandling af nyremangelsyndrom i Kina i tusinder af år. Både råproduktet afCistanche deserticola skiver(RCD) og densVindampbearbejdet produkt(WSCD) bruges klinisk til forskellige effekter. I denne undersøgelse er påvirkningerne af dampningsprocessen med vin (SPW) fraCistanche deserticolapå kemiske sammensætninger og biologiske effekter blev undersøgt. Hovedkomponentanalysen (PCA) og kvantitativ analyse blev brugt til at studere forskellene i de kemiske sammensætninger. Virkningerne af nærende nyrer blev også undersøgt for at sammenligne forskellene mellem RCD (Cistanche deserticola skiver)og WSCD (Vindampbearbejdet produkt). PCA-resultaterne indikerede, at den åbenlyse adskillelse blev opnået i RCD(Cistanche deserticola skiver)og WSCD (Vindampbearbejdet produkt). Resultaterne af den kvantitative analyse viste, at WSCD har højere mængder af totale polysaccharider, totale PhG'er, isoacteosid og osmanthusid B end RCD(Cistanche deserticola skiver), mens indholdet af 2'-acetylacteosid og acteosid faldt efter SPW. Sammenligningen af ​​RCD og WSCD på biologiske aktiviteter viste, at begge kunne genoprette niveauet af kønshormon i modellen med nyre-yang-mangel og forbedre antioxidanteffekten. WSCD(Vindampbearbejdet produkt)var meget bedre til at øge indvoldevægten afnyreog sædblære. Resultaterne indikerede, at SPW ændrede sine kemiske komponenter og forbedrede sine biologiske aktiviteter.

1. Introduktion

Cistanche deserticolaer en almindelig traditionel kinesisk medicin og er generelt blevet brugt som tonic i Kina og Japan i mange år, almindeligvis kendt som "Desert ginseng."Cistanche deserticolablev første gang optaget som en topkarakter i "Shennong's Herbal Classic of Materia Medica (Shen Nong Ben Cao Jing)" i omkring 100 f.Kr. og brugt til at behandle forskellige sygdomme, herunder nyremangel, impotens, kvindelig infertilitet, sygelig leukorrhea, voldsom metroragi (hvide) , kuldefornemmelse i lænd og knæ og kronisk forstoppelse hos ældre [1]. Indtil videre er flere hovedbestanddele blevet isoleret, såsom polysaccharider [2, 3], phenylethanoid glycosider (PhGs) [1, 4], iridoider [1] og lignanoider [1, 5]. Blandt dem har PhG'er og polysaccharider vist sig at være de vigtigste biologisk aktive komponenter iCistanche deserticola[6-9]. Moderne farmakologiske eksperimenter har bevist, at Cistanche deserticola kan øge produktionen af ​​testosteron og beskytte sædceller, stimulere celleproliferation og øge celleoverlevelsesraten, udvise markante aktiviteter for seksuel styrke, forbedre hukommelsen, anti-aging, frie radikaler og neurobeskyttelse [10 –13].

For at reducere toksicitet og/eller forstærke virkningerne, bør de fleste af de traditionelle kinesiske urter behandles før recepten. De traditionelle procestrin omfatter rengøring, vandproces (slibning i vand, dampning og ristning) og brandproces (omrøring med vin, eddike, salt eller honning) [14]. Under processen kan de kemiske komponenter ændres: det relative indhold af visse komponenter kan ændres, eller der kan dannes nye komponenter [15]. Processen afCistanche deserticolahar en lang historie ogCistanche deserticolabør behandles ved at opblødes i risvinen, dampes som beskrevet i Chinese pharmacopeia (2015-udgaven) [16]. SPW har vist sig at påvirke deres virkninger på nyrernes meridian ifølge teorien om traditionel kinesisk medicin (TCM) [17]. WSCD(Vindampbearbejdet produkt)er først dokumenteret i "Lei Gongs Treatise on Preparation and Boiling of Materia Medica (Lei Gong Pao Zhi Lun)" i de nordlige og sydlige dynastier i Kina. WSCD er bedre brugt til at behandle nyremangler og beskytte sæd som optaget i "Taiping Shenghui Fang" i Song-dynastiet i Kina. Der var dog ingen sammenlignende undersøgelser af de kemiske komponenter mellem RCD(Cistanche deserticola skiver)og WSCD(Vindampbearbejdet produkt)indtil nu.

Moderne farmakologiske undersøgelser har indikeret, at WSCD kunne tonificere nyren for at sikre essens ved at stimulere hypothalamus-hypofyse-gonade-aksen i varierende grad og bruges til behandling af mangel i nyren såsom mangel på nyre-yang [18]. Men indtil nu er forskellene i biologiske aktiviteter mellem RCD(Cistanche deserticola skiver)og WSCD(Vindampbearbejdet produkt)er ikke blevet undersøgt. For nylig, for at lette den eksperimentelle forskning, er dyremodellen med nyre-yang-mangel blevet duplikeret ved at injicere rotter med en høj dosis hydrocortison, hvor rotter vil vise symptomer, der i høj grad ligner dem, der er beskrevet i nyre-yang-mangel på TCM [19, 20] . Rotter med nyre-yang-mangel har altid nogle symptomer såsom vægttab, reduceret madforbrug, svaghed, øget vandindtag og nedsat aktivitet. Baseret på denne dyremodel blev forskellene i nærende nyreeffekter mellem RCD og WSCD opdaget og afslørede endda den videnskabelige essens af den traditionelle kinesiske proces.

Cistanche deserticola har mange funktioner

2. Materialer og metoder

2.1. Materialer og kemikalier

Standardstoffet såsom acteosid, isoacteosid, echinacosid, cistanosid A og 2'-acetylacteosid blev købt fra Shanghai Yuanye Biotechnology Co. Ltd (Shanghai, Kina). Cistanosid F, cistanosid C, osmanthusid B og tubulosid B blev købt fra Chengdu Pfeide Biotechnology Co. Ltd (Chengdu, Kina). Renheden af ​​alle standarder var ikke mindre end 98 procent. Methanol og acetonitril af HPLC-kvalitet blev købt fra Aladdin Chemistry Inc. (Shanghai, Kina). Deioniseret vand blev opnået ved hjælp af et MilliQ50 SP Reagent Water System (Bedford, MA, USA) til fremstilling af prøver og mobile opløsninger. Alle andre organiske opløsningsmidler anvendt i denne undersøgelse var af analytisk kvalitet og købt fra Shanghai Chemical Co. Ltd (Shanghai, Kina).

2.2. Samling af prøver

Alt det råCistanche deserticola(7 batches af prøver) blev indsamlet af Inner Mongolia Medical University fra Indre Mongoliet og Ningxia provinserne. Alle blev identificeret somcistanche deserticolaYC Ma af Xiao-qin Wang, professor i farmakognosiafdelingen i Indre Mongoliets medicinske universitet. En kuponprøve blev deponeret på School of Pharmacy, Inner Mongolia Medical University. Efter indsamling, blomsterstandene afCistanche deserticolablev fjernet, stilkene blev skåret i skiver og tørret ved stuetemperatur med luft, og derefter blev skiverne tilfældigt opdelt i to grupper i hver batch: den ene er RCD(Cistanche deserticola skiver)og den anden bruges til fremstilling af WSCD(Vindampbearbejdet produkt).

WSCD(Vindampbearbejdet produkt)blev fremstillet i laboratoriet i henhold til kinesisk farmakopé (2015-udgave) [16], hvilket betyder, at den skivede RCD(Cistanche deserticola skiver)blev gennemblødt i risvin med en lukket beholder i 6 timer indtil blødhed, dampet i et vandbad i yderligere 12 timer indtil overfladen bliver sort, og tørret ved stuetemperatur med luft.

2.3. Principal Component Analysis (PCA)

Principal component analysis (PCA) er en sofistikeret teknik, der i vid udstrækning anvendes til at reducere dimensionerne af multivariate problemer. Det reducerer dimensionaliteten af ​​det originale datasæt ved at forklare sammenhængen mellem et stort antal variabler i form af et mindre antal underliggende faktorer uden væsentligt tab af information. I denne undersøgelse er forskellene mellem RCD(Cistanche deserticola skiver)og WSCD(Vindampbearbejdet produkt)blev udført af uovervåget PCA ved hjælp af SIMCA 13.0-softwaren baseret på de relative toparealer i HPLC-kromatografien. Ved hjælp af PCA blev de vigtigste kemikaliers indflydelse på klassificeringen blandt forskellige prøver fundet.

2.4. Prøveforberedelse

2.4.1. Ekstraktpræparat til dyr

RCD(Cistanche deserticola skiver)og WSCD(Vindampbearbejdet produkt)blev udvalgt fra prøverne indsamlet og forberedt som beskrevet i afsnit 2.2.

Lufttørret og skåret RCD(Cistanche deserticola skiver)blev pulveriseret med en pulverisator (FW135, Tianjin Taisite Instrument Co., Ltd.), vejede nøjagtigt 1,0 kg og gennemblødt i 50 procent ethanol i 30 minutter, og forholdet mellem plante/ethanol var 1/ 10 (vægt/vægt). Og derefter blev det ekstraheret under tilbagesvaling to gange i 1 time hver gang. De to ekstrakter blev kombineret og filtreret, og ethanolen blev udvundet under reduceret tryk ved 60 grader. Den samlede rå ekstrakt af PhG'er blev tørret i et vakuum ved 60°C og oprenset med makroporøs harpiks. Endelig blev PhGs-ekstraktet af RCD opnået og vejet nøjagtigt.

PhGs-ekstraktet af WSCD(Vindampbearbejdet produkt)blev opnået efter samme procedure ovenfor.

Sedimenterne fra ekstraktion af PhG'erne blev lufttørret og afkogt to gange i 1,5 time hver gang med 20 gange vand. De to ekstrakter blev kombineret og centrifugeret ved 4000 rpm i 10 minutter, og supernatanten blev koncentreret og præcipiteret med 95% ethanol. Efter centrifugering blev bundfaldet tørret i vakuum ved 60 grader. Endelig polysaccharidekstraktet af RCD(Cistanche deserticola skiver)blev opnået og vejet nøjagtigt.

Polysaccharidekstraktet af WSCD(Vindampbearbejdet produkt)blev opnået efter samme procedure ovenfor.

PhG'erne og polysaccharidekstrakterne af RCD(Cistanche deserticola skiver)og WSCD(Vindampbearbejdet produkt)blev henholdsvis blandede suspensioner i vand, når rotterne blev behandlet oralt.

2.4.2. Prøveforberedelse til bestemmelse af phG'er

PhGs-ekstrakterne i afsnit 2.4.1 blev nøjagtigt vejet som 0,15 g og ekstraheret ved ultralydbehandling med 50mL 50 procent vandig methanolopløsning i 40 min. Efter afkøling blev vægttabet genopfyldt med 50 procent methanol. Alle prøver og opløsningsmidler blev filtreret gennem en 0,45 μm membran før analyse. Indholdet af fire PhG'er i RCD(Cistanche deserticola skiver)og WSCD(Vindampbearbejdet produkt)blev bestemt ved hjælp af HPLC, og de totale PhG'er blev bestemt ved anvendelse af UV-spektrofotometri.

2.4.3. Prøveforberedelse til bestemmelse af polysaccharid

Polysaccharidekstrakterne i afsnit 2.4.1 blev nøjagtigt vejet som 0.10 g og ekstraheret ved ultralydbehandling med 50 ml varmt vand i 40 minutter; efter afkøling blev vægttabet genopfyldt med vand. Alle prøver og opløsningsmidler blev filtreret gennem en 0,45 μm membran før analyse.

2.5. Kromatografisk tilstand af HPLC og bestemmelse af de fire phG'er

Den kromatografiske adskillelse blev udført i et UltiMate 300{{40}} HPLC-system (Thermo Fisher Scientific, USA), udstyret med en dobbeltgradientpumpe, et kolonnerum , og en DAD-detektor. Data blev indsamlet og behandlet ved hjælp af et ChromeLeon Chromatography Data System. Prøverne blev separeret på en Agilent Zorbax SB-C18 (250mm×4,6 mm, 5 μm) med en C18-beskyttelsessøjle (4,6mm×12,5 mm, 5 μm). Den mobile fase bestod af acetonitril (A) og 0,1 procent phosphorsyreopløsning (B) med en strømningshastighed på 1 ml/min. Gradientelueringen er som følger: initial 0-13 min, lineær ændring fra AB (5:95, v/v) til AB (15:85, v/v); 13–25 min, lineær ændring til AB (20:80, v/v); 25–43 min, lineær ændring til AB (25:75, v/v). Bølgelængden af ​​detektoren blev overvåget ved 330 nm. Kolonnetemperaturen blev indstillet til 30 grader, og prøvevolumenet injiceret var 10 μL [21]. Stamopløsningen indeholdende fire referencestandarder blev fremstillet ved at opløse referencestandarderne i 50 procent methanol til en slutkoncentration på 0,20 mg/ml for 2-acetylacteosid, 0,20 mg/ml for acteosid, 0,05 mg/ml for osmanthusid B, og 0,10 mg/ml for isoacteosid. Opløsningen blev derefter fortyndet til fem forskellige koncentrationer med tre replikater for at etablere kalibreringskurver. Prøveindholdet blev udtrykt i g/kg råvægt.

Undersøgelsen af ​​Cistanche deserticola-skiver og det vindampbearbejdede produkt fra Cistanche deserticola

2.6. Bestemmelse af samlede phG'er

De samlede PhG'er blev bestemt ved hjælp af UV-spektrofotometrimetoden ved bølgelængden på 33 0nm i UV1000-spektrofotometeret (Shanghai Tianmei Scientific Instrument Co., Ltd.). Stamopløsningen blev fremstillet ved at opløse echinacosid-standarder i 50 procent methanol til en slutkoncentration på 0,10 mg/ml og derefter fortyndet til fem forskellige koncentrationer med tre gentagelser for at etablere kalibreringskurver.

2.7. Bestemmelse af polysaccharider

Bestemmelsen af ​​polysaccharider blev udført ved anvendelse af phenol-svovlsyremetoden. 1 ml af prøveopløsningen blev sat i et 20 ml reagensglas med en glasprop, og 1 ml 6 procent phenolopløsning og 5 ml koncentreret svovlsyre blev tilsat og rystet i 5 minutter. Blandingen blev overført til et kogende vandbad i 10 minutter og afkølet til stuetemperatur til ultraviolet påvisning. Den ultraviolette absorption blev overvåget ved 480 nm i et UV1000 spektrofotometer. Referencestandarden for vandfri D-glucose blev nøjagtigt vejet og opløst i destilleret vand til en slutkoncentration på 0,10 mg/ml. Derefter blev opløsningen fortyndet til fem forskellige koncentrationer med tre replikater for at etablere kalibreringskurver.

2.8. Dyreforsøg

2.8.1. Dyr og Boliger

SD-hanrotter af seksuel modenhed (180-200 g) blev købt fra Xinglong (Beijing) Experimental Animal Farm (alder: 6 uger gamle), og forsøgsdyrlicensen var SCXK (Jing):2016-0003. Alle dyreprocedurer blev godkendt af Inner Mongolia Medical University Animals Research Committee og udført i henhold til National Institute of Health-retningslinjer vedrørende principperne for dyrepleje (2004). Alle dyr blev holdt i et barrieresystem med en reguleret temperatur på 21-23 grader og en relativ luftfugtighed på 40-65 procent og i en 12 timers mørke/lys-cyklus. Rotterne fik ad libitum mad og vand og akklimatiseret til ovennævnte miljø i en uge.

2.8.2. Dosering og prøveudtagning

Rotterne blev overført til individuelle metaboliske bure og tilfældigt opdelt i 6 grupper (= 10 i hver gruppe). De fik en intramuskulær injektion af 15 mg/kg hydrocortison-natriumsuccinat (købt fra Tianjin Biochemical Pharmaceutical Co., Ltd., Tianjin, Kina) i 2 uger med undtagelse af gruppe 1, som blev injiceret med et tilsvarende volumen fysiologisk saltvand. På den 14. dag blev kropsvægt, madforbrug, vandindtag, urinvolumen og spontan aktivitet inden for 5 minutter indsamlet for at sikre, om nyre-yang-mangelmodellen blev lavet med succes. Fra den 15. dag blev 6 grupper behandlet som følger: gruppe 1 og gruppe 2 (modelgruppe, M) blev behandlet med et lige så stort volumen destilleret vand, gruppe 3 (PhGs-ekstrakt af RCD(Cistanche deserticola skiver)gruppe, PR) blev behandlet med 0,42 g/kg PhGs-ekstrakt af RCD, hvilket var lig med ca. 1,8 g/kg af råmaterialetCistanche deserticolaog de andre grupper var de samme, gruppe 4 (PhGs-ekstrakt af WSCD(Vindampbearbejdet produkt)gruppe, PW) blev behandlet med en dosis på 0,49 g/kg PhGs-ekstrakt af WSCD(Vindampbearbejdet produkt)gruppe 5 (polysaccharidekstrakt af RCD(Cistanche deserticola skiver)gruppe, SR) blev behandlet med 0,18 g/kg polysaccharidekstraktet af RCD, og ​​gruppe 6 var (polysaccharidekstrakt af WSCD)(Vindampbearbejdet produkt)gruppe, SW) blev behandlet med en dosis på 0,22 g/kg polysaccharidekstraktet af WSCD. Alle rotter blev behandlet ved gastrisk perfusion pr. dag. Efter en måneds behandling blev rotterne nægtet mad i 12 timer før blodprøvetagning. Den næste dag blev alle rotter bedøvet og aflivet. Under testen blev rotterne vejet en gang om ugen for at justere doseringen og vejet igen før aflivning. Blodprøver blev opsamlet i et Eppendorf-rør med 10 procent EDTA-2Na-opløsning. Serumet blev separeret ved centrifugering ved 2000 rpm i 15 minutter og opbevaret ved -80 grad til yderligere brug. Derudover blev nyrer, testikler, epididymis, prostata og sædblæren fjernet og vejet hurtigt. Efter vejning blev testiklerne frosset i flydende nitrogen til bestemmelse af SOD og MDA.

2.9. Hormon- og antioxidanteffektanalyse

Testosteron (T) og østradiol (E2) niveauet blev bestemt i Qingdao Kechuang Quality Inspection Center ved radioimmunitet og kolorimetrisk metode. De frosne testikler blev vejet og blandet med 20 gange koldt fysiologisk saltvand (W/W). Testikelhomogenatet opnået ved vævshomogenat i isbadet blev centrifugeret til opnåelse af supernatanten. Indholdet af SOD og MDA i testiklen blev bestemt af SOD- og MDA-sæt efter instruktionerne.

2.10. Statistisk analyse

Betydningen af ​​forskelle mellem grupper blev sammenlignet gennem en envejs ANOVA-test efterfulgt af Scheffes test med en signifikansgrænse på 0.05 ved brug af SPSS-softwaren 25.0. Alle data blev udtrykt som middelværdi ± standardafvigelse (SD) (n=3).

3. Resultater

3.1. Analysen af ​​phG-ændringer efter SPW ved hjælp af PCA

For at sammenligne PhG-ændringerne efter SPW blev 9 kromatografiske toppe udvalgt som karakteristiske toppe og blev identificeret. Deres strukturer blev vist i figur 1, hvis relative toparealer blev beregnet til kvantitativ ekspression. HPLC-kromatogrammet som vist i figur 2, som indikerede, at det relative indhold af hoved-phG'er blev ændret under SPW. PCA-analyse på de relative toparealer af 9 komponenter blev opnået for at skelne mellem forskellige prøver. RCD(Cistanche deserticola skiver)og WSCD(Vindampbearbejdet produkt)var langt fra hinanden i plottet af scoringerne (figur 3(a)), hvilket indikerede, at prøverne var klassificeret i to klynger. Så det menes, at indholdet af de kemiske bestanddele var anderledes. For yderligere at finde de potentielle kemiske markører for diskriminationen blev en udvidet statistisk analyse udført for at generere loading Bi-plotten (figur 3(b)). Peaks 2, 3, 4, 6 og 7 vil falde efter SPW, mens Peaks 5, 8 og 9 vil stige, og alle af dem var de vigtigste komponenter til at skelne RCD(Cistanche deserticola skiver)og WSCD(Vindampbearbejdet produkt). Det relative indhold af top 1 varieres ikke meget efter SPW.

Figur 1 PhG'ernes kemiske strukturer iCistanche deserticolaYC Ma.

Figur 2 HPLC-kromatogram af standardstof (a), RCD(Cistanche deserticola skiver)(b) og WSCD(Vindampbearbejdet produkt)(c). Toppe: (1) cistanosid F, (2) echinacosid, (3) cistanosid A, (4) acteosid, (5) isoacteosid, (6) cistanosid C, (7) 2'-acetylacteosid, (8) osmanthusid B, og (9) tubulosid B.

Figur 3 PCA score plot (a) og loading Bi plot (b) af RCD(Cistanche deserticola skiver)(grøn cirkel) og WSCD (rød cirkel). RCD og WSCD blev klassificeret i to klynger. Toppe 2, 3, 4, 6 og 7 er de vigtigste komponenter til at skelne RCD og WSCD, som vil reducere under SPW; toppe 5, 8 og 9 er også de vigtigste komponenter for forskellene mellem RCD og WSCD(Vindampbearbejdet produkt), som vil stige under SPW.

3.2. Indholdet af totale polysaccharider og phG'er ændret efter SPW

Som vist i figur 3(b) havde 8 komponenter (5, 8 og 9 øget og 2, 3, 4, 6 og 7 faldet) ændret sig signifikant og havde en stor indflydelse på prøveklyngningen. Blandt dem var isoacteosid og Osmanthusid B steget mest, mens 2'-acetylacteosid og acteosid faldt mest. Så indholdet af isoacteosid, Osmanthusid B, 2'-acetylacteosid og acteosid blev bestemt ved HPLC. Som vist i figur 1 var top 4 acteosid, top 5 var isoacteosid, top 7 var 2'-acetylacteosid, og top 8 var osmanthusid B. De samlede PhG'er i RCD(Cistanche deserticola skiver)og WSCD(Vindampbearbejdet produkt)blev bestemt ved hjælp af UV-metoden, og de totale polysaccharider blev udført ved hjælp af phenol-svovlsyre-metoden, resultaterne blev vist i tabel 1, isoacteosid, Osmanthusid B, totale polysaccharider og PhG'er i WSCD var steget signifikant sammenlignet med RCD. 2'-acetylacteosid og acteosid var faldet signifikant.

Tabel 1 Indholdet af polysaccharider og PhG'er i RCD(Cistanche deserticola skiver)og WSCD(Vindampbearbejdet produkt)(mg/g) (n=3).

Bemærk. Betydelige forskelle med RCD(Cistanche deserticola skiver)blev udpeget som *p < 0.05.

3.3. Den hydrokortison-inducerede nyre-Yang-mangelmodel blev lavet

Sammenlignet med normal gruppe, efter 2 ugers intramuskulær injektion af 15 mg/kg hydrocortison natriumsuccinat, var kropsvægten, fødevareforbruget og den spontane aktivitet signifikant reduceret (P<0.05) and="" the="" water="" intake="" and="" urine="" volume="" were="" increased;="" the="" results="" were="" shown="" in="" table="" 2.="" the="" t="" and="" e2="" levels="" in="" the="" serum="" of="" the="" model="" group="" were="" lower="" than="" the="" normal="" group="" as="" shown="" in="" figure="" 4.="" from="" the="" above,="" the="" kidney-yang="" deficiency="" model="" was="" successfully="">

Tabel 2 Indikatorerne ændrede sig efter intramuskulær injektion af hydrocortisonnatriumsuccinat, (n=10).

Bemærk. Signifikante forskelle med N-gruppen blev udpeget som^# p<>

Figur 4 Niveauerne af T og E2: (a) niveauet af T og (b) niveauet af E2. Signifikante forskelle med M-gruppen blev udpeget som^∗p < 0.05.="" signifikante="" forskelle="" med="" n-gruppen="" blev="" udpeget="">^#p < 0.05.

3.4. Indvirkningen af ​​ekstrakter på den gennemsnitlige indvoldsvægt og indeks

Alle rotter og deres indvolde blev vejet, og derefter blev det gennemsnitlige indvolde-indeks beregnet.

Sammenlignet med N-gruppen havde M-gruppen signifikant reduceret indvoldevægtene af nyre, sædvesikel, epididymis og testikel, hvilket også indikerede, at den hydrocortison-inducerede nyre-yang-mangelmodel blev fremstillet med succes. Sammenlignet med M-gruppen var al observeret indvoldsvægt steget i PW- og SR-gruppen, PR-gruppen havde øget vægt af testikel, epididymis, sædblærer og prostata, og SW-gruppen havde øget vægt af nyre, testikel, epididymis, og sædblære. Sammenlignet med PR-grupperne var PW-gruppen bedre i nyrerne, sædblæren og prostata. Der var ingen signifikant forskel mellem SR- og SW-grupperne i vægten af ​​testikel, epididymis, sædvesikel og prostata. Resultaterne er vist i tabel 3.

Tabel 3 Indvoldevægten (g) (n=10).

Bemærk. Signifikante forskelle med M-gruppen blev udpeget som^∗p < 0.05.="" signifikante="" forskelle="" med="" n-gruppen="" blev="" udpeget="">^#p < 0.05.

Sammenlignet med N-gruppen var viscera-indekserne for nyre, testikel, epididymis og sædblærer nedsat i M-gruppen. Sammenlignet med M-gruppen havde PW- og SR-gruppen øget indekset for nyre, testikel, prostatakirtel og sædblærer, PR-grupperne havde øget indekset for testikel, prostatakirtel og sædblære, og SW-gruppen havde øget indekset for nyrer, testikler og sædblærer. Sammenlignet med PR-grupperne var PW-gruppen bedre i nyrerne, sædblæren og prostata. SW- og SR-grupperne havde et lignende indeks for nyre, testikel, sædblærer og epididymis. Resultaterne er vist i tabel 4.

Tabel 4 Det gennemsnitlige indvoldsindeks (g/100g) (n=10).

Bemærk. Signifikante forskelle med M-gruppen blev udpeget som^∗p < 0.05.="" signifikante="" forskelle="" med="" n-gruppen="" blev="" udpeget="">^#p < 0.05.

3.5. Indvirkningen af ​​ekstrakt på niveauet af hormon (T og )

Som vist i figur 4, sammenlignet med M-gruppen, var niveauerne af T og E2 i alle behandlingsgrupperne (PW, PR, SW og SR-gruppen) steget signifikant (P<0.05). however,="" the="" pw="" group="" was="" better="" than="" the="" pr="" group="" at="" levels="" t="" and="" e2.="" the="" sr="" and="" sw="" groups="" had="" no="" significant="">

3.6. Indvirkningen af ​​ekstrakter på antioxidanteffekt

SOD er ​​et vigtigt antioxidantenzym. MDA er produktet af lipidperoxidation, som er indikatoren for at afspejle graden af ​​oxidantskade. Indholdet af SOD og MDA afspejler omfanget af oxidant- og antioxidantevne. Som vist i figur 5, sammenlignet med M-gruppen, var antioxidanteffekten i alle behandlingsgrupperne (PW, PR, SW og SR) blevet forbedret. SW-gruppen havde størstantioxidanteffekt.

Figur 5 Indholdet af MDA og SOD: (a) indholdet af MDA og (b) indholdet af SOD. Signifikante forskelle med M-gruppen blev udpeget som^∗p< 0.05.="" significant="" differences="" with="" the="" n="" group="" were="" designated="" as=""><>

4. Diskussion

Før klinisk anvendelse bør råmaterialerne underkastes traditionelle kinesiske procesteknikker. Dampning er en af ​​de traditionelle behandlingsmetoder for nogle kinesiske lægeurter, som giver en sort farve produceret ved Maillard-reaktion [22], hvilket øger mængden af ​​nogle bioaktive komponenter [23] og farmakologiske aktiviteter. WSCD(Vindampbearbejdet produkt)da et af procesprodukterne er bedre med hensyn til nærende nyrer sammenlignet med RCD(Cistanche deserticola skiver)som dokumenteret i 2015-udgaven af ​​Chinese pharmacopeia. I denne undersøgelse indikerede PCA-resultaterne, at SPW havde ændret den kemiske profil af RCD(Cistanche deserticola skiver). Hvad mere er, havde 8 komponenter i PhG'er ændret sig væsentligt. Total PhG'er, totale polysaccharider, isoacteosid og Osmanthusid B var steget mest, mens 2'-acetylacteosid og acteosid faldt efter SPW. Resultaterne indikerede, at SPW kunne ændre de kemiske bestanddele af RCD(Cistanche deserticola skiver). Indholdet af PhG'er med 1,3,4-trisubstituerede glucopyranosyldele (såsom acteosid, 2'-acetylacteosid og cistanosid C) faldt i WSCD(Vindampbearbejdet produkt)koncentrationerne af deres isomerer med 1,3,5-trisubstitueret glucopyranosyldel (såsom isoacteosid og tubulosid B) steg imidlertid, hvilket indikerede, at transformationen af ​​kemiske bestanddele muligvis fandt sted under SPW, og hydrolysereaktionen vil være en af årsagerne. De foreslåede transformationsveje blev vist i figur 6. Stigningen i polysaccharider efter SPW var også blevet rapporteret i ginseng [24].

Figur 6 Foreslåede transformationsveje for PhG'erne i Cistanche deserticola YC Ma under SPW.

Cistanche deserticolablev dokumenteret for at styrke nyrerne og vende reduktionen i testosteronniveau og have antioxidant effekt og anti-inflammatorisk virkning [25], og PhG'er og polysaccharider var de to vigtigste biologisk aktive komponenter i Cistanche deserticola. Som PhG'er havde isoacteoside og Osmanthuside B antioxiderende og antiinflammatoriske virkninger [26, 27]. Så sammenligningen af ​​farmakologiske virkninger i testosteronniveau og antioxidanteffekt af RCD og WSCD(Vindampbearbejdet produkt)blev studeret. I modellen med hydrocortison-induceret nyre-yang-mangel var det endokrine forstyrrelse, og niveauet af kønshormon var stærkt nedsat i blodet. I denne undersøgelse viste resultaterne af kønshormonanalyse, at både RCD(Cistanche deserticola skiver)og WSCD kunne øge niveauet af T og E2 betydeligt, og både PhG'er og polysaccharider viste forbedring af kønshormoner. WSCD var bedre end RCD(Cistanche deserticola skiver), især i PhGs-ekstraktgrupper. Resultaterne af viscera-indekserne viste, at både PhG'er og polysaccharider kan forbedre indvoldevægtene og deres vægtindekser. I phGs-ekstraktgrupper, WSCD(Vindampbearbejdet produkt)er bedre end RCD til at øge vægten og indekset af nyrer og sædblærer. Ud over,Cistanche deserticolahar en betydelig antioxidant effekt, især polysaccharidekstraktgrupperne med WSCD. Som diskuteret ovenfor, både RCD(Cistanche deserticola skiver)og WSCD kunne forbedre nyre-yang-mangelsyndromet; WSCD er imidlertid bedre end RCD til at øge niveauet af T, E2, vægtene og indekserne for bitestikler og testikler. Resultaterne af undersøgelsen af ​​de farmakologiske virkninger indikerede, at SPW havde ændret de kemiske komponenter i PhG'er og øget indholdet af polysaccharider, hvilket igen øgede kønshormonniveauet og øgedeantioxidanteffekt.

5. Konklusion

Undersøgelsen skulle opdage ændringen af ​​PhG'er, totale polysaccharider og den farmakologiske effekt i RCD(Cistanche deserticola skiver)og WSCD på nyre-yang-mangelrotten, især på hormonniveau og antioxidanteffekt. Denne undersøgelse har vist, at processen med traditionelle kinesiske urter kan ændre deres kemiske bestanddele og påvirke deres bioaktivitet. Det understøttes også, at råvarer og forarbejdede produkter blev ordineret forskelligt i klinikken.

Datatilgængelighed

De data, der bruges til at understøtte resultaterne af denne undersøgelse, er tilgængelige fra den tilsvarende forfatter efter anmodning.

Interessekonflikt

Forfatterne erklærer, at de ikke har nogen interessekonflikter.

Forfatteres bidrag

Ying Zhang og Song Yang designede eksperimenterne. Ying Zhang, Yuewu Wang og Yunfeng Xiao udførte prøveindsamling og forberedelse. Ying Zhang analyserede dataene og udarbejdede papiret. Xiangri Li og Xiaoqin Wang var ansvarlige for studievejledning. Alle forfattere deltog i at skrive og give feedback på papiret. Alle forfattere har læst og godkendt det endelige papir.

Anerkendelser

Dette arbejde blev støttet af tilskud fra behandlingsprocedurerne for de tilberedte skiver af kinesiske råstoffer (nr. YP-PZ-2014). Særlig tak til Wenjia Qu og Tianying Jia for deres store hjælp til indsamlingen afCistanche deserticola.

Referencer

1. Y. Jiang og P.-F. Tu, "Analysis of chemical constituents in Cistanche species," Journal of Chromatography A, vol. 1216, nr. 11, s. 1970-1979, 2009.

Se på: Publisher Site|Google Scholar

2. W. Zhao, H. Yan, Z.-Y. Liang, Y.-J. Zhang og X.-Q. Jiao, "Strukturanalyse af vandopløseligt polysaccharid SPA isoleret fra stammen afCistanche deserticolaMa," Chemical Journal of Chinese Universities, bind 26, nr. 3, s. 461-463, 2005.

Se på: Google Scholar

3. Q. Dong, J. Yao, J.-N. Fang og K. Ding, "Strukturel karakterisering og immunologisk aktivitet af to koldtvandsekstraherbare polysaccharider fraCistanche deserticolaYC Ma," Carbohydrate Research, bind 342, nr. 10, s. 1343-1349, 2007.

Se på: Publisher Site|Google Scholar

4. X.-M. Wu og P.-F. Tu, "Isolering og karakterisering af -(1→6)-glucaner fraCistanche deserticola," Journal of Asian Natural Products Research, bind 7, nr. 6, s. 823–828, 2005.

Se på: Publisher Site|Google Scholar

5. B. Košíková, A. Ebringerová og R. Naran, "Karakterisering af lignin-kulhydratfraktioner isoleret fra træparasittenCistanche deserticolaYC Ma.," Holzforschung, bind 53, nr. 1, s. 33-38, 1999.

Se på: Google Scholar

6. G. Sheng, X. Pu, L. Lei, P. Tu og C. Li, "Tubulosid B fra Cistanche salsa redder PC12-neuroncellerne fra 1-methyl-4-phenylpyridiniumion-induceret apoptose og oxidativ stress," Planta Medica, vol. 68, nr. 11, s. 966-970, 2002.

Se på: Publisher Site|Google Scholar

7. M. Deng, J.-Y. Zhao, X.-D. Ju, P.-F. Tu, Y. Jiang og Z.-B. Li, "Beskyttende virkning af tubulosid B på TNF alfa-induceret apoptose i neuronale celler," Acta Pharmacologica Sinica, vol. 25, nr. 10, s. 1276-1284, 2004.

Se på: Google Scholar

8. X. Geng, L. Song, X. Pu og P. Tu, "Neuroprotective virkninger af phenylethanoid glycosider fra Cistanches salsa mod 1-methyl-4-phenyl-1,2,3 ,6-tetrahydropyridin (MPTP)-induceret dopaminerg toksicitet i C57-mus," Biological & Pharmaceutical Bulletin, vol. 27, nr. 6, s. 797-801, 2004.

Se på: Publisher Site|Google Scholar

9. H. Chen, FC Jing, CL Li, PF Tu, QS Zheng og ZH Wang, "Echinacoside forhindrer de striatale ekstracellulære niveauer af monoamin-neurotransmittere i at formindskes i 6-hydroxydopaminlæsionsrotter," Journal of Ethnopharmacology, vol. . 114, nr. 3, s. 285-289, 2007.

Se på: Publisher Site|Google Scholar

10 J. Pan, C. Yuan, C. Lin, Z. Jia og R. Zheng, "Farmakologiske aktiviteter og mekanismer af naturlige phenylpropanoidglycosider," Die Pharmazie, vol. 58, nr. 11, s. 767-775, 2003.

Se på: Google Scholar

11. G. Fu, H. Pang og YH Wong, "Naturligt forekommende phenylethanoidglycosider: Potentielle ledere til nye terapeutika," Current Medicinal Chemistry, vol. 15, nr. 25, s. 2592-2613, 2008.

Se på: Publisher Site|Google Scholar

12. X.-W. Wang, X.-F. Wang og L.-Y. Wu, "Forbedring af hukommelsen af ​​mus af phenylethanoid glycosider afCistanche deserticola," Chinese Pharmacological Bulletin, nr. 19, s. 41-42, 2002.

Se på: Google Scholar

13. J.-X. Xie og C.-F. Wu, "Effekten af ​​ethanolekstrakt afCistanche deserticolaom indholdet af monoamin-neurotransmittere i rottehjerne," Chinese Traditional and Herbal Drugs, nr. 24, s. 417-419, 1993.

Se på: Google Scholar

14. H. Wu og C.-J. Hu, Chinese Medicine Process Discipline, People's Medical Publishing House, Beijing, Kina, 2012.

15. ZZ Zhao, ZT Liang, K. Chan et al., "Et unikt problem i standardiseringen af ​​kinesisk materia medica: behandling," Planta Medica, vol. 76, nr. 17, s. 1975-1986, 2010.

Se på: Publisher Site|Google Scholar

16. Chinese Pharmacopoeia Commission, Pharmacopoeia of the People's Republic of China 2015, vol. IV, Pharmacopoeia of the People's Republic of China, Beijing, Kina, 2015.

17. J.-M. Chen, Enlightening Primer of Materia Medical, Traditional Chinese Medicine Ancient Books Press, Beijing, Kina, 2009.

18. B.-R. Li og Y.-C. Hun, "Effekter af tonificerende nyremedicin på hypothalamus-hypofyse-gonade (HPG) aksen," Journal of Traditional Chinese Medicine, nr. 7, s. 63-65, 1984.

Se på: Google Scholar

19. M. Chen, L. Zhao og W. Jia, "Metabonomisk undersøgelse af de biokemiske profiler af en hydrocortison-induceret dyremodel," Journal of Proteome Research, vol. 4, nr. 6, s. 2391-2396, 2005.

Se på: Publisher Site|Google Scholar

20. Q. Chen og N.-Y. Yi, "Dyremodellerne og lægemidler til Yin-mangel og Yang-mangel," i Eksperimentel metodologi for farmakologisk forskning i traditionel kinesisk medicin, People's Health Publishing House, Beijing, Kina, 1993.

Se på: Google Scholar

21. Z.-G. Ma, Z.-L. Yang, P. Li og C.-H. Li, "Samtidig bestemmelse af otte phenylethanoidglycosider i forskellige arter af slægten Cistanche ved højtydende væskekromatografi," Journal of Liquid Chromatography & Related Technologies, vol. 31, nr. 18, s. 2838-2850, 2008.

Se på: Publisher Site|Google Scholar

22. Z. Liu, Z. Chao, Y. Liu, Z. Song og A. Lu, "Maillard-reaktion involveret i dampningsprocessen af ​​roden af ​​Polygonum multiflorum," Planta Medica, vol. 75, nr. 1, s. 84-88, 2009.

Se på: Publisher Site|Google Scholar

23. W.-T. Chang, YH Choi, R. Van Der Heijden, et al., "Traditionel behandling påvirker stærkt metabolitsammensætning ved hydrolyse i Rehmannia glutinosa rødder," Chemical & Pharmaceutical Bulletin, vol. 59, nr. 5, s. 546-552, 2011.

Se på: Publisher Site|Google Scholar

24. Y. Jin, Y.-J. Kim, J.-N. Jeon et al., "Effekt af hvid, rød og sort ginseng på fysisk-kemiske egenskaber og ginsenosider," Plant Foods for Human Nutrition, vol. 70, nr. 2, s. 141-145, 2015.

Se på: Publisher Site|Google Scholar

25. T. Wang, X.-Y. Zhang og W.-Y. Xie, "Cistanche deserticolaYC Ma, 'desert Ginseng': A review," American Journal of Chinese Medicine, bind 40, nr. 6, s. 1123-1141, 2012.

Se på: Publisher Site|Google Scholar

26. S.-Y. Nam, H.-Y. Kim, M.-S. Yoou et al., "Anti-inflammatoriske virkninger af isoacteosid fra Abeliophyllum distichum," Immunopharmacology and Immunotoxicology, vol. 37, nr. 3, s. 258-264, 2015.

Se på: Publisher Site|Google Scholar

27. S. Chae, JS Kim, KA Kang, et al., "Antioxidant aktivitet af isoacteosid fra Clerodendron trichotomum," Journal of Toxicology and Environmental Health, del A. Aktuelle problemer, vol. 68, nr. 5, s. 389-400, 2005.

Se på: Publisher Site|Google Scholar

Fra: Evidensbaseret komplementær og alternativ medicin / 2019 / Artikel

Bind 2019 |Artikel-ID 2167947|https://doi.org/10.1155/2019/2167947