Abstrakt:Hovedformålet med denne undersøgelse er at estimere, gennem differentiel analyse, forskellige biologiske aktiviteter af det samlede indhold af phenoler i alkoholekstrakter af tre dadelpalmsorter, der er følsomme eller resistente over for Fusarium oxysporum. sp Albidinis. Her blev stilbenprodukter med antioxidant- og bioaktive kapaciteter påvist i den resistente sort Taabdount (TAAR). Ydermere indeholder den methanoliske fraktion af den TAAR-resistente dadelpalmsort et signifikant produkt, bestemt ved LCMS/MS og 1H, 13C NMR, tilhørende familien af ​​hydroxystilbener, som udviser antioxidantkapacitet, hæmmer svampetyrosinaseaktiviteten og aktiverer og udøver en beskyttende effekt på hypochlorit-induceret skade i 20S proteasom af humane dermale fibroblast-ældne celler. Samlet set indikerer de nuværende resultater, at hydroxytoluen, der er til stede i resistente Phoenix dactylifera L., bør undersøges for at forstå, hvordan stilbenen kan udøve anti-aldringsevne.

Glycoside af cistanche kan også øge aktiviteten af ​​SOD i hjerte- og levervæv og signifikant reducere indholdet af lipofuscin og MDA i hvert væv, hvilket effektivt fjerner forskellige reaktive iltradikaler (OH-, H₂O₂ osv.) og beskytter mod DNA-skader forårsaget af OH-radikaler. Cistanche phenylethanoid glycosider har en stærk opfangningsevne af frie radikaler, en højere reducerende evne end C-vitamin, forbedrer aktiviteten af ​​SOD i spermsuspension, reducerer indholdet af MDA og har en vis beskyttende effekt på sædmembranens funktion. Cistanche polysaccharider kan øge aktiviteten af ​​SOD og GSH-Px i erytrocytter og lungevæv fra eksperimentelt senescent mus forårsaget af D-galactose, samt reducere indholdet af MDA og kollagen i lunge og plasma, og øge indholdet af elastin, har en god rensende effekt på DPPH, forlænge hypoksitiden hos senescent mus, forbedre aktiviteten af ​​SOD i serum og forsinke den fysiologiske degeneration af lunge hos eksperimentelt senescent mus Med cellulær morfologisk degeneration har forsøg vist, at Cistanche har den gode antioxidantevne og har potentialet til at være et lægemiddel til at forebygge og behandle hudaldringssygdomme. Samtidig har echinacosid i Cistanche en betydelig evne til at opfange DPPH-frie radikaler og har evnen til at opfange reaktive oxygenarter og forhindre frie radikal-induceret kollagen-nedbrydning, og har også en god reparationseffekt på anionskader af thymin frie radikaler.

Klik på rou cong rong fordele

【For mere information:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Nøgleord:Phoenix dactylifera L.; Fusarium oxysporum. sp Albidinis (FoA); antioxidant aktiviteter; anti-tyrosinase aktivitet; proteasomaktivering; LC-MS/MS-analyse; stilbenderivater

1. Introduktion

Daddelpalme (Phoenix dactylifera L.) er en flerårig enkimblad fra familien Arecaceae. Dette træ er af yderste vigtighed i livet for de saharanske befolkninger i det sydlige og sydøstlige Marokko, både økonomisk og socialt. Bayoud sygdom, som er forårsaget af jordsvampen Fusarium oxysporum f. sp Albidinis (FoA) [1] har reduceret udbyttet af marokkanske daddelpalmer betydeligt i de seneste år [2]. Det anslås, at FoA forsvandt fra to tredjedele af den marokkanske phoenicicole-arv, men fortsætter med at ødelægge mellem 4,5 procent til 12 procent af de kommercielle kultivarer af højeste kvalitet af dadelpalmer [2]. Mange bestræbelser er blevet gjort for at bekæmpe denne sygdom og forklare nogle forsvarsmekanismer for dadelpalme [3]. De første undersøgelser af daddelpalmens mulige forsvarsmekanismer har fremhævet phenolforbindelsernes og antioxidantkapacitetens rolle i tolerance over for FoA [4,5]. Den biokemiske analyse af resistente og følsomme rodfænolforbindelser var den første biokemiske undersøgelse, der belyste fordelen ved forsvarsmekanismer af daddelpalmen. Faktisk indikerer litteraturen, at resistente rodsorter er rigere på 5-caffeoylshikiminsyre og dens positionsisomerer end de følsomme rodsorter [5]. Disse forbindelser har effektivt vist en potentiel antifungal aktivitet in vitro mod FoA [6].

Naturlige antioxidanters store evne til at opfange frie radikaler er det, der driver deres stigende popularitet i fødevarer og medicinske undersøgelser [7-10].

For eksempel er reaktive oxygenarter forværrende faktorer i cellulær skade og aldringsprocesser [11] og er således forbundet med mange sygdomme. Som et resultat kan antioxidantmolekyler hjælpe menneskers sundhed ved at forhindre degenerative sygdomme og bremse konsekvenserne af aldring [12]. I denne undersøgelse er vi interesseret i antioxidanters evne til at fremme aktiveringen af ​​20S-proteasomet og beskytte mod oxidativ skade af det. Proteasomet bidrager faktisk til opretholdelsen af ​​cellulær homeostase ved at muliggøre cellens proces med clearance af beskadigede proteiner og den kontrollerede ødelæggelse af kortlivede proteiner [13]. Derfor kan aktivering af proteasomet med antioxidanter vise sig at være en ny anti-aldringsstrategi [14]. Desuden har dette arbejde til hensigt at udforske potentialet af phenolindholdet i resistente rødder over for FoA som aktive biologiske forbindelser.

2. Materialer og metoder

2.1. Planteprøve

Undersøgelsen blev udført for hver prøve med materiale fra 10 voksne daddelpalmekultivarer (Phoenix dactylifera L.) dyrket fra enten kontaminerede eller ikke-kontaminerede parceller beliggende ved Palmaria Figuig, det sydøstlige Marokko. Hovedrødderne (inklusive deres luftåndende rødder) har en diameter på 0,5 til 2 cm af modtagelige sorter, såsom charas Bouffegous infected (BI) eller de uinficerede (BNI). Derudover blev den FoA-resistente kultivar af Taabdount (TAAR) indsamlet, og bladene fra to lægeplanter blev brugt lokalt som en fylaktisk behandling mod FoA. Desuden blev rosmarin (R, Rosmarinus officinalis) og granatæble (G, Punica granatum L.) [15] også indsamlet i den samme uforurenede parcel, hvorved de blev analyseret og brugt som kontrol. Prøver blev udtaget i to perioder af året, i september og sidst i januar (mellem 2013 og 2015), og opbevaret hermetisk ved stuetemperatur. Da prøverne blev erhvervet fra en palmer, er de behørigt certificeret (identifikation og klassificering) af Marokkos landbrugsminister [16].

2.2. Forberedelse af ekstrakterne

Efter en omfattende vask med vand blev rødderne eller bladene tørret i skyggen og derefter malet i en blender. For hver prøve (BI, BNI, TAAR, R og G) blev 10 ml methanol tilsat til 1 g tørt materiale og derefter efterladt under omrøring i 4 timer ved stuetemperatur. Derefter blev de filtreret og inddampet ved 37 ◦C med en rotationsdamp. Den tørre ekstrakt blev anbragt i methanolopløsning ved en slutkoncentration på 10 mg/ml eller 50 mg/ml (senere brugt til at analysere biologiske aktiviteter in vitro). Tre uafhængige ekstraktioner for hver prøve blev udført til de biologiske aktivitetsassays.

2.3. Biologiske aktiviteter

2.3.1. Fenolindhold og antioxidantaktiviteter

Fremgangsmåden skitseret af Nacoulma et al. blev anvendt til at evaluere det samlede phenoliske indhold og det totale flavonoidindhold i hvert ekstrakt [17], med en endelig tilpasning af volumener ved 200 µL til brug på en mikropladelæser. Absorbansen ved henholdsvis 760 nm og 510 nm blev bestemt mod en methanol-blindprøve. Standardkalibreringskurver for gallussyre (0-300 mg/L) (y=0.0083x plus 0.9106, r2=0.978) og quercetin (0-100 mg/L) (y {{14 }}.0008x plus 0,0597, henholdsvis r2=0}.994, blev brugt.

Ved anvendelse af 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl fri radikal blev antioxidantopfangende aktivitet undersøgt (DPPH). Ved at anvende en endelig tilpasning af volumener ved henholdsvis 300 µL og 275 µL for at anvende en mikropladelæser, blev ekstrakternes kapacitet til at reducere jern (III) vurderet som beskrevet af Nacoulma et al. [17]. I sammenligning med en methanol-blindprøve blev absorbansen målt ved henholdsvis 517 nm og 700 nm. Derefter blev den frie radikal-fjernende aktivitet af hver opløsning estimeret som en procentdel af inhibering ved hjælp af følgende ligning:

En standardkalibreringskurve blev opnået under anvendelse af ascorbinsyre ({{0}}-100 mg/L) som antioxidantstandard (y=0.0014x plus 0.0875, r2=0.998).

2.3.2. FoAMyc helium væksthæmmende assay

Med en lille modifikation kan metoden beskrevet af Neri et al. [18] blev brugt til at bestemme i hvilken grad rene kemikalier hæmmede FoA-myceliumvækst. En 7-daggammel kultur af FoA havde fem millimeter mycelieskiver placeret på petriskåle med PDA-medium suppleret med de rene kemikalier anført ovenfor ved 50, 75 og 100 µg/mL. Pladerne blev inkuberet i 5 dage ved 28 ◦C. Den gennemsnitlige diameter af kolonien målt i to rette vinkler blev brugt til at vurdere FoA-myceliumvækstinhiberingen. Hver behandling bestod af tre tests med tre forskellige FoA-stammer: FoA 41818, FoA 41814 (BCCM, Belgien) og FoA Local (Palemeraie i Figuig, Marokko), samt en negativ kontrol med et medium, der ikke var blevet tilsat.

2.3.3. Cellelevedygtighed og 20S proteasomaktivitet

Normale humane dermale fibroblaster fra en {{0}}-årig mand (NHDF) (Promocell, Heidelberg, Tyskland) blev brugt, hvorved celler blev placeret med en tæthed på 100,{{3 }} celler/ml i RPMI 10 procent suppleret med 10 procent (vægt/volumen) FBS, 1 procent (vægt/volumen) L-glutamin, 100 enheder/ml penicillin og 100 µg/ml streptomycin. De blev opbevaret i hvide eller gennemsigtige 96-mikrobrøndsplader i 24 timer ved 37 ◦C i en inkubator med et befugtet miljø på 5 procent CO2. Til proteasomaktivitetsassayet, såvel som til evaluering af beskyttende virkninger på hypochlorit-induceret skade, blev celler derefter behandlet med testmaterialer (en ren forbindelse fra 5 til 50 µg/ml, positiv kontrol ved 0,5 og/eller 1 µM, og methanoliske planteekstrakter fra 15 til 50 µg/ml) i 24 timer med maksimalt 0,3 procent DMSO i slutkoncentrationen, samtidigt, uden ændringer, med hensyn til den negative kontrol. Undersøgelse af de beskyttende virkninger af TAAR-ekstrakt eller rene forbindelser på proteasomaktivitet betød, at fibroblastceller senere blev udsat for 50 µM OCl- i 35 minutter (valgt som optimal, uden celletoksicitet, oxidant-inhibitor af 20S proteasomtilstanden) [19]. Følgende eksperimentelle faser blev afsluttet med leverandørens metodologi (Proteasome-Glo Chymotrypsin-Like Cell-Based Assay, Promega Corporation, USA): For det første et samtidig cellelevedygtighedseksperiment, der anvender krystalviolet kolorimetriske eller MTT-assays, der blev udført under absolut lignende betingelser blev brugt til at normalisere dette celle-bioluminescensassay. Standardafvigelserne og den gennemsnitlige fluorescens i tredobbelte prøver fra to separate tests (n=6) vises. Alle målinger og uafhængige eksperimenter (n=2) blev udført to gange.

2.3.4. Hæmmende effekt på cellefri svampetyrosinase

For at undersøge virkningen på enzymaktiviteten blev testmaterialerne (rene antioxidanter eller methanoliske planteekstrakter) præinkuberet med enzymer i fosfatbuffer ved stuetemperatur. I en nøddeskal blev 300 mL af en 5 mM L-DOPA-opløsning ved 50 mM fosfatbuffer (pH 6,5) med eller uden testmaterialer i forskellige koncentrationer tilsat til en 96-brønd mikroplade sammen med 100 ml af en vandig opløsning af svampetyrosinase (20 enheder). I 40 minutter blev assayblandingen inkuberet ved 25 ◦C. Efter inkubation blev reaktionsblandingens dopakromproduktionsniveau målt spektrofotometrisk ved 492 nm [20]. En standardkalibreringskurve blev plottet under anvendelse af gallussyre (0-1000 µg/mL) (y=-0,087 × plus 0,45; r2=0.97). Hver uafhængig måling og eksperiment (n=2) blev udført to gange.

2.4. Analyser, isolation og strukturbelysningsprocedurer

Den formalede rod (20 g) blev ekstraheret med 200 ml methanol, omrørt i 24 timer ved omgivelsestemperatur, filtreret, centrifugeret ved 10,000× g i 15 minutter og derefter inddampet ved 35 ◦C ved hjælp af en roterende vakuum fordampningsapparat. Den rå ekstrakt blev fortyndet med 20 ml destilleret vand, genekstraheret med 2 x 20 ml ethylacetat og derefter koncentreret ved anvendelse af et roterende vakuuminddampningssystem ved 35 ◦C. Hovedproduktet blev oprenset ved præparativ HPLC under anvendelse af en Waters C18-søjle (SymmetryPrep 150 x 19 mm, 7 µm partikelstørrelse) med de samme LC-gradientbetingelser som anvendt ovenfor og en strømningshastighed på 5 ml/min. Toppen ved stuetemperatur var mellem 38,8 og 40,8 minutter, opsamlet mellem 39,2 og 40,2 minutter; den samlede volumenopsamling blev lyofiliseret for at give 27 mg af forbindelsen. MS og NMR 1H og 13C identificerede det derefter.

Analyser blev udført med et LC 1200-seriesystem med hurtig opløsning ved hjælp af en diode array-detektor (DAD), der blev brugt til overvågning af UV-spektre ved 320 nm (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA). Forbindelsesseparation blev udført på en Beckman C18-søjle (ULTRASPHERE 250 mm × 4,6 mm, 5 µm partikelstørrelse) under anvendelse af en 47 min gradient af 10 mM ammoniumacetat/0,2 procent myresyre i vand (v/v), pH 2,9 ({{ 13}}opløsningsmiddel A) og 30/70 acetonitril/methanolblanding (=opløsningsmiddel B). Strømningshastigheden var 0,8 ml/min, og opløsningsmiddel B blev hævet fra 5 til 35 procent på 45 minutter og re-ækvilibreret i 2 minutter. I en serie med DAD blev en ESI-QTOF 6520-serie (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA) brugt til højopløselige MS og målrettede tandem MS (MS/MS) analyser. Spectra blev erhvervet i negativ og høj opløsning (4 GHz) optagelsestilstande.

1H NMR og 13C NMR spektre blev optaget på et Bruker Avance 300 spektrometer, der arbejdede ved 300 MHz. Frie induktionshenfald blev behandlet med MestreNova 5.3.2 NMR-pakken fra MestreLab Research SL.

2.5. Statistisk analyse

Alle uafhængige eksperimenter blev udført i tre eksemplarer. Alle data blev præsenteret som middelværdier ± SD. Ved hjælp af version 6 af GraphPad Prism-programmet blev resultaterne analyseret ved hjælp af den ikke-parametriske Kruskal–Wallis-test sammen med Dunns multiple sammenligningstest. p-værdier 0.05 og lavere betragtes som signifikante.

3. Resultater og diskussioner

3.1. Samlet phenol- og flavonoidindhold i methanolekstrakter

På grund af deres redoxegenskaber har plantephenolforbindelser vist sig at have en række biologiske virkninger, herunder antioxidantaktivitet [21]. Tabel 1 viser det totale phenolindhold i methanolrodekstrakter (500 µg/mL) af modtagelige varianter af ghagras Bouffegous inficeret (BI) og uinficeret (BNI) af FoA eller resistent som Taabdount (TAAR). Deres koncentration varierede fra 171 ± 14 til 253 ± 47 mg gallussyreækv./g. Den højeste mængde af disse forbindelser blev fundet i BNI-sorten, mens den laveste koncentration kom fra methanolrodekstraktet af BI. Antallet af flavonoider i disse samme ekstrakter (tabel 1)) varierede fra 240 ± 25 til 406 ± 66 mg quercetinækv./g, og endnu en gang blev den højeste mængde tilskrevet BNI-sorten. Der er et tab på ca. 1/3 af mængden af ​​et samlet antal polyphenoler og flavonoider mellem uinficerede (BNI) sorter og inficerede (BI) eller resistente (TAAR) sorter over for FoA. Derfor er det bemærkelsesværdigt at kontrollere, hvordan tabet af forbindelser, beskrevet som kritiske for plantens antioxidantkapacitet, kan påvirke de biologiske aktiviteter, som vi er interesserede i.

3.2. Antioxidantpotentiale af methanoliske ekstrakter

DPPH-radikalopfangende aktivitet er en metode, der i vid udstrækning anvendes til at screene antioxidantaktiviteten af ​​planteekstrakter [22]. Denne test afgør, om antioxidantkemikalier fundet i ekstrakterne er i stand til at opfange den stabile radikale art DPPH. De eksperimentelle data (figur 1) afslører, at alle de methanoliske ekstrakter (ved 100 eller 500 µg/mL) sandsynligvis har virkningen af ​​at opfange frie radikaler med de højeste DPPH-opfangende aktiviteter observeret i TAAR-rødder (87,0) procent af DPPH-hæmning). Antioxidantaktivitet synes ikke at afhænge af tilstedeværelsen af ​​den samlede mængde polyphenoliske eller flavonoide forbindelser. Imidlertid kan den bedre aktivitet af TAAR-rodmethanoliske ekstrakter skyldes flere hydrogendonerende komponenter indeholdt i ekstraktet.

Reduktionsevnen vurderes ud fra methanolekstraktets evne til at omdanne Fe (III) til Fe (II). Denne evne til at reducere Fe (III) kan tilskrives antallet og positionen af ​​hydroxylgrupper til stede i phenoliske forbindelser og deres evne til at donere hydrogen [23]. Tabel 2 viste de reducerende aktiviteter af methanoliske ekstrakter af vores planteprøver i sammenligning med ascorbinsyre som standard. Methanolekstrakter af TAAR-rødder indeholder høje reduktioner (95 ± 1 mg ascorbinsyreækv./g), mens det laveste indhold blev opnået fra BNI-rodekstrakter (27 ± 2 mg ascorbinsyreækv./g).

En regressionsanalyse blev udført for at korrelere de opnåede resultater (korrelationskoefficient (R)). Signifikante lineære korrelationer blev fundet mellem totalt phenol- og flavonoidindhold (R {{0}}.849, p < 0.05) og mellem DPPH og reducerende effektanalyse (R=0). 816, p < 0,05), men der var ingen mellem phenol- eller flavonoidindholdet i de methanoliske ekstrakter og deres antioxidantaktiviteter. Endelig udviste alle de methanoliske ekstrakter betydelige antioxidantaktiviteter mod DPPH-radikalopfangende aktivitet og reducerende effektassay, men disse antioxidantaktiviteter synes ikke at være relateret til det totale phenol- eller flavonoidindhold. Derfor indebærer disse resultater, at en bestemt type kemikalie, snarere end mængden af ​​phenoliske eller flavonoidforbindelser, der findes i vores forskellige ekstrakter, højst sandsynligt er ansvarlig for antioxidantaktiviteten af ​​de planteekstrakter, der undersøges. Nogle få phenoliske komponenter, der tidligere er beskrevet og er meget aktive individer, kan også have en indvirkning på antioxidantaktiviteten af ​​planteekstrakter: Uafhængigt af deres koncentration kan de phenoliske forbindelser, der findes i lagret rødvin, udvise forskellige antiradikale egenskaber forbundet med deres strukturelle aspekter [ 24].

Den TAAR FoA-resistente sort viser den højeste antioxidantaktivitet blandt de forskellige sorter af daddelpalmer. Med henvisning til litteraturen kan udviklingen af ​​resistens i disse særlige daddelpalmer tilskrives en stigning i mængden af ​​forskellige positionsisomerer af caffeoylshikiminsyre [5].

3.3. Svampe Tyrosinase aktivitet

Svampetyrosinase-diphenolase-aktiviteten katalyserer oxidationen af ​​to dopaquinon-derivater, hvilket fører til melaninsyntese. Resultaterne vist i tabel 3 viser evnen af ​​forbindelser, der er til stede i methanoliske ekstrakter af TAAR, BI og BNI, til at interferere med hydroxyleringen af ​​l-DOPA gennem inhibering af svampetyrosinaseaktiviteten. Desuden viser disse resultater, at det methanoliske ekstrakt af TAAR er statistisk mere aktivt end ekstrakter af BI (p < 0.05) og BNI (p < 0,05) på svampe-tyrosinase-aktivitet. Så kapaciteten af ​​palmedadelrodekstrakter til at hæmme tyrosinaseaktivitet ser ud til at følge samme tendens som for antioxidantevnerne.

Tyrosinaser er primært forbundet med hud-, øjne- og hårpigmentering. Faktisk er tyrosinaser melanogenese-enzymer involveret i de første trin af melaninbiosyntese, og melanin er forbundet med beskyttelse mod ultraviolet (UV), sol- eller gammastråling, reduceret cellulær modtagelighed og cellevægsresistens mod hydrolytiske enzymer [20]. Omvendt kan en overproduktion af melanin spille en rolle i hudanomalier eller mere alvorlige sygdomme som cancer (fx melanom), og et overskud af dopaquinon kan føre til neurodegenerativ sygdom (fx Parkinsons sygdom) [20,25]. Desuden er melanogenese blevet rapporteret at producere hydrogenperoxid og andre ROS, der udsætter humane melanocytter for høje niveauer af oxidativ stress [26]. Adskillige naturlige antioxidantforbindelser (phenoler, flavonoider og andre) opnået fra planter hæmmede tyrosinase-phenolaseaktivitet [27,28]. Her synes TAAR-ekstrakt at indeholde en eller flere forbindelser, der er modtagelige for at hæmme hudens aldring og melanogenese.

3.4. Proteasomaktivitet af methanoliske roddaddelekstrakter

Det er blevet rapporteret, at forhøjede niveauer af 20S-proteasomet fører til øget tolerance over for oxidativt stress [13]. Derfor blev reguleringen af ​​proteasomaktivitet med rodekstrakter af BI-, BNI- og TAAR-kultivarer undersøgt. Den målte 20S-proteasomaktivitet er relateret til den chymotrypsin-lignende (CT-L) aktivitet i NHDF-ældede celler (se materialer og metoder). Som illustreret i figur 2A udviste celler behandlet med 50 µg/ml methanolekstrakter i 24 timer en signifikant aktivering af CT-L for BI- og TAAR-ekstrakter og en inhibering af BNI uden at generere mere end 30 procent af celletoksicitet. TAAR-rodekstrakt viste engagerende proteasomaktivering sammenlignet med 1µM liponsyre (Ct plus) (henholdsvis 212 procent og 248 procent). Proteasomet er et cylindrisk proteinasekompleks indeholdende en kerne af fire stablede ringe, der er ansvarlige for fjernelse af unormalt nedbrudte (26S) proteasomer og oxidativt (20S proteolytisk kernekompleks) beskadigede proteiner (Ciechanover, 1998). Som præsenteret i Hwangs arbejde [29], kan proteasom dysfunktion være en bidragyder til ældning af menneskelig hud. Faktisk har aldrende og replikative senescentceller vist sig at have nedsat proteasomaktivitet såvel som proteinniveauer af proteasomunderenheder. Det faktum, at både oxiderede og/eller beskadigede cellulære proteiner akkumuleres oftere i disse celler, tyder på, at ubiquitin-proteasom-vejen for proteinnedbrydning er impliceret i iboende ældningsprocesser. Figur 2B og C viser evnen af ​​TAAR-methanolisk ekstrakt til at beskytte NHDF-aldrede celler mod inhibering af 20S-proteasomaktiviteten med OCl-oxidant. Faktisk hæmmer OCl−oxidant med 50 procent proteasomaktiviteten af ​​kontrolcellerne (Ct), mens den højeste 20S-proteasomaktivator (liponsyre ved 1 µM, Ct plus ) med mere end 50 procent af hæmningsaktiviteten ikke formår at vende inhiberingen af 20S proteasomaktiviteten af ​​OCl−, hvorimod alle de andre testede koncentrationer (15, 50 og 75 µg/mL) af TAAR methanolisk ekstrakt ser ud til at vende denne inhibering (0 til 19 procent af inhibering). Disse resultater tyder på, at TAAR-rodekstrakter kan indeholde molekyler, der kan forsinke hudens aldring, ikke kun ved at øge proteasomaktiviteten, men også ved at modvirke de hæmmende virkninger af oxidationsmidler. Blandt disse molekyler er caffeoyl shikiminsyre mest sandsynligt til stede, såvel som andre forbindelser. Yderligere er LC-DAD-MS (MS) og NMR-analyser blevet udført for at identificere de vigtigste forbindelser i ekstrakterne og diskuteres hermed i næste afsnit.

3.5. Spektrometriske analyser

3.5.1. LC-DAD-MS Analyse af methanoliske ekstrakter

Den sammenlignende undersøgelse af daddelpalmerødder afslørede ingen kvalitative forskelle, men i stedet blev semi-kvantitative forskelle (i DAD- og MS-kromatogrammer) mellem sorterne (Figur 3A, D) noteret til en vis grad. Faktisk tillader de nuværende resultater ikke en forbindelse mellem modstanden af ​​daddelpalmer til en stigning i mængden af ​​forskellige positionelle isomerer af caffeoyl shikiminsyre, fordi den resistente kultivar (TAAR) viser den laveste relative overflod af disse forbindelser (figur 3C). Alle tre positionelle isomerer af caffeoylshikiminsyre (m/z=335.0768 med en fejl på 1,2 ppm) blev identificeret ved deres MS/MS-spektre (figur S6) med et fragment ved m/z 179,0340, svarende til et koffeinsyrefragment A (C9H7O4) og et fragment ved m/z 135,0443, svarende til decarboxyleringen af ​​koffeinsyre (C8H7O2). Ikke desto mindre synes en anden forbindelse, der ikke svarer til caffeoyl-shikiminsyrer (figur 3C), og hvis retentionstid er 29 minutter med m/z=259.0607 (eller 373.0543 for TFA-addukt), at være klart skelnet mellem forskellige kultivarer (Figur 3D). Forskellen i akkumuleringen af ​​denne forbindelse i rødderne af følsomme og resistente sorter (0,135 procent), med et forhold omkring 1:35 (fra m/z=259.06, MS-data), kunne forklare de fremtrædende biologiske aktiviteter observeret for denne rods methanolekstrakt.

【For mere information:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】