Målretning af cathepsin B af cycloastragenol øger antitumorimmuniteten af ​​CD8 T-celler via inhibering af MHC-I-nedbrydning del 2

CAG hæmmer CTSB-medieret MHC-I lysosomal nedbrydning

Glycoside af cistanche kan også øge aktiviteten af ​​SOD i hjerte- og levervæv og reducere indholdet af lipofuscin og MDA i hvert væv betydeligt, effektivt opfange forskellige reaktive oxygenradikaler (OH-, H₂O₂ osv.) og beskytte mod DNA-skader forårsaget af OH-radikaler. Cistanche phenylethanoid glycosider har en stærk opfangningsevne af frie radikaler, en højere reducerende evne end C-vitamin, forbedrer aktiviteten af ​​SOD i spermsuspension, reducerer indholdet af MDA og har en vis beskyttende effekt på spermmembranfunktionen. Cistanche-polysaccharider kan øge aktiviteten af ​​SOD og GSH-Px i erytrocytter og lungevæv fra eksperimentelt senescent mus forårsaget af D-galactose, samt reducere indholdet af MDA og kollagen i lunge og plasma, og øge indholdet af elastin, har en god rensende effekt på DPPH, forlænge hypoksitiden hos senescent mus, forbedre aktiviteten af ​​SOD i serum og forsinke den fysiologiske degeneration af lunge hos eksperimentelt senescerende mus Med cellulær morfologisk degeneration har forsøg vist, at Cistanche har den gode antioxidantevne og har potentialet til at være et lægemiddel til at forebygge og behandle hudaldringssygdomme. Samtidig har echinacosid i Cistanche en betydelig evne til at opfange DPPH-frie radikaler og har evnen til at opfange reaktive oxygenarter og forhindre frie radikal-induceret kollagen-nedbrydning, og har også en god reparationseffekt på anionskader af thymin frie radikaler.

Klik på maca ginseng cistanche havhest

【For mere information:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:8613632399501】

Tidligere undersøgelser har vist, at MHC-I hovedsageligt nedbrydes i lysosomer under tumorprogression, hvilket fører til tumorimmunescape.12 13 Vi spekulerer i, om CAG også kan regulere ekspressionen af ​​MHC-I på cellemembranen gennem dets målprotein CTSB . Vi brugte først RNA-interferens til at slå ekspressionen af ​​CTSB i MC38-cellelinjen ned, og resultaterne viste, at gen- og proteinekspressionsniveauerne af H2-k1 blev øget efter at CTSB blev dæmpet (figur 5A, B). Tilsvarende, efter knockdown og overekspression af CTSB i den humane HCT-116-cellelinje, steg mRNA- eller proteinekspressionsniveauerne af HLA-A henholdsvis (figur 5C, D) og faldt (figur 5E, F). Samtidig fandt vi, at tumorceller med høj ekspression af CTSB udtrykte lavere HLA-A niveauer, mens celler efter CTSB knockdown øgede ekspressionen af ​​HLA-A (figur 5G). Disse resultater indikerer, at CTSB udøver en negativ regulatorisk effekt på ekspressionen af ​​MHC-I. Derefter behandlede vi MC38-cellelinjen med CAG og fandt ud af, at CAG fremmede ekspressionen af ​​MHC-I og ikke havde nogen effekt på CTSB (figur 5H, I), hvilket var i overensstemmelse med de tidligere resultater af undersøgelser af tumorvæv. Desuden fandt vi ud af, at H2-Kd efter CAG-behandling samlede sig fra cellen til dens membran (figur 5J), hvilket yderligere bekræftede vores formodning om, at CAG kan hæmme nedbrydningen af ​​MHC-I-molekylet og få det til at samle sig ved cellemembran, som er nemmere at blive fanget af immunceller. For yderligere at validere vores hypotese brugte vi et Co-IP eksperiment til at undersøge, om CTSB binder til MHC-I og fører til dets nedbrydning. Vi fandt ud af, at CAG kunne inhibere bindingen af ​​CTSB og MHC i muse-MC38-celler (figur 5K), og ekspressionen af ​​MHC-I øges også signifikant. Vi observerede også det samme fænomen i humane HCT116-celler (figur 5L). For yderligere at bekræfte, om CAG fremmer MHC-I-ekspression og cellemembranaggregering gennem CTSB, transficerede vi CTSB-mutantplasmid ind i humane HCT-116-celler. Resultaterne viste, at efter transfektion af Y75A-, A77V- og G198V-mutantplasmider blev CAG's funktion med at øge CD74- og HLA-A-genekspression ødelagt (figur 5M), og MHC-I-molekyler aggregerede fra cellemembran til lysosomer (figur 5N). Dette resultat viste, at CAG hæmmede nedbrydningen af ​​MHC-I i lysosomer medieret af CTSB og fremmede reaggregeringen af ​​MHC-I til cellemembranen.

Kombinationen af ​​CAG og PD-1 antistof forbedrer effektivt CD8 plus T-cellers tumordræbende evne

Tumorimmunflugt er hovedsageligt forårsaget af tab af tumorcelleantigenpræsentationsfunktionen og hæmning af immunkontrolpunkter. Ifølge vores resultater spekulerede vi i, om CAG kan bruges i kombination med PD-1-antistoffet til at dræbe tumorer, både for at afhjælpe manglerne ved tumorantigenpræsentation og løse udtømningen af ​​CD8 plus T-celler forårsaget af PD{ {2}}/ PD-L1-sti. Således transplanterede vi MC38-kræftceller i C57BL/6-mus og dannede en kombinationsgruppe af PD-1-antistof og CAG. Resultaterne viste, at kombinationsgruppen af ​​CAG- og PD-1-antistoffer udviste bedre antitumoreffekter end CAG- og PD-1-grupperne (figur 6A-D). Desuden observerede vi en signifikant stigning i antallet af infiltrerede H2-Kd plus-celler, CD45 plus-celler og CD8 plus-celler i tumorvæv (figur 6E-G) og ekspressionen af ​​de antigenpræsentationsrelaterede gener H2-K1, Psmb8 og B2m blev også forbedret (figur 6H–J). I mellemtiden blev ekspressionen af ​​Ifng- og Tnf-gener også signifikant forbedret (figur 6K, L), og immunhistokemisk farvning viste, at ekspressionen af ​​H2-Kd steg signifikant (figur 6M).

Derfor afklarede denne undersøgelse hovedsageligt antitumormekanismen af ​​CAG, hovedsageligt ved at hæmme nedbrydningen af ​​MHC-I medieret af CTSB, fremme aggregeringen af ​​MHC-I-molekyler til cellemembranen og derefter forbedre kræftcellernes antigenpræsentationsevne. Desuden kunne det, kombineret med PD-1-antistof, dræbe kræftceller meget effektivt (figur 6N).

CAG fremmer MHC-I-ekspression i organoider af kolorektal cancer og øger dræberevnen af ​​CD8 T-celler

For yderligere at undersøge, om den farmakologiske effekt af CAG kan anvendes klinisk, blev der anvendt humane kolorektal cancerorganoider. Vi fandt, at organoider inkuberet med CAG øgede ekspressionen af ​​MHC-I (figur 7A), og ekspressionen af ​​antigen-præsenterende relaterede gener ANXA1, B2M og HLA-A steg også (figur 7B). I de tidligere eksperimenter fandt vi ud af, at CAG forstærkede den dræbende effekt af CD8 T-celler ved at fremme antigenpræsentationsekspressionen af ​​tumorceller, og effekten var overlegen, når den blev kombineret med PD-1-antistoffet. For yderligere at verificere disse resultater indsamlede vi det perifere blod fra raske mennesker og isolerede CD8 T-celler og inkuberede dem derefter med CAG-stimulerede organoider i 24 timer (figur 7C). Resultaterne viste, at sammenlignet med DMSO-gruppen drev CD8 T-celler i tumororganoider behandlet med CAG ikke længere væk, men var mere koncentreret på overfladen af ​​organoider; på samme tid var der færre CD8 T-celler, der drev væk i CAG- og PD-1-grupperne (figur 7D). Vi fandt ud af, at IFN-G udskilt af aktiverede CD8 T-celler var tilsvarende forbedret (figur 7E-H).

Hidtil har vi fundet ud af, at CAG fremmede den antigenpræsenterende ekspression af tumorer for at øge antitumoreffekten af ​​CD8 T-celler, og kombinationen af ​​CAG og PD-1-antistof havde en overlegen antitumoreffekt. Desuden analyserede vi tyktarmskræftdataene i Cancer Genome Atlas (TCGA) databasen og fandt ud af, at de antigenpræsentationsrelaterede gener HLA-A, HLA-B, HLA-C, CD74 og B2M viste lave ekspressionsniveauer i tumorer og overlevelsesraten for disse gener med lav ekspression var meget dårlig (figur 7I, J, figur 7A-H).

Derfor fandt vi ud af, at den opregulerede ekspression af HLA-A, CD74 og andre gener af CAG var gavnlig for tumorpatienter. Endvidere fandt vi, at patienter med høj ekspression af HLA-A, såvel som IFNG, havde en højere overlevelsesrate (figur 7K); patienter med høj ekspression af HLA-A og lav ekspression af PDCD1 havde også en bedre overlevelsesrate (figur 7L). Alle disse fund tyder på, at CAG ville være lægemiddelkandidat til behandling af kolorektal cancer.

DISKUSSION

Immunflugt er en kritisk årsag til, at immunsystemet ikke kan kontrollere tumorvækst, men det er stadig dårligt forstået, hvordan flugtvarianter opstår under immunterapi.34 ​​Undersøgelser har vist, at tabet af tumorantigenpræsenterende funktion, epigenetiske ændringer, ekspressionen af ​​antiapoptotisk medicin. proteiner og immunsuppressive receptorer er nært beslægtede med tumorimmunescape. 6 7 35–37 I de senere år, selv om immunterapi repræsenteret ved PD-1-antistoffet har gjort store gennembrud, har fænomenerne med lægemiddelresistens og ikke-reagerende behandling af tyktarmskræft ført til stor utilfredshed.38 39 Derfor kan det at finde kemikalier, der kan fremme tumorantigenpræsentation og synergi med PD-1-antistoffet, forhindre tumorimmunudslip bedre.

Nylige undersøgelser har fundet ud af, at aktive molekyler fra traditionel kinesisk medicin spiller en effektiv rolle i behandlingen af ​​sygdomme, såsom celastrol i behandlingen af ​​metabolisk syndrom,32 andrographolid i colitis og cancer,40 baicalin i lipidsænkende og trifolirhizin i tumorkontrol. 41 42 CAG er et aktivt molekyle i A. membranaceus og har funktionerne hjerte-kar-sygdomme, leverbeskyttelse, antibakteriel og behandling af abdominal aortaaneurisme.18 43–45 Der er dog lidt forskning vedrørende det i inden for kolorektal cancer. Derfor havde vi til formål at undersøge, om og hvordan CAG hæmmer væksten af ​​murin tyktarmskræft

Udviklingen af ​​scRNA-seq og scATAC-seq teknologier har i høj grad fremmet forskningen i sygdomme.46-48 Derfor brugte vi single-cell multi-omics teknologi til at analysere den specifikke antitumor mekanisme af CAG. Det blev fundet, at CAG fremmede den antigenpræsenterende funktion af cancerceller, og funktionerne af CD8 plus T-celler, CD4 plus T-celler og NK-celler i lymfocytter blev forbedret i varierende grad. På den anden side var Spp1 plus TAM-celler i myeloidceller mere tilbøjelige til transformationen af ​​det inflammatoriske respons, og hypoxisignalet blev signifikant hæmmet efter CAG-behandling. Disse resultater er i overensstemmelse med resultaterne rapporteret i tidligere undersøgelser, hæmning af Spp1 plus TAM hypoxisignal og forøgelse af inflammatorisk respons kan hæmme væksten af ​​tumorer.49 Derfor spekulerede vi i, at CAG fremmer den antigenpræsenterende funktion af cancerceller, så de tilsvarende CD8 plus T-celler og makrofager kan genkende og dræbe kræftceller effektivt. Vi bekræftede yderligere vores formodning med in vitro eksperimenter. Flowcytometrianalyse viste også, at CAG øger infiltrationen af ​​CD45-immunceller, herunder CD8 plus T-celler og NK-celler. Derudover er evnen af ​​IFN- og GZMB udskilt af CD8 plus T-celler også signifikant forbedret af CAG. For at bestemme, om CD8 T-celler eller makrofager spiller en stor rolle i antitumoreksperimentet med CAG, testede vi vores formodning med transplanterede tumorer i nøgne mus. På grund af udviklingsforstyrrelsen af ​​T-celler forårsaget af immunisering af thymus hos nøgne mus, mens makrofagernes funktion stadig eksisterer. Resultaterne viste imidlertid, at CAG ikke effektivt kunne dræbe transplanterede tumorer i nøgne mus. Disse resultater tyder på, at CAG kan øge den dræbende effekt af CD8 plus T-celler på tumorer ved at fremme antigenpræsentationen af ​​cancerceller.

Dernæst undersøgte vi, hvordan CAG fremmer antigenpræsentationen af ​​kræftceller ved hjælp af TRAP-teknologi for at finde målproteinet for CAG'en for at forklare fænomenet. CTSB er en cysteinhydrolase, som kan interagere med andre proteiner og nedbrydes i lysosomer.50 Vi spekulerede i, at den kunne interagere med antigenpræsentationsrelaterede proteiner for at forårsage dens nedbrydning. Og det er blevet rapporteret, at MHC-I-molekylet nedbrydes i lysosomer, hvilket resulterer i tab af tumorcelleantigenpræsenterende funktion.13 Derfor havde vi mistanke om, at CTSB kunne binde til MHC-I-molekylet og forårsage dets nedbrydning i lysosomer. Vi bekræftede denne hypotese, at CAG kunne forhindre nedbrydning af MHC-I ved at hæmme interaktionen mellem CTSB og MHC-I. Organoider er en effektiv model til at studere udviklingen af ​​tumorsygdomme og har stor betydning for at fremme behandlingen af ​​kliniske tumorpatienter ved at undersøge lægemidlers virkning på væksten af ​​tumororganoider og den specifikke mekanisme.51 52 Gennem vores eksperimenter, vi fandt, at kombineret med CAG og PD-1 antistoffer har en god evne til at hæmme tumorvækst, hvad enten det er i musetransplanterede tumormodeller eller humane tyktarmskræftorganoider. Manglen på denne undersøgelse er det begrænsede antal xenograftprøver og patientorganoider. Selvom der er lignende konklusioner mellem murine modeller og menneskelige organoider, er yderligere undersøgelse nødvendig.

Her beskriver vi den specifikke mekanisme, hvormed CAG hæmmer væksten af ​​tyktarmskræft, hovedsageligt ved at hæmme nedbrydningen af ​​MHC-I medieret af CTSB, for at forbedre antitumorimmuniteten af ​​CD8 plus T-celler. På den ene side fremmer det antigenpræsentationen af ​​kræftceller, og på den anden side lindrer det udtømningstilstanden af ​​CD8 plus T-celler. De eksperimentelle resultater bekræftede også, at kombinationen af ​​CAG og PD-1-antistof havde en overlegen antitumoreffekt.

Som konklusion fremhæver disse resultater, så vidt vi ved, at CTSB-nedregulering giver antitumorimmunitet. Vores forskning forklarede også den specifikke mekanisme af CAG til at hæmme væksten af ​​kolorektal cancer. Det er værd at nævne, at CAG har et stort potentiale som sundhedsprodukt på det europæiske og amerikanske marked. Vores forskningsresultater giver en potentiel anticancer-lægemiddelkandidat.

Forfattertilhørsforhold

1 State Key Laboratory of Pharmaceutical Biotechnology, Chemistry and Biomedicine Innovation Center (ChemBIC), Institut for Bioteknologi og Farmaceutiske Videnskaber, School of Life Sciences, Nanjing University, Nanjing, Jiangsu, Kina

2 Bioinformatik Institut for Prædiktiv Medicin, Institut for Biomedicinsk Informatik, Cellesignaltransduktionslaboratorium, School of Basic Medical Sciences, Henan University, Kaifeng, Henan, Folkerepublikken Kina

3 Jiangsu Collaborative Innovation Center for Traditionel Kinesisk Medicin i Forebyggelse og Behandling af Tumor, The First Clinical College, Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing, Jiangsu, Kina

4 Department of General Surgery, Shanghai Jiao Tong University tilknyttede Sixth People's Hospital, Shanghai, Folkerepublikken Kina

5 Jiangsu Provincial Key Laboratory of Drug Metabolism and Pharmacokinetics, State Key Laboratory of Natural Medicine, China Pharmaceutical University, Nanjing, Jiangsu, Kina

6 Genergy Bio-technology (Shanghai) Co. Ltd, Shanghai, Kina

7 Jiangsu Key Laboratory of New Drug Research and Clinical Pharmacy, Xuzhou Medical University, Xuzhou, Jiangsu, Kina

BidragydereYS, HC og DS udtænkte dette projekt og designede undersøgelsen. GD, BW og XS udførte eksperimenterne og analyserede dataene. LZ og HC analyserede scRNA-seq- og scATAC-seq-dataene. DS og HC gav metodisk støtte og konceptuel rådgivning. YS og GD skrev manuskriptet. YS har som garant det fulde ansvar for arbejdet og/eller gennemførelsen af ​​undersøgelsen og har ret til at få adgang til dataene og kontrollere frigivelsesbeslutningen.

FinansieringDette arbejde blev støttet af National Key Research and Development Project (2017YFC1700602), National Natural Science Foundation of China (nr. 81930117, 81872877, 82074318), Priority Academic Program Development of Jiangsu Higher Education Institutions and Mountain-Climbing University Project of Nanjing University Project of Nanjing University (N/A), Natural Science Foundation Project of Shanghai, videnskabelig og teknologisk innovationshandlingsplan (nr. 22ZR1447400).

Konkurrerende interesserIngen erklæret.

Patientsamtykke til offentliggørelseIkke anvendelig.

EtikgodkendelseUndersøgelsen af ​​organoider i tyktarmskræft hos mennesker blev godkendt af forsknings- og etisk komité for det tilknyttede hospital i Nanjing University of Chinese Medicine og overholdt alle relevante etiske regler (2020-NL-094- 02). Deltagerne gav informeret samtykke til at deltage i undersøgelsen, før de deltog

Herkomst og peer reviewIkke idriftsat; eksternt peer-reviewed.

Erklæring om datatilgængelighedAlle data, der er relevante for undersøgelsen, er inkluderet i artiklen eller uploadet som online supplerende information.

Supplerende materialeDette indhold er leveret af forfatteren/forfatterne. Det er ikke blevet undersøgt af BMJ Publishing Group Limited (BMJ) og er muligvis ikke blevet peer-reviewet. Eventuelle synspunkter eller anbefalinger, der diskuteres, er udelukkende forfatterens/forfatternes og er ikke godkendt af BMJ. BMJ fraskriver sig ethvert ansvar og ansvar som følge af enhver tillid til indholdet. Hvor indholdet omfatter oversat materiale, garanterer BMJ ikke for nøjagtigheden og pålideligheden af ​​oversættelserne (herunder men ikke begrænset til lokale regler, kliniske retningslinjer, terminologi, lægemiddelnavne og lægemiddeldoseringer), og er ikke ansvarlig for fejl og/ eller udeladelser som følge af oversættelse og tilpasning eller andet.

Åben adgangDette er en artikel med åben adgang distribueret af Creative Commons Attribution Non-Commercial (CC BY-NC 4.0)-licensen, som tillader andre at distribuere, remixe, tilpasse, bygge videre på dette værk ikke-kommercielt og licensere deres afledte værker på andre vilkår, forudsat at det originale værk er korrekt citeret, at der gives passende kredit, eventuelle ændringer er angivet, og brugen er ikke-kommerciel.

REFERENCER

1 Siegel RL, Miller KD, Fuchs HE, et al. Kræftstatistik, 2022. CA A Cancer J Clinicians 2022;72:7–33.

2 Kuipers EJ, Grady WM, Lieberman D, et al. Kolorektal cancer. Nat Rev Dis Primers 2015;1:15065.

3 Biller LH, Schrag D. Diagnose og behandling af metastatisk kolorektal cancer. JAMA 2021;325:669–85.

4 Oliveira AF, Bretes L, Furtado I. Gennemgang af PD-1/PD-L1-hæmmere ved metastatisk dMMR/MSI-H kolorektal cancer. Front Oncol 2019;9:396.

5 Das M, Zhu C, Kuchroo VK. Tim-3 og dens rolle i regulering af antitumorimmunitet. Immunol Rev 2017;276:97-111.

6 Jiang X, Wang J, Deng X, et al. Tumormikromiljøets rolle i PD-L1/PD-1-medieret tumorimmunescape. Mol Cancer 2019;18:10.

7 Dhatchinamoorthy K, Colbert JD, Rock KL. Kræftimmunundvigelse gennem tab af MHC klasse I-antigenpræsentation. Front Immunol 2021;12:636568.

8 Zhu Y, Qian Y, Li Z, et al. Neoantigen-reaktiv T-celle: en spirende rolle i adoptiv cellulær immunterapi. MedComm 2021;2:207–20.

9 Vries JE, Yssel H, Spits H. Samspil mellem TCR/CD3-komplekset og CD4 eller CD8 i aktiveringen af ​​cytotoksiske T-lymfocytter. Immunol Rev 1989;109:119-42.

10 Huang J, Meyer C, Zhu C. T-celleantigengenkendelse ved cellemembranen. Mol Immunol 2012;52:155-64.

11 Allison JP. CD28-B7-interaktioner i T-celleaktivering. Curr Opin Immunol 1994;6:414-9.

12 Liu X, Bao X, Hu M, et al. Hæmning af PCSK9 forstærker immun checkpoint-terapi for cancer. Nature 2020;588:693–8.

13 Yamamoto K, Venida A, Yano J, et al. Autofagi fremmer immununddragelse af bugspytkirtelkræft ved at nedbryde MHC-I. Natur 2020;581:100–5.

14 Chen X, Zhao Y, Luo W, et al. Celastrol inducerer ROS-medieret apoptose via direkte målretning mod peroxiredoxin-2 i mavekræftceller. Theranostics 2020;10:10290–308.

15 Kong N, Chen X, Feng J, et al. Baicalin inducerer ferroptose i blærekræftceller ved at nedregulere FTH1. Acta Pharm Sin B 2021;11:4045–54.

16 Deng G, Chen W, Wang P, et al. Hæmning af NLRP3-inflammasommedieret pyroptose i makrofager af cycloastragenol bidrager til forbedring af imiquimod-induceret psoriasis-lignende hudbetændelse hos mus. Int Immunopharmacol 2019;74:105682.

17 Li M, Li S-chun, Dou B-kai, et al. Cycloastragenol opregulerer SIRT1-ekspression, dæmper apoptose og undertrykker neuroinflammation efter hjerneiskæmi. Acta Pharmacol Sin 2020;41:1025-32.

18 Chen C, Ni Y, Jiang B, et al. Anti-aging derivater af cycloastragenol produceret ved biotransformation. Nat Prod Res 2021;35:2685–90.

19 Fauce SR, Jamieson BD, Chin AC, et al. Telomerase-baseret farmakologisk forbedring af den antivirale funktion af human CD8 plus T-lymfocytter. J Immunol 2008;181:7400-6.

20 Wang B, Wang Y, Sun X, et al. CXCR6 er påkrævet for antitumoreffektiviteten af ​​intratumorale CD8 plus T-celler. J Immunother Cancer 2021;9:e003100.

21 Butler A, Hoffman P, Smibert P, et al. Integrering af enkeltcellede transkriptomiske data på tværs af forskellige forhold, teknologier og arter. Nat Biotechnol 2018;36:411–20.

22 Yu G, Wang LG, Han Y, et al. clusterProfiler: en R-pakke til sammenligning af biologiske temaer blandt genklynger. OMICS: A Journal of Integrative Biology 2012;16:284–7.

23 Stuart T, Butler A, Hoffman P, et al. Omfattende integration af enkeltcellede data. Cell 2019;177:1888–902.

24 Granja JM, Corces MR, Pierce SE, et al. ArchR er en skalerbar softwarepakke til integrativ enkeltcellet kromatintilgængelighedsanalyse. Nat Genet 2021;53:403–11.

25 Korsunsky I, Millard N, Fan J, et al. Hurtig, følsom og præcis integration af enkeltcellede data med harmoni. Nat Methods 2019;16:1289–96.

26 Trapnell C, Cacchiarelli D, Grimsby J, et al. Dynamikken og regulatorerne af celleskæbnebeslutninger afsløres af den pseudo-temporelle rækkefølge af enkelte celler. Nat Biotechnol 2014;32:381–6.

27 Qiu X, Hill A, Packer J, et al. Enkeltcellet mRNA kvantificering og differentiel analyse med folketælling. Nat Methods 2017;14:309–15.

28 Qiu X, Mao Q, Tang Y, et al. Omvendt grafindlejring løser komplekse enkeltcellede baner. Nat Methods 2017;14:979–82.

29 Patel AP, Tirosh I, Trombetta JJ, et al. Enkeltcellet RNA-seq fremhæver intratumoral heterogenitet i primært glioblastom. Science 2014;344:1396–401.

30 Subramanian A, Tamayo P, Mootha VK, et al. Gensætberigelsesanalyse: en vidensbaseret tilgang til fortolkning af genom-brede ekspressionsprofiler. Proc Natl Acad Sci USA 2005;102:15545–50.

31 Tian Y, Wan N, Ding M. Chemoproteomics kortlægger glykolytiske mål nogle i cancerceller. bioRxiv 2020.

32 Zhu Y, Wan N, Shan X, et al. Celastrol er rettet mod adenylylcyclase-associeret protein 1 for at reducere makrofag-medieret inflammation og lindre fedtfattig diæt-induceret metabolisk syndrom hos mus. Acta Pharm Sin B 2021;11:1200–12.

33 Driehuis E, Kretzschmar K, Clevers H. Etablering af patientafledte cancerorganoider til lægemiddelscreening. Nat Protoc 2020;15:3380–409.

34 Lin KY, Lu D, Hung CF, et al. Ektopisk ekspression af vaskulært celleadhæsionsmolekyle-1 som en ny mekanisme for tumorimmununddragelse. Cancer Res 2007;67:1832-41.

35 Kriegsman BA, Vangala P, Chen BJ, et al. Hyppigt tab af IRF2 i cancere fører til immunundvigelse gennem nedsat MHC klasse I-antigenpræsentation og øget PD-L1-ekspression. Ji 2019;203:1999-2010.

36 Gomez S, Tabernacki T, Kobyra J, et al. Kombinerer epigenetisk og immunterapi for at overvinde kræftresistens. Semin Cancer Biol 2020;65:99-113.

37 Mandal R, Barrón JC, Kostova I. Caspase-8: det tveæggede sværd. Biochim Biophys Acta Rev Cancer 1873;2020:188357.

38 Qin S, Xu L, Yi M, et al. Nye immuncheckpoint-mål: bevæger sig ud over PD-1 og CTLA-4. Mol Cancer 2019;18:155.

39 Lizardo DY, Kuang C, Hao S, et al. Immunterapi-effektivitet på mismatch reparationsmanglende kolorektal cancer: fra bænk til sengekant. Biochim Biophys Acta Rev Cancer 2020;1874:188447.

40 Guo W, Sun Y, Liu W, et al. Små molekyle-drevet mitofagi-medieret NLRP3-inflammasomhæmning er ansvarlig for forebyggelsen af ​​colitis-associeret cancer. Autophagy 2014;10:972–85.

41 Dai J, Liang K, Zhao S, et al. Chemoproteomics afslører, at baicalin aktiverer hepatisk CPT1 for at lindre diætinduceret fedme og hepatisk steatose. Proc Natl Acad Sci USA 2018;115:E5896–905.

42 Sun D, ​​Tao W, Zhang F, et al. Trifolirhizin inducerer autofagi-afhængig apoptose i tyktarmskræft via AMPK/mTOR-signalering. Sig Transduct Target Ther 2020;5:174.

43 Gu M, Zhang S, Zhao Y, et al. Cycloastragenol forbedrer hepatisk steatose ved at aktivere farnesoid X-receptorsignalering. Farmakologisk Forskning 2017;121:22–32.

44 Wang J, Wu ML, Cao SP, et al. Cycloastragenol forbedrer eksperimentel hjerteskade hos rotter ved at fremme myokardieautofagi via inhibering af AKT1-RPS6KB1-signalering. Biomed Pharmacother 2018;107:1074–81.

45 Wang Y, Chen C, Wang Q, et al. Hæmmende virkninger af cycloastragenol på abdominal aortaaneurisme og dets relaterede mekanismer. Br J Pharmacol 2019;176:282–96.

46 Lee JJ, Bernard V, Semaan A, et al. Belysning af tumor-stromal heterogenitet og ligand-receptor-interaktomet ved enkeltcellet transkriptomik i real-world pancreascancer biopsier. Clin Cancer Res 2021;27:5912–21.

47 Zhang L, Li Z, Skrzypczynska KM, et al. Enkeltcelleanalyser informerer om mekanismer for Myeloid-Targeted terapier i tyktarmskræft. Cell 2020;181:442–59.

48 Gao J, Wu Z, Zhao M, et al. Allosterisk hæmning afslører SHP2-medieret tumorimmunsuppression i tyktarmskræft ved enkeltcellet transkriptomik. Acta Pharm Sin B 2022;12:149–66.

49 Wei J, Chen Z, Hu M, et al. Karakteriserende intercellulær kommunikation af pan-cancer afslører SPP1 plus tumorassocieret makrofag udvidet i hypoxi og fremmer cancer malignitet gennem enkeltcellede RNA-Seq Data. Front Cell Dev Biol 2021;9:749210.

50 Chen X, Yu C, Kang R, et al. Cellulære nedbrydningssystemer i ferroptose. Celledød Differ 2021;28:1135–48.

51 Puschhof J, Pleguezuelos-Manzano C, Martinez-Silgado A, et al. Intestinale organoide samkulturer med mikrober. Nat Protoc 2021;16:4633–49.

52 Lee SH, Hu W, Matulay JT, et al. Tumorudvikling og lægemiddelrespons i patientafledte organoide modeller af blærekræft. Cell 2018;173:515–28.

【For mere information:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:8613632399501】