Synergistisk anti-hudpigmenteringseffekt af cistanche-phenylethanoid glycosider og glabridin
Jan 14, 2025
Abstrakt for at undersøge det synergistiskeEffekt af CistanchePhenylethanolside (PHGS) og glabridin (GLA) mod hudpigmentering, masseforholdet mellem PHG'er og GLA blev screenet af in vitro tyrosinaseinhiberingseksperiment, 1, 1- diphenyl -2- Trinitrophenylhydrazine (DPPH) og 2,2-diazo-bis(3-ethyl-benzothiazole-6-sulfonic acid diammonium cation (ABTS+) free radical scavenging experiments. The UVB-induced hypopigmentation model of B16F10 was established, and the inhibition of melanin production was evaluated using tyrosinase activity and melanin content som indekser.
DeinflammatoriskModel af HACAT-celler induceret af lipopolysaccharid (LPS) blev etableret, og den antiinflammatoriske virkning af lægemidlet blev evalueret ved at hæmme frigivelsen af interleukin -6 (IL -6) og tumor nekrosefaktor- (TNF-). Den oxidative stressmodel af HACAT -celler induceret af azodiisobuamidinhydrochlorid (AAPH) blev yderligere etableret, og den forbedrede aktivitet af superoxiddismutase (SOD) og katalase (CAT) blev anvendt som indekser til evaluering af antioxidanteffekten af lægemidlet. Det optimale masseforhold mellem PHG'er og GLA blev bestemt af ovenstående tre cellemodeller. Resultaterne viste, at vandige opløsninger af PHGS/GLA (1∶1), PHGS/GLA (5∶1) og PHGS/GLA (10∶1) fremstillet med M (PHGS) ∶M (GLA) =1 ∶1, 5∶1, 10∶1 udviste god inhibitive og syngeristiske virkninger på tyrosinase -aktivitet og antioxidant aktivitet. Inhiberingshastighederne for PHGS/GLA (1∶1),
PHGS/GLA (5∶1) og PHGS/GLA (1 0 ∶1) vandige opløsninger med en massekoncentration på 0,4 g/L var henholdsvis 94,37%, 92,93%og 88,06%. Rensningshastighederne for henholdsvis DPPH -frie radikaler var henholdsvis 89,44%, 88,72,%og 88,10%.
Rensningshastighederne for ABTS+ frie radikaler var henholdsvis 1 0 0,13%, 100,0,1%og 99,87%. Når massekoncentrationen af PHGS/GLA var 25 ug/ml, PHGS/GLA (1∶1), viste PHGS/GLA (5∶1) og PHGS/GLA (10∶1) vandige opløsninger ingen cytotoksicitet for B16F10 og HACAT -celler. Inhiberingen af tyrosinaseaktivitet i PHGS/GLA (1 ∶1) vandig opløsning blev stærkere (tyrosinaseaktivitet 23,80%), og melaninindholdet (30,90%) blev signifikant reduceret. PHGS/GLA (1∶1) vandig opløsning viste den bedste inhiberingseffekt på IL -6 og TNF-frigivelse og evnen til at forbedre aktiviteten af SOD og CAT. Kombinationen af PHG'er og GLA viste god synergistisk ydeevne, overlegen A til enkelt lægemiddel og højere end PHGS/ GLA (5∶1) og PHGS/ GLA (10∶1) vandig opløsning. Kombinationen af PHG'er og GLA spillede en synergistisk rolle i forbedring af hudpigmentering ved at hæmme melaninproduktion og antiinflammatoriske og antioxidantvirkninger.
Nøgleord cistanche phenylethanoid glycosides; glabridin; Synergistiske effekter; Anti-hudpigmentering; Anti-oxidation; Antiinflammatorisk; Lægemiddelmaterialer
Cistanche Phenylethanol -side til hvidtning
Støttende service af Wecistanche-den største cistanche-eksportør i Kina:
E -mail: wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/tlf: +86 15292862950
For mere information om potentielle rabatter, tøv ikke med at kontakte vores kundeserviceteam. De hjælper dig gerne!
Hudpigmentering er en hudsygdom forårsaget af faktorer som skade, hudbetændelse og ultraviolet stråling [1-2]. Disse faktorer kan føre til en unormal stigning i melanin, hvilket igen skaber problemer som Chloasma, fregner og postinflammatorisk hyperpigmentering (PIH) [3-4], der påvirker folks mentale tilstand og livskvalitet. På nuværende tidspunkt fokuserer behandlingen af hudpigmentering hovedsageligt på at hæmme tyrosinase, et nøgleenzym i dannelsen af melanin [5-6].
Den seneste forskning [7-8] viser, at hudpigmentering afhænger af den tætte forbindelse mellem keratinocytter og melanocytter i epidermis. Når de frie radikaler og inflammatoriske faktorer frigivet af keratinocytter kommer i kontakt med melanocytter, vil de inducere en stigning i tyrosinaseaktivitet, hvilket fører til en stigning i melaninindhold. De vil også fremskynde melanintransport og få melanin til at afsætte på overfladen af huden. Derfor kræver behandling af hudpigmentering en række forskellige mål, såsom hæmning af melaninproduktion, antiinflammatorisk og antioxidation.
På nuværende tidspunkt, selv om traditionelle lægemiddelpræparater, såsom hydroquinon og hydroquinon, har visse effekter i behandlingen af hudpigmentering, er deres virkningsmetoder relativt enkelt og kan give bivirkninger [9-10]. Til sammenligning er naturlige medicin naturlige og milde i kraft og anerkendes i stigende grad og rost af forbrugere [11-12]. Især kan kombinationen af flere planteekstrakter [13-14] ikke kun hæmme produktionen af melanin, men har også flere effekter, såsom antiinflammatoriske og antioxidantvirkninger, hvilket giver nye ideer og metoder til behandling af hudpigmentering.
Cistanche Deserticola MA har unik medicinsk værdi og er kendt som "Desert Ginseng". Undersøgelser har fundet, at den karakteristiske ingrediens-phenylethanoid glycosid indeholdt i cistanche har god antioxidantaktivitet [15] og antiinflammatoriske virkninger [16], og har også en bestemt tyrosinaseinhiberende virkning [17]. Glycyrrhizin er en flavonoidkomponent i glycyrrhiza glabra L., som har en kraftig hvidningseffekt og er kendt som "whitening guld" [18]. Traditionel kinesisk medicinbehandling af hudpigmentering begynder normalt at fbystrengene milten og nyre, rydde varme og afgifter op og genopfylder Qi og blod [19].
Phenylethanoliske glycosider af cistanche ørkener kan genopfylde nyre yang og fordel essensen og blod, mens glycyrrhiza glabra kan genopfylde milt og qi, rydde væk varme og afgiftende. De to kan arbejde sammen for at modstå pigmentering. Kombinationen af phenylethanoidc -glycosider af Cistanche Deserticola og glabridin kan modstå hudpigmentering fra flere dimensioner og mål, beskytte mod ultraviolette stråler i hele båndet, synergistisk inhiberer tyrosinaseaktivitet og reducerer melaninproduktion og kan også reducere frie radikaler og inflammatoriske faktorer, reducere hud og oxidativ stress og regulere melaninproduktion og kan også reducere frie radikaler og inflammatoriske faktorer, reducere hud og oxidativ stress og regulere melaninproduktion. Der er dog få rapporter i litteraturen om den synergistiske inhibering af hudpigmentering ved phenylethanoid glycosider af cistanche ørkenericola og glabridin.
Dette papir har til hensigt at undersøge, om der er en synergistisk virkning mellem pphenylethanoidglycosider af cistanche -ørkener (PHG'er) og glabridin (GLA) gennem in vitro -biokemiske eksperimenter og etablering af 3 cellemodeller, og opnå den optimale forbindelse masseforhold for en syngistisk effekt. Det forventes at yde teoretisk støtte og praktisk vejledning til udvikling af naturlige plantehudplejeprodukter og hjælpe med at fremme hudplejeindustrien til at udvikle sig i en mere naturlig, sund og effektiv retning.
Hvor: en reaktion er absorbansen af prøveopløsning, L-tyrosinopløsning, PBS og tyrosinaseopløsning; En reaktionskontrol er absorbansen af prøveopløsning, L-tyrosinopløsning, N og PBS-opløsning; Et tomt er absorbansen af L-tyrosinopløsning, PBS-opløsning og tyrosinaseopløsning; En tom kontrol er absorbansen af L-tyrosin- og PBS-opløsninger.
'
1.3.2 Bestemmelse af DPPH -frie radikale rensningsevne
Først skal du veje nøjagtigt {{0}}. 0 197 g ({{7}. mmol/l. Derefter blev PHGS og GLA fremstillet til PHGS -ethanolopløsning og GLA -ethanolopløsning med massekoncentrationer af 0. 0 01, 0,01, 0,1, 0,4, 0,8, 1,2, 1,6, 2,0 mg/ml ved anvendelse af 50% ethanol i volumen, og VC Ethanol -opløsningen var fremstillet på den samme måde. Derefter blev PHGS -ethanolopløsning og GLA -ethanolopløsning blandet jævnt ved M (PHGS -opløsning) ∶ M (GLA -opløsning)=40 ∶1, 20∶1, 10∶1, 5∶1, 1∶1, 1∶5, 1∶10, 1∶20, 1∶40 til opnåelse af 9 slags PHGS/GLA ethanol -løsninger med forskellige masseforhold, som blev registreret (40∶1) ~ PHGS/GLA (1∶40) Ethanol -opløsninger. Tilsæt til sidst 100 μl forskellige prøveløsninger og 100 μl DPPH -arbejdsopløsning til 96- godt plade, bland godt og hold dig væk fra lys ved stuetemperatur i 30 minutter. Mål absorbansen ved 517 nm med en enzymmarkør. VC blev anvendt som den positive kontrol, og hvert eksperiment blev gentaget 3 gange. Beregn DPPH -frie radikale rensningshastighed (%) i henhold til formlen (2).
DPPH FREE ROVIDAL SCAVENGING RATE/%=(1 −𝐴1 - 𝐴3𝐴2) × 100 (2) hvor: A1 er absorbansen af prøveopløsning + DPPH -arbejdsopløsning; A2 er absorbansen af 50% ethanol efter volumen + DPPH -arbejdsopløsning; A3 er absorbansen af prøveopløsning + 50% ethanol efter volumen.
1.3.3 Bestemmelse af ABTS+ fri radikal rensningsevne
Først skal du veje 1 g (1,82 mmol) ABT'er og opløse den i deioniseret vand for at fremstille en ABTS -arbejdsopløsning med en slutkoncentration på 7,4 mmol/L; Vej 0. 5 g kaliumpersulfat og opløs det i deioniseret vand for at fremstille en kaliumpersulfatarbejdsopløsning med en slutkoncentration på 2,6 mmol/L; Bland ABTS -arbejdsløsningen og kaliumpersulfat -arbejdsløsningen i lige store mængder, og reager i 12 timer i mørket for at forberede ABTS+ -arbejdsløsningen. Derefter fremstiller GLA -ethanolopløsning i henhold til metoden i afsnit 1.3.2 PHGS -ethanolopløsning, GLA -ethanolopløsning, N og VC -ethanolopløsning samt PHGS/GLA (40∶1) ~ PHGS/GLA (1∶40) ethanolopløsning.
Tilsæt til sidst 40 μl af forskellige prøveløsninger og 160 μl ABTS+ arbejdsopløsning til 96- brøndpladen, bland godt, reagere ved stuetemperatur i mørke i 6 minutter og måle absorbansen af opløsningen ved 734 nm ved hjælp af en ELISA -læser. Beregn ABTS+ frie radikale rensningshastighed (%) i henhold til formlen (3).
Hvor: A1 er absorbansen af prøveopløsning + ABTS + arbejdsopløsning; A2 er absorbansen af deioniseret vand + ABTS + arbejdsopløsning; A3 er absorbansen af prøveopløsning + deioniseret vand.
1,4 celleeksperiment
1.4.1 Cellekultur
Efter at B16F10- og HACAT-celler er genoplivet, inokuleres de til DMEM-højglukosemedium (indeholdende en blanding af 10% føtalt bovint serum og 1% penicillin-streptomycin med en massefraktion) og dyrket i en inkubator ved 37 grader, 5% CO2 volumenfraktion og 70% fugtighed i 24 timer. Cellevækststatus observeres under et mikroskop, og mediet erstattes eller subkultureres i henhold til cellevækststatus.
1.4.2 Eksperimentel gruppering
B16F10- og HACAT -celler i den logaritmiske vækstfase inokuleres i 96- godt plader med passende celletal og dyrket i 24 timer for at lade cellerne klæbe til væggen. Prøveopløsninger af forskellige massekoncentrationer fremstilles ved anvendelse af et DMEM -kulturmedium. Den normale gruppe, modelgruppe, lavdosis PHG'er (125 ug/ml) gruppe, medium-dosis PHG'er (250 ug/ml) gruppe, højdosis PHG'er (500 ug/ml) gruppe, høj-dosis GLA (25 UG/ML) gruppe (6,25 ug/ml) gruppe, og pHGS/GLA (12,5 ug/ml) gruppe, og pHGS/GLA (12,5 ug/ml) gruppe, og pHGS/GLA (1∶1) gruppe, og pHGS/GLA (1∶1) gruppe, højdosise GLA (25 UG/ML) og PHGS/GLS/GLA (1∶1) Group, Group, Group,, Group, Group, Group, Group, Group, High-dosis GLA (25 UG/ML) og PHGS/PHGS/GLS/GLS/GLS/GLA (1∶1))), PHGS/GLA (5∶1) gruppe og PHGS/GLA (10∶1) kulturmediumgruppe blev oprettet.
I den UVB-inducerede B16F10-pigmenteringsmodel blev modelgruppecellerne tilsat med 30 μL PBS (pH =7. 4) og placerede 3 cm direkte under UVB-irradiatoren i 110 s; Den eksperimentelle gruppe blev forbehandlet med 100 μl prøvopløsninger af forskellige massekoncentrationer i 1 time, tilsat derefter med 30 μL PBS og placeret 3 cm direkte under UVB -bestråling i 110 sekunder; Den normale gruppe anvendte altid dmem-kulturmedium med højt glukose; Den tomme gruppe blev ikke inokuleret med celler, men i stedet med en lige stor mængde kulturmedium.
I den LPS-inducerede HACAT-celleinflammationsmodel blev modelgruppen dyrket med PBS-opløsning af LPS i en koncentration på 20 ug/ml i 24 timer; Den eksperimentelle gruppe blev forbehandlet med 100 μl prøveopløsninger af forskellige massekoncentrationer i 24 timer og tilsat derefter med 20 ug/ml LPS -opløsning i 24 timer; Den normale gruppe anvendte altid DMEM-medium med højt glukose; Den tomme gruppe blev ikke inokuleret med celler, men med en lige stor mængde kulturmedium.
I den aaph-inducerede HACAT-celle oxidative stressmodel blev modelgruppen dyrket med 100 ml AAPH (2,5 mmol) opløsning i en koncentration på 25 mmol/L i 24 timer; Den eksperimentelle gruppe blev forbehandlet med 100 μl prøveopløsninger af forskellige massekoncentrationer i 24 timer og tilsat derefter med AAPH -opløsning i en koncentration på 25 mmol/L i 24 timer; Den normale gruppe anvendte altid DMEM-medium med højt glukose; Den tomme gruppe blev ikke inokuleret med celler, men med en lige stor mængde kulturmedium.
Hver gruppe blev oprettet med 3 replikatbrønde og dyrket i en inkubator ved 37 grader, 5% CO2 -volumenfraktion og 70% fugtighed.
1.4.3 Cytotoksicitetsassay
CCK8 -metoden blev anvendt til at bestemme cytotoksicitet. B16F1 0 og HACAT -celler i den logaritmiske vækstfase blev fordøjet med 0,25% trypsin i 3 minutter. Efter at fordøjelsen blev afsluttet, blev kulturmediet gentagne gange sprængt for at fremstille en cellesuspension med en densitet på 1 × 104 celler/ml. Cellerne blev jævnt inokuleret i en 96- brøndplade, 100 μl pr. Brønd, og PBS blev tilsat til brøndene omkring cellerne. Efter at cellerne klæbte sig til væggen blev der tilsat forskellige massekoncentrationer af prøveopløsningen, 3 replikatbrønde pr. Gruppe og dyrket i en inkubator ved 37 grader, 5% CO2 -volumenfraktion og 70% fugtighed for 24, 48 og 72 timer, og derefter blev opløsningen kasseret. Alle grupper blev tilsat med 100 μL komplet kulturmedium indeholdende 10% CCK8 volumenfraktion og inkuberet i 60 minutter. Absorbansen af opløsningen ved 450 nm blev målt under anvendelse af en ELISA -læser. Celleviabilitet (%) blev beregnet i henhold til formel (4).
Hvor: En eksperimentel gruppe er absorbansen af brøndene, der indeholder celler og prøveopløsning under UVB -bestråling; En normal gruppe er absorbansen af brøndene, der indeholder celler og prøveopløsning uden UVB -bestråling; En tom gruppe er absorbansen af brøndene, der indeholder kulturmedium, men ingen celler.
1.4.5 Bestemmelse af melaninindhold
Melaninindholdet blev bestemt ved NaOH -lyse -metoden. Efter behandling af cellerne i 72 timer ifølge metoden i afsnit 1.4.2 blev supernatanten kasseret og vasket to gange med PBS, og 100 μL NaOH vandig opløsning indeholdende 10% DMSO i volumen (koncentration på 1 mol/L) blev tilsat. Efter at have været anbragt i en ovn på 90 grader i 1 time, blev absorbansen af opløsningen ved 490 nm bestemt af en enzymmarkør. Eksperimentet blev gentaget 3 gange. Melaninindholdet (%) blev beregnet i henhold til formlen (5).
1.5 Bestemmelse af indhold af inflammatorisk faktor og oxidativt stressindeks
Efter behandling af cellerne i 48 timer ifølge metoden i afsnit 1.4.2 blev HACAT -cellerne i hver gruppe opsamlet med en celleskår, centrifugeret, og supernatanten blev opsamlet. Indholdet af IL -6 og TNF- blev bestemt i henhold til instruktionerne fra ELISA-kittet.
Efter behandling af cellerne i 48 timer ifølge metoden i afsnit 1.4.2 blev HACAT -cellerne i hver gruppe opsamlet med en celleskår, og cellerne blev brudt ved gentagen frysning og optøning. Cellerne blev centrifugeret ved 12000 r/min ved 4 grader i 10 minutter, og supernatanten blev opsamlet. SOD -aktiviteten og CAT -indholdet blev bestemt i henhold til instruktionerne fra ELISA -kittet.
1.6 Bestemmelse af det kombinerede indeks
Den kombinerede indeks (CI) -metode [20] blev anvendt til at bestemme, om PHG'er og GLA i forskellige masseforhold havde en synergistisk virkning i hæmning af tyrosinaseaktivitet og antioxidation. Kombinationsindekset blev beregnet i henhold til formlen (6):
Wherein: D1 and D2 are the mass concentrations (mg/mL) of the two drugs when the activity reaches x% in the combined treatment; DX is the mass concentration (mg/mL) required for the activity to reach x% when the two substances are used alone. Compusyn software was used for calculation. CI>1 angiver en antagonistisk effekt, CI =1 angiver en additiv effekt, og CI<1 indicates a synergistic effect.
1.7 Dataanalyse
Alle data udtrykkes som "aritmetisk middelværdi ± standardafvigelse (𝑥̅ ± 𝑠)". Grafprisme 9.5. 0 Software blev brugt til statistisk analyse. Envejs variansanalyse blev anvendt til sammenligning mellem flere grupper. S<0.05 was considered statistically significant.
