Undersøgelse af neuroendokrin-immun funktion af Cistanche Deserticola og dens risvinsdampende produkter i glukokortikoid-induceret rottemodel-Ⅱ

3.2.4. Immunhistokemi

Neuronal apoptose styres af mange apoptotiske og antiapoptotiske gener, hovedsageligt det apoptosefremmende gen Bax og de antiapoptotiske gener fra Bcl-2-genfamilien. Bcl-2 er lokaliseret i reaktive iltproducerende organeller såsom mitokondrier, endoplasmatisk retikulum og kernemembraner. Bcl-2 har ringe indflydelse på iltfrie radikaler, men kanforhindre oxidativ skade i celler. Bax transporterer fra cytoplasmaet til den mitokondrielle membran, ændrer den mitokondrielle membranstruktur og fremmer frigivelsen af cytochrom c og induktionen af apoptose.

NATURLIG CISTANCHE TUBULOSA TIL FORBEDRING AF SEKSUEL FUNKTION PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Der var et udtryk i binyrens cytoplasma af Bax- og Bcl-2-protein. Farvningen viste alle gule partikler. Sammenlignet med den for BC-gruppen steg den gennemsnitlige optiske tæthed af Bax-proteinet i MC-gruppen signifikant (P< 0.01). Compared to that of the MC group, the average optical density in the CD-LD and WCD-LD groups decreased significantly (P < 0.01) (Figure 5(a)).

Figur 5(b) viser, at sammenlignet med den for BC-gruppen faldt den gennemsnitlige optiske tæthed af Bcl-2-protein i MC-gruppen signifikant (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density in the WCD-HD and CD-HD groups increased significantly (P < 0.01), while those of the WCD-MD and CD-MD groups increased (P < 0.05).

Caspase-3-proteinet er hovedsageligt lokaliseret i cytoplasmaet i sin oprindelige form i normalt væv og har lav ekspression. Positive signaler er lysegule eller brungule. Sammenlignet med BC-gruppens ekspression af caspase-3 i MC-gruppen steg signifikant (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the expression of caspase-3 in the WCD-HD and WCD-MD groups increased (P < 0.05) (Figure 5(c)).

I normale væv var ekspressionen af Fas-genet reduceret, og det positive signal for in situ hybridisering var brungult. Som vist i figur 5(d), sammenlignet med den for BC-gruppen, steg den gennemsnitlige optiske tæthed af Fas-protein i MC-gruppen (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density in the WCD-HD and WCD-LD groups improved (P < 0.05) (Figure 5(d)).

FasL-proteinet er hovedsageligt placeret i cellemembranen eller cytoplasmaet, og dets positive signaler er brune. Sammenlignet med den for BC-gruppen steg den gennemsnitlige optiske tæthed af FasL-genet i MC-gruppen signifikant (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density of the FasL gene in the WCD-HD, WCD-MD, CDHD, and CD-MD groups increased significantly (P < 0.01) (Figure 5(e)).

Resultaterne viste, at CD og WCD kunneinducere apoptose i inflammatoriske cellerog reducere binyrebeskadigelse ved at fremme ekspressionen af FasL-proteinet og binding til Fas-proteinet, aktivere caspase-3-protein og udløse en caspase-kaskade. Effekten af WCD-HD-gruppen var den bedste.

3.3. Bestemmelse af immunfunktion

3.3.1. Immunorganindeks

Sammenlignet med dem fra BC-gruppen faldt thymuskoefficienten og miltindekset for MC-gruppen signifikant (P< 0.01). Compared to the MC group, the WCD-MD group had the greatest difference (P < 0.05). The thymus coefficient was almost back to the normal level. For the spleen index, the WCDMD, WCD-LD, and CD-MD groups showed significant differences compared with that of the MC group (P < 0.01) (see Figure 6). Therefore, WCD and CD treatment could protect the immune organs, and the effects of WCD were better.

NATURLIG CISTANCHE TUBULOSA TIL FORBEDRING AF SEKSUEL FUNKTION PHGS75% ECH 30% ACT 12%

3.3.2. Påvisning af T-lymfocytundersæt i perifert blod

Procentdelen af CD4+-celler i den øverste venstre kvadrant og CD8+-celler i den nederste højre kvadrant i BC og hver lægemiddelgruppe var højere end i MC-gruppen. Sammenlignet med BC-gruppen faldt forholdet mellem CD4+ThCD8+ signifikant i MC-gruppen (P< 0.01). Compared to that of the MC group, the ratio of CD4+ThCD8+ increased significantly in the PC group, the WCD group, and the CD-HD group (P < 0.01) (Figure 7).

3.3.3. Bestemmelse af niveauet af IL-10, IL-6, IL-2, TNF-Α og IFN-C i serum

Figur 8 viser, at sammenlignet med BC-gruppens niveau steg niveauet af IL-6, TNF- og IFN-c signifikant (P< 0.01). The level of IL-10 and IL-2 decreased in the MC group. Compared to that of the MC group, the level of IL-6, TNF-α, and IFN-c decreased and IL-10 and IL-2 increased in serum in each of the drug groups. The effect of WCD was better than the effect of CD, especially in the WCD-MD group, in which the effect was close to that of the PC group.

3.3.4. Resultater af Lymus-vævsmikroskopobservationseksperiment

Figur 9 viser, at der i BC-gruppen var et stort antal lymfocytter til stede. Lymfocytter og retikulocytter var løst arrangeret i midten med spredte runde eller ovale thymocytter. Der var ingen nekrose, ingen inflammatorisk celleinfiltration og ingen unormale ændringer.

MC-gruppen viste en stor mængde lymfoid nekrosevæv med et uordnet arrangement af lymfocytter og retikulocytter i midten. Runde eller ovale thymocytter forsvandt, massiv celledegeneration eller nekrose var tydelig, og der var inflammatorisk celleinfiltration med abnorme patologiske ændringer.

I CD-grupperne var de morfologiske karakteristika af lymfocytter vendt tilbage til normale, og arrangementet af centrale lymfocytter og retikulocytter var næsten normalt. Runde eller ovale thymocytter var kommet sig, men et lille antal degenerative eller nekrotiske lymfocytter og infiltrerende inflammatoriske celler var tilbage.

I WCD-grupperne og PC-gruppen blev de morfologiske egenskaber af lymfocytter bedre repareret. Lymfocytterne og retikulocytterne i midten var godt justeret, de runde eller ovale thymocytter var næsten normale, men der forblev et lille antal infiltrerende og degenerative lymfocytter.

3.4. CaM-proteingenekspression

RQ-værdi (CaM mRNA-actin mRNA) blev anset for at undersøge ekspressionen af CaM mRNA. RQ for BC-gruppen var 1. Ekspressionen af CaM mRNA i hypothalamus i MC-gruppen steg signifikant (P< 0.01), while the value decreased in the WCD-HD, WCD-MD, WCDLD, and CD-HD groups (P < 0.05) (Figure 10). The expression of CaM mRNA in the hypophysis in the MC group was lower than that in the BC group (P < 0.01). The expression in the WCD-HD, WCD-MD, WCD-LD, CD-HD, and CD-LD groups increased (P < 0.05), and the effect in the WCD groups was better than the effect in the CD groups.

4. Diskussion

Den kinesiske farmakopé [2] registrerer, at CD og WCD kan bruges i klinikken som hovedtyper af afkogningsstykker. Efter at være blevet dampet med risvin, denantiaging og tonificerende nyre-yang-effekterblev forbedret. Gennem UPLC-QqQ-MS opdagede vi de kvantitative ændringer i den kemiske materialebase under processen med risvinsdampning. Iridoidglykosider var ustabile, og indholdet af disse glykosider faldt, og blev endda upåviselig. Indholdet af phenylethanolglykosider ændrede sig også, hvilket kunne inducere ændringer i farmakodynamikken og den kliniske effekt.

NATURLIG CISTANCHE TUBULOSA TIL FORBEDRING AF SEKSUEL FUNKTION PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Den klassiske nyre-yang-mangelmodel blev replikeret ved subkutan injektion af kortikosteron [19]. Overdosis corticosteron kunne hæmme hemmeligheden bag CRH i hypothalamus. I mellemtiden blev hemmeligheden bag ACTH også hæmmet. Niveauet af binyrebarkhormon faldt, og dermed blev HPA-aksens funktion reduceret. Hypofunktion af HPA-aksen er et almindeligt kendetegn ved nyre-yang-mangel [20]. Derefter viser rotterne "udtømnings"-fænomener, og symptomerne stemmer overens med dem ved nyre-yang-mangel i klinikken.

I MC-gruppen faldt niveauet af CRH, ACTH, T og CORT i rotteserum signifikant (P< 0.01). After being treated by CD and WCD, the content of CRH, ACTH, T, CORT, and cortisol all increased to some degree, and the effect of WCD-MD was the best, almost equal to that in the PC group. These results indicated that the relative hormone balance in the HPA axis had been destroyed in the MC group, CD and WCD could improve the functional recovery of abnormal adrenal axis hormone levels, but the effect of WCD was better.

Modulering af andelen af Bcl-2-familiemedlemmer er en af kernemekanismerne, hvorved FasThFasL medierer dødsreceptorvejen, og Bcl-2-familien regulerer den mitokondrielle vej [21]. Apoptose-hæmmende faktor Bcl-2 og apoptose-inducerende faktorer, såsom Bax, tilhører alle Bcl-2-familien [22]. Celleapoptose kan bestemmes af det relative forhold mellem apoptose-hæmmende faktorer og apoptose-inducerende faktorer [23]. Mitokondrier har funktionen som centrale kontrolpunkter for mange former for apoptose [24]. Denne undersøgelse viste, at CD-MD og WCD'er kunne udlede udtrykket af Bax og øge Bcl-2 tilforbedre nyre-yang-mangel. Fas er den vigtigste dødsreceptor, der inducerer apoptose ved ligering med Fas-liganden (FasL) [25]. Ekspressionen af Fas og FasL i MC-gruppen steg, mens dette udtryk steg signifikant i WCD-MD-gruppen (P< 0.01) compared with the MC group. Both FasThFasL and BaxThBcl-2 systems transduce apoptotic signals to the caspase family [26]. Caspase-3 is one of the pivotal proteinases that initiate cell apoptosis. The activation of caspase-3 indicates that apoptosis enters an irreversible stage [27]. The expression of caspase-3 in the MC group increased and increased significantly in the WCD-HD and WCD-MD groups (P < 0.05).

Mangel på immunfunktion er en af de vigtige manifestationer af nyre-yang-mangel [28]. I denne undersøgelse fandt vi, at indekset for milten og thymus i WCD-MD-gruppen kom sig signifikant (P< 0.01, P < 0.05). The immune response of the immune system is regulated mainly by the Th subgroups [29]. IL-2 is the growth factor for T cells, secreted by T cells and macrophages, participates in inflammatory regulation, regulates immunity, and increases infection resistance [30]. The level of IL-2 in the MC group decreased (P < 0.01), and after treatment with CD and WCD, the level of IL-2 recovered. IL-6 and TNF-α are proinflammatory cytokines. Increased levels of IL-6 and TNF-α cytokines cause cytokine imbalances and exacerbate inflammation. The levels of IL-6 and TNF-α increased in the MC group, while after treatment, the levels of IL-6 and TNF-α decreased. T cells are divided into CD4 cells and CD8 cells, and the CD4+ThCD8+ ratio can be used as an important index of immune regulation [31]. CD4+ThCD8+ in the MC group decreased (P < 0.01), while in the WCD and CDHD groups increased (P < 0.01).

HPA-aksen er det vigtigste regulatoriske system, fordi det regulerer glukokortikoidsekretion og det endokrine system for at opretholde binyrebarkens sekretoriske funktion [32]. Overekspression af CaM mRNA i hypothalamusvæv var relateret til mangel på nyre-yang. CD og WCD kunne blokere calciumkanalerne, hæmme CaM-mRNA-ekspression i hypothalamus og mindske calciumtilstrømningen og dermed mindske Ca2+·CaM-kompleksaktiviteten.

Dannelsen af nyre-yang-mangel er en kronisk sygdomsudviklingsproces. Nyre er ikke længere et rent anatomisk begreb, og det er en generel betegnelse for neuroendokrine-immunitet og genitourinære systemer. Neuroendokrin-immun (NEI) netværk er et vigtigt integreret reguleringssystem [33]. CD og WCD kan regulere HPAT-aksens funktion og forbedre genopretningen af nyre-yang-mangel. Dette resultat giver det eksperimentelle grundlag for den kliniske forebyggelse og behandling af nyre-yang-mangel.