Phenylethanoid oligoglycosider og acylerede oligosukkere med vasorelaxant aktivitet fra Cistanche Tubulosa
Mar 15, 2022
for flere oplysninger:ali.ma@wecistanche.com
Masayuki Yoshikawa et al
Abstrakt
Det methanoliske ekstrakt fra de tørrede stængler afCistanche tubulosa(Schrenk) R. Wight viste sig at vise en hæmmende virkning på kontraktioner induceret af noradrenalin i isolerede rotteaorta-strimler. Fra ekstraktet blev nye phenylethanoid-aminoglycosidbestanddele, kankanosider F og G, og et acyleret oligosukker, kankanose, isoleret sammen med 14 kendte forbindelser. Strukturerne af disse nye forbindelser blev bestemt på grundlag af deres kemiske og fysisk-kemiske beviser. Derudover udviste hovedbestanddelene, kankanosid F, kankanose, echinacosid, acteosid og cistanosid F, vasorelakserende aktivitet, og flere strukturelle krav til aktiviteten blev afklaret. 2006 Elsevier Ltd. Alle rettigheder forbeholdes.
Klik for at Cistanche effekt produkter
Introduktion
Parasitplanten Orobanchaceae,Cistanche tubulosa(Schrenk) R. Wight, er vidt udbredt i Nordafrika, Arabien og asiatiske lande, og stammerne afCistanche tubulosa, såvel som C. salsa og C. deserticola, er traditionelt blevet brugt som et fremmende middel for blodcirkulationen og behandling af impotens, sterilitet, lumbago, kropssvaghed og tonic.2,3 I løbet af vores karakteriseringsundersøgelser af bioaktive bestanddele fra kinesiske naturlige medicin,1,4-14 har vi rapporteret isoleringen og strukturbelysningen af fem iridoider, kankanosider A–D og kankanol, og et monoterpeneglycosid, kankanosid E, sammen med 16 kendte forbindelser fra stænglerne afCistanche tubulosa1 Som en fortsættelse af undersøgelsen af dette naturlægemiddel, viste det sig, at ethanolekstrakt viste en hæmmende virkning på sammentrækninger induceret af noradrenalin i isolerede rotte thorax aorta strimler. Fra denne methanolekstrakt isolerede vi desuden phenylethanoid oligoglycosider, kankanosider F (1) og G (2), og anacyleret oligo sukker, kankanose (3) og 14 kendte forbindelser, echinacosid (4), acteosid (5), isoacteosid (6) ),20-acetylacteosid (7), tubulosid A (8) og B (9), cistanosid F (10), salidrosid (11), (2R,3R)-butan-2,{{18 }}diol 2-ObD-glucopyranosid,Meso-butan-2,3-diol2-ObD-glucopyranosid, ethyl-bD-glucopyranosid,3-methylbutanol bD-glucopyranosid, (plus )-pinoresinol40-ObD -glucopyranosid og (plus)-syringaresinol 40-ObD-glucopyranosid. Denne artikel beskæftiger sig med strukturbelysningen af nye forbindelser (1-3) samt de vasorelakserende virkninger af hovedbestanddelene (1, 3-6,10 og 11) på kontraktioner induceret af noradrenalin-isolerede rotteaorta-strimler baseret på den traditionelle anvendelse for blodcirkulationen (fig. 1).
Resultater og diskussion
2.1. Vasorelakserende virkning af methanolisk ekstrakt fra stammerne afCistanche tubulosapå kontraktionen induceret af noradrenalin i isoleret rotte thorax aorta
Som vist i tabel 1 er methanolekstraktet fra stammerne afCistanche tubulosa(købt i Urumqi, Xinjiang-provinsen, Kina) viste sig at vise vasorelakserende aktivitet på sammentrækninger induceret af noradrenalin i isolerede rotte-aorta-strimler, tids- og koncentrationsafhængig(30–3{{10}} 0 lg/ml). Den methanoliske ekstrakt blev yderligere oprenset ved normal- og omvendt-fase søjlekromatografi og til sidst HPLC for at give 1 (0.016 procent), 2(0.{{31} }25 procent ), 3 (0.020 procent ), 4 (3.09 procent ),3 5 ({{64} },68 procent ),3 6(0.096 procent ),3 7 (0,017 procent ),3 8 (0,052 procent ),3 9 (0,0036 procent ),3 10(0,025 procent ),15 11 (0,044 procent ),16 (2R,3R)-butan-2,{{44 }}diol2-ObD-glucopyranosid (0,0087 procent),17 meso-butan-2,3-diol 2-ObD-glucopyranosid (0,0065 procent),17 ethylb-D- glucopyranosid (0,055 procent),17 3-methylbutanol bD-glucopyranosid (0,0030 procent),17 ( plus )-pinoresinol 40-ObD-glucopyranosid (0,016 procent),18 og (plus )-syringaresinol{{81} }ObD-glucopyranosid (0,022 procent ).15
2.2. Strukturer af kankanosider F (1) og G (2)
Kankanosid F (1) blev opnået som et hvidt pulver med negativ optisk rotation (½a -28D -44.8- i MeOH). IR-spektret på 1 viste absorptionsbånd ved 156{{69} }, 1508 og 1458 cm-1, der kan tilskrives en aromatisk ring og stærke absorptionsbånd ved 3432, 1075 og 1044 cm-1, hvilket tyder på en aminoglykosidstruktur.I positiv- og negativ-ion FAB-MS på 1, kvasimomolekylære iontoppe blev observeret ved m/z 647 (M plus Na) plus og 623 (MH), og højopløsningsFAB-MS-analyse viste, at molekylformlen for1 var C26H40O17. 1H og 13C NMR (CD3OD, tabel 2) spektrene på 1, som blev tildelt ved forskellige NMR eksperimenter,19 viste signaler, der kunne tilskrives to methylener [d 2,78 (2H, m, H2-7), 3,70, 4.{{ 39}} (1H hver, både m, H2-8)] og ortho- og metakoblede aromatiske protoner af ABC-typen [d 6,56 (1H, dd, J=1.9,7.9 Hz, H-6), 6,67 (1H, d, J=7,9 Hz, H-5), 6,69(1H, d, J=1,9 Hz, H{ {64}})] sammen med tre glucopyranosedele [d 4,30 (1H, d, J=8,0 Hz, H-10), 4,37(1H, d, J=8. 0 Hz, H-1000), 5,16 (1H, br s, H-100)]. Aminoglycosidstrukturen i 1 var karakteriseret ved heteronuklear multiple bond connectivity (HMBC) eksperiment, som viste langrækkende korrelationer mellem følgende proton- og carbonpar (H-10 og C-8; H-100 og C-30; H-1000 og C-60) som vist i figur2. Enzymatisk deacylering af echinacosid (4), hvis absolutte stereostruktur blev rapporteret tidligere,3 withtannase13,14 gav 1. På grundlag af ovennævnte beviser blev strukturen af kankanosid F bestemt til at være 2-(3,4- dihydroxyphenyl)ethyl OaL-rhamnopyranosyl(1-3)[bD-glucopyranosyl(1-6)]-b-D-glucopyranosid (1).
Kankanosid G (2) blev også opnået som et hvidt pulver med negativ optisk rotation (½a-26D-35.0-i MeOH). IR-spektret på 2 viste absorptionsbånd ved 3432, 1709, 1638, 1518, 1447 og 1040 cm-1, der kan tilskrives hydroxyl-, konjugeret estercarbonyl- og etherfunktioner og aromatisk ring. Molekylformlen C29H36O14 på 2 blev bestemt ud fra den positive og negative ion FAB-MS [m/z 631 (M plus Na) plus og 607(MH)-] og ved højopløsnings-FAB-MS. Enzymatisk deacylering af 2 med tannase gav cistanosid G(12), hvis absolutte stereostruktur blev rapporteret tidligere.16 Ved alkalisk hydrolyse af 2 med 10 procent vandig kaliumhydroxid (KOH)-50 procent vandig 1,4-dioxan (1:1, v/v), blev koffeinsyre identificeret ved HPLC-analyse. 1H og 13C NMR (CD3OD, tabel 2) spektrene 19 af 2 indikerede tilstedeværelsen af følgende funktioner: 4-hydroxyphenylethylalkohol del {tomethylener [d 2,82 (2H, m, H2-7), 3,70, 3,96 ( 1H hver, både m, H2-8)] og ortho-koblede aromatiske protoner af A2B2-type [d 6,65, 7,03 (2H hver, begge d, J=8.6 Hz,H{ {62}},5 og H-2,6)]} og to glucopyranosedele [d4.33 (1H, d, J=7.9 Hz, H-10), 5.19 (1H, br s, H-100)]sammen med en caffeoyldel {en trans-olefin [d 6.29,7.56 (1H hver, begge d, J=15.9 Hz, H{{84 }} og H-7)] og dihydroxybenzen af pyrocatechol-typen [d 6,78 (1H, d,J=8,3 Hz, H-5), 6,89 (1H, dd, J {{ 96}},9, 8,3 Hz, H-6),7,04 (1H, d, J=1,9 Hz, H-2)]}. I HMBC-eksperimentet på 2 blev der observeret en lang rækkevidde-korrelation mellem 60-protonen [d 4,36 (1H, dd, J=6.1, 11,6 Hz), 4,50 (dd, J {{ 119}},8, 11,6 Hz)] og caffeoylcarbonylcarbonet (dC 169,1). Som følge heraf blev strukturen af kankanosid G bestemt til at være 4-hydroxyphenyl-OaL-rhamnopyranosyl(1! 3)-(6-O-caffeoyl)-bD-glucopyranosid (2).
2.3. Struktur af kankanose (3)
Kankanose (3), ½a- 27D-35.3- (MeOH), blev også opnået som et hvidt pulver. IR-spektret på 3 viste absorptionsbånd ved 343{{30}}, 1702, 1639, 1611, 1458 og 1071 cm-1, der kan tilskrives hydroxyl-, konjugeret estercarbonyl- og etherfunktioner og aromatisk ring. Den positive og negative ion-FAB-MS af 3 viste quasimolekylære iontoppe ved henholdsvis m/z 673 (M plus Na) plus og m/z 649 (MH). Den højopløselige FAB-MS på 3 afslørede molekylformlen til beC27H38O18. Alkalisk hydrolyse af 3 med 10 procent KOH–50 procent vandig 1,4-dioxan-frigivet koffeinsyre, som blev identificeret ved HPLC-analyse, sammen med et oligosukker. Syrehydrolysen af dette oligosukker med 1,0 M saltsyre (HCl) frigjorde L-rhamnose og D-glucose, som blev identificeret ved HPLC-analyse ved anvendelse af en optisk rotationsdetektor.1,13,14 1H- og 13CNMR-spektrene (CD3OD, tabel 3) af 3 viste signaler, der kunne tildeles trisacchariddelen {d [5.11 (d,J=3.4 Hz), 4.57 (d, J=7,9 Hz), a- og b-form blanding af H{ {52}} (ca. 1:1)], 4,25, 4,27 (begge d, J=7,7 Hz, H-1000),5,13, 5,18 (begge br s, H{{66 }})} sammen med en caffeoylgruppe [d 6,28, 6,29 (begge d, J=15,9 Hz, H-9), 6,78 (d,J=8,0 Hz, H -5), 6,96 (dd, J=2,0, 8,0 Hz, H-6), 7,06(d, J=2,0 Hz, H{{90} }), 7,60 (d, J=15,9 Hz, H-7)]. I HMBC-eksperimenterne på 3 blev der observeret langdistancekorrelationer mellem 40-protonen [d 5.04, 4.99 (begge dd,J=9.5, 9.8 Hz)] og caffeoylcarbonylcarbonet (dC168.53) 168,65). På basis af ovennævnte beviser blev strukturen af kankanose belyst til bea-L-rhamnopyranosyl(1-3)[bD-glucopyranosyl(1-6)]-O-(4- O-caffeoyl)-D-glucopyranose (3).
2.4. Vasorelakserende effekt af hovedbestanddele (1, 3-6,10, 11) fraCistanche tubulosapå sammentrækningen induceret af noradrenalin og høj K plus i isoleret rotte thorax aorta
Som vist i tabel 4 og figur 3, hæmmende virkninger af hovedbestanddelene, kankanosid F (1) og kankanose (3), echinacosid (4), acteosid (5), isoacteosid (6), cistanosid F (10) og salidrosid ( 11) på noradrenalin-inducerede sammentrækninger i isolerede thoraxaorta hos rotter blev undersøgt. Som følge heraf hæmmede forbindelser 3-5 og 10, der havde en caffeoylgruppe i 40-positionen kontraktionerne signifikant, tids- og/eller koncentrationsafhængigt (10-100 lM), mens 6 havde 60- O-caffeoyl-del viste svag aktivitet end 4 og 5. På den anden side viste forbindelse 1 med en catechol-gruppe signifikant inhibering, men 11 med en phenolgruppe viste ikke en sådan effekt. Disse resultater fik os til at antage, at 40-O-caffeoyl-delen og 10-O-dihydroxyphenethyl-delen er essentielle for stærk vasorelakserende aktivitet. På den anden side udviste forbindelser 1, 3-6 og 10 (100 lM) ingen virkninger på sammentrækninger induceret af en høj koncentration af kaliumkation (høj K plus ) forskellig fra nifedipin, en spændingsafhængig calciumkanalblokker, i samme væv (data ikke vist). Dette fund tydede på, at disse aktive bestanddele hæmmede kontraktionerne via receptor-opereret calciumkanal, men ikke via spændingsafhængig calciumkanal. For nylig rapporterede Iizuka et al., at et phenylethanoid, forsythiaside, fra frugten af Forsythia suspensa hæmmede de noradrenalin-inducerede sammentrækninger i aortaringpræparater hos rotter, og antydede, at inhiberingen af forsythiaside af noradrenalin-induceret kontraktion delvist ikke skyldes en reduktion af renalin. calciumtilstrømning.20 I nærværende undersøgelse blev de afslappende virkninger af de aktive bestanddele imidlertid observeret ca. 30 minutter efter tilsætning af noradrenalin på en anden måde end prazosin, en adrenalin-a1-receptorantagonist. Virkningsmekanismerne for aktive bestanddele skal undersøges yderligere.
3. Eksperimentel
3.1. Generel eksperimentel procedure
Følgende instrumenter blev brugt til at opnå fysiske data: specifikke rotationer, Horiba SEPA-300 digital polarimeter (l=5 cm); UV-spektre, Shimadzu UV-1600spektrometer; IR-spektre, Shimadzu FTIR-8100-spektrometer; 1H NMR-spektre, JEOL JNM-LA500 (500 MHz) spektrometer; 13C NMR-spektre, JEOLJNM-LA500 (125 MHz) spektrometer med tetramethylsilan som intern standard; FABMS og HR-FAB MS, JEOL JMS-SX 102A massespektrometer; HPLC-detektor, Shimadzu RID-6Et brydningsindeks og SPD 10A UV-vis-detektorer. HPLC kolonne, YMC-PackODS-A (250 · 4,6 mm id) og (250 · 20 mm id) kolonner blev brugt til henholdsvis analytiske og præparative formål
Følgende eksperimentelle betingelser blev brugt til kromatografi: normalfase silicagelsøjlekromatografi, silicagel BW-200 (Fuji Silysia Chemical, Ltd, 150–350 mesh); omvendt fase silicagelsøjlekromatografi, Chromatorex ODS DM1020T (FujiSilesia Chemical, Ltd, 100-200 mesh); TLC, præcoatede TLC-plader med silicagel 60F254 (Merck, 0,25 mm)(normalfase) og silicagel RP-18 F254S (Merck,0,25 mm) (omvendt fase); omvendt fase HPTLC, præcoatede TLC-plader med silicagel RP-18 WF254S(Merck, 0,25 mm); detektion blev opnået ved at sprøjte med 1 procent Ce(SO4)2-10 procent vandig H2SO4, efterfulgt af opvarmning.
Cistanche tubulosa
3.2. Plantemateriale
Tørrede stængler afCistanche tubulosablev købt i Urumqi, Xinjiang-provinsen, Kina, i januar 2005 via EishinTrading Co., Ltd, Osaka, Japan, som beskrevet tidligere.1
3.3. Udvinding og isolering
Fraktioner {{0}} (590 mg), 2-1 (466 mg), 2-3 (3931 mg), 3-3(3610 mg), 3-4 (190 mg), 4-5 [=echinacoside (4, 2595 mg, 0,44 procent )], 4-6 (1635 mg), 5-2 (1114 mg), {{ 20}} (306 mg), 5-4(347 mg), 5-5 (=4, 1620 mg, 2,03 procent) og 5-6 (1453 mg) blev opnået fra det methanoliske ekstrakt af stænglerneCistanche tubulosasom tidligere rapporteret.1 Fraktion 1-2(590 mg) blev oprenset ved HPLC [MeOH/H2O (35:65,v/v)] for at give 3-methylbutanol bD-glucopyranosid (18 mg , 0.0030 procent ), ( plus )-pinoresinol 40-ObD-glucopyranosid (96 mg, 0. 016 procent) og (plus )-syringaresinol 40-O bD-glucopyranosid (129 mg, 0.022 procent) sammen cistanochlorin (21 mg, {{ 76}}.{{80}}035 procent). Fraktion 2-1 (466 mg) blev adskilt ved HPLC [MeOH/H2O (5:95, v/v)] for at give (2R,3R)-butan-2,{{40 }}diol 2-ObD-glucopyranosid(12 mg, {{1{{108}}4}}.0087 procent ), (2R, 3S)-butan-2,3-diol 2-ObD-glucopyranosid (9 mg, 0.0065 procent) og ethyl-bD -glucopyranosid (76 mg, 0.055 procent ) sammen med uridin(0.0069 procent ). Fraktion 2-2 (535 mg) blev oprenset ved HPLC[MeOH/H2O (5:95, v/v)] for at give salidrosid (11, 41 mg, 0,022 procent) sammen med antirrhide (15 mg, 0,0079 procent) og 6-deoxycatalpol (214 mg, 0,11 procent). Fraktion 2-3(535 mg) blev adskilt ved HPLC [MeOH/H2O (5:95, v/v)] for at give 11 (17 mg, 0,022 procent) sammen med gluroside (110 mg, 0,14 procent) og bartsiosid (164 mg, 0,21 procent). Fraktion 3-3 (510 mg) blev underkastet HPLC [MeOH/H2O (40:60, v/v)] for at give acteosid (5, 257 mg, 0,31 procent), isoacteosid (6, 79 mg, 0,096 procent) og 20-acetylacteosid (7, 14 mg, 0,017 procent). Fraktion 3-4 (190 mg) blev yderligere oprenset ved HPLC [MeOH/H2O (40:60, v/v)] for at give kankanosid G (2, 17 mg, 0,0029 procent) og tubulosid B(9, 21 mg, 0,0036) procent). Fraktion 4-6 (75 mg) blev oprenset ved HPLC [MeOH/H2O (35:65, v/v)] for at give 5 (18 mg, 0,065 procent). Fraktion 5-2 (1114 mg) blev underkastet HPLC [MeOH/H2O (10:90, v/v)] for at give 2 (24 mg, 0,030 procent). Fraktion 5-3 (306 mg) var oprenset ved HPLC [MeOH/H2O (15:85, v/v)] for at give kankanosid F (1, 13 mg, 0,016 procent). Fraktion 5-4 (347 mg) blev underkastet HPLC [MeOH/H2O (10:90, v/v)] for at give kankanose (3, 30 mg, 0,038 procent) og cistanosid F (10, 20 mg, 0,025 procent). Fraktion 5-6 (530 mg) blev oprenset ved HPLC [MeOH/H2O (35:65, v/v)] for at give 4 (185 mg, 0,62 procent), 5 (91 mg, 0,30 procent) og tubulosid A (8, 16 mg, 0,052 procent).
3.3.1. Kankanoside F (1).
Et hvidt pulver, ½a{{0}}D -44.8- (c0,50, MeOH). Højopløsningspositiv ion FAB-MSm/z: Beregnet for C26H40O17Na (M plus Na) plus, 647,2163. Fundet: 647,2160. UV [MeOH, nm (log e)]: 224 (3,83), 283 (3,37). IR (KBr): 3432, 2940, 1560, 1508, 1458,1075, 1044 cm-1. 1H NMR (500 MHz, CD3OD) d: angivet i tabel 2. 13C NMR-data (125 MHz, CD3OD) dC: givet i tabel 2. Positiv-ion FAB-MS m/z: 647 (M plus Na) plus. Negativ-ion FAB-MS m/z: 623 (MH), 477 (M-C6H1104)-, 623 (M-C6H1105)-, 623 (M-C12H2109)-.
3.3.2. Kankanoside G (2).
Et hvidt pulver, ½a{{0}}D -35.0-(c 0,80, MeOH). Højopløselig positiv-ion FAB-MSm/z: Beregnet for C29H36O14Na (M plus Na) plus, 631,2003. Fundet: 631,1996. UV [MeOH, nm (log e)]: 329 (4,10). IR (KBr): 3432, 2924, 1709, 1638, 1518, 1447, 1264,1040 cm-1. 1H NMR (500 MHz, CD3OD) d: angivet i tabel 2. 13C NMR-data (125 MHz, CD3OD) dC: angivet i tabel 2. Positiv-ion FAB-MS m/z: 631 (M plus Na) plus .Negativ-ion FAB-MS m/z: 607 (MH)-, 461 (M-C6H1104).
3.3.3. Kankanose (3).
Et hvidt pulver, ½a{{0}}D -35.3- (c0,50, MeOH). Højopløselig positiv-ion FAB-MSm/z: Beregnet for C27H38O18Na (M plus Na) plus, 673,1956. Fundet: 673,1959. UV [MeOH, nm (log e)]: 219 (4,10), 247 (3,96), 333 (4,21). IR (KBr): 3430, 2962, 1702, 1639, 1611, 1458, 1264, 1071 cm-1. 1H NMR (500 MHz, CD3OD) d: angivet i tabel 3. 13C NMR-data (125 MHz, CD3OD) dC: givet i tabel 3. Positiv-ion FAB-MS m/z: 673 (M plus Na) plus. Negativ-ion FABM-Sm/z: 649 (MH), 487 (M-C9H8O3)-, 325 (M-C15H18O8)-.
Cistanche tubulosa
3.4. Enzymatisk deacylering af 2 og 4 med tannase
En opløsning af 2 (4,8 mg, 0.008 mmol) i H2O (1.0 ml) blev behandlet med tannase (3,7 mg, fra Aspergillus oryzae , Wako Pure Chemical Ind., Ltd, Osaka, Japan), og opløsningen blev omrørt ved 37 grader i 24 timer. Efter at EtOH var tilsat til reaktionsblandingen, blev opløsningsmidlet fjernet under reduceret tryk, og remanensen blev oprenset ved HPLC [MeOH/H2O (35:65, v/v)] for at give cistanosid G (12, 2,8 mg, 80 procent). en lignende procedure blev en opløsning af 4 (9,2 mg, 0,012 mmol) inH2O (2,0 ml) behandlet med tannase (7,5 mg), og opløsningen blev omrørt ved 37 grader i 24 timer. Oparbejdning af reaktionsblandingen som beskrevet ovenfor gav en remanens, som blev oprenset ved HPLC [MeOH/H20 (15:85, v/v)] for at give 1 (4,7 mg, 62 procent).
3.5. Alkalisk og sur hydrolyse af 2 og 3
En opløsning af 2 og 3 (hver 3,5 mg) i 50 procent vandig 1,4-dioxan (1,0 ml) blev behandlet med 10 procent vandig KOH (1,{{30}} ml), og det hele blev omrørt ved 37 C i hhv. 1 time. Fjernelse af opløsningsmidlet under reduceret tryk gav en reaktionsblanding, som blev underkastet HPLC-analyse [søjle: YMC-Pack ODS-A,250 · 4,6 mm id; mobil fase: MeOH/H20 (30:70, v/v); detektion: UV (254 nm); flowhastighed: 1,0 ml/min] for at identificere koffeinsyre (tR: 13,1 min). Derefter blev reaktionsblandingen fra 3 opløst i 1 M HCI (2,0 ml) og opvarmet under tilbagesvaling i 3 timer. Efter afkøling blev reaktionsblandingen ekstraheret med EtOAc. Det vandige lag blev udsat for HPLC-analyse under henholdsvis følgende betingelser: HPLC-søjle, KaseisorbLC NH2-60-5, 250 · 4,6 mm id (Tokyo Kasei Co., Ltd, Tokyo, Japan); detektion, optisk rotation [ShodexOR-2 (Showa Denko Co., Ltd, Tokyo, Japan); mobilfase, CH3CN/H20 (85:15, v/v); strømningshastighed 0,8 ml/min]. Identifikation af L-rhamnose og D-glucose til stede i det vandige lag blev udført ved sammenligning af deres retentionstid og optiske rotation med de af autentiske prøver, tR: 9,9 min (L-rhamnose, negativ optisk rotation) og 17,9 min (D-glucose, positiv optisk rotation).
3.6. Vasorelakserende aktivitet
3.6.1. Vævsforberedelse.
Sprague-Dawley-hanrotter, der vejede 250-350 g, blev aflivet ved at adskille begge halspulsårer under bedøvelse, og thoraxaortaen blev isoleret og skåret i spiralformede strimler (2-3 mm ·15-2{{25 }} mm). Fysiologisk saltopløsning indeholdt NaCI (118,0 mM), KCI (4,7 mM), KH2P04 (1,2 mM), MgS04 (1,2 mM), CaCl2 (2,5 mM), NaHC03 (25,0 mM) og D-glucose (10,0 mM). Opløsningen blev beluftet med en 95 procent O2-5 procent CO2 gasblanding og holdt ved 37 grader. For at undersøge den mekaniske respons blev hvert præparat suspenderet i et organbad (6 ml) og udsat for en initial belastning på ca. 1 g. En times ækvilibreringsperiode blev tilladt før påbegyndelse af eksperimenterne. Kontraktioner blev målt isometrisk via en kraft-forskydningstransducer (AD Instruments) og optaget på en polygraf.
3.6.2. Hæmmende effekt på kontraktionen induceret af dl-noradrenalin eller høj K plus.
Efter ækvilibrering blev dl-nor-adrenalin (slutkoncentration: 1 lM) eller 3 M KCl(0,1 ml, slutkoncentration af K plus: 54 mM) tilsat badet. Vævene blev vasket tre gange og ækvilibreret, efter at kontraktionen havde nået det maksimale niveau. Den vedvarende kontraktion blev induceret igen ved tilsætning af dl-noradrenalin eller KCl, og derefter blev testforbindelsen påført ved 10-100 lM (noradrenalin) eller 100 lM (høj K plus). Den kontraktile respons før påføring af testprøven blev taget til at være 100 procent. Prazosinhydrochlorid og nifedipin blev anvendt som referenceforbindelser.
3.6.3. Statistisk analyse.
Værdier er udtrykt som middel ± SEM. Til statistisk analyse blev der brugt en envejsvariansanalyse efterfulgt af Dunnetts test for multipel sammenligningsanalyse. Sandsynlighedsværdier (p) mindre end 0.05 blev betragtet som signifikante.
Anerkendelser
Denne forskning blev støttet af det 21. COE-program, Academic Frontier Project og en Grant-in-Aid til videnskabelig forskning fra ministeriet for uddannelse, kultur, sport, videnskab og teknologi i Japan.
Referencer og noter
1. Dette papir er nummer 19 i serien 'Bioaktive bestanddele fra kinesisk naturmedicin.' For papir nummer 18, se Xie, H.; Morikawa, T.; Matsuda, H.; Nakamura, S.; Muraoka, O.; Yoshikawa, M. Chem. Pharm. Tyr. 2006, 54, 669-675.
2. Namba, T. I The Encyclopedia of Wakan-Yaku (traditionelle kinesisk-japanske lægemidler) med farvebilleder; Hokuryusha: Osaka, 1994; bind II.
3. Kobayashi, H.; Oguchi, H.; Takizawa, N.; Miyase, T.; Ueno, A.; Usmanghani, K.; Ahmad, M. Chem. Pharm. Tyr. 1987, 35, 3309-3314.
4. Matsuda, H.; Morikawa, T.; Tao, J.; Ueda, K.; Yoshikawa, M. Chem. Pharm. Tyr. 2002, 50, 208-215.
5. Morikawa, T.; Matsuda, H.; Toguchida, I.; Ueda, K.; Yoshikawa, MJ Nat. Prod. 2002, 65, 1468-1474.
6. Tao, J.; Morikawa, T.; Toguchida, I.; Ando, S.; Matsuda, H.; Yoshikawa, M. Bioorg. Med. Chem. 2002, 10, 4005-4012.
7. Morikawa, T.; Tao, J.; Ando, S.; Matsuda, H.; Yoshikawa, MJ Nat. Prod. 2003, 66, 638-645.
8. Tao, J.; Morikawa, T.; Ando, S.; Matsuda, H.; Yoshikawa, M. Chem. Pharm. Tyr. 2003, 51, 654-662.
9. Matsuda, H.; Morikawa, T.; Xie, H.; Yoshikawa, M. Planta Med. 2004, 70, 847-855.
10. Sun, B.; Morikawa, T.; Matsuda, H.; Tewtrakul, H.; Wu, LJ; Harima, S.; Yoshikawa, MJ Nat. Prod. 2004, 67, 1464-1469.
11. Morikawa, T.; Sun, B.; Matsuda, H.; Wu, LJ; Harima, S.; Yoshikawa, M. Chem. Pharm. Tyr. 2004, 52, 1194-1199.
12. Xie, H.; Wang, T.; Matsuda, H.; Morikawa, T.; Yoshikawa, M.; Tani, T. Chem. Pharm. Tyr. 2005, 53, 1416-1422.
13. Morikawa, T.; Xie, H.; Matsuda, H.; Yoshikawa, MJ Nat. Prod. 2006, 69, 881-886.
14. Morikawa, T.; Xie, H.; Matsuda, H.; Wang, T.; Yoshikawa, M. Chem. Pharm. Tyr. 2006, 54, 506-513.
15. Kobayashi, H.; Karasawa, H.; Miyase, T.; Fukushima, S. Chem. Pharm. Tyr. 1985, 33, 1452-1457.
16. Karasawa, H.; Kobayashi, H.; Takizawa, N.; Miyase, T.; Fukushima, S. Yakugaku Zasshi 1986, 106, 721-724.
17. Kitajima, J.; Ishikawa, T.; Tanaka, Y. Chem. Pharm. Tyr. 1998, 46, 1643-1646.
18. Chiba, M.; Hisada, S.; Nishibe, S.; Thieme, H. Phytochemistry 1980, 19, 335-336.
19. 1H- og 13C NMR-spektrene på 1-3 blev tildelt ved hjælp af forvrængningsfri forbedring ved polarisationsoverførsel (DEPT), dobbelt kvantefilterkorrelationsspektroskopi (DQF COSY) og heteronukleær multipel kvantekohærens (HMQC), heteronukleær multipelbindingsforbindelse (HMBC) eksperimenter.
20. Iizuka, T.; Nagai, M. Yakugaku Zasshi 2005, 125, 219-224.
