DEL Ⅱ: Rolle af human primær nyrefibroblast i TGF- 1-medieret fibrose-efterlignende enheder

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

DEL Ⅱ: Rolle af human primær nyrefibroblast i TGF- 1-medieret fibrose-efterlignende enheder

Seong-Hye Hwang, Yun-Mi Lee & et al.

Abstrakt

Nyrefibroseer en progressiv kronisk nyresygdom, der i sidste ende fører til nyresvigt i slutstadiet. På trods af flere tilgange til kampnyrefibrose, er en eksperimentel model til at evaluere aktuelt tilgængelige lægemidler ikke ideel. Vi udviklede b-efterlignende modeller ved hjælp af tredimensionelle (3D) co-kulturenheder designet med tre separate lag af tubulus interstitium, nemlig epitel-, fibroblastiske og endotellag. Vi introducerede humane renale proksimale tubulære epitelceller (HK-2), humane navlevene-endotelceller og patientafledte nyrefibroblaster og evaluerede virkningerne aftændre vækstfaktor- (TGF-)ogTGF-hæmmerbehandling på dettenyrefibrosemodel. Udtrykket affibrosemarkør alfa-glat muskel actin påTGF- 1behandling blev udvidet i monolag-dyrkede HK-2-celler i en 3D-sygdomsmodel. I det vaskulære rum afnyrefibrosemodeller blev tætheden af ​​kar øget og faldet iTGF--behandlet gruppe ogTGF--hæmmer behandlingsgruppe, hhv. Multiplex ELISA under anvendelse af supernatanter iTGF--stimulerende 3D-modeller viste, at pro-inflammatoriske cytokin- og vækstfaktorniveauer inklusive interleukin-1 beta, tumornekrosefaktor-alfa, basal fibroblastvækstfaktor ogTGF- 1, TGF- 2, ogTGF- 3blev øget, hvilket efterlignede de fibrotiske mikromiljøer i menneskelige nyrer. Denne undersøgelse kan muliggøre konstruktionen af ​​et menneskenyrefibrose-efterlignende enhedsmodel ud over traditionelle kultureksperimenter.

Nøgleord: nyrefibroblast; fibrose; TGF- 1

cistanche tubolosa sundhedsmæssige fordele: behandling af kroniske nyresygdomme

KLIK HER FOR AT DEL Ⅰ

3. Diskussion

TGF- 1spiller en vigtig rolle i matrixakkumulering i nyrefibrogenese og hæmmer proliferation i de fleste celler, herunder glomerulære epitel- og endotelceller, såvel som tubulære epitelceller 【1】. Imidlertid inducerer TGF-ß1 proliferation i humane nyrefibroblaster via induktion af basal fibroblastvækstfaktor (FGF-2) [8].

I nærværende undersøgelse har vi etableret enfibrose- efterlignende enhed ved hjælp af tre essentielle cellulære komponenter, herunder humane primære nyrefibroblaster, renale tubulære epitelceller og humane endotelceller og evaluerede det som ennyrefibrosemodel baseret påTGF- 1stimulation. At genererenyrefibrose-on-a-chip etablerede vi et nyt 3D-kultursystem designet med tre separate dele af væv, med det formål at overvinde forhindringer forbundet med nyresygdomsmodellering. Vores undersøgelse viste detTGF- 1inducerede cellulære responser, herunder tubulær epitel-mesenkymal overgang (EMT) af epitelceller, mikrovaskulær ændring af endotelceller og cytokinændringer i nyrefibroblaster. Dette er den første undersøgelse, der introducerer enfibrose- efterlignende anordning bestående af primære fibroblaster afledt af menneskelige nyrer og stimulerede fibroblaster isoleret fra patienter medTGF- 1, en kendt inducer af fibrotiske responser, der generelt anvendes som standard til at efterlignefibrosei cellekulturer [9]. Disse resultater tyder på detTGF- 1-behandlede epitelceller omdannes til en mesenkymal cellelignende fænotype. HvornårTGF- 1administreres til fibroblaster, ændres forskellige cytokiner for at afspejle induktionen af ​​fibrotiske processer. Det er tydeligt, at inyrefibrosemodel, er fibroblaster hovedkraften bag udviklingen af ​​det etablerede kultursystem gennem TGF-stimulering.

Davis et al, rapporterede, at 3D-kulturen af ​​endotelceller er tilstrækkelig til, at cellerne kan invadere og danne et lumen- og rørnetværk efter en intakt organisme in vivo [10,11]. Flere grupper har rapporteret, at 3D-kulturmodeller udviser højere niveauer af nefrotoksicitet end 2D-cellekulturmodeller [12]. Ydermere var ekspressionen af ​​nefrotoksicitets- og inflammationsrelaterede gener signifikant højere i den renale 3D-cellekulturmodel end i en typisk 2D-kultur[13].

I denne undersøgelse, kulturmedier af mennesketnyrefibrose-on-a-chip havde et signifikant højere niveau af cytokiner sammenlignet med det i 2Dculture. Vores gruppe har vist, at patientafledte fibroblaster kan genskabe naturligt nyrevæv, herunder endotel- og epitelcellelag, gennem vores foreslåedefibrose-on-a-chip model. Disse resultater indikerer derfor, atnyrefibrose-on-a-chip model simulerer nøjagtigt det mikrofysiske miljø i den menneskelige nyre. Fordi fibroblasterne dyrket i chippen er afledt fra patienter, kan andre klinisk relevante patientmodeller desuden nemt og overskueligt opnås på en sikker måde. Derfor mennesketnyrefibrose-on-a-chip modelsystem kan give mulighed for udvikling af personlig medicin med følsomme målinger af epitel- og endotelfunktioner. I vores eksperimenter,fibroseog angiogenese var nedsat iTGF-inhibitor-behandlede grupper. TGF-hæmmere er naturlige antagonister af TGF-, som er blevet påvist ved hjælp af forskellige nyresygdomsmodeller. Det ser ud til, at det er muligt at udføre eksperimenter for at bekræfte effektiviteten af ​​behandling i sygdomsmodeller ved hjælp af terapeutiske midler såsom denne TGF-hæmmer. Derfor har denne chip givet et middel til at udvikle en forbedret model for nyrefibrose til at måle cellemorfologi og funktion og kan være nyttig til at udføre nefrotoksicitetsvurderinger for lægemidler.

TGF-er den dominerende profibrotiske faktor ved forskellige nyresygdomme [14] og spiller en rolle i angiogenese [15]. De angiogene virkninger af TGF- er meget komplekse og kan have enten proangiogen eller antiangiogen aktivitet afhængigt af indstillingen og forskellige regulatoriske faktorer [16]. Angiogene vækstfaktorer såsom VEGF og FGF-2inducerer angiogenese in vivo ser ud til at spille en central rolle i moduleringen af ​​angiogenese in vivo [17-20]. Nogle beviser indikerer, at disse to faktorer kan virke synergistisk for at fremme endotelcellemorfogenetiske hændelser [21,22]. Vi har fremlagt bevis for, at VEGF-mRNA-ekspression og FGF-2-proteinsekretion er signifikant forhøjet af TGF- 1 i 3D-chips sammenlignet med 2D-kultur.

Begrænsningen af ​​voresfibrosemodeller kan være, at de blev skabt i en relativt kort tidsperiode, 24 timer. TGF-beta har pro-fibrotiske og anti-inflammatoriske egenskaber inden for en tidligfibroseproces, ikke i den kroniske proces. Konventionelt,TGF-er primært blevet brugt i cytokin-induceretfibrosemodeller. Men da kun ét cytokin ikke kan repræsenteres in vivo,fibroseinduktionsmodeller, der anvender flere yderligere kandidatstoffer som f.eksTGF-og BMP7 er blevet foreslået. Imidlertid er to eller tre cytokiner stadig ikke tilstrækkelige til at reproducere in vivo. Vi brugteTGF-som udgangspunkt; dog forsøgte vi at implementere et in vivo mikromiljø på chippen ved at inducere en mere forskelligartet cytokinstorm. Fibroblast, en vigtig cellulær komponent affibrose, blev introduceret, og sekundær stimulering af mere forskellige cytokiner (IL-1, TNF-, b-FGF,TGF- 1, TGF-2, ogTGF-3) blev induceret i fibroblaster stimuleret medTGF-. Altså et miljø svarende tilfibrosei den menneskelige krop blev reproduceret.

cistanche deserticola-ekstrakt: behandling af nyresygdomme

4. Materialer og metoder

4.1.Cellekulturer

Kidney fibroblasts(KFs)were isolated from biopsies of the normal tissue portion of renal cell carcinoma patients with an estimated glomerular filtration rate (eGFR)>60 mL/minut/1,73 m2 efter, at patienter havde givet deres samtykke til en anden biopsi til forskningsformål. KF'er blev dyrket i et fibroblast vækstmedium (FGM-2, Lonza, Schweiz), og passager 3 til 4 blev brugt til eksperimenterne. Nyrefibroblaster blev skrabet fra kulturen i 1-2 uger, indtil cellerne dannede et monolag. For at eliminere epitelceller, der kontaminerede kulturen, blev fibroblaster udvalgt under anvendelse af magnetiske anti-fibroblastperler (Miltenyi Biotec Inc., Auburn, CA, USA) efter den første passage. Celler blev løsrevet ved hjælp af 0.05 procent trypsin-ethylendiamintetraeddikesyre (EDTA) (Welgene, Gyeongsan, Korea), inkuberet med anti-fibroblastperler og adskilt ved hjælp af en magnetisk søjle, og flow- igennem blev samlet. De oprensede primære fibroblaster blev karakteriseret ved fluorescensaktiveret cellesortering (FACS) analyse under anvendelse af PE-konjugerede anti-fibroblast antistoffer. Den blide magnetisk-aktiverede cellesortering (MACS) Dissociator blev brugt til skånsom nyrevævshakning. En Octo MACSTM magnetisk separator med MACS LS-søjler (med stempler) anvendt til oprensning af mikroperle-mærkede celler blev købt fra Miltenyi Biotec Inc. (Auburn, CA, USA). Blide MACS C-rør (Miltenyi Biotec Inc., Auburn, CA, USA) blev brugt til nyrehakning til celleadskillelse. MACS Smart Strainers (70 um) blev opnået fra Miltenyi Biotec Inc. (Auburn, CA, USA). Søjlebuffer blev brugt til at vaske søjler og resuspendere cellepelleter. Pufferen blev fremstillet som en opløsning indeholdende 0,5 procent bovint serumalbumin (BSA) med 2 mM EDTA i phosphatpufret saltvand (PBS) (pH 7,4) og købt fra Miltenyi Biotec Inc. (Auburn, CA, USA). Grønt fluorescerende protein-udtrykkende humane navle-vene-endotelceller (GFP-HUVEC'er, Lonza, Schweiz) blev dyrket i endotelvækstmedium (EGM-2, Lonza, Schweiz), og celler i passager 3 til 4 blev brugt. Human proksimale tubulære cellelinje (human nyre-2(HK-2)-celler blev opnået fra American Type Culture Collection (ATCC). Cellelinjen blev dyrket i Dulbeccos modificerede Eagle's medium (DMEM) med højt glukoseindhold. suppleret med 10 procent føtalt bovint serum (FBS), penicillin (100 U/mL) og streptomycin (100 ug/mL). Reagenser blev købt fra Gibco (Rockville, MD, USA). Alle celler blev løsrevet under anvendelse af 0,05 procent Trypsin- EDTA og holdt i en fugtet inkubator ved 37 grader og 5 procent CO2. KF'er blev resuspenderet i FGM-2 ved en cellekoncentration på 4×10 graders celler/ml. Humane nyre tubulære epitelceller (HK{{49) }}) blev resuspenderet ved en koncentration på 2×10 graders celler/ml i højglukose DMEM.GFP-HUVEC'er blev resuspenderet i en koncentration på 2×10 graders celler/ml i EGM-2.

4.2.Reagenser

Matrixen var sammensat af fibringler, herunder kommercielt tilgængeligt fibrinogen fra bovint plasma, aprotinin fra bovint lunge og thrombin fra bovint plasma. De førnævnte tre materialer blev købt fra Sigma (St. Louis, MO, USA). Fibrinogen blev opløst i l×PBS i et vandbad (37 grader) i 30 minutter ved en koncentration på 10 mg/ml. Thrombin og aprotinin blev opløst i deioniseret vand i en koncentration på 50 enheder/ml og 4 TIU/ml. De tre opløsninger blev steriliseret ved filtrering gennem et 0,22 μm filter. Rekombinant menneskeTGF- 1blev opnået fra PeproTech EC Ltd. (London, UK). En specifik inhibitor af TGF-beta-receptorkinase, SB431542, blev købt fra Tocris Cookson, Inc. (Ellisville, MO, USA).

4.3. Cellemønster i enheden

Før cellepodning for at lette tæt binding, blev enheden behandlet i 1 min. i en plasmamaskine (Femto Science Inc., Suwon, Korea) med en effekt på 70 W, 50 Hz. Plasmabehandling-induceret overfladehydrofilicitet og hjalp med at lette gelmønstret og mediefyldning. For at undgå ændringer i hydrofilicitet blev eksperimenter udført inden for 30 minutter efter plasmabehandling. Forskellige cellulære mønstre i enhederne kan udføres på en meget tilpasselig måde. Det var vigtigt at bestemme sammensætningen og koncentrationen af ​​de forskellige celletyper, der skulle mønstres på forhånd. Til cellulære hydrogelsuspensioner blev 37,5 μL cellesuspension og en adskilt alikvot på 12,5 μL 10 mg/ml fibrinogenopløsning (250 μL 10 mg/mL fibrinogenopløsning med 40 μL 4 TIU/ml aprotinin) fremstillet til at blive blandet med det samme) inden lastning. Umiddelbart før påfyldning blev de 37,5 μL cellesuspension blandet med 12,5 μL 10 mg/ml fibrinogen, indtil de var homogeniseret. De 50 µl hydrogel blev blandet med en 1 µl dråbe thrombin (0,5 enheder/ml). Umiddelbart efter blanding blev thrombin med en fibrinsuspension af GFP-HUVEC'er (cellekoncentration på 2 x 10' celler/ml) injiceret i den ydre kant af den ydre kanal (figur 3, Gel A). Vi ventede 3 minutter på, at fibrinogen-tværbinding var fuldstændig. Umiddelbart efter blanding blev thrombin med en fibrinsuspension af KF'er (cellekoncentration på 4 x 10 grader celler/ml) anbragt på hver side af reservoirbunden pr. brønd (figur 3, Gel C). Denne fibrinsuspension af KF'er fik lov til at tværbinde ved stuetemperatur i 3 min. En cellesuspension af 10 μL humane renale proksimale tubulære epitelceller (HK-2) blev injiceret i injektionsporten på den indre kanal (Figur 3, Gel B). For at fastgøre HK-2 til væggen af fibringel i GFP-HUVECs kanal, blev enheden drejet 90 grader og anbragt i 5 procent CO, en inkubator i 30 minutter ved 37 grader. HK-2 lagde sig ned og dannede et celleark på siden af ​​fibringelen.

Efter at have vedhæftet HK-2, var enheden fyldt med EGM-2. Enheden blev inkuberet i 3 dage ved 37 grader i en 5 procent CO, inkubator. Mediet blev skiftet med eller uden 5 ng/mlTGF- 1og med 5 ng/mlTGF- 1og 10 umTGF- 1inhibitor efter tre dages inkubation (figur 3).

hvad er cistanche

4.4. Immunocytofluorescens

Samdyrkede væv i enheden blev fikseret med 4 procent (vægt/volumen) paraformaldehydopløsning (Biosesang, Seongnam, Korea) i PBS (Welgene, Gyeongsan, Korea) i 20 min, efterfulgt af permeabilisering med en 20 min nedsænkning i 0,15 procent Triton X-100(Sigma, St.Louis, MO, USA). Prøverne blev derefter behandlet med 3 procent BSA (Sigma, USA) i 1 time. Cellerne blev inkuberet med antistoffer købt fra Abcam. De primære antistoffer var anti-cytokeratin 8 og anti-o-SMA, efterladt i 2 dage ved stuetemperatur (RT). Alexa Fluor 647 konjugeret æsel anti-kanin IgG(H plus L) blev brugt som det sekundære antistof. DNA-mærkning blev udført med en 1:250 fortynding af Hoechst33342 (Thermo Scientific, Rockford, IL, USA) i 3 timer ved stuetemperatur. Billeder blev opsamlet ved hjælp af et Zeiss LSM 710 konfokalt lasermikroskop. Den gennemsnitlige fluorescensintensitet (MFI) blev målt ved hjælp af ImageJ og en fluorescens-intensitetsanalysator.

4.5. Multipleksanalyse af cytokiner

MSD V-Plex Cytokine and Angiogenesis Panel 1 Human kit (Rockville, MD, USA) blev brugt til at måle interleukin-1 beta （IL-1ß） og basal fibroblast vækstfaktor （b-FGF） koncentrationer i enkeltprøver i henhold til producentens anvisninger. Alle prøver blev vurderet for totale proteinniveauer af IL-1 og b-FGF. Mængden (i pg/ml) blev kvantificeret fra standardkurven for hver måling.

4.6. Multiplex Bead Immunoassay

Cytokinkoncentrationer blev analyseret ved hjælp af et multipleksperle-immunoassay-system (Procarta Cytokine Assay Kit; Affymetrix, Inc., Santa Clara, CA, USA), baseret på multiplexing-teknologi (xMAP; Luminex, Austin, TX, USA), ifølge producentens instruktioner. Dataene blev indhentet ved hjælp af en Luminex-kompatibel arbejdsstation og dens managersoftware (Bio-Plex-arbejdsstation og version 6.0-software; Bio-Rad, Tokyo, Japan), i henhold til producentens instruktioner. Human TGF- 1, TGF- 2 og TGF- 3 relateret tilfibroseprocessen blev analyseret samtidigt i de fortyndede prøver. Isoformerne afTGF-blev detekteret ved hjælp af Bio-Plex 200 Systems og kommercielt tilgængelige Bio-Plex ProTM HumanTGF-analyser (Bio-Rad Laboratories, Inc); baseret på oplysningerne fra producenten. Multiplex assay-kittet kan kvantitativt måle multiple cytokiner fra supernatanten med en nedre detektionsgrænse på 1 pg/ml pr. cytokin. Hver prøve blev kørt som en enkelt måling for en begrænset mængde af den opsamlede supernatant.

4.7. Realtids-PCR

RNA-ekstraktion blev udført under anvendelse af TRIzol Reagent (Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA, USA). Master Mix og et Revert Aid First Strand cDNA Synthesis Kit blev brugt til revers transkription af det totale RNA.qPCR blev udført ved anvendelse af Applied BiosystemsTM PowerUpTM SYBRTM Green Master Mix (Thermo Fisher Scientific, Inc.). De specifikke primere blev fremstillet af Bioneer (Daejeon, Korea) og anvendt i dette eksperiment som følger. Primersekvenserne er opsummeret i tabel 1.

Ti mikroliter PowerUp SYBR Green Master Mix, 4 μL cDNA og 2 pmol af hver primer blev brugt til real-time PCR i et slutvolumen på 20 μL. Reaktionen blev udført ved 95 grader i 1 s og 60 grader i 20 s i 45 cyklusser efter denaturering ved 95 grader i 20 s. PCR blev udført i to eller tre eksemplarer for hver prøve. cDNA-niveauer blev bestemt under anvendelse af en standardkurve af cyklustærskler. Alle data for hvert cDNA var inden for den tilsvarende standardkurve. De opnåede data blev normaliseret til -actin cDNA.

4.8. Statistisk analyse

Kvantitative data præsenteres som gennemsnit ±SD eller SE af mindst tre uafhængige eksperimenter. Statistiske analyser blev udført under anvendelse af en to-halet Student's t-test. Vi betragtede kun en signifikant forskel ved et 95 procents konfidensniveau eller højere (s<>

5. Konklusioner

Sammenfattende muliggjorde protokollerne i denne undersøgelse konstruktion af menneskernyrefibrose-efterlignede enheder som model og viste forskellige effekter, der ikke er mulige i 2D-kultureksperimenter. Vi mener, at den evalueringsstrategi, der foreslås i denne undersøgelse, vil føre til en bedre forståelse af det detaljeredefibrosemekanismer involveret i patologiske ændringer undernyresygdom. Den udviklede 3D-nyrefibrose-på-en-chip kunne bruges som en potentiel in vitro-model, som vil bringe os tættere på at skabe en forbedret nyre-på-en-chip-model.

cistanche phelypaes: behandling af nyresygdomme

Referencer

1. Grænse, W.; Noble, N. Transformerende vækstfaktor i vævfibrose.N. Engl. J. Med.1994, 331,1286-1292.

2. Wang, W.; Huang, XR; Li, AG; Liu, F; Li, J.; Truong, LD; Wang, XJ; Lan, HYSigneringsmekanisme for TGF-betal til forebyggelse af nyrebetændelse: Smads rolle. Jeg er. Soc. Nephrol.2005, 16, 1371-1383. [CrossRef]

3. Liu,Y.Renalfibrose: Ny indsigt i patogenesen og terapien.Nyre Int.2006,69,213-217. [CrossRef][PubMed]

4. Andes, D.; Craig, WA Dyremodelfarmakokinetik og farmakodynamik: En kritisk gennemgang. Int. J.Antimicrob.Agents 2002, 19,261-268. [CrossRef]

5. Kim, S.; Takayama, S.Organ-on-a-chip og nyren. Nyre Res. Clin. Pract.2015, 34, 165-169.[CrossRef][PubMed]

6. Jang, KJ; Mehr, AP; Hamilton, GA; McPartlin, LA; Chung, S.; Suh, KY; Ingber, DE Menneskelig nyreproksimal tubuli på en chip til lægemiddeltransport og nefrotoksicitetsvurdering. Heltal. Biol. 2013,5,1119-1129. [CrossRef[PubMedl

7. Reardon, S. 'Organs-on-chips' bliver mainstream. Nature 2015, 523, 266. [CrossRef]

8. Strutz, F; Zeisberg, M; Renziehausen, A.; Raschke, B.; Becker, V; Kooten, CV; Muller, GATGF- 1inducerer proliferation i humane nyrefibroblaster via induktion af basal fibroblastvækstfaktor (FGF-2).Nyre Int. 2001, 59, 579-592.[CrossRef][PubMed]

9. Zanotti, S.; Bragato, C.; Zucchella, A.; Maggi, L.; Mantegazza, R.; Morandi, L.; Mora, M. Anti-fibrotisk virkning af pirfenidon i muskelafledte fibroblaster fra Duchennes muskeldystrofipatienter. Life Sci. 2016, 145,127-136. [CrossRef]

10. Davis, GE.: Camarillo. C, W. En alfa 2 beta 1 integrin-afhængig pinocytisk mekanisme, der involverer intracellulær vakuoldannelse og koalescens, regulerer kapillær lumen og rørdannelse i en tredimensionel kollagenmatrix. Exp. Cell Res. 1996, 224, 39-51.[CrossRef]

11. Bayless, KJ; Davis, G. Cdc42 og Race GTPaserne er nødvendige til dannelse af kapillær lumen i tredimensionelle ekstracellulære matricer. J. Cell Sci. 2002,115,1123-1136. [CrossRef [PubMed]

12. DesRochers, TM; Suter, L.; Roth, A.; Kaplan, DL Bioengineered 3D human nyrevæv, en platform til bestemmelse af nefrotoksicitet. PLoS ONE 2013, 8, e59219. [CrossRef]

13. Astashkina, AI; Mann, BK; Prestwich, GD; Grainger, DW Sammenligning af biomarkører for prædiktiv lægemiddel nefrotoksicitet i nyre 3-D primær organoid kultur og udødeliggjorte cellelinjer. Biomaterials 2012, 33, 4712-4721. [CrossRef] [PubMed]

14. Meng, XM; Nikolic-Paterson, DJ; Lan, HY TGF-beta: Hovedregulatoren affibrose. Nat.Rev.Nephrol.2016,12, 325-338. [CrossRef]

15. Pardali,E.;Goumans, MJ;ten Dijke,P. Signalering fra medlemmer af TGF-beta-familien i vaskulær morfogenese og sygdom. Trends Cell Biol.2010, 20, 556-567. [CrossRef] [PubMed]

16. Cunha, SL; Pietras, K. ALK1 som et spirende mål for antiangiogene terapi af cancer. Blood 2011,117,6999-7006.[CrossRef]

17. Klagsbrun, M.; D'Amore, PA Regulatorer af angiogenese. Annu. Rev. Physiol.1991,53, 217-239. [CrossRef]

18. Folkman, J.;Shing, Y.Angiogenese. J. Biol. Chem. 1992, 267, 10931-10934. [CrossRef]

19. Shweiki, D. Itin, A. Soffer, D.Keshet, E. Vaskulær endothelial vækstfaktor induceret af hypoxi kan mediere hypoxi-initieret angiogenese. Nature 1992, 359, 843-848. [CrossRef]

20. Kim, KJ; Li, B.; Winer, J.; Armanini, M; Gillett, N.; Phillips, HS; Ferrera, N. Inhibering af vaskulær endotelvækstfaktor-induceret angiogenese undertrykker tumorvækst in vivo. Nature 1993, 362, 841-844. [CrossRefl]

21. Peber, MS; Ferrara, N.; Orci, L.; Montesano, R. Potent synergisme mellem vaskulær endotelvækstfaktor og basal fibroblastvækstfaktor ved induktion af angiogenese in vitro. Biochem. Biofys. Res. Commun.1992,189,824-831.[CrossRefl

22. Goto, F.; Goto, K.; Weindel, K.; Folkman, J. Synergistiske virkninger af vaskulær endotelvækstfaktor og basal fibroblastvækstfaktor på proliferation og ledningsdannelse af bovine kapillære endotelceller i kollagengeler. Lab. Investig.1993,69, 508-551.[PubMed]

KLIK HER FOR AT DEL Ⅰ