Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Venligst klik her til del 2

Cistanche har en meget god neurobeskyttende effekt

Gabriel Gonzalez 1,2, Jiˇrí Grz 1, Cosimo Walter D'Acunto 1, Petr Kaˇnovsk2 og Miroslav Strnad1,2,*

1. Laboratory of Growth Regulators, Institut for Eksperimentel Botanik ved Det Tjekkiske Videnskabsakademi,

og Det Naturvidenskabelige Fakultet, Palacký Universitet, Šlechtitel ˚u 27, CZ-78371 Olomouc, Tjekkiet;

Gonzalez.gabriel@seznam.cz (GG); jiri.gruz@upol.cz (JG); waldacun@gmail.com (CWD)

2. Neurologisk afdeling, Universitetshospitalet Olomouc og Det Medicinske og Odontologiske Fakultet,

Palacký University Olomouc, CZ-775 20 Olomouc, Tjekkiet; Petr.Kanovsky@fnol.cz

* Korrespondance: miroslav.strnad@upol.cz; Tlf.: plus 420-585-634-850

Abstrakt: Cytokininerer adenin-baserede fytohormoner, der regulerer nøgleprocesser i planter, såsom celledeling og -differentiering, rod- og skudvækst, apikale dominans, forgrening og frøspiring. I foreløbige undersøgelser har de også vist beskyttende aktiviteter mod humane neurodegenerative sygdomme. For at udvide kendskabet til den beskyttelse (beskyttende aktivitet), de tilbyder, har vi undersøgt naturlige aktivitetercytokininermod salsolinol (SAL)-induceret toksicitet (aParkinsons sygdommodel) og glutamat (Glu)-induceret død afneuron-lignende dopaminerge SH-SY5Y-celler. Vi fandt ud af, at kinetin-3-glucosid, cis-zeatinribosid og N6-isopentenyladenosin var aktive i den SAL-inducerede PD-model. Derudover reducerede trans-, cis-zeatin og kinetin sammen med jernchelatoren deferoxamin (DFO) og nekroptoseinhibitoren necrostatin 1 (NEC-1) signifikant celledødsraten i den Glu-inducerede model. Lactatdehydrogenase-assays afslørede, atcytokininerforudsat lavereneurobeskyttendeaktivitet end DFO og NEC-1. Desuden reducerede de apoptotiske caspase-3/7 aktiviteter mindre kraftigt end DFO. Imidlertidcytokininerhavde meget lignende virkninger som DFO og NEC-1 på superoxid-radikalproduktion. Samlet set viste de beskyttende aktivitet i den SAL-inducerede model afparkinsonneuronalcelledød og den Glu-inducerede model for oxidativ skade hovedsageligt ved reduktion af oxidativt stress.

Nøgleord: cytokinin; phytohormon; neurobeskyttelse; neuronlignende SH-SY5Y-celler; cytotoksicitet; salsolinol; glutamat; oxidativt stress; Parkinsons sygdom

cistanche plantepå virkningerne påNeurobeskyttelse

1. Introduktion

Parkinsons sygdom(PD) er den næstmest almindelige motorrelaterede neurodegenerative sygdom, og antallet af globalt diagnosticerede tilfælde forventes at stige fra 6 millioner i 2015 til mere end 12 millioner i 2040 [1]. Det er karakteriseret ved motoriske symptomer forbundet med specifik degeneration og tab af cirka 30-70 procent af dopaminerge (DA)neuroneri substantia nigra pars compacta og deres fremspring til striatum [2,3]. Nogle af mange kendte molekylære kendetegn ved PD inkluderer øget oxidativt og nitrosativt stress, mitokondriel dysfunktion [4-7], excitotoksicitet [8], ubiquitin/proteasomal systemdysfunktion [9] og neuroinflammation [10]. Nuværende behandlinger har forskellige uønskede bivirkninger og tilbyder kun symptomatisk lindring [11], så der er intense bestræbelser på at udvikle lægemidler med effektiv helbredende virkning på degenererende DAneuroner. Ressourcer, der kan hjælpe med en sådan indsats, omfatter naturlige forbindelser, der har en tendens til at have færre bivirkninger. Blandt andet har stoffer fra Ginkgo biloba (ginkgetin, ginkgolid, bilobalid), ginseng (ginsenosider) og flavonoider (baicalein, kaempferol, rutin og luteolin) vist bred beskyttende aktivitet i adskillige in vitro-modeller (inklusive den humane neuroblastomcellelinje SH) -SY5Y) og in vivo-modeller af PD induceret af 1,1'-dimethyl-4,4'-bipyridiniumdichlorid (paraquat), 1-methyl- 4-phenyl-1, 2,3,6-tetrahydropyridin (MPTP), 1-methyl-4-phenylpyridinium (MPP plus) og 6-hydroxydopamin (6-OHDA) [12].

Undersøgelsen præsenteret her fokuserede på virkningerne af en klasse af naturlige fytohormoner kaldetcytokininer(CK'er) og deres metabolitter, som er velkendte regulatorer af celledeling, vækst, differentiering og bladaldring i planter [13]. Strukturelt er CK'er adeninderivater substitueret i N6--stillingen med enten en prenyl (isopentenyl) eller aromatisk sidekæde. Naturlige former omfatter 6-(E)-4-hydroxy-3-methyl-but-2-enylaminopurin (transzeatin, tZ), dens 6-(Z)-isomer ( cis-zeatin, cZ), N6-isopentenyladenin (iP), 6-benzylaminopurin (BAP), 6-furfurylaminopurin (kinetin, K) og ortho-, meta-, og para-hydroxylerede eller methoxylerede derivater af BAP, kaldet topoliner (oT, mT, pT, MeoT, MemT, MepT). Forskellige 9-ribosider, 9-nukleotider samt 7-, 9 og O-glukosider af disse former forekommer også almindeligt, som vist i tabel 1. Ud over deres oprindelige roller i planter, har CK'er vist potent antoxidantaktivitet over for reaktive oxygenarter (ROS), der giver beskyttelse i flere in vitro stressmodeller af aldringsassocierede lidelser [14].

Tabel 1. Strukturer afcytokininerog de positive kontrolmidler.

Især har CK'er angiveligt cytobeskyttende aktivitet i modeller som H2O2--induceret celledød af humane fibroblaster [15] og D-galactose-induceret glycoxidativ stress i rotteastrocytter [16]. Endnu vigtigere, i denne sammenhæng har de vistneurobeskyttendeeffekter i modeller relateret til neurodegenerative sygdomme såsom familiær PD, proteasomhæmmer MG 132-induceret eller H2O2-induceret toksicitet i SH-SY5Y-celler [17], Glu-induceret oxidativ beskadigelse af HT22 musehippocampusneuronalceller [18] og PC12-cellemodellen for Huntingtons sygdom [19]. Andre undersøgelser indikerer, at CK'ers beskyttende aktiviteter involverer både direkte [20,21] og indirekte [15,16,22] modulering af cellulære redoxsystemer. Ud over CK'ers karakteristiske antioxidantaktiviteter har de angiveligt regulerende virkninger i mitokondrier, der forbedrerneuronallevedygtighed [17]. Desuden kan K stabilisere mitokondriemembranpotentialet og øge ATP-produktionen og derved mindske Glu-induceret død af HT22-celler [18]. Men på trods af resultater vedrørende deres virkninger i flere modeller, er der begrænset viden om CK'ers beskyttende aktivitet i den mest almindelige (sporadiske) form for PD.

For at imødegå den videnskløft, der er beskrevet ovenfor, evaluerede vi systematisk virkningerne af naturlige CK'er og deres metabolitter i to in vitro-modeller: En salsolinol (SAL)-induceret model af PD og glutamat (Glu)-induceret model for oxidativ skade ineuron-lignende SH-SY5Y-celler. Denne linje blev brugt på grund af dens dopaminerge fænotype, følsomhed over for dopaminerge toksiner såsom SAL og bekvem dannelse af relativt stabile populationer af differentieredeneuronalceller med reducerede proliferationshastigheder efter 48 timers eksponering for 10 uM all-trans retinsyre (ATRA) [23-25].

Neuron-lignende celler blev udsat for endo/exotoksin SAL for at efterligne PD-patologi via dysfunktion af cellulært redoxsystem: Depletering af glutathion (GSH) og hæmning af både antioxidant enzym (Cu/Zn superoxiddismutase og katalase) aktiviteter og mitokondrielle komplekser (I og II), hvilket fører til apoptose og nekrose [26]. I den anden model inducerer Glu potentielt dødelig oxidativ skade ved afbrydelse af redoxsystemet. Begge modeller i SH-SY5Y-cellelinjen er tidligere blevet brugt i neurobeskyttelsesundersøgelser [26,27].

Cytobeskyttende og/eller antioxidante aktiviteter relateret til degenerative lidelser af K, iP, BAP, iPR, tZR og deres frie baser er blevet testet, og (som skitseret ovenfor) er nogle CK'er blevet fundet at have beskyttende aktiviteter ineuronalceller. Ingen tidligere publicerede undersøgelser har dog undersøgt strukturen-neurobeskyttendeaktivitetsforhold (SAR) af naturlige CK'er (tabel 1). Derfor blev denne undersøgelse foretaget for at undersøgeneurobeskyttende(anti-parkinson) aktiviteter af næsten alle kendte naturligt forekommende CK'er i de udvalgte SAL- og Glu-inducerede modeller af neurodegeneration. Først evaluerede vi hver af CK'ernes oxygenradical absorbance-kapacitet (ORAC) og (i sikkerhedstests) cytotoksicitet over forneuron-lignende SH-SY5Y-celler. Derefter evaluerede vi forbindelsernes neurobeskyttende virkninger og indflydelse på oxidative stressniveauer ved at måle superoxid (O2.) produktion (dihydroethidium, DHE assay) og apoptotisk caspase-3,7 aktiviteter. Resultaterne giver de første rapporterede systematiske indikationer af sammenhængen mellem naturlige CK'ers strukturer ogneurobeskyttendeaktiviteter.

Cistanche herbahar en meget godneurobeskyttendeeffekt

2. Resultater og diskussion

2.1. Cytokinins' Oxygen Radical Absorbance Capacity (ORAC)

Da neurodegenerative sygdomme er forbundet med forhøjet oxidativt stress, spiller antioxidantaktivitet en nøglerolle i forsvaret afneuronalceller. For at vurdere CK'ers biologiske potentiale i denne henseende blev antioxidantkapacitet bestemt af ORAC, som almindeligvis bruges til at bestemme stoffers antioxidantkapacitet [28]. Antioxidantkapacitet blev udtrykt som Trolox-ækvivalenter (TE), som bestemmer effektiviteten (lavere til højere) af forbindelser end Trolox på en ækvimolær basis. Resultaterne, præsenteret i tabel 1, viser, at topoliner (oT, mT og pT) og deres ribosider (oTR, mTR, pTR) har høje antioxidantaktiviteter, som sandsynligvis er tæt beslægtet med det elektronrige system i deres C{{ 3}}hydroxybenzylaminosubstituent. På trods af deres høje ORAC-værdier havde topolinerne ikke højeneurobeskyttendeaktivitet. Men flere heteroaromatiske CK'er, herunder K (N6-furfurylaminopurin) og ikke-aromatisk cis-zeatin-O-glucosid (cZOG), som har en 4-hydroxy-3-methylbut{{7} }en-1-yl)aminosubstituent, viste også høj antioxidantkapacitet (tabel 2). Andre CK-metabolitter – inklusive kinetin-3-glucosid (K3G), kinetin ribosid 5<-monophosphate (kmp),="" kinetin-9-glucoside="" (k9g),="" and="" trans-zeatin=""><- monophosphate="" (tzmp)—had="" moderate="" antioxidant="" activity.="" all="" the="" others="" had="" detectable="" capacity="" except="" bap.="" these="" results="" confirm="" previous="" findings="" that="" ip,="" pt,="" k="" can="" act="" as="" direct="" radical="" scavengers,="" but="" conflict="" with="" the="" previously="" reported="" activity="" of="" bap="" in="" the="" orac="" test="" [20,21].="" to="" conclude,="" these="" compounds="" have="" potential="" in="" the="" treatment="" of="" neurodegenerative="" diseases="" associated="" with="" increased="" oxidative="" stress="">

cistanche stamme fordelepåanti-Alzheimers sygdom

2.2. Differentiering af SH-SY5Y-celler

At studere CK'er'neurobeskyttendevirkninger blev SH-SY5Y neuroblastomceller (valgt af allerede beskrevne årsager [23]) differentieret ved eksponering for 10 uM ATRA i 48 timer som tidligere beskrevet [23,24]. De blev derefter farvet ved hjælp af et membranfarvningssæt for at undersøge morfologiske forskelle mellem udifferentierede og differentierede celler. Som vist i figur 1A erneuron-lignende differentierede celler voksede mindre tæt, var mere langvarige og producerede flere neuritter (angivet med gule pile i figuren) end de udifferentierede celler. Disse morfologiske ændringer forbundet med differentiering er tidligere blevet observeret, selv efter kortere eksponering (24 timer) for ATRA [24,30]. Endnu vigtigere stiger antallet af neuriter dramatisk til et niveau, hvor de kan skabe et neuritnetværk. Af denne grund blev cellelevedygtighed målt for at sammenligne proliferationshastigheden af ​​udifferentierede og differentierede SH-SY5Y-celler. Levedygtigheden af ​​udifferentieret SH-SY5Y blev taget som den maksimale spredningshastighed. Resultaterne præsenteres i

Figur 1B viser, at proliferationshastigheden (vurderet ved Calcein AM-levedygtighedsanalyse) af SH-SY5Y blev reduceret med 23 procent efter 48 timers ATRA-behandling.

Figur 1. (A) Fluorescerende mikrofotografier af SH-SY5Y-celler med membraner farvet med et Neurite-udvækstsæt (Invitrogen™): Kontrol, udifferentierede celler (udsat for falsk behandlingsopløsning:<0.1% dmso);="" cells="" differentiated="" by="" exposure="" to="" 10="" um="" all-trans="" retinoic="" acid="" (atra)="" for="" 48="" h.="" bars="50" um.="" (b)="" proliferation="" rates="" of="" undifferentiated="" and="" differentiated="" sh-sy5y="" cells:="" numbers="" of="" viable="" cells="" after="" 48="" h="" exposure="" to=""><0.1% dmso="" and="" 10="" um="" atra,="" respectively.="" data="" were="" obtained="" from="" five="" independent="" experiments="" with="" triplicate="" cultures:="" asterisks="" show="" the="" significance="" of="" differences="" in="" numbers="" of="" viable="" cells="" (as="" percentages="" of="" numbers="" of="" undifferentiated="" cells)="" between="" the="" cultures:="" *="" p="" <="">

Tabel 2. Oxygen radikal absorbanskapacitet (ORAC) af de testedecytokininer(CK'er) udtrykt som Trolox-ækvivalenter (TE) på en ækvimolær basis. Navne, forkortelser og strukturer af CK'erne er præsenteret i figur 1.

2.3. Cytotoksicitet af cytokininer mod neuronlignende SH-SY5Y-celler

I test af CK'ernes potentielle cytotoksicitet med Calcein AM-levedygtighedsanalysen [31] viste de fleste lav toksicitet over forneuron-lignende SH-SY5Y-celler. Faldet i levedygtighed under 90 procent blev betragtet som en tærskel for neurotoksisk effekt. De eneste to undtagelser var KR (11,9 procent) og pTR (10,5 procent), i overensstemmelse med tidligere resultater, som noglecytokininmetabolitter, især ribosider, kan have cytotoksiske virkninger [32]. Andre ribosider, såsom cZR, iPR, oTR, mTR, forårsagede ingen tilsyneladende reduktion ineuron-lignende SH-SY5Y-cellers levedygtighed (tabel 3). DFO [33,34] og NEC-1 [35,36] brugt som positive kontroller i vores in vitro-model blev også bevist af andre undersøgelser på SH-SY5Y-celler som ikke-toksiske. Som konklusion viste hovedsagelig derivater KR og pTR lavere levedygtighed end 90 procent og blev derfor anset for mindre interessante for yderligere evaluering i begge in vitro-modeller af neurodegeneration.

Tabel 3. Cellelevedygtighed afneuron-lignende SH-SY5Y celler efter eksponering forcytokinineri 24 timer. Levedygtighed udtrykkes som en procentdel af DMSO-kontrol.

2.4. Identifikation af neurobeskyttende cytokininer i den SAL-inducerede model af PD

Til disse tests,neuronalSH-SY5Y-celler blev differentieret i 48 timer og derefter co-behandlet med 500 uM SAL og hver CK i tre koncentrationer (0,1, 1, 10 uM). Som vist med den stiplede linje i figur 2A reducerede anvendelse af neurotoksinet SAL ved 500 uM levedygtigheden af ​​differentierede SH-SY5Y-celler ifølge Calcein AM-assayet med 30 procent. N-acetylcystein (NAC) blev brugt som en positiv kontrol i disse test på grund af dets tidligere rapporterede neurobeskyttende effekt i den samme SH-SY5Y celle-baserede in vitro model [37]. Koncentrationer på 10, 100 og 1000 uM NAC blev brugt til at inducere delvis eller næsten fuldstændig genopretning i SAL-modellen. NAC var i stand til at øge cellelevedygtigheden ved 100 uM og 1 mM koncentration, svarende til henholdsvis 83,39 ± 1,74 procent og 89,21 ± 2,89 procent. NAC's beskyttende aktivitet ved 100 µM (angivet med den stiplede linje i figur 2A) blev brugt som en styrketærskel for udvælgelse af CK'er til yderligere test. Ifølge denne opsætning er de biologisk signifikante neurobeskyttende aktiviteter blevet observeret med K3G ved 10 uM (81,84 ± 2,36 procent), cZR ved 0,1 uM (81,14 ± 2,30 procent) og 1 uM (81,53 ± 1) i 2,24 procent. uM (82,43 ± 2,51 procent). Således var iPR og cZR effektive neurobeskyttende midler ved lavere mikro- eller sub-mikromolære koncentrationer end NAC. Detcytokininscreening afslørede også, at mange andre metabolitter moderat kan øge levedygtigheden af ​​differentierede SH-SY5Y-celler udsat for SAL. Nogle testede CK'er (herunder tZR, tZMP, mT, mTR, pT og pTR) havde dog en meget lille beskyttende effekt.

Figur 2. (A)Neurobeskyttendeaktivitet afcytokininerog N-acetylcystein (NAC) i SAL-induceret model af PD påneuron-lignende SH-SY5Y-celler. Den stiplede linje viser NAC-effekttærsklen, ved hvilkencytokininerblev udvalgt til yderligere test; den stiplede linje tæller derefter antallet af levende celler i Calcein AM-analysen efter behandling af cellerne med 500 uM SAL; sunde kontrolceller (CTR, DMSO < 0,1="" procent).="" tredobbelt="" på="" mindst="" tre="" adskilte="" dage.="" (b)="" normaliseret="" sh-sy5y-celledød="" efter="" propidiumiodidfarvning.="" tredobbelt="" på="" mindst="" fem="" uafhængige="" dage.="" *="" p="" sammenlignet="" med="" køretøjet="" med="" 500="" um="" sal,="" #="" p="" sammenlignet="" med="" køretøjet="" uden="" 500="" um="">

For at bekræfte de mest aktive naturlige CK'ers anti-PD-aktiviteter blev de samlede celledødsrater kvantificeret ved propidiumiodid (PI) farvning, som (i modsætning til cellemetabolisme-baserede levedygtighedstests) kun mærker celler med nedsat membranintegritet, døende celler , og allerede døde celler [38]. Resultaterne blev normaliseret med hensyn til celledødsraten efter behandling med SAL alene (sat til 100 procent). Som vist i figur 2B reducerede det positive NAC-kontrolstof celledødsraten signifikant ved både 100 og 1000 uM (til henholdsvis 77,3 ± 2,21 procent og 77,5 ± 4,44 procent). Samlet set viste NAC sig at være enneurobeskyttendeagent med sammenlignelige aktiviteter som dem, der er registreret i andre undersøgelser på en dosisafhængig måde (i 50-500 uM-området) for SH-SY5Y-celler [37]. PI-assayet viste også, at CK'erne cZR, K3G og iPR har beskyttende aktiviteter, især cZR, som reducerede celledødsraten til 71,6 ± 5,08 procent ved 0,1 uM. I modsætning til cZR havde K3G omvendte dosisafhængige virkninger med maksimal aktivitet ved 10 uM (reducerer celledødsraten til 75,0 ± 3,69 procent) og NPR's aktivitet toppede ved 1 uM (reducerede frekvensen til 73,9 ± 4,99 procent). Samlet, som vist i figur 2, gav CK'er en sammenligneligneurobeskyttendeaktivitet til 100 uM NAC ifølge både levedygtigheds- og cytotoksicitetsassays. Desuden var effektive koncentrationer af CK'er såsom cZR og iPR meget lavere end NAC's i de sub-mikromolære og mikromolære områder. Tidligere observationer opnået efter dobbeltfarvning med PI og annexin V/PI indikerer, at K kan reducere apoptose [39], og derfor undersøgte vi også virkningerne af CK'er og NAC på oxidativ stress og caspase-3,7-aktivering (en vel- kendt apoptosemarkør).

2.5. Cytokininer Reducerer SAL-induceret Superoxid-radikaldannelse

Oxidativt stress (OS) er en vigtig patologisk bidragsyder til adskillige neurodegenerative sygdomme, og både SAL (ved > 100 uM) og tetrahydroisoquinoliner er potente OS-inducere [26,40]. Således målte vi også dannelsen af ​​superoxid (en ROS og vigtig OS-markør) i nærvær af SAL med og uden udvalgte CK'er eller NAC. For at sikre, at SAL forårsagede tilstrækkelig OS-skade i SH-SY5Y-celler til at detektere responser, blev celler udsat for 500 uM SAL i 24 timer, som i tidligere arbejde [37] og i overensstemmelse med resultaterne præsenteret ovenfor. Cellerne blev derefter farvet med dihydroethidium (DHE) for at detektere superoxidradikaldannelse [41,42]. Som det kan ses i figur 3A, blev celler visuelt observeret efter mærkning med DHE (som giver røde fluorescenssignaler efter reaktion med superoxid). SAL inducerede en klar stigning i DHE-fluorescens i forhold til niveauer i kontrolceller og NAC-behandlede celler. Desuden havde tre CK'er (cZR, K3G og iPR) lignende visuelle effekter som NAC (100 uM) på DHE-fluorescens. Ydermere var den spektrofotometriske kvantificering med hensyn til niveauer påvist i celler behandlet med SAL alene (sat til 100 procent), i overensstemmelse med mikroskopiobservation. Som vist i figur 3B var det normaliserede superoxidniveau i raske kontrolceller (CTR) mindre end 39 procent, og det positive kontrolstof NAC gav moderat til fuldstændig reduktion af SAL-induceret ROS-produktion ved 100 og 1000 uM (til 76,3) ± 4,33 og 44,3 ± 5,12 procent), hvilket tyder på, at glutathion (GSH) udtømning spiller en nøglerolle i modellen [26]. Interessant nok inducerede SAL dramatiske reduktioner i GSH-indholdet i SH-SY5Y-celler ledsaget af forhøjelse af OS, til niveauer svarende til dem, der tidligere er observeret i en undersøgelse, der også registrerede NAC-medierede effekter på cellelevedygtighed, celledød og glutathionindhold [43] . Resultater præsenteret her viser, at NAC også reducerede superoxidradikaldannelse til basale niveauer (dvs. niveauer i DMSO-behandlede kontroller). CK-ribosider blev testet i aktive koncentrationer (0,1-1 uM) sammen med K3G og reducerede signifikant cellernes indhold af superoxidradikal til følgende niveauer (i forhold til celler behandlet med SAL alene): cZR 80,34 ± 5,99 procent ved 0,1 uM ; K3G 77,1 ± 4,89 procent ved 10 uM; iPR 79,2 ± 5,91 procent ved 1 uM, sammenlignelig med virkningerne af 100 uM NAC. Samlet indikerer de ortogonale demonstrationer stærkt, at potent anti-OS-aktivitet spiller en nøglerolle i de beskyttende virkninger af NAC og CK'er i den SAL-inducerede PD-model. En sammenhæng mellem OS-forbedring og neurobeskyttelse er også blevet bemærket af andre forfattere [29], og adskillige undersøgelser har fundet, at K og BAP direkte kan forbedre OS-aktiviteter [44] gennem dannelsen af ​​komplekser med Cu2 plus-ioner, hvilket resulterer i superoxiddismutase- lignende aktivitet [45,46]. Imidlertid er CK'er også blevet beskrevet som indirekte antioxidanter med virkninger medieret af induktion af den nuklear faktor erythroid 2-relaterede faktor 2 (NRF2) antioxidant respons pathway (iPR) [22] eller delvis genoprettelse af glutathionperoxidase og SOD aktiviteter ( K) [16]. Derudover har K efter sigendeneurobeskyttendeaktiviteter mod OS-skade induceret af H2O2 i SH-SY5Y-celler [17]. Begge typer af rapporteret anti-ROS-aktivitet af CK'er kan potentielt forklare virkningerne af cZR, K3G og iPR i reduktionen af ​​superoxidradikaler i den SAL-inducerede SH-SY5Y-celle PD-model [47-50].

Figur 3. (A) Mikrofotografier, der viser SAL-induceret oxidativ stress og oxidativ stress-reducerende aktiviteter afcytokinineri menneskelig differentieretneuron-lignende SH-SY5Y celler visualiseret ved fluorescensmikroskopi efter dihydroethidium (DHE) mærkning. Barer=50 um. Billederne viser celler behandlet med DMSO-opløsning (kontroller), 500 uM salsolinol (SAL) alene og kombinationer af 500 uM SAL og 1000 uM NAC (plus NAC), 0,1 uM cZR (plus cZR); 10 uM K3G ( plus K3G), 1 uM iPR ( plus iPR) i 24 timer før farvning med DHE. (B) SAL-induceret superoxidradikaldannelse ogcytokinineller N-acetylcystein (NAC) beskyttende aktivitet. Grafen viser kvantificeringen af ​​DHE-farvede celler ved hjælp af Infinite M200 Pro mikropladelæser (Tecan, Østrig). Tredobbelt på mindst fem uafhængige dage. * P sammenlignet med køretøjet med 500 uM SAL, # P sammenlignet med køretøjet uden 500 uM SAL.