Maternal autogen inaktiveret virusvaccination øger immuniteten mod PRRSV hos smågrise, del 1

Abstrakt:

Moder-afledt immunitet er en kritisk komponent for overlevelse og succes for afkom hos grise for at beskytte mod cirkulerende patogener såsom Type 2 Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus (PRRSV-2).

Formålet med denne undersøgelse er at undersøge overførslen af ​​anti-PRRSV-immunitet til smågrise fra gylte, der modtog modificeret-levende virus (MLV) alene (behandling (TRT) 0), eller i kombination med en af ​​to autogene inaktiverede vacciner (AIV'er, TRT 1 plus 2). Smågrise fra disse gylte blev udfordret med den autogene PRRSV-2-stamme ved to ugers alder, og deres adaptive immunrespons (IR) blev evalueret indtil 4 uger efter inokulering (dpi).

Den systemiske humorale og cellulære IR blev analyseret i præ-farve-gylte, hos smågrise, præ-inokulering og ved 2 og 4 wpi. Begge AIV'er beskyttede delvist pattegrisene med reduceret lungepatologi og øget vægtøgning; TRT 1 sænkede også pattegriseviræmi, bedst forklaret ved den AIV-inducerede produktion af neutraliserende antistoffer hos gylte og deres overførsel til pattegrise. Hos smågrise, præ-inokulering, var de vigtigste systemiske IFN-producenter CD21 plus B-celler. Fra 0 til 4 wpi aftog disse B-cellers rolle, og CD4 T-celler blev de primære systemiske IFN-producenter.

Gode ​​levende vira henviser til vira, der ikke forårsager sygdom, og de har et vist forhold til den menneskelige krops immunitet. Levende vira kan stimulere det menneskelige immunsystem til at producere et immunrespons og derved øge menneskets immunitet. Undersøgelser har vist, at efter at den menneskelige krop er inficeret med en levende virus, vil den frigive nogle mediatorer og cytokiner, som kan aktivere immunceller, fremme immunsystemets funktion og forbedre kroppens evne til at modstå vira.

Derudover kan godartede og levedygtige vira også konkurrerende optage celler, hvilket gør det vanskeligt for patogener at invadere og reproducere, og derved beskytte den menneskelige krop mod andre infektioner. Derfor kan passende godartet og levende virusinfektion forbedre menneskets immunitet, men overdreven infektion kan føre til sygdom. Derfor bør folk i det daglige liv være opmærksomme på at kontrollere infektionen af ​​levende vira og forbedre immuniteten gennem en sund livsstil. Fra dette synspunkt er vi nødt til at forbedre immuniteten. Cistanche kan forbedre immuniteten betydeligt. Kødaske indeholder en række biologisk aktive ingredienser, såsom polysaccharider, to svampe og Huangli osv. Disse ingredienser kan stimulere forskellige funktioner i immunsystemet. cellelignende celler, hvilket øger deres immunaktivitet.

Klik på sundhedsmæssige fordele ved cistanche

I lungerne var CD8 T-celler de primære, og CD4 T-celler var de sekundære IFN-producenter, inklusive en ny undergruppe af porcine CD8-CCR7-CD4 T-celler, potentielt terminalt differentierede CD4 TEMRA-celler. Sammenfattende viser denne undersøgelse, at moder AIV-vaccination kan forbedre beskyttelsen af ​​smågrise før fravænning mod PRRSV-2; den viser vigtigheden af ​​at overføre neutraliserende antistoffer til smågrise, og den introducerer to nye undergrupper af immunceller i grise - IFN-producerende CD21 plus B-celler og CD8 −CCR7− CD4 T-celler.

Nøgleord:

modervaccination; autogen inaktiveret vaccine; overførsel af immunitet; humoral immunrespons; cellemedieret immunrespons; T-celler; PRRSV; svin; IFN-producerende B-celler; CD4 TEMRA-celler.

1. Introduktion

Maternal-derived immunitet (MDI) hos pattedyr er en ærefrygtindgydende symfoni ("harmonisk kompleksitet"—[1]). I dette system, eller symfoni, overfører en mor immunbeskyttelse (midlertidig og/eller varig) til sit afkom enten under drægtighed gennem moderkagen, efter fødslen gennem brystsekreter eller begge dele [2]: mennesker modtager immunglobuliner under drægtighed og til sidst gennem bryster. sekret [3]; hunde og gnavere modtager immunglobuliner under drægtighed og gennem brystsekret, og grise og andre husdyr modtager kun immunglobuliner gennem brystsekret.

I lighed med andre arter modtager pattegrise denne MDI i form af immunglobuliner, immunceller og andre immunrelaterede molekyler [4,5]. Mens immunoglobuliner kan modtages fra forskellige søer (= krydsfostrende), er det kun biologiske mødre, der med succes kan overføre immunceller til deres afkom [5], og mængden af ​​råmælksindtagelse hos smågrise reducerer dødeligheden betydeligt og forbedrer ydeevnen [6 ]. Disse immunceller omfatter B-celler [7], såvel som forskellige T-celle-undersæt-CD4, CD8 og hovedsageligt T-cellereceptor (TCR)-δ T-celler [8].

Disse T-celle-undersæt kan derefter skelnes yderligere baseret på deres differentieringstrin og målsøgningsmønster. Hos grise bruges CD8-kæden til at differentiere CD8 - naive fra CD8 plus antigen-erfarne eller hukommelse CD4 T-celler [9-11]. Ekspressionen af ​​kemokinreceptoren (CCR) 7 adskiller yderligere CCR7 plus lymfeknude homing fra CCR7-perifere vævs-homing T-celler [12]. Med en kombineret CD8/CCR7-analyse kan vi så skelne mellem flere forskellige T-celle-undersæt: CD8-CCR7 plus naive CD4 T-celler, CD8 plus CCR7 plus central hukommelse (TCM) CD4 T-celler og CD8 plus CCR7- effektorhukommelse (TEM ) CD4 T-celler; perifert vævs-homing CCR7− og lymfeknude-hosing CCR7 plus CD8 T-celler og CD8 −CCR7−, CD8 plus CCR7− og CD8 plus CCR7 plus TCR-δ T-celler.
Mens vi tidligere har rapporteret, at svin TCR-δ T-celler har et omvendt målsøgningsmønster sammenlignet med deres TCR-modstykker, er den specifikke rolle for disse forskellige undergrupper endnu ikke beskrevet [13]. Både undergrupper af immunceller og antistoffer overføres til afkommet for at beskytte dem mod forskellige patogener [4,5].

I årtier har det mest katastrofale patogen for grise været porcine reproduktive og respiratoriske syndromvirus (PRRSV, [14,15]). Der findes to hovedtyper af PRRSV – type 1 og 2 (PRRSV-1 og 2); deres høje mangfoldighed og immunsuppressive kapacitet gør PRRSV til en problematisk sygdom, hvilket fører til enorme økonomiske tab for svineindustrien [16] og indtil videre, mens vacciner yder delvis beskyttelse mod PRRSV, har de ikke været i stand til fuldt ud at kontrollere denne sygdom.

To hovedvaccinetyper er tilgængelige for at beskytte mod PRRSV - modificerede levende virus (MLV) vacciner og inaktiverede vacciner, hovedsageligt autogene inaktiverede vacciner (AIV'er); begge typer står dog over for deres udfordringer.

Den lange tid til at udvikle de meget immunogene MLV-vacciner betyder, at de sædvanligvis er mere heterologe til farm-prævalente PRRSV-stammer, og mens AIV'er er rettet mod disse farm-prævalente stammer, gør deres inaktiverede natur dem generelt mindre immunogene.

Disse udfordringer fører til mangel på beskyttelse, især hos unge grise, som kan tilskrives tre faktorer: For det første begrænser den høje mutationsrate af PRRSV heterolog beskyttelse, så det reducerer MLV-vaccineeffektiviteten; for det andet begrænser dens immunsuppressive kapacitet svagere vacciner (f.eks. AIV'er), og dens forsinkelse af induktionen af ​​et beskyttende immunrespons efterlader unge grise særligt modtagelige [17]; og for det tredje er vores forståelse af immunresponset på PRRSV, især hos smågrise, begrænset. Loving og Lunney lavede en flot anmeldelse vedrørende den generelle forståelse af immunresponset på PRRSV [18,19].

Hovedsageligt baseret på den forlængede tid til at etablere vaccine-induceret immunitet mod PRRSV, vaccinerer svineproducenter ofte gylte og søer for at muliggøre overførsel af immunitet til smågrise. Forskning i modervaccination ved hjælp af en kommerciel MLV mod type PRRSV-1 forhindrede ikke vaccination af 2 eller 3-uger gamle pattegrise, og den beskyttede delvist smågrise mod heterolog udfordring [20]. Denne vaccinationsstrategi inducerede også PRRSV--1-specifikke IgG-, IgA- og interferon- (IFN)-udskillende celler i råmælken og mælken fra vaccinerede søer. Disse IFN-producerende celler er meget vigtige i anti-virale responser, herunder i PRRSV [19,21].
Denne vaccination inducerede også serum anti-PRRSV IgG, som var påviselig efter seks ugers alderen for uvaccinerede smågrise og forblev stabil i vaccinerede smågrise før udfordringen; alligevel kunne IFN-udskillende celler ikke skelnes fra baggrundsniveauer i præ-fravænnede smågrise [22]. Mens brugen af ​​MLV'er er en industristandard, synes et kombineret vaccinationsprogram med en MLV-prime- og AIV-boost-vaccination lovende at overvinde hver af ulemperne ved uafhængigt at bruge MLV'er og AIV'er.

Derfor var hovedmålet med denne undersøgelse ikke kun at bestemme, om, men også hvordan, modervaccination med to forskellige AIV'er (behandling (TRT) 1 plus 2) kan booste en industristandard MLV-vaccination alene (TRT 0 ), for bedre at beskytte afkommet mod tidlig PRRSV2-udfordring. Til dette formål undersøgte vi det vaccine-inducerede humorale og cellemedierede immunrespons (CMI) i disse gylte, og vi udfordrede tidlige smågrise fra gylte inden for hver af disse grupper ved 2 ugers alderen. Det systemiske og lokale immunrespons hos disse pattegrise blev fulgt i 2-4 uger.

Vi viser, at AIV boost-vaccination kunne forbedre beskyttelsen af ​​smågrise mod PRRSV-udfordring ved 2 ugers alderen, og vi identificerer også de underliggende immunmekanismer og karakteriserer anti-PRRSV humoral og CMI-respons hos disse unge grise. Derudover påviste vi to nye celletyper hos grise: (1) CD8 −CCR7− CD4 T-celler, der i høj grad bidrager til IFN-produktionen i bronchoalveolær lavage (BAL) - potentielle CD4 TEMRA-celler, og (2) en vigtig kilde til anti-PRRSV-responset især hos smågrise - IFN-producerende B-celler.

2. Materialer og metoder

2.1. Undersøgelsesdesign, dyr og prøvebehandling

Formålet med denne undersøgelse var at evaluere effekten af ​​forskellige moder-PRRSV2-vaccinationsserier på beskyttende immunitet hos fravænnede smågrise mod PRRSV-2. Før undersøgelsen blev en cirkulerende PRRSV-2-stamme (restriktion fragment length polymorphism (RFLP), 1-7-4) fra en North Carolina svinekødsvirksomhed isoleret og opformeret af to uafhængige biologiske videnskabsvirksomheder; de producerede to adskilte autogene vacciner. Begge vacciner indeholdt forskellige proprietære komponenter, men indeholdt den samme inaktiverede 1-7-4 PRRSV-2-stamme. Designet af denne undersøgelse er illustreret i figur 1.

Begge vaccinationer blev administreret intramuskulært i en serie på fire doser før faring: Ifølge North Carolina-svinevirksomhedens virksomhedsvaccinationsplan blev 46 PRRSV-2 negative gylte i en kommerciel sofarm vaccineret med Ingelvac PRRS MLV-vaccinen (Boehringer Ingelheim Vetmedica) GmbH, Tyskland) ni uger før avl. For at opretholde konsistent terminologi gennem hele denne undersøgelse, vil de indskrevne kønsmodne hungrise (her defineret som gylte) blive omtalt som gylte, selv efter at de er blevet avlet og født (almindeligvis omtalt som søer). Fire uger før avl blev der udtaget blodprøver fra alle gylte til serum, og derefter blev gylte fordelt i tre behandlinger: TRT 0 (kun MLV-vaccination); TRT 1 (MLV-vaccination plus 4 doser autogen (1-7-4) inaktiveret vaccine 1); eller TRT 2 (MLV-vaccination plus 4 doser autogen (1-7-4) inaktiveret vaccine 2).

Gilts that did not breed were dropped from the study. 3 weeks before farrowing, blood was collected from pregnant gilts for the isolation of serum and peripheral blood mononuclear cells (PBMC). At this point, five gilts remained in both TRT 0 and TRT 2; nine gilts remained in TRT 1. Within these gilts, we selected three gilts per group to provide the piglets for the challenge study. The selected gilts had an adequate litter size (>7) og den højeste serum fluorescerende fokus neutralisation (FFN) titer (primære immunkriterier) og den højeste CD4 T-celle IFN-reaktion (sekundære immunkriterier) mod AIV udfordringsstammen inden for deres gruppe. For TRT 1 plus 2 varierede disse FFN-titre fra 1:4 til 1:128. Da TRT {{10}} ikke havde nogen titere mod AIV-stammen, valgte vi gyltene med de højeste anti-MLV-titre; disse titere varierede fra 1:16 til 1:32. IFN-responset i alle udvalgte gylte varierede fra 0,09-0,21 procent af de samlede CD4 T-celler.

Hver af disse gylte gav fire smågrise til udfordringsundersøgelsen. Ved 2 ugers alderen (= 0 uger efter infektion, wpi) blev de fire pattegrise med den højeste gennemsnitlige kuldvægt udvalgt til udfordringsundersøgelsen og transporteret til Biosecurity Level 2 boligfaciliteterne på North Carolina State University ( NCSU) Laboratory Animal Resources (LAR) (Raleigh, North Carolina). Her blev de tilfældigt tildelt en af ​​seks kuglepenne i samme rum; to grise pr. behandling blev anbragt i hver sti (en pr. gylt). Sammenfattende var der i alt 36 smågrise i undersøgelsen med 12 smågrise pr. behandlingsgruppe.

During the study, four piglets died before the end of the study: three piglets from one gilt (TRT 0) died within 30 h of arrival at LAR and were dropped from the study. Additionally, one pig (TRT 2) was euthanized between weeks three and four of the study due to high fever (>106◦ F) og manglende respons på fysisk stimulering. Denne gris blev inkluderet i alle analyser gennem uge 3, og dens lunger blev vurderet for patologi. Ingen flowcytometri (FCM)-analyse forekom for dette dyr ved obduktion.

En dag efter fravænning og ankomst til NCSU blev alle smågrise inokuleret intranasalt med 1 × 105,5 PRRSV-2 viruspartikler (autogen stamme 1-7-4) i 1 ml 1X fosfatbufret saltvand (PBS, Corning, Corning, NY, USA) (500 µL/næsebor), holdt i liggende stilling i 30 sekunder og vendt tilbage til deres penne. Halvdelen af ​​dyrene blev aflivet ved 2 dpi, og de resterende dyr blev aflivet ved 4 dpi. Ved obduktion blev BAL, lunger og tracheobronchiale lymfeknuder (TrBr LN'er) indsamlet og behandlet som tidligere beskrevet [13].

Prøveudtagning fandt sted før inokulering (0 wpi) og derefter ugentligt, som vist i figur 1. Serum blev opsamlet i Serum Separator Tubes (SST) rør (Becton Dickinson (BD) Biosciences, San Jose, CA, USA) og blod til PBMC-isolering blev opsamlet i heparinrør (BD Biosciences). Dyreopstaldning var af National Institutes of Health guide til forskningsdyr. Smågrise havde ubegrænset adgang til vand, blev fodret med en midlertidig fravænningsdiæt, derefter en almindelig diæt to gange dagligt og holdt ved 83 ◦F med en 12-timers lys/mørke-cyklus. De eksperimentelle procedurer blev godkendt af NC State University Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) ID# 17-166A (29. november 2017).

2.2. Virusudbredelse, titrering og evaluering

PRRSV-2 viral isolat (stamme, 1-7-4) blev opformeret på PRRSV-negative porcine alveolære makrofager (PAM'er) i RPMI-1640, 1× med L-glutamin (Corning, Corning, NY , USA) suppleret med 10 procent føtalt bovint serum (FBS) (VWR, Radnor, PA, USA) og 1X antibiotikum-antimykotisk (Corning) (benævnt RPMI-komplet) i ca. 30 timer i T-75-kolber (Sarstedt, Nümbrecht, Tyskland), indtil en cytopatisk effekt blev observeret. Kolberne blev fryse-optøet én gang, og supernatanten blev centrifugeret ved 2200 g ved 4 ◦C i 10 min. For at koncentrere virusset blev supernatanten derefter overført til 36 mL Nalgene centrifugerør (Thermo Fisher Scientific, Rochester, NY, USA) og centrifugeret i en Sorvall 100S Ultracentrifuge (Sorvall, Thermo Fisher Scientific), Newtown, CT, USA) ved 73 ,000 g ved 4 ◦C i 2 timer.

Supernatanten blev kasseret, og pelleten blev resuspenderet i medium (RPMI komplet) og opbevaret i 100 µL alikvoter ved -80 ◦C. Vævskulturens infektiøse dosis 50 (TCID50) titere af virale stamopløsninger blev bestemt ved anvendelse af PAM'er som tidligere beskrevet (Spearman-Karber TCID50 metode i henhold til OIE manual of diagnostic tests [World Organization for Animal Health, tidligere Office International des Epizooties (OIE) ), "Kapitel 2.8.7 Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome", Terr. Man., nr. maj 2015, 2015].

2.3. Viræmi

Isoleret serum blev analyseret af North Carolina svinekødsfirmaets diagnostiske laboratorium ved hjælp af Reverse-Transcription quantitative polymerase chain reaction (RT qPCR) med et 5X MagMAX patogen RNA/DNA kit (Thermo Fisher Scientific) og VetMAX PRRSV qPCR kit (Thermo Fisher Scientific). Vaccineret forgyldt serum var PRRSV-negativt (qPCR) ved faring som bestemt af Iowa State University Veterinary Diagnostic Laboratory (ISU VDL, Ames, IA, USA). ∆Ct-værdierne blev beregnet ved at subtrahere Ct-værdien af ​​en prøve fra Ct-værdien betragtet som PRRSV-negativ (Ctneg=37) for PRRSV: ∆Ct=37 − Ctx.

2.4. Neutraliserende antistofvalidering og bestemmelse af positive prøver

Serumprøver fra gylte og smågrise blev sendt til South Dakota State University Animal Research and Diagnostic Laboratory (Brookings, SD), som fuldførte PRRSV-2-neutraliserende antistof (NA)-bestemmelse ved at bruge FFN og 1-7-4-podningsstammen. Et positivt resultat er den højeste serumfortynding med en 90 procent eller højere reduktion i antallet af fluorescerende fokusdannende enheder [23].

2.5. Obduktionsprocedurer, scoring og vævscelleisoleringer

Ved obduktion (2 eller 4 wpi) blev dyrene aflivet under anvendelse af letal intravenøs injektion af Euthasol (Covetrus, MW, 390 mg/ml pentobarbital, 50 mg phenytoin/ml). Derefter blev lungerne, thymus og TrBr LN'er høstet.

Til lungerne blev der taget ryg- og ventrale fotos; lungerne blev skyllet med 1 × PBS for at opsamle den bronchiale alveolære udskylning (BAL), og fem samlede prøver blev taget til histologi: en hver fra højre og venstre kaudallap, højre og venstre midterlap og derefter en fra den accessoriske lap. Histologiprøver blev fikseret i formaldehyd/Zn-fiksativ (Electron Microscopy Sciences, Hatfield, PA) i 24 timer, overført til 70 procent ethanol og farvet med hæmatoxylin og eosin (H&E). Farvede objektglas (histologi) og lungefotos (grov patologi) blev sendt til ISU VDL og bedømt af en veterinær diagnostisk patolog, som var blindet for behandlinger og obduktionsdatoer; lungelæsion og interstitiel pneumoni-scoring blev udført som tidligere beskrevet [24].

Ryg- og ventrale visninger af lungebilleder blev evalueret for procentdelen af ​​lungen, der var ramt af lungebetændelse. Specifikt blev procentdelen af ​​lungebetændelse estimeret visuelt for hver lungelap, og den samlede procentdel for hele lungen blev beregnet baseret på den vægtede andel af hver lap i forhold til det totale lungevolumen. Hver af de fire kranioventrale lapper repræsenterede 10 procent, tilbehørslappen 5 procent, og hver af de to kaudallapper repræsenterede 27,5 procent af den samlede lunge.

Lungehistopatologiske sektioner blev blindt undersøgt for mikroskopiske læsioner, og hver lap fik en estimeret score baseret på sværhedsgraden af ​​interstitiel pneumoni som følger: 0=ingen mikroskopiske læsioner; 1=minimal interstitiel lungebetændelse; 2=mild interstitiel pneumoni; 3=moderat interstitiel lungebetændelse; 4=rigelig interstitiel lungebetændelse; 5=svær, multifokal interstitiel pneumoni; 6=svær, diffus interstitiel lungebetændelse. For alt opsamlet væv (lunger, thymus og TrBr LN'er) blev vævet skåret i små stykker og presset gennem runde afløbssi af rustfrit stål (Grainger, Lake Forest, IL, USA) i 50 ml rør med iskold PBS for at eluere enkeltcellesuspensioner. Fibrøse klumper blev filtreret med 40 µm filtre (BD Biosciences, San Jose, CA, USA).

2.6. Perifer blodisolering, viral stimulering og IFN-FCM farvning/analyse

PBMC-isolering blev udført ved hjælp af Ficoll-Paque-densitetscentrifugering (GE Healthcare, Uppsala, Sverige) og SepMate-50 ml-rør (STEMCELL Technologies, Vancouver, BC, Canada) i henhold til producentens protokol. PBMC- og enkeltcellers suspensionscelletællinger blev fuldført på et CASY-celletællingssystem (Schärfe System, nu: Roche Innovatis AG, Bielefeld, Tyskland). Til IFN-produktionsassayet blev 5 × 105 PBMC'er og lymfocytter fra lungerne og TrBr LN'er udpladet i otte replikater i en 96-brønd rundbundet plade (Corning) i 100 µl RPMI-komplet og hvilet natten over i en inkubator ved 37◦ C og 5 procent CO2. Næste morgen blev 100 µL RPMI-komplet indeholdende PRRSV-stamme 1-7-4 (Multiplicity of Infection, MOI=0.1) tilsat til hver brønd; pladerne blev returneret til inkubatoren i 24 timers viral stimulering.

I de sidste 4 timers kultur blev monensin (5 µg/ml, Alfa Aesar, Haverhill, MA, USA) tilsat for at blokere IFN-frigivelse fra cellerne. Efter afslutning af 24 timers inkubation blev replikaterne samlet og farvet som angivet i tabel 1; i gennemsnit blev 276.756 enkelte levende lymfocytter (SLL'er) registreret på en Cytoflex ved hjælp af CytExpert-softwaren (Beckman Coulter, Brea, CA, USA). Dataanalyse blev udført med FlowJo version 10.6.1 (FLOWJO LLC). Gatehierarkiet for analysen af ​​IFN-responset er vist i figur 4 og 5 for PBMC og i supplerende figur S1 og figur 7 for BAL, lungevæv og TrBr LN'er.

2.7. Statistisk analyse

Statistiske analyser blev udført under anvendelse af Graphpad Prism 8 (Graphpad Software, San Diego, CA, USA). Data med et komplet datasæt blev analyseret ved enten tovejs (gennem hele undersøgelsen) eller envejs (ved obduktion) ANOVA'er. Data med manglende datapunkter (hovedsageligt på grund af obduktion af 50 procent af grisene ved 2 dpi) blev analyseret ved hjælp af en mixed-effects model (Restricted maximum likelihood, REML). Alle multiple sammenligninger blev udført med Dunnetts multiple sammenligningstest. Dataillustration blev udført ved hjælp af violinplot, der viser fordelingen, individuelle punkter, median (hvis relevant, stiplet sort linje) og 25./75. intervaller (som en anvendelig, farvet linje). Korrelationsanalyser mellem gylte- og pattegrise-nAb-niveauer blev udført ved hjælp af Pearson-korrelationskoefficienter og et to-halet 95 procent konfidensinterval.

3. Resultater

3.1. Undersøgelsesdesign og vaccineeffektivitet – kliniske tegn, viræmi, vægtøgning og lungepatologi

Undersøgelsen blev udført som afbildet i figur 1. Efter PRRSV-podning udviste grise milde PRRSV-symptomer, der begyndte inden for 3-4 dage efter infektion – feber [hovedsageligt ved 1 wpi, dns], sløvhed, reduceret fødeforbrug, mild hoste/nysen. Ingen signifikante forskelle blev observeret for disse symptomer, og de varede ved i varierende grad indtil obduktion. Figur 2 illustrerer viræmi, ugentlige vægtforøgelser såvel som brutto- og histopatologiske resultater.

Som vist i figur 2A var alle grise PRRSV-2 negative ved fravænning, og intranasal podning med PRRSV-2 inducerede en viræmi, der toppede ved 2 wpi. Selvom der ikke var nogen forskel i viræmi mellem TRT 0 og TRT 2, havde TRT 1 signifikant lavere viræmi i de første to uger end kontrolgruppen TRT 0. Vægtstigningerne for grise i alle grupper var meget ens i de første tre uger; alligevel havde TRT 2 og TRT 1 i slutningen af ​​undersøgelsen – og sammenlignet med TRT 0 – signifikant højere ugentlige vægtstigninger – figur 2B. Mest bemærkelsesværdigt, mens lungepatologi generelt er løst ved PRRSV-infektion og derfor var ens mellem grupperne ved 4 dpi (dns), reducerede begge moder AIV-vaccinationer, så TRT 1 plus 2, signifikant lungepatologien ved 2 wpi: begge reducerede procentniveauerne af makroskopiske læsioner og/eller interstitiel lungebetændelse (figur 2C, D). Forekomsten af ​​makroskopiske lungelæsioner i lungerne fra TRT 0 var mellem 20-70 procent; i modsætning hertil havde de fleste grise i TRT 1 plus 2 en prævalens af lungelæsioner under 20 procent - figur 2C. Tilsvarende, mens den mediane histopatologiske score for interstitiel lungebetændelse i lunger fra TRT 0-grise var tre, var den henholdsvis 1,8 for TRT 1 og 1,2 for TRT 2. Sammenlignet med TRT 0 viser dette en tendens til signifikans (p=0.07) og et signifikant fald i lungehistopatologi hos grise fra AIV-vaccinerede gylte—Figur 2D. Disse data viser, at AIV-vaccination markant kan reducere viræmi og lungepatologi, og desuden viser de også, at moder-AIV-vaccination mod PRRSV-2 kan booste immuniteten hos 2-ugegamle smågrise.

3.2. Induktion af maternelle neutraliserende antistoffer og deres overførsel til smågrise

Induktionen af ​​humoral immunrespons hos gylte og deres afkom blev analyseret ved at bestemme NA FFN-titere (figur 3).

Vaccination af alle grupper med MLV-inducerede NA-titere i gylte på mellem fire og 64 uden signifikante forskelle mellem de tre grupper (dns). I modsætning hertil, mens MLV-vaccination alene (TRT 0) ikke inkluderede NA'er mod den heterologe 1-7-4-stamme, inducerede begge AIV boost-vaccinationer NA-titere på op til 1:16 (for TRT 2) og endda 1 :128 (for TRT 1)—Figur 3A.

Disse serum-NA'er blev moderligt overført til smågrise (figur 3B): Mens TRT 0-grisene ikke viste nogen NA-titre ved 0 wpi, havde TRT 1- og TRT 2-grise serum-NA'er til at stamme 1-7-4 før infektion, som direkte korrelerede med maternelle NA-niveauer (figur 3C, r=0.886, p < 0.0001). Disse NA-titere faldt i løbet af de første to uger, før de stabiliserede sig med 4 wpi. Men sammenlignet med TRT 0 havde pattegrise fra AIV-vaccinerede gylte (TRT 1 plus 2) signifikant højere serum NA-titere allerede før udfordringen, og disse øgede titere varede indtil 2-3 wpi, så indtil 4-5 ugers alderen—Figur 3B.

For more information:1950477648nn@gmail.com