Makrofagudtømning reducerer sygdomspatologi i faktor H-afhængig immunkompleks-medieret glomerulonefritis Ⅱ

3. Resultater

Vi inducerede CSS i mus ved gentagen immunisering med hestemilt apoferritin. Dyr genererer et aktivt antiapoferritin IgG humoralt immunforsvarrespons og deponerer IgG i glomeruli. Vores tidligere undersøgelser afslørede, at der er øget Mϕinfiltration i nyrernei denne indstilling.

3.1. Makrofagegenekspression er øget i FH-afhængige ICGN-nyrer. For at evaluere tilstedeværelsen af ​​Mϕs i FH-afhængige ICGN nyrer blev qRT-PCR udført med M2 makrofagmarkører, CD204 (Mϕ scavenger receptor 1) og CD206 (Mϕ mannose receptor 1) [21-24]. Ekspression af begge gener i nyren blev signifikant opreguleret efter apoferritin-behandling i FHKO-mus (figur 1), hvilket indikerer enøget tilstedeværelse af makrofager i nyrerne.

KLIK HER FOR AT FÅ NATURLIGE ØKOLOGISKE CISTANCHE EKSTRAKT MED 25% ECHINACOSIDE OG 9% ACTEOSIDE TIL NYREFUNKTION

Supportive Service Of Wecistanche - Den største cistanche-eksportør i Kina:

E-mail:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tlf:+86 15292862950

Shop for flere specifikationer detaljer:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

3.2. Tidsforløbsændringer ved klodronatbehandling ved nyremakrofageinfiltration i Apoferritin-behandlede FHKO-mus. For at bestemme den effektive metode til at reducere Mϕs i FH-afhængig ICGN, udtømte vi Mϕs i fh-/- mus

Figur 3: Supplerende data. Givet er flowcytometri-profilerne for F4/80+-monocytter fra kontrol- og clodronatbehandlede mus. F4/ 80+-celler reduceres betydeligt og når mindre end 10 % ved clodronatbehandling. Hvert tidspunkt n=6.

3.4. Makrofagudtømning reducerer glomerulær

Patologi i FH-medieret ICGN. Immunkompleksaflejringer i nyrerne og histopatologiske træk ved ICGN blev evalueret ved afslutningen af ​​eksperimentet. Immunfluorescensfarvning for C3 og IgG afslørede, at Mϕ-depletering ikke modulerede immunkomplekserne i denne indstilling. Repræsentativ immunfluorescensfarvning og histopatologi er vist i figur 5. Det primære histopatologiske træk var diffus hypercellularitet af de glomerulære totter i fh-/- mus med CSS blev signifikant reduceret ved udtømning af Mϕs.

3.5. Makrofager modulerer cytokiner i FH-afhængig ICGN.

Engang Mϕsinfiltrere nyrenog udsættes for inflammatoriske stimuli, frigiver de cytokiner. Vi evaluerede ved ELISA plasmacirkulerende niveauer af TNF og IL-6 og nyrernes mCSF i FHKO-mus behandlet med saltvand, apoferritin eller apoferritin og clodronat. De cirkulerende niveauer af IL-6 var meget lave i vildtypemus og steg i FHKO-mus og blev reduceret i FHKO-mus behandlet med clodronat (figur 6). De tre cytokiner, TNF , IL-6 og mCSF var signifikant forøget i mus behandlet med apoferritin sammenlignet med saltvandsbehandlede kontroller. Mϕ-depletering af clodronat begrænsede signifikant stigningen i cytokiner i denne indstilling

3.6. Makrofager modulerer profibrotisk

Molekyler og laminin i FH-afhængig ICGN. En gangnyrerne udvikler en sygdom, har de en tendens til at blive fibrotiske. Mϕs deltager i den fibrotiske proces ved at overproducere profibrotiske molekyler. Real-time PCR afslørede en 75 % stigning i transformerende vækstfaktor-beta1 (TGFbeta1) mRNA-ekspression, en 100 % stigning i metalloproteinase-9 (MMP9)-ekspression og en 230 % stigning i laminin-mRNA. I overensstemmelse med mRNA-ekspressionen øges lamininproteinekspression signifikant i fh-/- musene med CSS, som blev reduceret i fravær af Mϕs (figur 7).

4. Diskussion

Vores seneste undersøgelser har vist, at i fravær af FH udvikler mus diffuseproliferativ glomerulonefritis(GN) med F4/80+ Mϕs omkring steder af IC'er [10]. Desuden viser vores undersøgelser, at Cd11b-/- fh-/- mus har forværrede træk ved glomerulonephritis [26]. I betragtning af, at tilstedeværelsen af ​​øgede inflammatoriske M1-makrofager og deres vedvarende aktivering kunne forårsage vævspatologi, og deres repolarisering til den anti-inflammatoriske fænotype ville hjælpe med at løse sygdomspatologi, blev den aktuelle undersøgelse foretaget for yderligere at forstå Mϕs rolle i fh -/- mus med ICGN. Den øgede tilstedeværelse af Mϕs i nyren og opløsningen af ​​sygdomspatologi ved udtømning af makrofager under FH-medieret ICGN viser Mϕs kritiske rolle i denne indstilling, og derfor kunne de tjene som vigtige terapeutiske mål i denne indstilling.

Figur 5: Mϕs-depletering reducerer glomerulær patologi i FH-afhængig ICGN. Givet er repræsentative billeder af glomeruli fra saltvandsbehandlede (a), apoferritin-behandlede (b) og apoferritin+clodronat-behandlede FH-mangelfulde mus. I (A) er snittene farvet med C3 (grøn) og IgG (rød), mens (B) viser snit farvet med PAS. IgG-aflejringer, der blev øget med apoferritinbehandling, forblev uændrede, mens glomeruli så tættere på normal ved makrofagudtømning.

Fraværet af FH fører til øget C5a-produktion. C5a binder til C5aR1 og signalerer Mos til nyren, hvor de tilføjer det inflammatoriske miljø. Derudover viste vores undersøgelser også, at i denne indstilling af overdreven C5a-generering ser inaktivering af C5a ud til at begrænse sygdommen [10]. Aktivering af Mos får dem til at blive polariserede, men de forbliver i en tilstand af kontinuum [27]. Vores resultater i denne undersøgelse viser, at glomerulær sygdom i CSS blev reduceret i fh-/− mus, hvor Mϕs var udtømt sammenlignet med fh-/- mus uden makrofagudtømning. Eliminering af Mϕs alle viated ICGN i fh−/− mus reducerer således sygdomspatologien. Men Mϕs er også nødvendige for reparationsprocessen, og da Mϕs ændrer tilstande fra pro- til anti-inflammatoriske tilstande og omvendt, vil det være vores fremtidige bestræbelse at forstå, om ændring af Mϕs landskab uden at udtømme dem kan ændre sygdomspatologien.

Mϕs spiller en vigtig rolle i initiering og vedligeholdelse af fibrose og er også involveret i undertrykkelse, opløsning og reversering af fibrose [28]. Vores resultater viser øget udtryk for CD204+ og CD206+ Mϕ-markører, hvilket tyder på deres øgede tilstedeværelse i denne indstilling. Da disse Mϕ'er er en stor kilde til profibrotiske molekyler, tyder vores resultater, der viser en stigning i TGF -1 såvel som MMP9, at disse Mϕ'er kunne bidrage både direkte og indirekte til fibrotiske processer i FH-medieret ICGN gennem forskellige mekanismer ( 1,3,8,44). TGF -1 kan ændre fibrose ved cytokinregulering. Derudover modulerer TGF -1 C3- og faktor B-biosyntese og ekspression i monocytter [29], og ændring af komplement i immuncellerne og nyrecellerne kan lette vævsfibrose [30]. Imidlertid skal de nøjagtige interaktioner mellem makrofager og komplement, de involverede mekanismer, deres roller og vævsopdeling dechifreres [31]. Vores undersøgelser viste reduceret ekspression af laminin i Mϕs-udtømte mus sammenlignet med Mϕ-tilstrækkelige mus. For bedre at forstå, hvordan FH regulerer den fibrotiske proces, skal vi identificere de specifikke Mϕ-delmængder, der er til stede i FH-medieret ICGN og belyse bidragene fra hver undergruppepopulation. Disse undersøgelser er vigtige, da komplementære terapier er blevet en klinisk realitet. Inhibitorer er blevet og bliver fortsat udviklet mod forskellige mål i komplementkaskaden, der vil blokere nedstrøms trinene i aktiveringsvejen(e). I øjeblikket er en af ​​komplementhæmmerne i klinisk brug anti-C5 antistoffet, Eculizumab [32]. Derfor er det ikke et trivielt punkt at identificere de patogene komplementkomponenter i sygdommen og supplere det med reguleringen af ​​Mϕs-populationen.

Figur 7: Lamininaflejring iFH-mangelfulde nyrermed ICGN reduceres af Mϕs-udtømning. (a) qRT-PCR for TGFB, MMP9 og laminin franyre-mRNAisoleret fra mus efter 5 ugers saltvand og apoferritin og 3 ugers clodronat. Udtrykket er normaliseret til GAPDH (n=6/gruppe). (b) Repræsentative IF-mikrografier til lamininfarvning i nyrerne af de samme grupper af mus. ∗P < 0:01.

Sammenfattende studerede vi her Mϕs' rolle i den FH-afhængige ICGN-model. Resultaterne kan også anvendes i omgivelser med ureguleret komplementaktivering med immunkomplekser, såsom dem, der observeres ved forskellige sygdomme, herunder lupus nefritis, IgA nefropati og membranøs nefropati. Vi viser vigtigheden af ​​både komplementregulering af FH og Mϕs-status i sygdommen. Farmakologisk målretning af komplementkaskaden og Mϕs-status i IC-medieret GN har således potentiel klinisk relevans.

Referencer

[1] T. Mijovic, A. Zeitouni og I. Colmegna,"Autoimmun sensorineuralt høretab: grænsefladen mellem otologi og reumatologi," Reumatologi, bind. 52, nr. 5, s. 780–789, 2013. [2] M. Abongwa, KE Baber, RJ Martin og AP Robertson,"Den kolinomimetiske morantel som en åben kanalblokker af Ascaris suum ACR-16 nAChR," Invertebrat neurovidenskab, bind. 16, nr. 4, 2016.

[3] AS De Vriese, S. Sethi, J. Van Praet, KA Nath og FC Fer venza,"Nyresygdom forårsaget af dysregulering af den alternative komplementvej: en ætiologisk tilgang," Journal of American Society of Nephrology, bind. 26, nr. 12, s. 2917– 2929, 2015. [4] RJ Quigg,"Komplement- og autoimmune glomerulære sygdomme," Nuværende retninger i autoimmunitet, bind. 7, s. 165– 180, 2003. 

[5] MC Carroll,"Komplementsystemet i reguleringen af ​​adaptiv immunitet," Naturimmunologi, bind. 5, nr. 10, s. 981– 986, 2004. [6] MV Carroll og RB Sim,"Komplement inden for sundhed og sygdom," Anmeldelser af avanceret lægemiddellevering, bind. 63, nr. 12, s. 965–975, 2011. 

[7] M. Noris og G. Remuzzi,"Oversigt over komplement aktivering og regulering," Seminarer i nefrologi, bind. 33, nr. 6, s. 479–492, 2013. 

[8] VP Ferreira, AP Herbert, C. Cortes et al.,"Bindingen af ​​faktor H til et kompleks af fysiologiske polyanioner og C3b på celler er svækket ved atypisk hæmolytisk uremisk syndrom," Tidsskrift af Immunologi, bind. 182, nr. 11, s. 7009–7018, 2009.

[9] JJ Alexander, MC Pickering, M. Haas, I. Osawe og RJ Quigg,"Komplementfaktor h begrænser immunkompleksaflejring og forhindrer indFlammation og ardannelse i glomeruli hos mus med kronisk serumsygdom," Journal of American Society of Nephrology, bind. 16, nr. 1, s. 52–57, 2005.

[10] JJ Alexander, L. Chaves, A. Chang og RJ Quigg,"C5a-receptoren har en nøglerolle i immunkompleks glomerulonefritis i komplementfaktor H-defigamle mus," Nyre International, bind. 82, nr. 9, s. 961–968, 2012. 

[11] CV Jakubzick, GJ Randolph og PM Henson,"Monocyt differentiation og antigen-præsenterende funktioner," Naturanmeldelser. Immunologi, bind. 17, nr. 6, s. 349–362, 2017. 

[12] Q. Cao, Y. Wang og DC Harris,"Makrofager heterogenitet, fænotyper og roller i nyrernefibrose," Nyre International. Supplement, bind. 4, nr. 1, s. 16–19, 2014.

[13] Q. Cao, Y. Wang, XM Wang et al.,"Renal F4/80+ CD11c+ mononukleære fagocytter udviser fænotypiske og funktionelle egenskaber for makrofager i sundhed og ved adriamycinnefropati," Journal of American Society of Nephrology, bind. 26, nr. 2, s. 349–363, 2015.