HydroZitLa hæmmer dannelsen af calciumoxalatsten hos nefrolitiske rotter og fremmer levetiden i Nematode Caenorhabditis Elegans, del 2

Glycoside af cistanche kan også øge aktiviteten af SOD i hjerte- og levervæv og signifikant reducere indholdet af lipofuscin og MDA i hvert væv, hvilket effektivt fjerner forskellige reaktive iltradikaler (OH-, H₂O₂ osv.) og beskytter mod DNA-skader forårsaget af OH-radikaler. Cistanche phenylethanoid glycosider har en stærk opfangningsevne af frie radikaler, en højere reducerende evne end C-vitamin, forbedrer aktiviteten af SOD i spermsuspension, reducerer indholdet af MDA og har en vis beskyttende effekt på spermmembranfunktionen. Cistanche-polysaccharider kan øge aktiviteten af SOD og GSH-Px i erytrocytter og lungevæv fra eksperimentelt senescent mus forårsaget af D-galactose, samt reducere indholdet af MDA og kollagen i lunge og plasma, og øge indholdet af elastin, har en god rensende effekt på DPPH, forlænge hypoksitiden hos senescent mus, forbedre aktiviteten af SOD i serum og forsinke den fysiologiske degeneration af lunge hos eksperimentelt senescerende mus Med cellulær morfologisk degeneration har forsøg vist, at Cistanche har den gode antioxidantevne og har potentialet til at være et lægemiddel til at forebygge og behandle hudaldringssygdomme. Samtidig har echinacosid i Cistanche en betydelig evne til at opfange DPPH-frie radikaler og har evnen til at opfange reaktive oxygenarter og forhindre frie radikal-induceret kollagen-nedbrydning, og har også en god reparationseffekt på anionskader af thymin frie radikaler.

cistanche supplement

Klik på Cistanche Norge

【For mere information:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:8613632399501】

Baseret på vores nuværende resultater udøvede HydroZitLa den antipatogene funktion gennem mindst to veje. For det første reducerede det urin-oxalat-udskillelse, nedsatte urin CaOx-krystallisationskapacitet og tilførte citrat. For det andet indeholdt det urtepolyfenoler, der var i stand til at dæmpe oxidativt stress og inflammation, og dermed hæmme CaOx-litogenesen. Grundlæggende syntetiseres oxalat endogent i leveren ved hjælp af glyoxylat som en fremtrædende precursor41. Glyoxylat syntetiseres fra glycolat af enzymet glycolatoxidase (GO), og det omdannes yderligere til oxalat af lactatdehydrogenase (LDH). Vi fandt ud af, at HydroZitLa signifikant reducerede urinoxalatudskillelse hos EG-behandlede rotter. Vi spekulerede i, at HydroZitLa hæmmede oxalatsyntesevejen i leveren gennem nedregulering af leverenzymer involveret i glyoxylatmetabolismen, især LDH og GO. Den tidligere undersøgelse af Kailash og Varalakshmi viste, at bananstængelekstrakt reducerede GO- og LDH-niveauerne i leveren i natriumglykolat-inducerede hyperoxaluriske rotter27. Poonguzhali og Chegu rapporterede også, at råekstrakt fra bananstængler reducerede urinoxalat, glykolsyre og glyoxylsyre i de glykolat-inducerede hyperoxaluriske rotter30. For nylig har Patankar et al. viste, at deres urteformulering, kaldet Herbmed Plus (indeholdende bananstængel), reducerede niveauet af LDH-aktivitet i lever- og nyrevæv42. For at verificere vores spekulation bør ekspressionen af lever- og nyreenzymer involveret i oxalatsyntese i EG-rotter behandlet med HydroZitLa undersøges yderligere.

cistanche nedir

Flere evidenslinjer understøtter stærkt, at oxidativt stress, inflammation og nyrerubulær skade er kritisk involveret i CaOx-litogenese3,4,15,43-45. Oxidativ stress induceret af oxalat og/eller CaOx-krystaller forårsager renal tubulær skade, der skaber steder for krystalkernedannelse, adhæsion, retention, aggregering og endelig en nidus-dannelse43,46,47. Ydermere aktiverer oxidativ stress den inflammatoriske reaktion, der igen accelererer den litogene proces4,47,48. Derved er fytomedicin, der har antioxidante og antiinflammatoriske egenskaber, en lovende foranstaltning til forebyggelse af dannelse af nyresten24. Aggarwal et al. demonstreret i den EG-inducerede nefrolithiske rottemodel, at bergenin (bioaktiv phenolforbindelse isoleret fra Bergenia ligulata) havde en potent antipatogen effekt til at mildne oxidativt stress, lindre mitokondriel dysfunktion og mindske tubulær skade og inflammation49. Rutin og curcumin (velkendte oprindelige fytokemikalier med antioxidante og antiinflammatoriske egenskaber) blev vist at hæmme tubulointerstitiel skade og krystalaflejringer i de EG-inducerede nefrolitiske rotter50. Polyphenoler fra vindruekerner blev også påvist at hæmme intrarenale CaOx-krystalaflejringer i de EG-inducerede lithiasis-rotter, sandsynligt gennem deres antioxidantaktivitet51. En Ayurveda-urteformulering Herbmed blev påvist at reducere inflammatorisk skade og krystalaflejringer i nyrerne hos EG-inducerede nefrolitiske rotter42. I denne undersøgelse viste vi, at HydroZitLa reducerede intrarenalt oxidativt stress, inflammation og CaOx-krystalaflejringer, hvilket tyder på, at HydroZitLa udøvede antioxidante og antiinflammatoriske virkninger for at forhindre dannelse af CaOx-nyresten.

Adskillige plantepolyfenoler er eksperimentelt bevist at være gavnlige til at forlænge levetiden og forsinke aldring52. Resveratrol er den mest velkarakteriserede polyphenolforbindelse, der forlænger levetiden. Det virker primært gennem sirtuin-aktivering og oxidativ stress-dæmpning53. Levetidseffekten af resveratrol testet i C. elegans-modellen varierer mellem undersøgelser med en stigning i median levetid fra 10 til 65 procent 54,55. HydroZitLa forlængede signifikant levetiden for vildtype C. elegans op til 34 procent uden tegn på toksicitet, hvilket tyder på, at den levetidsforlængende effekt af HydroZitLa var sammenlignelig med resveratrols. Kostrestriktioner er en kendt nøglemekanisme i lang levetid56. Svælgpumpehastighederne sammenlignet mellem HydroZitLa-orme og kontrolorme var sammenlignelige, hvilket indikerer, at forlængelsen af levetiden med HydroZitLa ikke var et resultat af diætrestriktioner.

HydroZitLa reducerede signifikant en ophobning af det autofluorescerende alderspigment lipofuscin i C. elegans, hvilket tyder på en anti-aging effekt. ROS og oxidativ stress er velkendte inducere af SIPS, og oxidativ stress accelererer afkortningen af telomerer57. Vi påviste for nylig, at oxalat, COM og urin fra patienter med CaOx-sten inducerede for tidlig senescens, p16-opregulering og telomer-nedslidning i renale tubulære celler gennem oxidativt stress 58. I denne undersøgelse viste vi, at HydroZitLa hæmmede telomer-nedslidning, p16-opregulering, og for tidlig senescens i HK-2-celler udsat for H2O2, oxalat og COM. Selvom den molekylære mekanisme for denne anti-aldringseffekt ikke blev uddybet, blev HydroZitLa foreslået at mekanisk forhindre for tidlig senescens gennem hæmning af telomerforkortelse og nedregulering af p16-ekspression.

Selvom naturlægemidler og fytomedicin gradvist bliver populære og globalt accepterede, skal videnskabelig dokumentation for effektivitet og sikkerhed fremlægges og bør ikke kompromitteres. Urte-lægemiddel-interaktionen er næppe forudsagt, fordi den er meget varieret blandt individer, afhængigt af flere faktorer, såsom polymorfismer af cytokrom P450-enzym og lægemiddeltransportere, og eksisterende medicinske tilstande59. Bivirkninger af samtidig administration af urter og medicin skal overvåges nøje for at identificere de potentielle urte-lægemiddelinteraktioner. De mest kendte urter, der for alvor interagerer med stoffer, omfatter hvidløg, Baizhi, Danggui, ginseng, ginkgo, lakrids, perikon, Kava, sort og lang peber, Danshen, Huangqin og marietidsel59. Så vidt vi ved, har der ikke været nogen alvorlige bivirkninger eller lægemiddelinteraktioner rapporteret for bananstænglen, sommerfuglen blå ærteblomst og sappan træ. I Thailand indtages bananstængel som fødevareingrediens. At drikke for meget (overforbrug) bananstængeljuice kan forårsage allergi, mavesmerter og opkastning, derfor anbefales moderat indtagelse. Den blå ærteblomst bruges almindeligvis i mad som et naturligt farvestof, og det bruges også til at lave te. Den negative virkning af overforbrug af sommerfugleblå ærteblomstte, for eksempel mavebesvær, kvalme og allergiske reaktioner, er sjældent rapporteret. Sappantræ bruges også ofte som et naturligt fødevarefarvestof, og i samfund (herunder samfund i Thailand) indtages det almindeligvis som en sund drik. Imidlertid er den svangerskabsforebyggende funktion (anti-fertilitet hos mænd) af sappantræekstrakt påvist i en rottemodel, da det forstyrrer spermatogenesen60. På den anden side bruges kernevedet af Caesalpinia sappan L. som en medicinsk behandling af gynækologiske symptomer, herunder oligomenoré og amenoré61. Derfor er sikkerheden ved langtidsindtagelse af HydroZitLa hos mennesker endnu ikke fastlagt i det kliniske forsøg.

rou cong rong benefits (2)

Denne undersøgelse har nogle begrænsninger. De præcise aktive forbindelser, der er ansvarlige for CaOx-stensinhiberende funktion, blev ikke identificeret og karakteriseret. De nøjagtige mekanismer af HydroZitLa til at hæmme CaOx-stendannelse hos rotter blev ikke grundigt undersøgt. Den dosisafhængige antipatogene virkning af HydroZitLa blev ikke undersøgt. Den dosis af HydroZitLa, der signifikant kunne øge urincitratniveauerne hos nefrolitiske rotter, blev ikke undersøgt. Den phenoliske profil af HydroZitLa bør undersøges yderligere. Mekanismen for fremme af lang levetid af HydroZitLa i C. elegans blev ikke undersøgt intensivt. Endelig blev specifikke forbindelser i HydroZitLa, der er ansvarlige for lang levetid og anti-aging, ikke identificeret og karakteriseret.

Som konklusion blev HydroZitLa udviklet til samtidig at normalisere risikofaktorer for CaOx-stendannelse ved at tilføre væske, citrat og naturlige antioxidanter. Eksperimentelt hæmmede HydroZitLa intrarenal CaOx-aflejring i nefrolitiske rotter. Den CaOx-stenhæmmende virkning af HydroZitLa svarede til det aktuelt anvendte kaliumcitrat (Uralyt-U). HydroZitLa dæmpede effektivt oxidativt stress både in vitro og in vivo. Bemærkelsesværdigt forlængede HydroZitLa levetiden og forsinkede begyndelsen af aldring hos C. elegans. Desuden hæmmede HydroZitLa signifikant telomerforkortning, p16-ekspression og for tidlig senescens i humane nyreceller. Disse prækliniske resultater tydede på, at HydroZitLa var et klinisk lovende alternativ til CaOx nefrolithiasis-behandling ledsaget af langtidsfremmende og anti-aging fordele. Kliniske forsøg er nødvendige for at garantere den terapeutiske effekt af HydroZitLa hos mennesker.

Materialer og metoder

HydroZitLa-produktion, antioxidantindhold og ernæringsfakta. HydroZitLa er et medicinsk plante-afledt drikkevarekoncentrat lokalt tilgængeligt i Thailand32. Drikken tilberedes ved at fortynde HydroZitLa-koncentrat (55 ml i en forseglet pose) med drikkevand (til det endelige volumen på 500 ml). Den har en lyserød-lilla farve med en lækker sur-og-sød smag. Hovedingredienserne i HydroZitLa var bananstængel (Musa sapientum L.) vandekstrakt og citronsyre (16 mEq/pose). Traditionelle Tai-lægeplanter inklusive Clitoria ternatea L. (Sommerfugleblå ærteblomstpulver) og Caesalpinia sappan L. (Sappantræpulver) blev brugt som naturlige farvestoffer. Stevia og sucralose var sødestoffer. Produktet blev godkendt af Tai FDA den 10. april 2019 i kategorien drikkevarer i en forseglet beholder (Food serie nr. 10–1-02,244–5-0005).

Den totale antioxidantkapacitet (TAC) af HydroZitLa var 21,87±7,96 mg C-vitaminækvivalent antioxidantkapacitet pr. pose (Supplerende Fig. 8). Det totale phenolindhold (TPC) var 19,99 ±0,83 mg gallussyreækvivalent/100 g. Det totale favonoidindhold (TFC) var 4,59 ± 0,31 mg catechinækvivalent/100 g. Til kvalitetskontrol blev TAC, TPC og TFC brugt som kvalitetskontrolparametre. Niveauerne af TAC, TPC og TFC i bananstængel, sommerfuglblå ærteblomst og sappantræekstrakter mellem partier og opbevaringstidspunkter var ikke signifikant forskellige. I produktionen af HydroZitLa blev TAC-, TPC-, TFC- og brix-værdien (17±2) brugt som kvalitetskontrolparametre for at opretholde konsistensen mellem batches.

Den samlede energi af HydroZitLa pr. pose (portion) var 25 kcal. Der blev ikke fundet noget protein-, fedt- og kolesterolindhold. Det samlede kulhydrat var 6 g, sukker var<1 g, and sodium was 10 mg. The potassium content was 240 mg/100 g. Soluble and insoluble dietary fibers were 0.74 and 0.43 g/100 g, respectively. Te pH of HydroZitLa was 3.4.

Toksicitetsvurdering.Tilstedeværelsen af Escherichia coli, Clostridium spp., Salmonella spp. og Staphylococcus aureus i HydroZitLa blev analyseret af Bureau of Quality and Safety of Food, Ministeriet for Folkesundhed, Thailand. Metalprofilen af HydroZitLa blev analyseret af ICP-OES.

Den akutte in vivo toksicitet af HydroZitLa i mus blev testet af Medicinal Plant Research Institute, Ministeriet for Folkesundhed, Thailand. HydroZitLa eller vand (kontrol) blev indgivet oralt til mus i en dosis på 20 ml/kg (n=10 pr. gruppe). Mus blev observeret i 14 dage før obduktionen. Grove læsioner i viscerale organer blev undersøgt og sammenlignet mellem HydroZitLa- og kontrolgrupperne.

CaOx-aggregeringsassay.Pode-COM-krystaller blev fremstillet62 og fortyndet til 50 mg/ml i 0.05 M Tris/0.15 NaCl, pH 6,5. HydroZitLa, eller BSA, eller destilleret vand (blindprøve) (200 µL) blev tilsat til den friskfremstillede arbejdsfrø-COM-suspension (2 ml). Efter blanding blev absorbans ved 620 nm målt som baseline (AT0). Efter inkubation ved 37 grader i 10 minutter blev absorbansen ved 620 nm målt igen (AT10). Aggregeringskoefficienten (AC) blev beregnet som følger: AC=((AT0− AT10)/10)×1000. En højere AC-værdi indikerer en højere COM-aggregering.

Cellelinje, cytotoksicitet og intracellulær ROS-bestemmelse.HK{{0}}-celler (ATCC, VA, USA) blev opretholdt i DMEM suppleret med 10 procent føtalt bovint serum og 1 procent Pen-Strep under 37 grader, 5 procent CO2 og 95 procent luftfugtighed. Cytotoksiciteten af HydroZitLa i HK-2-celler blev vurderet ved MTT-assay63. HK-2-celler blev podet (200 celler/brønd), dyrket natten over i en 96-brøndsplade og behandlet med forskellige koncentrationer af HydroZitLa (0 som kontrol, 1,25 procent, 2,5 procent, 5 procent, 10 procent , 20 procent , 40 procent , 50 procent , 80 procent og 100 procent v/v) i 24 timer. Efter vask blev MTT-opløsningen tilsat, inkuberet i 1 time og derefter kasseret. Dimethylsulfoxid blev tilsat for at solubilisere formazankrystaller. Absorption ved 570 nm blev målt. Cellelevedygtighed (procent) blev beregnet under anvendelse af ubehandlede celler som kontrol (100 procent levedygtighed).

Hæmningen af intracellulær ROS-produktion af HydroZitLa blev bestemt ved dichlor-dihydro-fluoresceindiacetat (DCFH-DA) assay i en 96-brøndplade 64,65. HK-2-celler blev kombineret med 0.1 M DCFH-DA-opløsning og inkuberet ved 37 grader i 30 min. Efter vask blev celler udfordret med H2O2 eller COM (med og uden 10 % v/v HydroZitLa). Fluorescensintensitet (exciteret ved 485 nm og udsendt ved 535 nm) blev målt i begyndelsen (T0) og 60 minutter (T60). Vilkårlig fluorescerende enhed (AFU), som indikerede niveauet af ROS-generering, blev beregnet som følger: AFU= T60/T0.

Proteincarbonyleringsmåling.Proteincarbonylindhold, som en indikator for proteinoxidation, blev målt i henhold til vores tidligere rapporter64-66. De behandlede HK-2-celler (i 100-mm skålen) blev lyseret med radioimmunpræcipitationsassaybuffer indeholdende en proteaseinhibitorcocktail. Total proteinkoncentration blev målt ved Bradford-assay. Cellelysatet blev inkuberet med 10 mM dinitrophenylhydrazin (DNPH) opløsning eller 2 N HCI i 1 time i mørke. Kold 20% trichloreddikesyre blev tilsat og inkuberet i 10 minutter på is. Pellets blev opsamlet ved centrifugering, vasket med ethylacetat:ethanol (1:1) og genopløst med 6 M guanidin HCI. Absorbans (A) ved 375 nm blev målt. Proteincarbonylindholdet normaliseret ved den totale proteinkoncentration blev beregnet som følger: ((ADNPH – AHCl)×45,45)/proteinkoncentration.

cistanche side effects reddit

Rottemodel for CaOx nefrolithiasis.EG (1 procent v/v) tilsat drikkevand (fri adgang ad libitum, i 35 dage) blev anvendt til induktion af CaOx nefrolithiasis hos rotter. Wistar-hanrotter (6-8 uger gamle, 180-300 g) blev opdelt i fire grupper, nemlig EG (n=6), EG plus HydroZitLa (n=6), EG plus Uralyt-U (n=6), og normale kontrolgrupper (n=2). Alle rotter blev anbragt i rustfrit stålbure ved 25 grader under en lys-mørke-cyklus på 12:12 timer. To kontrolrotter blev med vilje kun brugt til sammenligning af CaOx-aflejringer i rottenyrer og immunhistokemi, ikke til urinkemi. HydroZitLa og Uralyt-U blev tvangsfodret to gange dagligt (morgen og aften) med en samlet citratdosis på 2 mEq pr. dag. Denne indgivne dosis citrat svarede til 60,8 mEq citrat hos mennesker beregnet på basis af dosiskonverteringen foreslået af Reagan-Shaw et al.67. 24-h urinprøver blev opsamlet ved slutningen af interventionen (dag 35) med thymol som konserveringsmiddel. Rotter blev bedøvet med isofluran og aflivet. Begge nyrer blev fjernet, skåret og fikseret i 10 procent neutral formalinbuffer til histologisk undersøgelse.

Alle rotter blev købt fra National Laboratory Animal Center, Salaya Campus Mahidol University, Nakhonpathom, Thailand. De eksperimentelle procedurer blev udført af retningslinjerne for forsøgsdyr af Thailands Nationale Forskningsråd og godkendt af Institutional Animal Care & Use Committee, Det medicinske fakultet, Chulalongkorn University (nr. 022/2560). Vores undersøgelse blev udført i overensstemmelse med ARRIVE-retningslinjerne.

CaOx-aflejring i nyresnit ved polariseret mikroskopi.Formalinfikserede paraffinindlejrede rottenyresnit blev fremstillet af en automatiseret vævsprocessor. H&E-farvning blev udført i overensstemmelse med standardproceduren. Dobbeltbrydende CaOx-krystalaflejringer i H&E-farvede sektioner blev visualiseret ved hjælp af et polariseret lysmikroskop (OLYMPUS BX50, Japan).

Yasue-farvning til CaOx-histokemi.Nyrevævssnit blev afparaffineret, rehydreret, nedsænket i 5 procent eddikesyre i 30 minutter for at fjerne calciumphosphat og calciumcarbonat og vasket med destilleret vand 68. Sektioner blev inkuberet med 5 procent AgNO3 i 12 minutter, vasket og inkuberet med mættet rubeansyre syre i 10 procent ammonium i 1 min. De farvede sektioner blev skyllet med 50% ethanol, vasket med destilleret vand, dehydreret, renset og monteret. Sorte CaOx-præcipitater blev visualiseret under et lysmikroskop69.

Immunhistokemisk farvning.Efter afparaffinisering og rehydrering blev antigenudvinding udført ved kogning i natriumcitratbuffer under anvendelse af en mikrobølgeovn. Endogent H2O2 blev inaktiveret ved inkubering med 0,3 procent H2O2 i 30 min. Uspecifik binding blev blokeret ved inkubering med normalt hesteserum i 20 min. Sektioner blev derefter inkuberet med 1:1,000 4-HNE (ab46545, Abcam, Cambridge, UK) eller spaltet caspase-3 (5A1E, Cell Signaling Technology, MA, USA) primært antistof ved 4 grader natten over, efterfulgt af inkubation med sekundært antistof ved 37 grader i 30 min. Efter vask blev sektioner inkuberet med ABC-reagens (VECTASTAIN® ABC-kit) i 30 minutter, gennemblødt i 1 procent diaminobenzidinfarvningsreagens i 5 minutter og modfarvet med hæmatoxylin i 5 minutter. Til sidst blev sektioner dehydreret, ryddet, monteret og visualiseret under et lysmikroskop.

Målinger af urincitrat, oxalat, urinsyre og iCOCI. Urinniveauet af citrat blev bestemt ved højtydende væskekromatografi (Varian Medical Systems, CA, USA) under anvendelse af ROAorganic Acid H plus kolonne (300×7,8 mm) (Phenomenex, CA, USA) og elueret med 5 mM H2SO4 ved en strømningshastighed på 0,5 ml/min. Urinoxalat- og urinsyreniveauer blev målt ved kapillærelektroforese (Beckman Coulter, CA, USA) adskilt ved 25 grader med en spænding på -20 kV. Urin-iCOCI-testen blev udført i henhold til vores tidligere rapport 38.

C. elegans belastning og vedligeholdelse.C. elegans vildtype-stammen Bristol N2 og dens laboratoriefødekilde E. coli OP50 blev opnået fra Caenorhabditis Genetics Center, University of Minnesota, USA. De blev dyrket og holdt i nematodevækstmedium-agarplader med en græsplæne af E. coli OP50 ved 20 grader 70. Alle eksperimenter blev udført i alderssynkroniserede unge voksne orme.

Levetidsanalyse.Levetidsanalyse blev udført i flydende medier71. Kort fortalt blev 10 alderssynkroniserede unge voksne nematoder overført til en 24-brøndplade med M9-buffer sammen med E. coli OP50 og 5-fuoro-2′-deoxyuridin til forebyggelse af afkomsproduktion. Forskellige koncentrationer af HydroZitLa blev tilsat under anvendelse af destilleret vand som vehikelkontrol. Levende nematoder blev talt hver 24. time. Nematoder blev anset for at være døde, når de ikke reagerede på forsigtigt tilskyndelse ved hjælp af platinløkken.

Pharyngeal pumpeanalyse.Pharyngeal pumpning (en indikator for fødeindtagelsesevne) blev målt i unge voksne nematoder (~10) sammenlignet mellem kontrol og HydroZitLa-tilskud ved at overvåge pharyngeal kontraktion i 30 s i hver 24. time under stereomikroskopet (SMZ{ {3}}, Motic, Kina) på dag 0 (før tilskud), 5, 10 og 1572.

Lipofuscin analyse.Akkumuleringen af lipofuscin i vildtypenematoderne efter tilskud med forskellige koncentrationer af HydroZitLa (20 %, 30 %, 40 % v/v) i 5 dage blev overvåget. E. coli OP50-fodrede orme blev brugt som kontrol. Efter interventionen blev orme vasket med M9-buffer flere gange og anbragt på et objektglas i en dråbe natriumazid. Fluorescerende billeddannelse blev udført ved hjælp af ZEISS LSM 700 konfokalmikroskop. Billeder blev yderligere analyseret ved hjælp af Image J-software, og fluorescensintensiteten blev præsenteret som vilkårlige enheder (AU)72.

Måling af relativ telomerlængde. Den relative telomerlængde (RTL) blev målt i HK-2-celler behandlet med H2O2 (25 µM), natriumoxalat (NaOx, 900 µM) og COM (25 µg/cm2) med eller uden HydroZitLa (10 procent v. /v). RTL blev bestemt ved real-time kvantitativ polymerasekædereaktion (qPCR)73. Det beregnes ud fra forholdet mellem kopiantallet af telomer-gentagelser og kopiantallet af et enkeltkopi-gen (36B4-gen), der er proportional med den gennemsnitlige telomerlængde. De anvendte primere var som følger: Telomere (fremad) 5'-CGGTTTGTTTGGGTTTGGGTTTGGGTTTGGGTTTGGGTT-3′, Telomere (omvendt) 5'-GGC TTGCCTTACCCTTACCCTTACCCTTACCCTTACCCT{{18}) ′CGATG{{18})}′AGTG (AGT3AGTG3) ATCC{{23 }}′ og 36B4 (omvendt) 5'-CCCATTCTATCATCAACGGGTACAA-3′. PCR blev amplificeret ved 95 grader i 10 minutter, efterfulgt af 40 cyklusser på 95 grader i 15 sekunder og 54 grader i 1 minut.

Dobbeltfarvning af SA‑‑gal og p16.HK{{0}}-celler dyrket på dækglas blev behandlet med H2O2, NaOx og COM med og uden 10 % v/v HydroZitLa i 72 timer til induktion af SIPS. Efter behandling blev celler fikseret og farvet med den frisklavede X-gal opløsning (Vivantis, Malaysia) i 12-16 timer, vasket, permeabiliseret med 0,1 procent Triton X-100 (Amresco, TX, USA) i 3 minutter og blokeret for uspecifik binding med 1 procent normalt hesteserum (Gibco, MA, USA) ved 37 grader i 1 time. Celler blev derefter inkuberet med 1:10,000 p16 primært antistof (ab108349, Abcam) ved 4 grader natten over, efterfulgt af 1:10,000 Alexa Fluor® 488-konjugeret sekundært antistof ( Cell Signaling Technology) ved 37 grader i 30 min. Det farvede dækglas blev monteret med Fluoroshield-monteringsmedium med 4′,6-diamidino-2-phenylindol (Abcam). SA- -gal-positive senescentceller (blå) og p16-udtrykkende celler (grønne) blev visualiseret og afbildet ved hjælp af EVOS FL Auto 2-billeddannelsessystemet (Thermo Fisher Scientific, MA, USA).

Statistisk analyse.Alle data blev præsenteret som middel ± standardafvigelse eller median (interkvartilområde), alt efter hvad der var relevant. To-prøve t-test eller Mann-Whitney test blev udført for at teste forskellen mellem de to grupper. En-vejs variansanalyse eller Kruskal-Wallis test, efterfulgt af multiple sammenligningstest, blev brugt til at teste forskellen mellem tre eller flere grupper. GraphPad Prism Software version 9 (GraphPad Sofware Inc., CA, USA) blev brugt til beregning og grafer. P<0.05 was considered significant.

Referencer

1. Michell, AR Urolithiasis-historiske, komparative og patofysiologiske aspekter: En gennemgang. JR Soc. Med. 82, 669-672 (1989).

2. Shah, J. & Whitfield, HN Urolithiasis gennem tiderne. BJU Int. 89, 801-810 (2002).

3. Boonla, C. et al. Messenger RNA-ekspression af monocyt kemoattraktant protein-1 og interleukin-6 i stenholdige nyrer. BJU Int. 101, 1170-1177 (2008).

4. Boonla, C. et al. Fibrose og evidens for epitel-mesenkymal overgang i nyrerne hos patienter med staghornsten. BJU Int. 108, 1336-1345 (2011).

5. Chuang, TF et al. Risiko for kronisk nyresygdom hos patienter med nyresten - en landsdækkende kohorteundersøgelse. BMC Nephrol. 21, 292 (2020).

6. Dhondup, T. et al. Risiko for ESRD og dødelighed i nyre- og blærestensdannere. Er. J. Kidney Dis. 72, 790-797 (2018).

7. Kum, F. et al. Dræber sten stadig? En analyse af død fra stensygdom 1999-2013 i England og Wales. BJU Int. 118, 140-144 (2016).

8. Geraghty, RM, Cook, P., Walker, V. & Somani, BK Evaluering af den økonomiske byrde af nyrestenssygdom i Storbritannien: Et retrospektivt kohortestudie med en gennemsnitlig opfølgning på 19 år. BJU Int. 125, 586-594 (2020).

9. C. Türk (formand), AN, A. Petrik, C. Seitz, A. Skolarikos (næstformand), K. Tomas & Guidelines Associates: NF Davis, JFD, R. Lombardo, N. Grivas, Y. Ruhayel. The European Association of Urology (EAU) Guideline on Urolithiasis.

10. Jendle-Bengten, C. & Tiselius, HG Langtidsopfølgning af stendannere behandlet med en lav dosis natriumkaliumcitrat. Scand. J. Urol. Nephrol. 34, 36-41 (2000).

11. Schwille, PO, Herrmann, U., Wolf, C., Berger, I. & Meister, R. Citrat og tilbagevendende idiopatisk calciumurolithiasis. En longitudinel pilotundersøgelse af de metaboliske virkninger af oral kaliumcitrat administreret over kort-, mellem- og langtidsmedicinering af mandlige stenpatienter. Urol. Res. 20, 145-155 (1992).

12. Tracy, CR & Pearle, MS Opdatering om medicinsk behandling af stensygdom. Curr. Opin. Urol. 19, 200-204 (2009).

13. Mechlin, C., Kalorin, C., Asplin, J. & White, M. Splenda(R) forbedrer tolerancen af oralt kaliumcitrattilskud til forebyggelse af stendannelse: Resultater af et randomiseret dobbeltblindt forsøg. J. Endourol. 25, 1541-1545 (2011).

14. Boonla, C. Oxidativ stress i Urolithiasis, Reactive Oxygen Species (ROS) i levende celler, Cristiana Filip og Elena Albu, IntechOpen.

15. Boonla, C., Wunsuwan, R., Tungsanga, K. & Tosukhowong, P. Urinary 8-hydroxydeoxyguanosin er forhøjet hos patienter med nefrolithiasis. Urol. Res. 35, 185-191 (2007).

16. Khan, SR Hyperoxaluri-induceret oxidativ stress og antioxidanter til nyrebeskyttelse. Urol. Res. 33, 349-357 (2005).

17. Khan, SR Reaktive oxygenarter som de molekylære modulatorer af calciumoxalat-nyrestendannelse: Evidens fra kliniske og eksperimentelle undersøgelser. J. Urol. 189, 803-811 (2013).

18. Kittikowit, W. et al. Øget oxidativ DNA-skade set i nyrebiopsier ved siden af sten hos patienter med nefrolithiasis. Urolithiasis 42, 387-394 (2014).

19. Yasui, T. et al. Patofysiologi-baseret behandling af urolithiasis. Int. J. Urol. 24, 32-38 (2017).

20. Huang, HS, Ma, MC & Chen, J. Lav-vitamin E-diæt forværrer dannelsen af calciumoxalatkrystal via øget oxidativ stress i hyperoxalurisk nyre hos rotter. Er. J. Physiol. Renal. Physiol. 296, F34-45 (2009).

21. Huang, HS, Chen, J., Chen, CF & Ma, MC E-vitamin dæmper krystaldannelse i rottenyrer: Roller af renal tubulær celledød og krystallisationsinhibitorer. Nyre Int. 70, 699-710 (2006).

22. Tamilselvan, S. & Menon, M. Vitamin E-terapi forhindrer hyperoxaluri-induceret calciumoxalatkrystalaflejring i nyren ved at forbedre nyrevævets antioxidantstatus. BJU Int. 96, 117-126 (2005).

23. Tamilselvan, S. & Selvam, R. Effekt af vitamin E og mannitol på renal calciumoxalatretention i eksperimentel nefrolithiasis. Indian J. Biochem. Biofys. 34, 319-323 (1997).

24. Butterweck, V. & Khan, SR Naturlægemidler til behandling af urolithiasis: Alternativt eller komplementært? Planta Med. 75, 1095-1103 (2009).

25. Kasote, DM, Jagtap, SD, Tapa, D., Khyade, MS & Russell, WR Naturlægemidler til urinsten brugt i Indien og Kina: En anmeldelse. J. Ethnopharmacol. 203, 55-68 (2017).

26. Abu Zarin, M., Tan, JS, Murugan, P. & Ahmad, R. Undersøgelse af potentiel anti-urolithiasis-aktivitet fra forskellige typer Musa-pseudo-stammeekstrakter i inhibering af calciumoxalatkrystallisation. BMC Komplement Med. Ter. 20, 317 (2020).

27. Kailash, P. & Varalakshmi, P. Effekt af bananstængeljuice på biokemiske ændringer i leveren hos normale og hyperoxaluriske rotter. indiske J. Exp. Biol. 30, 440-442 (1992).

28. Prasad, KV, Bharathi, K. & Srinivasan, KK Evaluering af Musa (paradisisk Linn. cultivar) - "Puttubale" stammejuice til antilithiatisk aktivitet hos albinorotter. Indian J. Physiol. Pharmacol. 37, 337-341 (1993).

29. Panigrahi, PN, Dey, S., Sahoo, M. & Dan, A. Antiurolithiatisk og antioxidanteffektivitet af Musa paradisiaca pseudostem på ethylenglycol-induceret nefrolithiasis hos rotter. Indian J. Pharmacol. 49, 77-83 (2017).

30. Poonguzhali, PK & Chegu, H. Te påvirkning af bananstængelekstrakt på urinrisikofaktorer for sten i normale og hyperoxaluriske rotter. Br. J. Urol. 74, 23-25 (1994).

31. Pillai, RG Kernen i Musas pseudostem i behandlingen af urinsten. Anc Sci Life. 15, 2-6 (1995).

32. Lordumrongkiat, N., Chotechuang, N., Madared, N., Jindatip, D. & Boonla, C. Total phenolics, total flavonoid og total antioxidantkapacitet af medicinsk plante-afledt drik: HydroZitLa. Chula Med. J. 64, 381-388 (2020).

33. Sakhaee, K. Farmakologi af stensygdom. Adv. Kronisk Nyre Dis. 16, 30-38 (2009).

34. Baumann, JM & Afolter, B. Urinmakromolekylers paradoksale rolle i aggregeringen af calciumoxalat: Et yderligere anbringende om at øge diurese ved stenmetafylakse. Urolithiasis 44, 311-317 (2016).

35. Reddy, AJ et al. Antikonvulsive og antioxidante virkninger af Musa sapientum stammeekstrakt på akutte og kroniske eksperimentelle modeller af epilepsi. Pharmacogn. Res. 10, 49-54 (2018).

36. Jaafar, NF, Ramli, ME & Mohd Salleh, R. Optimal ekstraktionstilstand af Clitorea ternatea-blomst på antioxidantaktiviteter, totalt phenolindhold, totalt flavonoid og totalt anthocyaninindhold. Trop. Life Sci. Res. 31, 1-17 (2020).

37. Nirmal, NP, Rajput, MS, Prasad, RG & Ahmad, M. Brazilin fra Caesalpinia sappan kernetræ og dets farmakologiske aktiviteter: En gennemgang. Asiatisk Pac. J. Trop. Med. 8, 421-430 (2015).

38. More-Krong, P. et al. Klinisk validering af urinindol-reageret calciumoxalat krystallisationsindeks (iCOCI) test til diagnosticering af calciumoxalat urolithiasis. Sci. Rep. 10, 8334 (2020).

39. Yasui, T. et al. Virkninger af citrat på nyrestendannelse og osteopontinekspression i en rotteurolithiasismodel. Urol. Res. 29, 50-56 (2001).

40. Ghaeni, FA, Amin, B., Hariri, AT, Meybodi, NT & Hosseinzadeh, H. Antilithiatiske virkninger af crocin på ethylenglycol-induceret lithiasis hos rotter. Urolithiasis 42, 549-558 (2014).

41. Holmes, RP & Assimos, DG Glyoxylatsyntese og dens modulering og indflydelse på oxalatsyntese. J. Urol. 160, 1617-1624 (1998).

42. Patankar, S., Fanthome, B. & Bhalerao, SS Effektiviteten af herbed plus hos urolithiske rotter: En eksperimentel undersøgelse. J. Ayurveda Integr. Med. 11, 250-255 (2020).

43. Chaiyarit, S. & Tongboonkerd, V. Mitokondriel dysfunktion og nyrestenssygdom. Front Physiol. 11, 566506 (2020).

cistanche portugal

44. Holoch, PA & Tracy, CR Antioxidanter og selvrapporteret historie om nyresten: National Health and Nutrition Examination Survey. J. Endourol. 25, 1903-1908 (2011).

45. Khan, SR Er oxidativ stress, en sammenhæng mellem nefrolithiasis og fedme, hypertension, diabetes, kronisk nyresygdom, metabolisk syndrom? Urol. Res. 40, 95-112 (2012).

46. Hirose, M. et al. Renal tubulær epitelcelleskade og oxidativ stress inducerer dannelse af calciumoxalatkrystal i musenyrer. Int. J. Urol. 17, 83-92 (2010).

47. Khan, SR Reaktive oxygenarter, inflammation og calciumoxalat-nephrolithiasis. Overs. Androl. Urol. 3, 256-276 (2014).

48. Boonla, C. et al. Proteomiske inflammatoriske og fibrotiske proteiner identificeret som nøgleproteinbestanddele i urin- og stenmatrix hos patienter med nyresten. Clin. Chim. Acta 429, 81-89 (2014).

49. Aggarwal, D., Gautam, D., Sharma, M. & Singla, SK Bergenin dæmper nyreskade ved at vende mitokondriel dysfunktion i ethylenglycol-induceret hyperoxalurisk rottemodel. Eur. J. Pharmacol. 791, 611-621 (2016).

50. Ghodasara, J., Pawar, A., Deshmukh, C. & Kuchekar, B. Inhiberende virkning af rutin og curcumin på eksperimentelt induceret calciumoxalat urolithiasis hos rotter. Pharmacogn. Res. 2, 388-392 (2010).

51. Grases, F. et al. Effekter af polyfenoler fra vindruekerner på renal lithiasis. Oxid. Med. Celle. Longev. 2015, 813737 (2015).

52. Cherniack, EP Plantepolyfenolers potentielle indflydelse på ældningsprocessen. Forsch Komplementmed. 17, 181-187 (2010).

53. Wood, JG et al. Sirtuin-aktivatorer efterligner kaloriebegrænsning og forsinker aldring hos metazoer. Nature 430, 686-689 (2004).

54. Bonkowski, MS & Sinclair, DA Bremse aldring ved design: Fremkomsten af NAD( plus ) og sirtuin-aktiverende forbindelser. Nat. Rev. Mol. Celle. Biol. 17, 679-690 (2016).

55. Bhullar, KS & Hubbard, BP Forlængelse af levetid og helbred med resveratrol. Biochim. Biofys. Acta. 1852, 1209-1218 (2015).

56. von Frieling, J. & Roeder, T. Faktorer, der påvirker oversættelsen af kostrestriktioner til et længere liv. IUBMB Life 72, 814–824 (2020).

57. von Zglinicki, T. Oxidativ stress forkorter telomerer. Trends Biochem Sci. 27, 339-344 (2002).

58. Chuenwisad, K. et al. For tidlig senescens og telomerforkortelse induceret af oxidativt stress fra oxalat, calciumoxalatmonohydrat og urin fra patienter med calciumoxalat nefrolithiasis. Foran. Immunol. 12, 696486 (2021).

59. Hu, Z. et al. Urte-lægemiddelinteraktioner: En litteraturgennemgang. Drugs 65, 1239-1282 (2005).

60. Susanti, S. & Imannura, P. Effekt af Secang Wood (Ceasalpinia Sappan L.) ekstrakt på morfologien af spermatozoer og reversibel proces hos hanrotter. I gang med den 2. fælles internationale konference. ISBN: 978-602-5842-03-0 (2018).

61. Kim, BS et al. Caesalpinia sappan inducerer apoptotisk celledød i ektopiske endometriale 12Z-celler ved at undertrykke pyruvatdehydrogenasekinase 1-ekspression. Exp. Ter. Med. 21, 357 (2021).

62. Boonla, C., Youngjermchan, P., Pumpaisanchai, S., Tungsanga, K. & Tosukhowong, P. Litogen aktivitet og klinisk relevans af lipider ekstraheret fra urin og sten fra nefrolithiasispatienter. Urol. Res. 39, 9-19 (2011).

63. Kloypan, C., Srisa-art, M., Mutirangura, A. & Boonla, C. LINE-1-hypomethylering induceret af reaktive oxygenarter medieres via udtømning af S-adenosylmethionin. Cell Biochem. Funktion. 33, 375-385 (2015).

64. Whongsiri, P., Phoyen, S. & Boonla, C. Oxidativ stress i urothelial carcinogenese: Målinger af proteincarbonylering og intracellulær produktion af reaktive oxygenarter. Metoder Mol. Biol. 1655, 109-117 (2018).

65. Whongsiri, P. et al. Oxidativ stress og LINE-1-reaktivering i blærekræft er epigenetisk forbundet gennem aktiv kromatindannelse. Fri Radik. Biol. Med. 134, 419-428 (2019).

66. Whongsiri, P. et al. LINE-1 ORF1-protein opreguleres af reaktive oxygenarter og er forbundet med blæreurothelial carcinomprogression. Cancer Genom. Proteom. 15, 143-151 (2018).

67. Reagan-Shaw, S., Nihal, M. & Ahmad, N. Dosisoversættelse fra dyre- til menneskestudier genbesøgt. FASEB J. 22, 659-661 (2008).

68. Yasue, T. Histokemisk identifikation af calciumoxalat. Acta Histochem. Cytochem. 2, 83-95 (1969).

69. Evan, AP et al. Randalls plaque af patienter med nefrolithiasis begynder i basalmembraner af tynde løkker af Henle. J. Clin. Investere. 111, 607-616 (2003).

70. Prasanth, MI, Santoshram, GS, Bhaskar, JP & Balamurugan, K. Ultraviolet-A udløser fotoaldring i modelnematoden Caenorhabditis elegans i en DAF-16-afhængig vej. Alder (Dordr) 38, 27 (2016).

71. Brimson, JM, Prasanth, MI, Plaingam, W. & Tencomnao, T. Bacopa monnieri (L.) wettst. Ekstrakt beskytter mod glutamattoksicitet og forlænger Caenorhabditis elegans levetid. J. Tradit. Kompleks. Med. 10, 460-470 (2020).

72. Prasanth, MI, Brimson, JM, Chuchawankul, S., Sukprasansap, M. & Tencomnao, T. Antiaging, stressresistens og neurobeskyttende virkninger af Cleistocalyx nervosum var. universalmiddel frugtekstrakter ved hjælp af Caenorhabditis elegans model. Oxid. Med. Celle. Longev. 2019, 7024785 (2019).

73. Cawthon, RM Telomermåling ved kvantitativ PCR. Nucleic Acids Res. 30, e47 (2002).

Anerkendelser

Undersøgelsen blev økonomisk støttet af Research Gap Fund fra Ministeriet for Videnskab og Teknologi, National Science and Technology Development Agency (NSTDA) og Chulalongkorn University (GB-rgf_60_2905_0003 til CB) og af Thailand Science Research og Innovation, Industry Division (RDG6150088 til CB) og Det Medicinske Fakultet, Chulalongkorn University (Matching Fund). NL modtog 90-års jubilæet for Chulalongkorn University Fund (Ratchadaphiseksomphot Endowment Fund). Forfatterne anerkender med tak for forsknings- og innovationsstøtten fra Chulalongkorn University Technology Center og Thailand Science Research and Innovation Fund (TSRI) (CU_FRB640001_01_2). Tak til Miss Natcha Madared for deres fremragende hjælp. Vær taknemmelig for personalet i dyrefaciliteten på Det Medicinske Fakultet, Chulalongkorn University. Tak til assisterende prof. dr. Sitthichai Ukritchon og prof. dr. Manathip Osiri for deres støtte til brugen af polariseret mikroskopi.

Forfatterbidrag

NL: Udførte celle- og rotteforsøg og indsamlede data. NC: Indsamlede data og hjalp med at udtænke forskningsidéen og dataanalysen. MP: Udtænkt og udført C. elegans eksperiment, og udført C. elegans dataanalyse. DJ: hjalp med immunhistokemiske eksperimenter og billeddannelse. CM: Hjælpet med vævssektionering. KC: Udførte telomerforkortnings- og senescenseksperimenter. AL: Det lykkedes at få adgang til dyrefaciliteter til rotteforsøg. TT: Hjalp med at udtænke og designe C. elegans eksperiment. CB: Udtænkt og designet undersøgelsen, udførte statistisk analyse og skrev manuskriptet. Alle forfattere har gennemgået manuskriptet.

Konkurrerende interesser

CB, NC og NL er opfindere af HydroZitLa. Chulalongkorn University og opfinderne ejer den intellektuelle ejendom for HydroZitLa. Ingen af de andre forfattere har nogen interessekonflikt at erklære om dette værk.