Gastrointestinal epitelial medfødt immunitet - regionalisering og organoider som ny model

Den menneskelige mave-tarmkanal er i konstant kontakt med mikrobielle stimuli. Dens barrierer skal sikre sameksistens med de kommensale bakterier og samtidig muliggøre overvågning af indtrængende patogener. I centrum af interaktionen ligger epitellaget, som markerer kroppens grænser. Den er udstyret med et væld af forskellige medfødte immunsensorer, såsom Toll-lignende receptorer, til at montere inflammatoriske reaktioner på mikrober. Dysfunktion af dette indviklede system resulterer i inflammationsassocierede patologier, såsom inflammatorisk tarmsygdom. Imidlertid forbliver kompleksiteten af ​​de cellulære interaktioner, deres molekylære grundlag og deres udvikling dårligt forstået. I de senere år har stamcelle-afledte organoider fået stigende opmærksomhed som lovende modeller for både udvikling og en bred vifte af patologier, herunder infektionssygdomme. Derudover muliggør organoider studiet af epitelial medfødt immunitet in vitro. I denne gennemgang fokuserer vi på den gastrointestinale epitelbarriere og dens regionale organisation for at diskutere medfødt immunfornemmelse og udvikling.

Eksponering for mikrobielle stimuli kan forbedre immuniteten, fordi mikrobielle stimuli kan stimulere kroppen til at producere immunceller og immunmolekyler og derved stimulere kroppens immunrespons. Specifikt kan eksponering for mikrobielle stimuli aktivere immunceller såsom makrofager, dendritiske celler og naturlige dræberceller, accelerere spredningen og differentieringen af ​​immunceller og forbedre immuncellernes vitalitet og sygdomsresistens. Derudover kan mikrobielle stimuli også fremme inflammatoriske reaktioner og immunregulering og forbedre kroppens immunforsvar mod patogener. Derfor kan rimelig eksponering for mikrobielle stimuli fremme forbedringen af ​​menneskelig immunitet. Det kan ses, at vi skal forbedre immuniteten. Cistanche kan forbedre immuniteten betydeligt. Kødaske indeholder forskellige biologisk aktive ingredienser, såsom polysaccharider, to svampe, Huang Li osv. Disse ingredienser kan stimulere forskellige typer kød i immunsystemet. celler, hvilket øger deres immunforsvar.

Klik på sundhedsmæssige fordele ved cistanche

Nøgleord

Mavetarmkanalen. Immunitet. Regionalisering og organoider.

Introduktion

Mave-tarmkanalen (GI) er nødvendig for fordøjelsen af ​​mad og strækker sig fra mundhulen via spiserøret, maven, tyndtarmen og tyktarmen til anus. GI-lumen er koloniseret af en bred vifte af kommensaler, symbionter og lejlighedsvis patogener. Den mikrobielle kolonisering følger en gradient med mindre end 103 mikrober/ml i maven til 103-107 mikrober/ml i tyndtarmen og 1011-1012 mikrober/ml i tyktarmen (gennemgået i [1-3]). Fra kirtelmaven og fremefter er mave-tarmkanalen beklædt med et enkelt lag søjleepitelceller. Dette epitellag omfatter forskellige specialiserede celler, tæt sammenlåst af koblingsproteinkomplekser, som styrker den fysiske barriere (fig. 1).

Interaktionen mellem tarmmikrobiotaen samt indtagne patogener og epitelceller medieres af mønstergenkendelsesreceptorer (PRR'er), herunder Toll-lignende receptorer (TLR'er), nukleotidbindende oligomeriseringsdomæne (NOD)-lignende receptorer (NLR'er) og andre cytosoliske receptorer (fig. 2, gennemgået i [7, 11]). Disse PRR'er spiller en nøglerolle i genkendelsen af ​​mikrobe-associerede molekylære mønstre (MAMP'er) og skadesassocierede molekylære mønstre (DAMP'er). Efter PRR-aktivering i epitelceller inducerer nedstrøms signalkaskader ekspressionen af ​​forskellige cytokiner og kemokiner via inflammatoriske veje, såsom NF-KB-vejen, for at dirigere de professionelle immunceller (gennemgået i [8, 12-16]). Ud over de klassiske PRR'er er yderligere sensorer for bakterielle aktiviteter, såsom alfa-kinase 1 (ALPK1) for nylig blevet opdaget [17-19]. Inflammasomer, cytoplasmatiske komplekser sammensat af NLR-proteiner, genkender yderligere molekylære mønstre, såsom bakterielle metabolitter (gennemgået i [7, 9]).

Gastrointestinale medfødte immunresponser, herunder PRR-sensing, skal balancere behovet for beskyttelse mod potentielt skadelige patogener med at kunne tolerere eksponering for det forskellige luminale mikrobiom. Derfor forventes ekspressionen og funktionen af ​​PRR-signalering at have en stor indvirkning ikke kun på patogen-sensing, men også på vævshomeostase (boks 1) og inflammatoriske sygdomme, herunder akut gastroenteritis, gastritis og inflammatoriske tarmsygdomme (IBD'er) (gennemgået i [ 12, 13, 20, 21]). Selvom hver af disse sygdomme udviser helt forskellige patogeneser, deler de et kritisk træk: grænsefladen mellem miljøet og kroppen er betydeligt forstyrret. Der er dog en løbende debat om, hvorvidt ændringer i tarmepitellaget, især dem, der påvirker dets medfødte immunfunktion, er en årsag til eller en konsekvens af de ovennævnte sygdomme.

Mest viden om PRR-signalering er indsamlet fra forskning i hæmatopoietiske celler. Det har været en udfordring at skelne funktionerne af PRR-signalering i epitelceller fra de infiltrerende immuncellers funktioner. Store forhindringer omfatter vanskeligheder med at isolere rene epitelceller og rejse pålidelige antistoffer mod PRR'er. Med udviklingen af ​​organoider, der stammer fra intestinale epitelstamceller, er en reduktionistisk eksperimentel model nu tilgængelig, der muliggør undersøgelser af det medfødte immunrespons af de primære epitelceller. Organoider er defineret som stamcelle-afledte, 3- dimensionelle cellekulturer, der har den selvorganiserende kapacitet og bevarer noget af det oprindelige organs funktion (f.eks. sekretion, filtrering, absorption, kontraktion). Da organoider kan dyrkes enten fra vævsresidente voksne stamceller (ASC'er) eller fra pluripotente stamceller (PSC'er), er cellerne ikke-transformerede. Tilsammen dækker de to typer organoider et omfattende repertoire af orgler, der kan efterlignes (gennemgået i [4, 22, 23]). Begge teknologier har deres fordele (gennemgået i [4, 22, 23]). For eksempel har kulturer af ASC-afledte organoider et enormt ekspansionspotentiale og er relativt homogene, og PSC-afledte organoider er mere komplekse i den forstand, at de kombinerer celler af meget forskellig udviklingsoprindelse (f.eks. epitel- og mesenkymale celler). PSC-afledte organoider tillader analyse af udviklingstrinene, men når muligvis ikke det fulde niveau af differentiering i epitellaget som fundet in vivo [24]. ASC-afledte organoider genereret fra føtalt væv kan også tillade undersøgelse af modningen af ​​føtale epitel, da de ældes i kultur [24, 25].

Denne gennemgang vil fremhæve indsigter fra undersøgelser, der bruger organoider og diskutere potentialet af denne teknologi til studiet af epitelial medfødt immunitet. Vi har fokus på den regionale organisation i mave-tarmkanalen.

Regional identitet og medfødt immunsignalering i GI-kanalen

Når man ser på mave-tarmsygdomme, er det vigtigt at bemærke, at nogle af dem er begrænset til en bestemt del af mave-tarmkanalen. IBD omfatter Crohns sygdom (CD) og colitis ulcerosa (UC), som viser et differentielt og sygdomsspecifikt inflammationsmønster: mens UC begynder i endetarmen og findes i tyktarmen, kan CD'en påvirke alle dele af mave-tarmkanalen fra mundhulen til anus. Desuden er CD'en karakteriseret ved segmental, diskontinuerlig inflammation i GI-kanalen, mens UC normalt beskrives som en kontinuerlig inflammation i tyktarmen (gennemgået i [26, 27]). I spiserøret, maven og tyktarmen er kræftforekomsten høj, og infektion og inflammation kan fremme udviklingen og progressionen af ​​disse kræftformer (gennemgået i [28, 29]). I modsætning hertil er malign transformation i tyndtarmen meget sjælden (gennemgået i [30]). Den tilsyneladende segmentspecificitet af disse sygdomme i mave-tarmkanalen forbliver gådefuld, men det er fristende at spekulere i, at deres regionsspecifikke oprindelse er forankret i regionspecifikke forstyrrelser af det tæt afbalancerede system af epitelbarrierefunktion, medfødt immunitet og slimhindregenerering . Derfor er det interessant at fremhæve forskelle i segmenterne inden for GI-kanalen.

Mave-tarmkanalen omfatter flere anatomisk definerede segmenter med vidt forskellige fysiske funktioner (gennemgået i [31]). Mavens hovedfunktion er fordøjelsen af ​​mad og eliminering af indkommende patogener af mavesyre. Næringsstoffer behøver ikke at nå epitellaget i maven; således investerer kroppen kraftigt i en beskyttende slimbarriere, der beskytter epitelcellerne ikke kun fra dets syre, men også fra luminalt indhold (gennemgået i [32, 33]). Derimod er tyndtarmens hovedfunktion ikke kun fordøjelsen, men også optagelsen af ​​næringsstoffer. I overensstemmelse hermed har tyndtarmen et betydeligt forstørret overfladeareal på grund af villi, der stikker ud i tarmlumen, hvor celleoverflader kommer i tæt kontakt med næringsstofferne. Det meste af fordøjelsen foregår ved den proksimale tyndtarm, tolvfingertarmen og jejunum, hvor villi er lange og tynde. Jejunum har det højeste forhold af Paneth-celler, der udskiller antimikrobielle peptider [34], som dekorerer det ret løse slim, og derved beskytter epitellaget og holder krypterne sterile (gennemgået i [35]).

Villi bliver gradvist kortere og bredere mod ileum (gennemgået i [36]), hvor slimet igen overtager en vigtig del af beskyttelsen: med den højeste andel af bægerceller har ileum et tykkere slimlag og et lavere hastigheden af ​​fordøjelse og absorption end jejunum [34] (gennemgået i [31]). Endelig reabsorberer tyktarmen vand og investerer i et omfattende, tykt og to-lags slimdæksel for sikkert at kunne rumme billioner af kommensale bakterier. Tyktarmen har ingen villi, og krypterne er mindre end tyndtarmens. Der er ingen Paneth-celler, og bægercelleforholdet kan være op til 25 procent af epitellaget [37]. De tre tarmsegmenter har således forskellige strategier til at opretholde en sikker afstand mellem epitelcellerne og mikrobiotaen. MAMP-genkendelse og aktivering af immunbaner er et andet lag af denne interaktion, og derfor er det kun rimeligt, at de også er struktureret langs mave-tarmkanalen (gennemgået i [38]). Det er dog stadig en fascinerende gåde om, hvad der præcist former strukturen i PRR-organisationen.

Selvom det er intuitivt, at gener, der er vigtige for regionale funktioner, såsom fordøjelse og næringsstofoptagelse, følger rumlig kompartmentalisering langs den cephalocaudale akse (gennemgået i [39]), var en sådan organisation ikke forventet for epitelial medfødt immunsignalering. Tidligere undersøgelser havde rapporteret regulering af PRR-signalering som reaktion på stimulering med MAMP'er. For eksempel falder TLR4-reaktionsevnen efter fødslen, formentlig på grund af eksponering for LPS under fødslen og efterfølgende kolonisering af tarmen [40]. Også stimulering af TLR9 med dets ligand CpG-DNA fører til et fald i Tlr4-ekspression og hæmmer TLR4-signalering [41]. Det var således forventet, at kontakt med mikroorganismerne, deres molekyler og metabolitter i mave-tarmkanalen ville føre til dæmpning af PRR-ekspression mod tarmlumen (gennemgået i [14]). Imidlertid førte modstridende resultater, forårsaget af tekniske vanskeligheder såsom upålidelige antistoffer rettet mod TLR'er, til forvirring i feltet, og det var uklart, om en bestemt PRR blev udtrykt eller ej (gennemgået i [42]). Tidlige Northern blots for mRNA af Tlr2 og Tlr4 in ex vivo isolerede epitelceller indikerede, at ekspressionsniveauer af disse to Tlr-molekyler var segmentspecifikke: Tlr2 blev primært udtrykt i tyktarmen, mens Tlr4 hovedsageligt blev udtrykt i mave og tyktarm. Forfatterne kaldte dette " strategisk opdeling" af disse TLR'er [43]. Nylige undersøgelser har nu opdaget, at dette princip for segmentspecifikt udtryk strækker sig ud over disse to TLR'er og har afsløret en meget kompleks regional organisation af PRR-signalering, der ikke altid følger den mikrobielle belastning [44, 45].

Den første af de to undersøgelser kom fra Barton-gruppen og afslørede flere niveauer af organisering af TLR-ekspression. Gruppen genererede fem stammer af reportermus, hvilket muliggjorde ekspressionsanalyse af henholdsvis TLR2, 4, 5, 7 og 9. TLR2 og 5 blev udtrykt i tyndtarmen og den proksimale colon, TLR4 blev udtrykt i colon og TLR7 og 9 blev ikke udtrykt. Reporter-ekspression i organoider fra disse mus efterlignede in vivo-ekspressionen tæt, hvilket indikerer, at ekspressionen er uafhængig af kontakt med mikrobiotaen eller med immunceller [45].

Den anden undersøgelse brugte en biobank af frisk genererede menneskelige og murine organoider, der dækkede de forskellige segmenter af mave-tarmkanalen: corpus, pylorus, duodenum, jejunum, ileum og colon. Transkriptionel analyse af organoiderne bekræftede ekspressionsmønstrene for TLR'erne rapporteret af Barton-gruppen, men afslørede desuden et stort omfang af differentiel ekspression af TLR'er, NLR'er, inflammasomkomponenter og andre medfødte immunitetsrelaterede gener (fig. 3 og [44) ]). For eksempel blev Nod2 hovedsageligt udtrykt i maven, mens udtryk for adskillige inflammasom-pathway-komponenter som Nlrp1b, Nlrp6 og Aim2 var begrænset til tarmen. Forskellige receptorer blev ensartet udtrykt; for eksempel blev Tlr3-ekspression påvist i hvert segment af den murine GI-kanal i høje mængder, hvorimod Tlr5 blev udtrykt i hvert segment, men i lave mængder [44]. Som følge heraf ser hvert segment ud til at have sit helt eget, specifikke komplement af medfødte immunreceptorer og signalkomponenter.

Sammenligning af murinen med de humane gastrointestinale organoider viste, at princippet for den komplekse organisering af PRR-signalkomponenter var det samme i begge arter, men individuelle PRR-ekspressionsprofiler kunne variere. Nogle PRR'er, som TLR4 og NLRP6, var tilsvarende mønstret langs GI-kanalen af ​​begge arter. TLR4 blev overvejende udtrykt i maven og tyktarmen, og NLRP6-ekspression var begrænset til segmenterne af tarmen. På den anden side viste flere PRR'er såsom TLR1 og TLR2 mønstre, der var forskellige mellem begge arter. Mens der hos murine organoider steg ekspressionen af ​​begge langs GI-kanalen og var højest i tyktarmen, var ekspressionen i humane organoider højest i maven og faldt langs GI-kanalen [44]. Desuden var ekspressionen af ​​TLR5 højere i humane organoider, med de højeste niveauer observeret i maven [44].

Som nævnt ovenfor tillader organoider også test af, om en bestemt vej er funktionel ved tilsætning af liganden og efterfølgende analyse af nedstrøms målgenekspression. Som supplement til den regionspecifikke ekspressionsanalyse fandt undersøgelsen også, at humane og murine organoider viser regionsspecifik funktion: den murine mave reagerede på TLR4-liganden LPS, men ikke TLR2-liganden PAM3CSK4 eller TLR5-liganden flagellin, ved at opregulere NF- κB målgen Cxcl2. Murine jejunum opregulerede Cxcl2 som respons på PAM3CSK4 og flagellin, men ikke som respons på LPS. Derudover udtrykte tyktarmen Cxcl2 som svar på alle disse 3 testede ligander [44]. I modsætning hertil udtrykte humane organoider fra alle regioner den humane Cxcl2-analoge IL-8 som respons på flagellin, men ikke som respons på LPS og PAM3CSK [44]. Således er ikke kun udtrykket, men også funktionen af ​​PRR'er i tarmen meget organiseret og segmentspecifik. Disse eksperimenter blev udført ved at tilføje stimulus til det organoide medium og således kun stimulere basalsiden, eftersom den apikale side vender mod organoidernes forseglede lumen. Andre eksperimenter viste, at der er et endnu højere niveau af organisation, da PRR-ekspression inden for et segment kan begrænses til specifikke celletyper eller endda subcellulære placeringer, såsom kun det basale rum. Disse er beskrevet mere detaljeret nedenfor.

Hver region i GI-kanalen udtrykker sit specifikke sæt af medfødte immungener. Selvom en generalisering er vanskelig, tyder de nuværende data på, at TLR'er udtrykkes højest i maven og tyktarmen, mens tyndtarmen er karakteriseret ved ekspressionen af ​​inflammasomkomponenter. I øjeblikket er den underliggende molekylære mekanisme og den evolutionære fordel uklare.

Vi formoder, at de fysiske og kemiske barrierer, der dækker epitellagene i de forskellige tarmsegmenter, hver især kræver overvågning af specifikke trusler. For eksempel har mavesækken og tyktarmen begge et to-lags, tykt slimlag med det indre slimlag solidt fæstnet til epitellaget, mens tyndtarmen er dækket af et tyndt, tyktflydende slimlag [46]. De forskellige konstitutioner af slimlagene skyldes til gengæld sandsynligvis de forskellige funktioner af de respektive tarmsegmenter (fordøjelse vs næringsstofoptagelse vs vandresorption). Det er tænkeligt, at slimtykkelsen påvirker typen af ​​PRR'er, der er nødvendige på specifikke steder.

Specialiserede celler med immunfunktion i epitelet

Et mangeårigt koncept inden for epitelial medfødt immunitet er eksistensen af ​​celletypespecifik medfødt immungenkendelse. Prototyper af de specialiserede epitelceller med forsvarsfunktion er mikrofoldcellerne (M) og Paneth-cellerne – for nylig suppleret med en specialiseret bægercelle, sentinelbægercellen. Eksistensen af ​​sådanne specialiserede celler fremhæver de indviklede og overflødige systemer, der sikrer balancen mellem næringsstofoptagelse, sameksistens med mikrobiotaen og overvågning af mulige angribere. Direkte differentiering af organoider tillader nu også studiet af disse celler i cellekultur.

M-celler er placeret i det follikel-associerede epitel, der dækker Peyers pletter. De har en unik morfologi med uregelmæssige børstekanter og reducerede mikrovilli-strukturer. Deres rolle er at transportere antigener i tarmlumenet over epitellaget til det underliggende lymfoide væv til regulering af immunresponser [47]. M-celler selv såvel som det follikelassocierede epitel blev vist at udtrykke flere TLR'er [48] (gennemgået i [14]). M-celler har imidlertid været vanskelige at studere, da der ikke er mange i epitelvævet, og de findes kun i nærheden af ​​den komplekse struktur af Peyers pletter [47]. Ikke desto mindre kan M-celler genereres i organoide kulturer ved hjælp af rettet differentiering. Til dette tilsættes receptoraktivatoren af ​​NF-KB-ligand (RANKL) til mediet, som opregulerer transkriptionsfaktoren SpiB, som er karakteristisk for M-celledifferentiering [49]. Organoider genereret fra mus, der er genetisk mangelfulde for NF-KB-underenheden RelB, er ikke i stand til at producere M-celler efter stimulering med RANKL, hvilket indikerer, at NF-KB-aktivering er afgørende for udviklingen af ​​M-celler [50]. I human organoid kultur er lymfotoksin og retinsyre ud over RANKL afgørende for at inducere differentiering mod M-celler. Disse M-celler optager specifikt enteriske vira som rotavirus og reovirus, hvilket indikerer korrekt fænokopiering af den naturlige M-cellefunktion også i organoide kulturer [51]. Fremtidigt organoid arbejde bliver nødt til at fortsætte med at optrevle sammenkoblingen af ​​epitelial NF-KB-signalering, M-celleudvikling og kommunikation med immunceller.

Paneth-celler er blandet med tarmstamcellerne i bunden af ​​krypten og har længe været anset for at være stamcellerummets vogtere, fordi de udskiller antimikrobielle peptider. For eksempel udskiller Paneth-celler alfa-defensiner, en proces, der er vist at være reguleret af mikrobielle mønstre og medfødte immunmekanismer [52, 53]. Derudover regulerer NOD2, som først blev påvist i kryptområdet i den murine tyndtarm [54], udskillelsen af ​​adskillige alfa-defensiner fra Paneth-celler, hvilket igen fører til aktivering af adaptiv immunitet. Paneth-celler udtrykker også TLR5 og Paneth-celleberigede organoider udtrykker særligt høje niveauer af TLR5. RNA-sekventering efter stimulering afslører, at mens normale tyndtarmsorganoider kun udtrykker moderate niveauer af TLR5 downstream-målgenerne som reaktion på stimulering med flagellin, såsom NF-kB-inducerede cytokiner, er organoider rettet til at indeholde et højt antal Paneth-celler en meget stærkere respons, hvilket indikerer, at Paneth-celler er de vigtigste respondere på flagellin i tyndtarmen [44, 45]. I modsætning til målgenekspression udløses den mest dramatiske reaktion fra Paneth-celler (degranulering, ekstrudering og celledød) ikke af stimulering med TLR-ligander, men kræver snarere stimulering med det professionelle immuncelle-afledte cytokin-interferon-gamma [55]. Disse resultater fra organoider er i overensstemmelse med observationerne, der viser Paneth-celledegranulering og ekstrudering efter interferon-gamma-stimulering in vivo [55]. Dette understreger elegant systemet af checks og balances i epitellaget.

Bægerceller er vigtige for epitelforsvaret, fordi de producerer de glycosylerede muciner, der er afgørende for dannelsen af ​​en slimbarriere på epitellaget (gennemgået i [56]). Hos mus resulterer MUC2-mangel i spontan inflammation og øger modtageligheden for infektion [57, 58]. For nylig blev en undergruppe af bægerceller kaldet sentinel bægerceller beskrevet i musens tyktarm. Ved hjælp af vævseksplantater identificerede undersøgelsen fortykkelse af slimlaget som reaktion på eksponering for TLR1/2, 4 og 5 ligander, men ikke for TLR9, NOD1 og NOD2 ligander [59], i overensstemmelse med en tidligere rapport om Tlr 2 ,4 og 5, der udtrykkes i bægerceller [60]. Forfatterne fastslog, at responsen også afhang af tilstedeværelsen af ​​Nlrp6-inflammasomet og var uafhængig af slimhindelymfocytter ved hjælp af væv fra en række knockout-mus [59]. En tidligere rapport viste også vigtigheden af ​​NLRP6-inflammasomet for slimsekretion fra bægerceller [61]. Billeddannelse afslørede, at specifikke bægerceller placeret i de apikale områder af krypten endocytoserede fluorescerende mærkede LPS [59]. Disse nyligt benævnte sentinel-bægerceller gennemgår ikke kun hurtig degranulering og epitel-uddrivelse efter behandling med TLR-ligander, men transmitterer også et calciumsignal til naboceller via intercellulære cytoplasmatiske broer dannet af gap junctions, hvilket sandsynligvis stimulerer andre bægerceller til at øge slimsekretionen [59] . Både bægerceller og Paneth-celler tilhører den sekretoriske afstamning. Organoider tillader rettet differentiering mod begge celleidentiteter, hvilket giver organoider stærkt beriget i enten bægerceller eller Paneth-celler [62]. Sammenligning af transkriptomer af disse skæve organoider hjalp med at identificere nøgleregulatorer af differentieringsvejen [63]. Yderligere analyse af omics-dataene samt funktionel analyse af disse organoider vil tillade en bedre forståelse af begge celletypers rolle i medfødt immunforsvar.

Endelig er stamceller selv også blevet rapporteret at udtrykke specifikke PRR'er såsom TLR4 [64, 65], som ikke findes på murine tyndtarmsvilli eller Paneth-celler [66]. Derudover ser størstedelen af ​​Nod2-ekspression i den murine krypt ud til at være begrænset til stamceller [67]. Stimulering med NOD2-ligand øgede overlevelsen af ​​stamceller og dannelsen af ​​organoider, hvilket indikerer, at stimulering af PRR'er også kan regulere tarmepitelregenerering direkte.

Uden tvivl vil de nuværende bestræbelser på at generere atlas af genekspression, der dækker hver celletype i stadig flere detaljer, snart give et mere fuldstændigt billede af den cellulære organisation af medfødt immunsignalering i tarmen såvel som i hele kroppen [68-71 ].

Cellepolaritet og sidespecifikke medfødte immunresponser

Endelig er det også relevant at overveje, at gastrointestinale epitelceller er meget polariserede, med en specialiseret apikal side, der vender mod tarmens lumen med dens mikrobiota, og en basolateral side, der vender mod vævet. Under homeostase når MAMP'er kun den apikale side. Men når epitelbarrieren brydes, kan mikroorganismer også udfordre den basolaterale side. Det er således blevet antaget, at epitelceller selektivt kun kan udløse en pro-inflammatorisk reaktion, når de stimuleres fra den basolaterale side, for at matche den trussel, som signalet udgør. For eksempel blev TLR9 vist at inducere distinkte signalveje, når det blev stimuleret fra den apikale eller basolaterale side i cancercellelinjer [72], og TLR5 inducerede kun NF-KB-responsgenet IL-8, når det blev stimuleret fra basalsiden [73 ].
Mens tidligere undersøgelser med antistofmærkning mod TLR'er kun har rapporteret specifik ekspression på den ene side (gennemgået i [14, 16]), bekræftede analyse af TLR-reportermus ved brug af farvning af et HA-mærke ikke dette, men viste i stedet TLR2, 4 og 5 receptorer på både apikale og basale sider af den proksimale colon samt nogle intracellulære TLR4 [45]. Disse tilsyneladende forskelle skyldes sandsynligvis de forskellige tekniske tilgange.

Organoider tillader nu direkte funktionel testning af sidespecifikke immunresponser, da den cellulære polarisering bibeholdes i organoider. Under standardbetingelser, når organoider dyrkes i en ekstracellulær matrix, vender den apikale side mod organoidens lumen, og basalsiden vender mod den ekstracellulære matrix [74-76]. Når den dyrkes uden for en ekstracellulær matrix, kan polariteten vende [77, 78]. Når celler fra organoider podes på standard cellekulturoverflader, såsom kulturskåle eller transwells, vender den apikale side mod brøndens lumen [44, 79-82].

Adskillige undersøgelser brugte organoider til at teste den generelle funktion af bestemte PRR'er uden at adressere specifikke forskelle mellem apikal og basal stimulation. Disse undersøgelser omfattede stimulus i mediet af organoiderne, som under standardbetingelser stimulerer den basale side af cellen. Ved hjælp af denne teknik blev opregulering af NF-KB nedstrøms målgener identificeret efter basal stimulering med ligander af TLR4 i maven, TLR2 og 3 i tyndtarmen og TLR2, 3, 4 og 5 i tyktarmen hos mus [44, 45, 83] og til ligander af TLR2 og 5 i maven og TLR5 i tyndtarmen og tyktarmen hos mennesker [44]. Ydermere inducerede basal stimulering af murine colon-organoider med TLR4-agonister cellulær differentiering, især mod den sekretoriske linje [64], mens NOD2-agonister inducerede øget overlevelse af stamceller [67, 84] og taurinstimulerede NLRP6-afhængig opregulering af det inflammasomiske nedstrøms målgen IL-18 [85]. I alle disse undersøgelser blev apikal stimulation ikke testet.

Kun få undersøgelser har behandlet de sidespecifikke funktioner af PRR'er. Det er bemærkelsesværdigt, at i modsætning til undersøgelserne, der anvender polariserede cancercellelinjer, har ingen af ​​undersøgelserne, der anvender organoider, indtil videre identificeret en sidespecifik aktivering af et typisk NF-KB-afhængigt proinflammatorisk gen. Transwell-monolag afledt af humane kolonorganoider udtrykker lignende niveauer af NF-KB-målgenet IL-6, når de stimuleres fra den apikale eller basale side med ligander af TLR1/2, 3, 4, 5, 7/8 og 9 [82]. Murine gastriske organoider reagerede også på en apikal stimulering med TLR4-liganden LPS i flere assays, herunder i transwells og mikroinjektion af LPS i lumen af ​​organoider [44]. Murine tyndtarmsepitelceller udtrykte ikke NF-KB-målgenet icam1 som svar på en række ligander, uanset om de blev tilføjet til intakte organoider, hvilket således stimulerede den basale side, eller tilføjet til enkelte, dissocierede celler, og dermed stimulerede alle sider [55].

Men ser man ud over NF-KB-responset, identificerede en nylig undersøgelse en sidespecifik funktion af TLR3 og dens betydning ved viral infektion [82]. Resultater af eksperimenter med humane colon organoid-afledte monolag viste, at ekspressionen af ​​de kritiske virus-forsvarsgener type I og type III interferon blev opreguleret efter basal stimulering med TLR3 agonist, men ikke efter stimulering med andre TLR agonister. Når de var inficeret med en virus, var organoidernes interferonrespons på lignende måde meget stærkere, når de blev inficeret fra basalsiden sammenlignet med infektion fra den apikale side. Dette var synligt i organoid-afledte monolag såvel som i organoider mikroinjiceret med virussen. Undersøgelsen identificerede yderligere den clathrin-sorterende adapter AP-1B som det molekyle, der er ansvarlig for den polariserede ekspression af TLR3. Tilsvarende viste mus med mangel på Ap-1b forværrede immunresponser efter virusinfektion [82]. Dette bekræfter den polariserede funktion af PRR'er og fremhæver vigtigheden af ​​dette niveau af regulering i yderligere modulering af patogengenkendelse og forsvar.

Indtil videre er der ikke noget "one size fits all" svar på polaritetsspørgsmålet, og løsningen af ​​den stedspecifikke karakter af PRR-signalering er fortsat en teknisk udfordrende opgave for fremtiden.

Tolerance som en reaktion på kolonisering og som et standard udviklingsprogram

De mekanismer, der bidrager til organiseringen af ​​epitelial medfødt immunitet, er stadig uklare. Hovedkonceptet i denne henseende har været induktion af tolerance efter kolonisering af den sterile tarm under fødslen, det såkaldte vindue af muligheder (gennemgået i [86–88]). Dette koncept postulerer en priming-periode for det medfødte og adaptive immunsystem efter fødslen, som sætter scenen for immunhomeostase og efterfølgende vært-mikrobielle interaktioner.

Det neonatale immunsystem og epitelial medfødte immunitet er unikt udstyret til at mestre denne overgang fra sterilitet til sameksistens med mikrobiotaen. Ved fødslen er den menneskelige neonatale tarm fuldt moden med tarmvilli og krypter, der indeholder Paneth-celler. Det murine neonatale tarmepitellag er mere umodent og gennemgår en dramatisk ændring, der kan måles på transkriptomniveau, der sammenligner forskellige udviklingsstadier [89] og er synlig i vævsarkitekturen og celledifferentieringen: Krypt-villus-aksen er ikke dannet endnu, og celleproliferation er lavere, uden cellemigration eller eksfoliering. Det indeholder ikke modne Paneth-celler; imidlertid producerer enterocytter det cathelicidin-lignende antimikrobielle peptid (CRAMP) [90]. Paneth-celler opstår, når krypter dannes 2 uger efter fødslen [91]. På tidspunktet for fravænning er epitelet fuldt dannet med krypter og villi, enterocytter, bægerceller og enteroendokrine celler; Paneth-celler har overtaget den antimikrobielle peptidproduktion; og bægerceller har øget produktionen af ​​muciner for at danne slimlaget (gennemgået i [92]).

Denne aldersafhængige overgang af epitelet går hånd i hånd med et gradvist fald i TLR5-ekspression i tyndtarmsepitelet. Samtidig øges ekspression af TLR3 i den neonatale periode. Andre PRR'er, såsom TLR2, 4 og 9, udtrykkes på lignende niveauer i neonatale og voksne mus [45, 93].

De mekanismer, der fører til regulering af PRR-ekspression og funktion efter fødslen, forbliver uklare. Som nævnt ovenfor har flere undersøgelser foreslået et bidrag fra miljøet, især mikrobiel kolonisering, til reguleringen af ​​PRR-ekspression efter fødslen [40, 41] (gennemgået i [14]). Imidlertid viste kimfrie vs specifikke patogenfrie mus ikke forskelle i TLR-ekspression i hverken tyndtarmen eller tyktarmen, hvilket indikerer, at hverken opregulering af TLR3 eller nedregulering af TLR5 i denne tidlige periode afhænger af mikrobiotaen [45, 93]. Også i organoider var udtrykket af mange, men ikke alle, PRR-signalkomponenter allerede defineret i organoider fra væv, der aldrig havde været i kontakt med mikrobielle produkter [44]. Dette indikerer, at en stor del af organiseringen af ​​de medfødte immunsignalveje er defineret uafhængigt af kontakt med mikrobiotaen og ser ud til at være bestemt af standardudviklingsprocesser, såsom dem, der er skitseret ovenfor, der former den generelle vævsidentitet langs mave-tarmkanalen. . Dette udelukker ikke en yderligere finjustering af PRR-ekspression af miljøfaktorer i voksenalderen.

Betydningen af ​​rettidig regulering af epitelmikrobielle interaktioner bliver tydelig, når det umodne epitel konfronteres med mikrobiel kolonisering for tidligt: ​​præmature spædbørn er tilbøjelige til at udvikle nekrotiserende enterocolitis (NEC), karakteriseret ved intestinal nekrose, systemisk sepsis og multiple organer. fiasko. Selvom patogenesen betragtes som multifaktoriel, har adskillige undersøgelser indikeret, at den udvikler sig som reaktion på en ubalance mellem proinflammatorisk signalering og reparationsmekanismer i den præmature tarm (gennemgået i [94]), og et bidrag af PRR'er er blevet foreslået [41, 65, 95 –97]. Adskillige undersøgelser har brugt humane føtale organoider [24, 98, 99], normale murine organoider udsat for bakterier og hypoxi til model NEC [100], eller organoider fra en murin NEC-model såvel som fra NEC-patienter [101]. Fremtidige undersøgelser vil bruge disse etablerede og nye organoide modeller til yderligere at definere epitelets bidrag i NEC.

Modellering af epitelafhængige aspekter af IBD med organoider

Tab af integritet af tarmepitelbarriere er et definerende træk ved IBD, dvs. CD og UC, og synes at være forårsaget af et multifaktorielt samspil mellem genetisk disposition, miljøfaktorer, ændringer i tarmmikrobiota og ændringer af det lokale og systemiske immunrespons (gennemgået i [27]). Nuværende terapier retter sig overvejende mod de (afvigende) immunresponser i IBD, som er forbundet med høje rater af ikke-respondere og bivirkninger (gennemgået i [27]). En forbedret forståelse af det epitelspecifikke bidrag til patofysiologien af ​​IBD er påkrævet for at identificere nye terapeutiske mål, der også kan have direkte indflydelse på intestinal epitelbarriere-restaurering og dermed slimhindeheling.

For at få indsigt i epitelpatologi har flere grupper etableret levende biobanker bestående af organoider genereret fra individuelle patienter med UC eller CD. Selvom denne tilgang er indlysende, har kun få undersøgelser indtil videre rapporteret resultater fra organoider afledt af denne gruppe af patienter [102-104]. Dette kan forklares med den observation, at organoider fra patienter med IBD er sværere at generere. Vores egen erfaring er, at organoider genereret fra CD-patienter vokser langsommere under de første passager, og nogle prøver gik tabt - hvilket var forbundet med en højere hastighed af bakteriel kontaminering i kulturerne [105].

Karakterisering af organoider afledt af patienter med IBD afslørede en fænotype med nedsat størrelse og spireevne, øget celledødshastighed, luminale affald og delvist omvendt polarisering af epitelceller [106]. Global sammenligning af organoider fra UC- eller CD-patienter og raske kontroller viste, at transkriptionelle og methyleringsforskelle set i tarmepitelet blev opretholdt in vitro [102, 103, 107]. En tidligere undersøgelse fra organoider genereret fra patienter med CD antydede også permanente ændringer af intestinale stamceller i IBD. Dette var baseret på den observation, at organoider genereret fra aktive CD-læsioner opretholdt høje ekspressionsniveauer af intestinale epitelstamcellemarkører [108]. Dette blev til en vis grad bekræftet i en nylig undersøgelse, hvor tyktarmsorganoider afledt af pædiatriske IBD-patienter viste et forlænget ekspressionsmønster af antigen-præsenterende gener [109].

Med fokus på ændringer i intestinal epitelbarrierefunktion, herunder tab af tætte forbindelser og desmosomer, som normalt findes i IBD [110], blev det vist, at organoider fra CD-patienter opretholder denne fænotype af overgangsændringer under dyrkningsbetingelser [105]. Dette var især tilfældet, når organoider blev genereret fra steder med alvorlig inflammation [105]. Et fald i forbindelsesproteiner kunne også induceres i organoider fra raske donorer ved anvendelse af det proinflammatoriske cytokin TNF- og/eller IFN- [106, 111]. Imidlertid blev det faste mønster af ændringer af forbindelsesproteiner i organoider fra patienter med IBD kun observeret på proteinniveauet, men ikke på mRNA-niveauet [105].

Disse observationer tyder på, at flere ændringer er fikseret i organoider fra IBD-patienter. Den observation, at nogle, men ikke alle, permanente ændringer kun er synlige på protein, men ikke RNA-niveau, tyder på, at der er permanente ændringer i post-transkriptionelle modifikationer eller proteinnedbrydning i organoider fra IBD-patienter. Dette mangler dog at blive undersøgt i detaljer.

Hvad der præcist inducerer de permanente ændringer i ekspressionsmønstre af det betændte epitel er uklart. En effekt af mikrobiotaen var længe mistænkt; imidlertid viste en nylig undersøgelse, at effekten af ​​mikrobiotaen på epitelet går tabt over tid [112]. Undersøgelsen sammenlignede flere musefaciliteter, fordi de forskellige mikrobiomsammensætninger af musekolonier er blevet identificeret som forstyrrende faktorer in vivo-undersøgelser. For at tydeliggøre denne effekt sammenlignede undersøgelsen epitelisolater og organoide kulturer fra bakteriefri mus og to separate specifikke patogenfrie musekolonier med forskellig mikrobiota. Mens det friskisolerede epitel viste et aftryk af mikrobiotaeksponeringen på RNA- og proteinniveauer, gik denne effekt tabt efter flere ugers dyrkning af tyndtarmsorganoider [112]. Også en global sammenligning af genekspression af organoider genereret fra betændte eller ikke-betændte regioner af de samme IBD-patienter viste, at IBD-organoiderne i de betændte regioner mistede den inflammatoriske genekspression allerede efter et par uger i dyrkning. Transkriptomerne af organoiderne blev derefter grupperet pr. patient; således forblev de permanente forskelle mellem IBD og raske kontroller. Den inflammatoriske fænotype i IBD-organoiderne kunne derefter re-induceres ved tilsætning af en cytokincocktail [107]. Samlet set tyder dette på, at permanente ændringer observeret i organoider fra IBD-patienter er uafhængige af kontakt med mikrobiota eller cytokiner.

Selvom det er rimeligt at spekulere i, at nogle af de permanente ændringer i tarmepitelceller fra patienter med IBD kan være forårsaget af ændringer i medfødt immunsignalering, er beviset for dette i øjeblikket sparsomt. Derudover er ikke alle epitelændringer observeret i de betændte områder i tarmen permanent bevaret i det rensede epitel, hvilket indikerer vigtige bidrag fra det lokale miljø. I fremtiden skulle nye undersøgelser med mere komplekse organoide modeller, der også inkorporerer immunceller, inflammatorisk cytokinstimulering og co-kulturer med mikroorganismer, hjælpe med at adressere denne hypotese mere detaljeret.

Konklusioner, fremtidsperspektiver og Outlook

Sammenfattende, mens mange sygdomme i mave-tarmkanalen forbliver ufuldstændig forstået, peger stigende beviser på en kritisk rolle for det gastrointestinale epitel i patogenesen af ​​mange af dem - selvom dens specifikke rolle forbliver uklar.

Den begrænsede viden om den medfødte immunfunktion af det gastrointestinale epitel er blevet tilskrevet en mangel på passende eksperimentelle modeller. Med implementeringen af ​​organoid teknologi er der taget et stort skridt for at overvinde dette problem. Organoider genereret fra hver region i mave-tarmkanalen vil tilføje væsentligt til den eksisterende viden. Som afsløret af tidligere undersøgelser giver genereringen af ​​organoider den afgørende fordel ved at være i stand til at observere responser fra primære gastrointestinale celler i modsætning til transformerede cellelinjer, som for det meste er genereret fra gastrointestinale maligne tumorer. Et af de mest fascinerende træk ved organoider er, at de opretholder specifikke egenskaber ved det segment af mave-tarmkanalen, de blev genereret fra som en del af deres celleidentitet i voksenalderen. Ifølge aktuelle eksperimentelle undersøgelser er den regionale identitet fikseret i de gastrointestinale stamceller. I denne sammenhæng vil et tilbageværende problem være at bestemme præcist hvordan og hvornår under udviklingen af ​​denne iboende programmering finder sted.

Når man ser på specifikke begreber om, hvordan epitelet kan reagere på eller interagere med miljøet, har organoid teknologi nu muliggjort belysning af det differentielle og segmentspecifikke udtryk og funktion af PRR'er i det gastrointestinale epitel. De overordnede funktionelle konsekvenser for de komplekse reguleringssystemer i hele mave-tarmkanalen er stadig uklare og vil skulle behandles i fremtiden. Til dette vil det også være vigtigt at samdyrke organoider med immunceller (gennemgået i [113]), celler i det enteriske nervesystem [114] og luminale faktorer såsom bakterielle co-kulturer (gennemgået i [115]) (Fig. 4).

Et yderligere vigtigt aspekt er, at organoider genereret fra patientvæv, der er påvirket af GI-sygdomme, såsom IBD, bevarer nogle af de karakteristika, der ses i de tilsvarende vævsprøver, de var afledt af. Dette giver den unikke mulighed for yderligere at optrevle det epitel- og sygdomsspecifikke bidrag til patogenesen af ​​GI-sygdomme - ikke kun dem, der involverer inflammationsinducerede ændringer, men også dem, der involverer ændringer i maligne sygdomme. Begge kan vise sig at involvere et specifikt bidrag af epitel-afledt medfødt immunitet. Til dette vil den systematiske etablering af "levende biobanker" være et vigtigt skridt. Som en vision for fremtiden kunne sådanne levende biobanker knyttes til allerede eksisterende biobanker, som i dag udelukkende leverer "døde" biomaterialer. Dette ville repræsentere endnu et vigtigt skridt, ikke kun for forskning, men også for at lette individualiseret diagnostik og terapi for patienter.

Boks 1. Medfødt immunitet og epitelceller i GI-kanalen er uklart, om den observerede påvirkning skyldes den medfødte immunsignalering i epitelceller eller professionelle immunceller.

For at adskille samspillet mellem professionelle immunceller og epitelceller har adskillige undersøgelser brugt epitelspecifikke knockouts, eller for nyligt, epitelorganoider. I musemodeller fører ingen af ​​de epitelspecifikke deletioner af PRR'er til spontan inflammation. Mus med epitelspecifik knockout af MyD88 er imidlertid mere modtagelige for eksperimentel colitis og viser alvorlig barriereforstyrrelse, svækket bæger- og Paneth-cellerespons [121] og reduceret produktion af mucin og antimikrobielle peptider [121, 122]. Tyndtarmsorganoider giver ikke et inflammatorisk respons på flere oprensede PRR-ligander [55], selvom dette ikke kan generaliseres og afhænger af arten, placeringen og alderen af ​​det væv, som organoiderne genereres fra [44, 45].

Fraværet af en spontan inflammatorisk fænotype i epitelcellespecifikke PRR knockout-modeller understøtter hypotesen om, at andre faktorer end en generel inflammatorisk respons af epitelet har en indvirkning på epitelhomeostase. For eksempel øgede stimulering med NOD2-agonisten muramyldipeptid (MDP) antallet af organoider, der voksede ud af isolerede stamceller, hvilket indikerer, at den medfødte immunsignalering understøttede stamcellernes overlevelse [67, 84]. Desuden fremhæver data fra mus vigtigheden af ​​de anti-apoptotiske virkninger af NF-KB-signalering som reaktion på andre stimuli, såsom TNF- [123]. Interessant nok er polymorfier i medfødte immungener inklusive NOD2 og TLR4 hos mennesker forbundet med en øget risiko for at udvikle IBD [124], og blokering af TNF- er i øjeblikket den mest effektive behandling for IBD hos nogle patienter (gennemgået i [125]).

Et billede tegner sig, hvor et lavt niveau af medfødt immunstimulering er vigtig for slimsekretion, barriereintegritet og epitelcelleoverlevelse. Dens svækkelse kan tillade translokation af tarmbakterier fra lumen til subepitelvævet, hvilket fører til betændelse.

Anerkendelser

Vi takker Ömer Kaya for hjælpen med illustrationerne og Rike Zietlow for redigeringen.

Forfatterbidrag

Idé: SB Oprindeligt koncept: SB og Ö.K.; litteratursøgning: Ö.K., NS og SB; Oprindeligt udkast: Ö.K. Revidering, omskrivning, tilføjelse af sektioner: NS, SB Alle forfattere reviderede det endelige manuskript kritisk.

Finansiering

Open Access-finansiering aktiveret og organiseret af Projekt DEAL. Dette arbejde blev støttet af Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG GRK 2157; 3D-vævsmodeller til undersøgelse af mikrobielle infektioner af humane patogener, projekt 10, til SB), det tværfaglige center for klinisk forskning (IZKF; www.med.uni-wuerzburg.de/izkf /startseite) i Würzburg (Grant AD-427 til NS og SB), og DFG SPP1982 SCHL1962/5-2 til NS.

Erklæringer

Interessekonflikt

Forfatterne erklærer ingen konkurrerende interesser.

Åben adgang

Denne artikel er licenseret under en Creative Commons Attribution 4.0 International License, som tillader brug, deling, tilpasning, distribution og reproduktion i ethvert medie eller format, så længe du giver passende kredit til den eller de originale forfattere ) og kilden, angiv et link til Creative Commons-licensen og angiv, om der er foretaget ændringer. Billederne eller andet tredjepartsmateriale i denne artikel er inkluderet i artiklens Creative Commons-licens, medmindre andet er angivet i en kreditlinje til materialet. Hvis materiale ikke er inkluderet i artiklens Creative Commons-licens, og din påtænkte brug ikke er tilladt i henhold til lovbestemmelser eller overskrider den tilladte brug, skal du indhente tilladelse direkte fra indehaveren af ​​ophavsretten.

Referencer

1. Goodwin CS (1984) Mikrober og infektioner i tarmen

2. Sekirov I, Russell SL, Antunes LCM, Finlay BB (2010) Tarmmikrobiota i sundhed og sygdom. Physiol Rev 90:859-904

3. Simon GL, Gorbach SL (1986) Den menneskelige tarmmikroflora. Dig Dis Sci 31:147S–162S

4. Bartfeld S, Clevers H (2017) Stamcelle-afledte organoider og deres anvendelse til medicinsk forskning og patientbehandling. J Mol Med:1–10. https://doi.org/10.1007/s00109-017-1531-7

5. Barker N (2014) Voksne intestinale stamceller: kritiske drivere for epitelial homeostase og regenerering. Nat Rev Mol Cell Biol 15:19-33

6. Bartfeld S, Koo BK (2017) Voksne gastriske stamceller og deres nicher. Wiley Interdiscip Rev Dev Biol 6:e261. https://doi.org/ 10.1002/wdev.261

7. Liwinski T, Zheng D, Elinav E (2020) Mikrobiomet og cytosoliske medfødte immunreceptorer. Immunol Rev 297:1-18

8. Burgueño JF, Abreu MT (2020) Epiteliale Toll-lignende receptorer og deres rolle i tarmhomeostase og sygdom. Nat Rev Gastroenterol Hepatol 17:263-278

9. Christian S, Kanneganti TD (2020) Inflammasomer og den fine linje mellem forsvar og sygdom. Curr Opin Immunol 62:39-44

10. Ying L, Ferrero RL (2019) Rolle af NOD1 og ALPK1/TIFA signalering i medfødt immunitet mod Helicobacter pylori. Infektion pp:159–177

11. Takeuchi O, Akira S (2010) Mønstergenkendelsesreceptorer og inflammation. Celle 140:805-820

12. Peterson LW, Artis D (2014) Intestinale epitelceller: regulatorer af barrierefunktion og immunhomeostase. Nat Rev Immunol 14:141-153

13. Pott J, Hornef M (2012) Medfødt immunsignalering ved tarmepitel i homeostase og sygdom. EMBO Rep 13:684-698

14. Abreu MT (2010) Toll-lignende receptorsignalering i tarmepitelet: hvordan bakteriel genkendelse former tarmens funktion. Nat Rev Immunol 10:131-144

15. Zhang K, Hornef MW, Dupont A (2015) Det intestinale epitel som vogter af tarmbarrierens integritet. Cell Microbiol 17:1561-1569

16. Yu S, Gao N (2015) Opdeling af tarmepitelcelle-toll-lignende receptorer til immunovervågning. Cell Mol Life Sci 72: 3343-3353

17. Zhou P, She Y, Dong N, Li P, He H, Borio A, Wu Q, Lu S, Ding X, Cao Y, Xu Y, Gao W, Dong M, Ding J, Wang DC, Zamyatina A, Shao F (2018) Alpha-kinase 1 er en cytosolisk medfødt immunreceptor for bakteriel ADP-heptose. Natur. 561:122-126

18. Milivojevic M, Dangeard AS, Kasper CA, Tschon T, Emmenlauer M, Pique C, Schnupf P, Guignot J, Arrieumerlou C (2017) ALPK1 kontrollerer TIFA/TRAF6-afhængig medfødt immunitet mod heptose{{5} },7-bisphosphat af gramnegative bakterier. PLoS Pathog 13:e1006224. https://doi.org/10.1371/journal.ppat. 1006224

19. Zimmermann S, Pfannkuch L, Al-Zeer MA et al (2017) ALPK1- og TIFA-afhængigt medfødt immunrespons udløst af helicobacter pylori type IV sekretionssystem. Cell Rep 20:2384-2395

20. Abreu MT, Fukata M, Arditi M (2005) TLR-signalering i tarmen i sundhed og sygdom. J Immunol 174:4453-4460 174/8/4453 [pii]

For more information:1950477648nn@gamil.com