Gao-Zi-Yao forbedrer indlæring og hukommelsesfunktion hos gamle spontane hypertensive rotter, del 2

Forsøgsdyr

Tolv måneder gamle og otte uger gamle spontane hypertensive hanrotter (SHR) blev købt fra Nanjing Animal Model Center.

Der er en stærk sammenhæng mellem 8-ugegamle mænd og hukommelse. I denne periode udvikler det mandlige væsens hjerne sig hurtigt, og forbindelserne mellem dets neuroner øges gradvist, hvilket igen påvirker udviklingen af ​​dets hukommelse.

Forskning viser, at mandlige skabningers hukommelse bliver ved med at blive bedre med alderen. Dette har ikke kun en betydelig indvirkning på deres overlevelse og reproduktion, men hjælper dem også bedre med at tilpasse sig miljøet og klare nye udfordringer.

Derfor bør vi aktivt opmuntre unge mænd til at deltage i en række gavnlige aktiviteter, såsom at løse gåder, lære nye færdigheder og udforske nye områder. Disse aktiviteter stimulerer deres hjerner, så de kan udvikle sig hurtigere og forbedre deres hukommelsesevner.

Samtidig bør vi også sørge for et passende miljø og atmosfære for unge mandlige væsner. At få dem til at føle sig trygge og tætte på kan fremme deres hjerneudvikling og forbedre deres hukommelse.

Kort sagt bør vi gøre alt, hvad vi kan, for at hjælpe unge mænd med at forbedre deres hukommelse, så de bliver klogere, mere selvsikre og dygtige væsner. Dette er ikke kun befordrende for deres personlige udvikling, men også for hele artens velstand og overlevelse. Det kan ses, at vi skal forbedre hukommelsen, og Cistanche deserticola kan forbedre hukommelsen markant, fordi Cistanche deserticola har antioxidant-, anti-inflammatoriske og anti-aldringseffekter, som kan hjælpe med at reducere oxidative og inflammatoriske reaktioner i hjernen og derved beskytte nervesystemets sundhed. Derudover kan Cistanche deserticola også fremme væksten og reparationen af ​​nerveceller og dermed forbedre forbindelsen og funktionen af ​​neurale netværk. Disse effekter kan hjælpe med at forbedre hukommelsen, indlæringen og tænkehastigheden og kan også forhindre udviklingen af ​​kognitiv dysfunktion og neurodegenerative sygdomme.

Klik på kend kosttilskud for at øge hukommelsen

I denne model begynder hypertension at udvikle sig ved 4 måneders alderen med forekomsten af ​​hypertensionsrelaterede ændringer i hjernens mikrovaskulatur ved 6 måneders alderen [37].

Rotter blev anbragt under optimale forhold med standard hygiejne, holdt ved en temperatur på 25 grader med en 12/12 lys/mørke cyklus og fodret med standard rottefoder og vand ad libitum.

Alle procedurer blev godkendt af og udført i henhold til retningslinjer for pleje og brug af dyr etableret af SoochowUniversity, hvilket er i overensstemmelse med vores tidligere rapport[35].

Forsøgene blev udført i henhold til National Institutes of Health Guidelines for the Use of Laboratory Animals (NIH, publikationsnummer 85-23, revideret 1996). Nærværende undersøgelse er rapporteret af ARRIVE guidelines.

Otte uger gammel SHR blev anvendt til aldringskontrol (SHR-Young, n=10). Tolv måneder gamle rotter blev behandlet med eller uden Gao-Zi-Yao for destilleret vand (gammel SHR-C, n=10), lav dosis (gammel SHR-L, n=10), medium dosis (gammel SHR-M, n=10), høj dosis (gammel SHR-H, n=10) ved mavefodring.

Doser af lav, medium og høj Gao-Zi-Yao svarende til 1/2-, 1-, tredobbelte doser til klinisk patientanvendelse beregnet i henhold til kropsoverfladeareal. Gao-Zi-Yao blev opløst i 5 ml destilleret vand før påføring og blev administreret engangs-mejeri i 4 uger.

Blodtryk og hjertefrekvens blev overvåget hver uge ved hale-cuff-metoden, og kropsvægten blev også overvåget hver uge som i vores tidligere observation [35].

Efter 4 uger blev Morris-vandlabyrinteksperimentet udført, og rotter blev aflivet under bedøvelse med natriumpentobarbital (50 mg/kg ip), hippocampusvæv blev opsamlet til yderligere analyse. Alle eksperimentelle protokoller blev godkendt af det etiske licensudvalg ved Soochow University.

Morris vandlabyrint eksperiment

Morris vandlabyrinteksperiment (BW-MWM101, Shanghai Bio-will Co., Ltd., Shanghai, Kina) blev udført som beskrevet tidligere med nogle modifikationer [38]. Testen var planlagt til 6 dage, dag 1 til 5 var til træningsperioden, og dag 6 var til testresultater.

Rotter modtog træning i 2 minutters mejeri, og registrerede tid for boarding på platformen som latenstid. På dag 6 blev platformen fjernet. Rotter blev sat ind i den fjerneste afstandskvadrant, og svømmebanen blev registreret i 2 min.

Parametre for indlæring og hukommelsesfunktion blev beregnet af softwaren.

Måling af serumniveauer af NO og inflammatoriske faktorer ved ELISA

Serumniveauer af NO (Katalognummer: S0023), IL-1 (Katalognummer: A301BH80153), IL-2 (Katalognummer:A31038348), IL-6 (Katalognummer: A30681042), og TNF- (Katalognummer: A38280855) blev målt ved hjælp af kommercielt tilgængelige ELISA-sæt (BiotechnologyCo., Ltd. Shanghai enzymforskning. Shanghai, Kina). Alle trin blev udført i overensstemmelse med producentens instruktioner.

Nissl farvning

Rottehippocampusvæv blev isoleret, fikseret, paraffinindlejret og derefter inkuberet i 1% toluidinblåt farveopløsning i 5-10 minutter ved stuetemperatur. Ti sektioner blev skyllet i destilleret vand, gennemblødt i 95% ethanol i 5-30 minutter og dehydreret i 100% ethanol.

Efter dehydrering blev skiven anbragt i xylen og dækglas under anvendelse af et harpiksmedium. Antallet af neuroner i CA1, CA2 og dentate gyrus (DG) regionerne i hippocampus blev observeret og analyseret ved hjælp af ImageJ analyseprogrammet.

Western blot til indlæring og hukommelsesrelaterede proteiner

Western blot for indlæring og hukommelsesrelaterede proteiner blev udført som beskrevet i vores tidligere rapport med nogle modifikationer [39].

Hippocampustissues blev homogeniseret med RIPA-buffer (50 mmTris, 150 mM NaCl, 1% Triton-X-100, pH 7,0) indeholdende phenylmenthansulfonylfluorid (R&D Systems Inc., Minneapolis, USA). Homogenater blev centrifugeret ved 12,000 x g i 10 minutter ved 4 grader.

Celleproteiner blev separeret ved SDS-PAGE og overført til PVDF-membraner (Hybond TM-ECL; AmershamPharmacia Biotech, Inc.). Membranerne blev blokeret i 5 % fedtfri mælk i PBS og 0,1 % Tween-20 ved stuetemperatur.

Blottene blev derefter inkuberet med primært antistof: Anti-glutamatreceptor 1 (1:1000, Abcam, Inc., Katalognummer: ab183797), AntiNMDAR2B-antistof (1:1000, Abcam, Inc., Katalognummer: ab28373), Anti-phospho -CaMKII-antistof (1:1000, Abcam, Inc., Katalognummer: ab171095), Antiphospho-CREB-antistof (1:1000, Abcam, Inc., Katalognummer: 32096) eller anti-GAPDH (Santa Cruz Biotech, Inc., Katalognummer: sc-47724).

Derefter blev membraner inkuberet i 1 time med et sekundært antistof (HRP-konjugeret anti-kanin Ig-G, 1:2000, Abcam, Inc. Katalognummer: ab205718). Membraner blev derefter vasket tre gange i 15 minutter under anvendelse af TBS-T for at fjerne overskydende antistoffer før inkubation i 1 minut med kemiluminescerende reagenser (ECL, R&D Systems Inc., Minneapolis, MN, USA).

Ydermere blev immunoreaktive bånd detekteret af et elektroforesegelanalysesystem (GL2200 Pro, Crestream Inc. USA). Intensiteten af ​​båndene blev analyseret med Image J-software. Mængden af ​​målproteiner blev normaliseret ved GAPDH-ekspression [39].

Statistisk analyse

SPSS 18.0-softwaren blev brugt til statistisk analyse. Data præsenteres som middel ± SEM Grouped data blev analyseret ved hjælp af en envejs variansanalyse efterfulgt af Student-Newman-Keuls-testen. En P-værdi < 0.05 blev betragtet som statistisk signifikant som vores tidligere rapport [35].

Resultater

Systolisk blodtryk (SBP), hjertefrekvens og kropsvægt mellem ung SHR og gammel SHR

Yong SHR viste lavere SBP i de første to uger sammenlignet med gammel SHR, og steg derefter til ingen forskel mellem de to grupper i de senere tre uger (fig. 2A).

Tværtimod var hjertefrekvensen ingen forskel mellem de to grupper i de første to uger, derefter steg unge SHR markant sammenlignet med gamle SHR i de senere tre uger (fig. 2B). Ung SHR viste lavere kropsvægt sammenlignet med gammel SHR under hele observationsperioden (fig. 2C).

Morris vandlabyrint parametre mellem unge SHR og gamle SHR

For at bestemme hippocampus-afhængig indlæring og hukommelse blev Morris-vandlabyrinten udført. Gammel SHR viste længere escape latency i de første fire dage sammenlignet med unge SHR (fig. 3A).

Tiderne for at krydse målkvadranten var mindre i oldSHR end i unge SHR (fig. 3B).

Procentdelen af ​​tid ved målplatformens kvadrant var kortere i gammel SHR sammenlignet med unge SHR (fig. 3C). Procentdelen af ​​vejlængde i kvadranten var også kortere i gammel SHR sammenlignet med gammel SHR (fig. 3D). Disse resultater tyder på, at gammel SHR har svækkelse af kognitiv funktion.

Antal neuroner i hippocampus mellem unge SHR og gamle SHR

Antallet af neuroner i forskellige områder af hippocampus blev talt ved Nissl-farvning. Resultater viste, at der er et mindre antal neuroner i CA1-, CA2- og DG-regioner af gamle SHR sammenlignet med unge SHR (fig. 4).

Læring og hukommelsesrelateret proteinudtryk lå i hippocampus mellem unge SHR og gamle SHR

Western blot-resultater viste, at ekspression af lærings- og hukommelsesrelaterede proteiner (GluR1, NMDAR 2B, phosphoryleret-CaMK II og phosphoryleret-CREB) i oldSHR-hippocampus var lavere end i unge SHRhippocampus (fig. 5).

Effekt af Gao-Zi-Yao på SBP, hjertefrekvens og kropsvægt i gammel SHR

Virkningen af ​​Gao-Zi-Yao på SBP blev analyseret. Behandling med en lav dosis af Gao-Zi-Yao reducerede markant SBP i gammel SHR fra den anden uge til den fjerde uge sammenlignet med den gamle SHR-kontrolgruppe, mellemstore og høje doser af Gao-Zi-Yao reducerede markant SBP i gammel SHR fra den første uge til fjerde uge sammenlignet med kontrol gamle SHR (fig. 6A). Disse resultater indikerer, at Gao-Zi-Yao udøver antihypertensiv effekt i gammel SHR.

Vi sammenlignede også dataene om virkningerne af Gao-Zi-Yaoon-puls og kropsvægt. Vores data viste, at der ikke var nogen signifikant forskel i hjertefrekvens og kropsvægt blandt alle grupper under hele observationsperioden (fig. 6B, C).

Virkning af Gao-Zi-Yao på serumniveauer af NO, IL-1, IL-2 og TNF-i gamle SHR

Behandling med mellemstore og høje doser af GAO-ZIYAO øgede serum-NO-niveauerne i sammenligning med niveauerne i SHR-kontrolgruppen (fig. 7A). Behandling med alle testede doser af GAO-ZI-YAO reducerede serumniveauerne af IL-1, IL-2 i sammenligning med niveauerne i SHR-kontrolgruppen (fig. 7B, C); dog var det kun den høje dosis af GAO-ZI-YAO, der undertrykte serumniveauerne af TNF- (fig. 7D).

Disse resultater viser, at GAO-ZI-YAO kunne regulere oxidativ stress og inflammation.

For more information:1950477648nn@gmail.com