Evaluering af fedtsyresammensætninger, antioxidanter og farmakologiske aktiviteter af græskar (Cucurbita Moschata) frøolie fra vandig enzymatisk ekstraktion, del 1

May 08, 2023

Abstrakt:Græskarkerneolie er et biprodukt, der er rigeligt af næringsstoffer og bioaktive komponenter, der fremmer adskillige sundhedsmæssige fordele. Denne undersøgelse havde til formål at sammenligne de kemiske sammensætninger, antioxidanter og farmakologiske aktiviteter af græskarfrøolier ekstraheret fra Cucurbita moschata Duch. Ex Poir. (PSO1) og Cucurbita moschata (japansk græskar) (PSO2) ved vandig enzymatisk ekstraktion. En enzymblanding bestående af pectinase, cellulase og protease (1:1:1) blev anvendt i den enzymatiske ekstraktionsproces. Fedtsyresammensætningen af ​​olierne blev bestemt ved anvendelse af fedtsyremethylester/gaskromatografisk massespektrometri. Antioxidantaktivitetsassays blev målt ved at anvende stabil fri radikal diphenylpicrylhydrazyl, radikal kation 2,20 -azinobis-(3- ethylbenzothiazolin-6-sulfonat, ferri-reducerende/antioxidant-styrke og ferri-thiocyanat-assay. enzymer, der involverer hudens aldring og blegningsproces, blev undersøgt. Linolsyre var en vigtig bestanddel af alle græskarfrøolier. Derudover blev der også påvist en betydelig mængde oliesyre, palmitinsyre og stearinsyre. PSO2 havde den højeste antioxidantaktivitet sammenlignet med PSO1 og kommercielle græskarfrøolier (COM1 og COM2). Både PSO1 og PSO2 udviste højere hæmmende virkninger på hyaluronidase, collagenase og tyrosinase end reklamerne. Derfor kunne vandig enzymatisk ekstraktion give græskarfrøolier med højere antioxidant, anti-aldring og Dette er gavnligt for yderligere farmakologiske undersøgelser og kan bruges som en funktionel mad til fordel for huden.

Ifølge relevante undersøgelser,cistancheer en almindelig urt, der er kendt som "mirakelurten, der forlænger livet". Dens hovedkomponent ercistanoside, som har forskellige effekter som f.eksantioxidant, anti-inflammatorisk, ogfremme af immunfunktionen. Mekanismen mellem cistanche oghud blegningligger i den antioxidante virkning af cistancheglykosider. Melanin i menneskelig hud produceres ved oxidation af tyrosin katalyseret aftyrosinase, og oxidationsreaktionen kræver deltagelse af ilt, så de iltfrie radikaler i kroppen bliver en vigtig faktor, der påvirker melaninproduktionen. Cistanche indeholder cistanosid, som er en antioxidant og kan reducere dannelsen af ​​frie radikaler i kroppen, dvs.hæmmer melaninproduktionen.

cistanche para que serve

Klik på Cistanche Tubulosa Supplement

For mere info:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

Nøgleord:Cucurbita moschata; japansk græskar; græskar frø olie; vandig enzymatisk ekstraktion; fedtsyrer; antioxidant; anti aldring

1. Introduktion

Græskar er i slægten Cucurbita og familien Cucurbitaceae, en almindelig og berømt plante, der blev dyrket i det nordlige Mexico og har spredt sig til Europa, Vestamerika og Asien [1]. Græskar betragtes som en funktionel fødevare, der indeholder rigelige næringsstoffer såsom protein, kulhydrat, lipider, fibre osv. sammen med fytokemiske forbindelser såsom tocopheroler, carotenoider og -sitosterol [2]. Plantenæringsstofferne fra forskellige dele af græskar har vist sig at have farmakologiske aktiviteter [2]. Græskarskrælekstrakt viste gavnlige forbrændingssåreffekter i dyremodeller [3]. Græskarpulp udviste antioxidant-, anti-inflammations- og anti-angiogenese-aktivitet [2], såvel som anti-træthedsaktivitet hos mus [4]. Derudover er græskarfrø en god naturlig kilde til essentielle fedtsyrer og phytosteroler, som sænker risikoen for kardiovaskulær dødelighed [5,6]. Græskarkerneolie er et biprodukt af forarbejdningen af ​​græskarkerner, som er rige på forskellige fedtsyrer og bioaktive forbindelser såsom -carotener, -tocopherol, vitamin B, lutein, phytosteroler og andre mineraler [7,8]. Olien udøver antioxidant, anti-inflammation, antibakteriel og sårhelende virkning [1,9]. Desuden har det adskillige sundhedsmæssige fordele mod sygdomme, såsom hypertension, diabetes og cancer [8,10].

Der er udviklet forskellige metoder til udvinding af frøolie, herunder mekaniske metoder som koldpresning [11] og højtryksudvinding [12]. Opløsningsmiddelekstraktion af frøolie ved hjælp af organiske opløsningsmidler såsom hexan, ethylacetat, acetone og methanol er også blevet dokumenteret [13,14]. Enzymassisteret udvinding er en alternativ metode til planteolieindustrien, fordi det er en miljøvenlig og sikker teknologi. Den vigtigste mekanisme ved vandig enzymatisk ekstraktion er at hydrolysere og bryde cellevæggene i plantemateriale, hvilket fører til mere permeabilitet og frigivelse af bioaktive komponenter, herunder oliefasen [15]. Forskellige enzymblandinger anvendt i denne ekstraktion er sammensat af pectinaser, cellulaser, hemicellulaser, arabinose, -glucanase og xylanase [16,17]. De optimerede betingelser for en enzymblanding, for eksempel temperatur, pH, reaktionstid, partikelstørrelse og enzymkoncentration, forbedrede også enzymaktivitet [16]. I dag er denne metode blevet meget brugt til at udvinde olie fra mange frugter og plantefrø [18,19]. Nogle tidligere undersøgelser viste den optimerede tilstand af græskarfrøolie for at opnå højt udbytte og effektive farmakologiske aktiviteter [20,21].

I øjeblikket indtager folk græskarkerneolie i desserter eller salatdressinger, og det er også en populær ingrediens i kosmetik. Hudens ældning er en kompleks biologisk proces, der er karakteriseret ved rynker, tab af elasticitet, tab af fugt og ru tekstur forårsaget af oxidativ stress, DNA-skader og avanceret ophobning af slutproduktet for glykering [22]. Hyaluronsyre, kollagen og elastin, som er vigtige komponenter i huden, kan nedbrydes af henholdsvis hyaluronidase, collagenase og elastase enzymer, hvilket resulterer i hudens aldring. Adskillige planteolier, såsom olivenolie, solsikkekerneolie, vindruekerneolie og jojobaolie er blevet brugt til hudkosmetiske egenskaber for at bevare fugt, forbedre hudbarrierefunktionen og forhindre hudældning [23]. Derudover er hudpigmentering en variabel og mærkbar fænotype hos mennesker, der involverer melanogenese og reguleres af tyrosinase-enzymet [24]. På nuværende tidspunkt er forskellige planteekstrakter blevet testet for kosmetik og lægemidler for at reducere melaninproduktionen, der fungerer som blegemidler [25,26].

cistanche tubulosa supplement

For nylig har C. moschata Duch. Ex Poir er en græskarkultivar, der er almindeligt dyrket og populær i Thailand, men der er få undersøgelser, der involverer dens funktionelle værdier og farmakologiske egenskaber. Ydermere er vandig enzymatisk ekstraktion en interessant metode til at udvinde olie fra græskarfrø for at opnå højt udbytte og effektivitet. Derfor fokuserede denne undersøgelse på bestemmelsen af ​​hovedbestanddelene, antioxidant og farmakologiske aktiviteter af græskarfrøolie fra C. moschata Duch. Ex Poir. (Thai cultivar) og C. moschata (japansk græskar) ved hjælp af den vandige enzymatiske ekstraktionsmetode.

2. Materialer og metoder

2.1. Plantematerialer

De friske frugter af C. moschata Duch. Ex Poir og C. moschata (japansk græskar) blev købt fra et lokalt marked i Chiang Mai, Thailand i december 2020. Frøene blev indsamlet, og alle fibrøse tråde blev fjernet. Efter fjernelse af frøskallet blev de afskallede græskarkerner vasket og tørret ved omgivelsestemperatur. Frøene blev opbevaret i en forseglet plastikpose indtil yderligere eksperimenter. Derudover blev to kommercielle prøver af græskarfrøolie (COM1 og COM2) købt fra et supermarked i Chiang Mai, Thailand. Alle eksperimenter blev udført inden for datoen for egnethed til forbrug af de kommercielle olier.

2.2. Kemikalier og reagenser 

Kollagenase fra Clostridium histolyticum (ChC—EC.3.4.23.3), elastase fra svinepancreas (PE—EC 3.4.21.36), N-succinyl-Ala-Ala-p-nitroanilid, jernsulfat (FeSO4), hyaluronsyrenatriumsalt fra Streptococcus equi, hyaluronidase fra bovine tests, pektinase fra Aspergillus niger (EC 3.2.1.15, større end eller lig med 5 enheder/mg protein, optimal pH=4.{{20}}, optimal temperatur=61 ◦C), cellulase fra Aspergillus niger (EC 3.2.1.4, større end eller lig med 0,3 enheder/mg fast stof, optimal pH=6,5, optimal temperatur {{ 30}}–55 ◦C), protease fra Aspergillus Saito (EC 3.4.21.112, større end eller lig med 0,6 enheder/mg fast stof, optimal pH=5.1, optimal temperatur=57.2 ◦ C), 2,20 -azinobis-3-ethylbenzothiazolin-6-sulfonat (ABTS), 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazylhydrat (DPPH), 2,4,6 tripyridyl-s-triazin (TPTZ), 6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxylsyre (Trolox), bovint serumalbumin, kojinsyre, L -tyrosin, L-DOPA, linolsyre, monobasisk natriumphosphat (NaH2PO4·2H2O), dibasisk natriumphosphat og tyrosinase fra svampe blev købt fra Sigma-Aldrrich (St. Louis, MO, USA). Derudover blev 37 procent saltsyre, 95 procent ethanol, destilleret (DI) vand, dimethylsulfoxid (DMSO) og methanol købt fra RCI Labscan Co., Ltd. (Bangkok, Thailand). Ammoniumthiocyanat (NH4SCN) og ferrochlorid (FeCl2) blev købt fra Loba Chemie Pvt. Ltd. (Mumbai, Indien). Tris (hydroxymethyl) aminomethan blev købt fra Merck (Darmstadt, Tyskland).

2.3. Vandig enzymatisk ekstraktion

Græskarkerneolier fra både C. moschata Duch. Ex Poir og C. moschata (japansk græskar) blev ekstraheret ved en vandig enzymatisk ekstraktionsmetode under anvendelse af de enzymatiske hydrolyseparametre fra en tidligere undersøgelse af Kanopka et al. (2016), herunder enzymkoncentration, enzym-til-substrat-forhold, reaktionstemperatur, pH og reaktionstid [21]. Tre forskellige typer enzymer, herunder pectinase, cellulase og protease, blev kombineret i et vægtforhold på 1:1:1 for at generere en koncentreret cocktail af enzymer. Derefter blev den resulterende koncentratcocktail fortyndet i DI-vand til frembringelse af en 2% w/w vandig enzymatisk blanding. De skrogløse græskarfrø blev derefter tilsat til den resulterende vandige enzymatiske blanding i et vægtforhold på 1:1. Blandingen blev derefter finmalet under anvendelse af en Moulinex DB81 blender ved stuetemperatur indtil homogenitet. pH-værdien af ​​den resulterende opslæmning blev derefter justeret til 4,7 under anvendelse af 0,1 M HCI og inkuberet ved 54 ◦C i 15 timer. Efter at opslæmningen var afkølet til stuetemperatur, blev den centrifugeret ved 11.500 x g i 10 min. Det øvre lag af supernatanter, som var oliefasen, blev opsamlet. Den creme, der blev fremstillet under ekstraktionsprocessen, blev ikke emulgeret, men fjernet ved hævert ved hjælp af en mikropipette. Resten af ​​græskarfrø blev fjernet ved filtrering gennem Whatman No.1 filterpapir under vakuum [21]. Græskarkerneolie fra C. moschata Duch. Ex Poir (PSO1) og C. moschata (japansk græskar) (PSO2) blev opbevaret i godt lukkede, lysbestandige beholdere ved stuetemperatur indtil yderligere eksperimenter.

2.4. Bestemmelse af kemisk sammensætning af græskarfrøolie under anvendelse af fedtsyremethylester/gaskromatografisk massespektrometrisk (FAME/GC/MS) metode

Græskarfrøolie blev bestemt for fedtsyresammensætning ved anvendelse af fedtsyremethylester/gaskromatografisk massespektrometrisk (FAME/GC/MS) metode. FAME er en type fedtsyreester, der er afledt af syrekatalyseret transesterificering af fedtstoffer med methanol. I denne undersøgelse blev græskarfrøolier (PSO1, PSO2, COM1 og COM2) forsæbet ved at tilsætte 0.5 M NaOH-opløsning i methanol ved 100 ◦C i 15 min. . Efter afkøling blev olieprøverne derivatiseret med bortrifluorid (BF3) i methanolopløsning ved 100 ◦C i 1 minut for at danne FAME-produkter. Efter afkøling og tilsætning af mættet NaCl og hexan blev FAME delt i hexanfase og blev opsamlet i hætteglas til injektion. FAME-ekstrakterne blev analyseret ved at bruge GC/MS-teknik under følgende betingelser: kapillarsøjledimension (TR-FAME, størrelse 60 m × 0,25 mm, 0,25-µm partikelstørrelse), kørende temperaturprogram på 50 ◦C ; hold 2 min med rampe 1 hastighed på 10 ◦C/min op til 180 ◦C, hold 15 min; rampe 2 hastighed på 4 ◦C/min, sluttemperatur 230 ◦C, hold 22,50 min. Helium blev anvendt som bæregas ved en strømningshastighed på 1,0 ml/min. Olieprøverne blev injiceret i en spaltningsfri tilstand (splitforhold 1:20 og delt med 20 ml/min) ved 235 ◦C af en autosampler. En MS-detektor udstyret med en elektrospray-ioniseringskilde (ESI) drevet ved 70 eV med ionkildens og overføringsledningens temperatur indstillet til henholdsvis 200 ◦C og 220 ◦C, registrerede massespektre i m/z-området 38-600. Analyserede forbindelser blev tildelt ved at sammenligne deres massespektre med offentliggjorte data (National Institute of Standards and Technology, 2008). Den procentvise sammensætning blev beregnet ved at integrere toppe i totalionkromatogrammer (TIC). Alle målinger blev udført af Research and Service Laboratory, The Halal Science Center, Chulalongkorn University, Bangkok, Thailand under Halal GMP/HACCP og Halal-QHS/ISO 22000.

cistanches herba

2.5. Bestemmelse af antioxidantaktiviteter

2.5.1. 2,2-Diphenyl-1-Picrylhydrazyl (DPPH) Radical Scavenging Assay

DPPH-radikal (DPPH•)-fjernende aktivitet blev bestemt ved at anvende metoden etableret af Chaiyana et al. (2017) [27]. Kort fortalt blev 20 µL olieprøver (PSO1, PSO2, COM1, COM2) og linolsyre opløst i DMSO blandet med 180 µL 167 µM DPPH ethanolopløsning i en 96-brøndsplade og derefter inkuberet i 30 min. stuetemperatur i mørke. Ascorbinsyre (1 mg/ml) blev anvendt som en positiv kontrol. Den optiske tæthed (OD) blev målt ved 520 nm ved anvendelse af en mikropladelæser (Microplate readers EZ Read 2000, Biochrome, England). Forsøgene blev udført i tre eksemplarer og udført i tre uafhængige. Procentdelen af ​​DPPH-inhibering blev beregnet ved hjælp af ligning (1):

DPPH-hæmning ( procent )={[(ODA − ODB) − (ODC − ODD)]/(ODA − ODB)} × 100, (1)

hvor ODA er OD for en blanding indeholdende DI-vand og DPPH•opløsning; B er ODB for en blanding indeholdende DI-vand og DMSO; C er ODC for en blanding indeholdende olieprøver og DPPH•opløsning; og ODD er OD for en blanding indeholdende olieprøver og DMSO.

2.5.2. 2,20 -Azino-Bis-3-Ethylbenzthiazolin-6-Sulphonic Acid (ABTS) Assay

ABTS kationisk radikal (ABTS+ plus)-fjernende aktivitet blev målt ved den kolorimetriske metode ifølge Chaiyana et al. (2017) og Paradee et al. (2019) [27,28] med en lille ændring. ABTS• plus blev genereret ved at tilsætte 2 mL 7 mM ABTS med 3 mL 2,45 mM kaliumpersulfat og inkuberet i 16-24 timer ved stuetemperatur i mørke. Det resulterende ABTS• plus blev efterfølgende fortyndet med ethanol for at opnå en OD på 0,7 ± 0,1 ved 750 nm. Kort fortalt blev 20 µL olieprøver (PSO1, PSO2, COM1, COM2) og linolsyre opløst i DMSO blandet med 180 µL ABTS• plus ethanolopløsning i en 96-brøndsplade og inkuberet i 5 minutter ved stuetemperatur . OD blev målt ved 750 nm ved anvendelse af en mikropladelæser (Microplate readers EZ Read 2000, Biochrome, England). Ascorbinsyre (1 mg/ml) blev anvendt som en positiv kontrol. Standardkurven blev fremstillet ved at plotte absorbansen ved 750 nm versus forskellige koncentrationer af Trolox i området fra 2,5-30 µg/mL. ABTS• plus rensende aktivitet blev beregnet ud fra Trolox standardkurve (R2=0.9922) og udtrykt som Trolox-ækvivalent antioxidantkapacitet (TEAC). Forsøgene blev udført i tre eksemplarer og udført i tre uafhængige.

2.5.3. Ferric Reducing Antioxidant Power (FRAP) analyse

Ferri-reducerende antioxidantkraft (FRAP) af hver af prøverne blev bestemt ved hjælp af FRAP-assay som beskrevet i en tidligere undersøgelse af Chaiyana et al. (2017), som var blevet lidt modificeret fra Saeio et al. (2011) [27,29]. FRAP-reagens blev frisk genereret ved at blande 300 mM acetatbuffer (pH 3,6), 10 mM 2,4,6 tripyridyl-s-triazin (TPTZ) i 40 mM HCI og 20 mM FeCl3 i forholdet 10:1:1. I denne undersøgelse blev 20 µL olieprøver (PSO1, PSO2, COM1, COM2) og linolsyre blandet med 180 µL FRAP-reagens i en 96-brøndsplade og inkuberet i 5 minutter ved stuetemperatur i mørke. OD blev målt ved 595 nm ved anvendelse af en mikropladelæser (Microplate readers EZ Read 2000, Biochrome, England). Ascorbinsyre (1 mg/ml) blev anvendt som en positiv kontrol. Standardkurven blev fremstillet ved at plotte absorbansen ved 595 nm versus forskellige koncentrationer af ferrisulfat (FeSO4) i området fra 0,003-0,5 mM. FRAP-værdien blev beregnet ud fra FeSO4-standardkurven (R2=0.9965) og udtrykt som ækvivalent kapacitet (EC1). Forsøgene blev udført i tre eksemplarer og udført i tre uafhængige.

2.5.4. Ferrithiocyanat (FTC) assay

Hæmningen af ​​lipidperoxidation blev undersøgt ved ferrithiocyanat (FTC) metoden. Denne metode blev udført i overensstemmelse med trinene beskrevet af Osawa et al. (1981) [30] med en lille modifikation. Blandingen var sammensat af 50 µL olieprøver (PSO1, PSO2, COM1, COM2) og linolsyre, 50 µL 50 procent linolsyre i DMSO, 50 µL 10 procent ammoniumthiocyanat (NH4SCN) vandig opløsning og 50 µL 2 mM ferrochlorid (FeCl2). Efterfølgende blev blandingen inkuberet ved 37 ± 2 ◦C i 1 time, og OD blev målt ved 500 nm ved anvendelse af en mikropladelæser (Micropladelæser EZ Read 2000, Biochrome, England). -Tocopherol (0,025-0,1 mg/ml) blev brugt som en positiv kontrol. Forsøgene blev udført i tre eksemplarer og udført i tre uafhængige. Lipidperoxidationshæmningsaktiviteten blev beregnet ved hjælp af ligning (2):
Lipidperoxidationshæmning ( procent )={[(ODA − ODB) − (ODC − ODD)]/(ODA−ODB)} × 100, (2)
hvor ODA er OD for blandingen indeholdende linolsyre, NH4SCN og FeCl2; ODB er OD for DMSO; ODC er OD for blandingen, der indeholder olieprøver, linolsyre, NH4SCN og FeCl2; og ODD er OD for blandingen indeholdende olieprøver og DMSO.

2.6. Bestemmelse af anti-aldringsaktiviteter

2.6.1. Anti-hyaluronidase aktivitet

Anti-hyaluronidase aktivitetsmåling blev udført som tidligere beskrevet af Chaiyana et al. (2020) [31]. Først blev 20 µL olieprøver (PSO1, PSO2, COM1, COM2) blandet med 100 µL 15 U/mL hyaluronidase-opløsning og inkuberet ved 37 ◦C i 10 min. Efter inkubationen blev 100 µL 0,03% w/v hyaluronsyre, som var opløst i 20 mM phosphatbuffer (pH 5,35), tilsat og derefter inkuberet ved 37 ◦C i 45 min. Derefter blev 1 ml 0,1 procent bovint serumalbumin tilsat og inkuberet ved stuetemperatur i 10 min. OD blev bestemt ved 600 nm under anvendelse af en multimode detektor (Beckman Coulter DTX880, Fullerton, CA, USA). Oleanolsyre (0,25 % vægt/volumen) blev anvendt som en positiv kontrol. Forsøgene blev udført i tre eksemplarer og udført i tre uafhængige. Procentdelen af ​​hyaluronidaseinhibering blev beregnet ved hjælp af ligning (3):

Hyaluronidasehæmning ( procent )={[(ODA − ODB) − (ODC − ODD)]/(ODA − ODB)} × 100, (3)
hvor ODA er OD for blandingen indeholdende DI-vand, hyaluronidase-opløsning og hyaluronsyre; ODB er OD for blandingen indeholdende DI-vand og phosphatbuffer (pH 5,35); ODC er OD for blandingen, der indeholder olieprøver, hyaluronidaseopløsning og hyaluronsyre; og ODD er OD for blandingen indeholdende olieprøver og fosfatbuffer (pH 5,35).

2.6.2. Anti-collagenase aktivitet

Anti-collagenase aktivitetsmåling blev udført i overensstemmelse med processen etableret af Chaiyana et al. (2019) og Thring et al. (2009) med små modifikationer [32,33]. Kort fortalt blev 20 µL olieprøver (PSO1, PSO2, COM1, COM2) blandet med 20 µL 0,1 U/mL collagenase-opløsning fra Clostridium histolyticum og inkuberet ved 37 ◦C i 15 min. Efter inkubationen, 80 µL 50 mM tricinbuffer (400 mM NaCl og 10 mM CaCl2, pH 7,5) og 40 µL N-[3-(2-furyl)acryloyl]-Leu-Gly- Pro-Ala (FALGPA) substratopløsning blev tilsat. OD blev straks detekteret ved 340 nm og derefter kontinuerligt målt i 20 minutter ved hjælp af en mikropladelæser (Micropladelæser EZ Read 2000, Biochrome, England). Oleanolsyre (1 % vægt/volumen) blev anvendt som en positiv kontrol. Forsøgene blev udført i tre eksemplarer og udført i tre uafhængige. Procentdelen af ​​kollagenasehæmning blev beregnet ved hjælp af ligning (4):

Kollagenasehæmning ( procent )=[(ODA − ODB)/ODA] × 100, (4)
hvor ODA er OD for blandingen indeholdende olieprøver, collagenaseopløsning, tricinbuffer og FALGPA-substrat; og ODB er OD for blandingen indeholdende DMSO, collagenaseopløsning, tricinbuffer og FALGPA-substrat.

2.6.3. Anti-elastase aktivitet

Anti-elastaseaktivitetsmåling blev udført i overensstemmelse med processen etableret af Chaiyana et al. (2019) og Thring et al. (2009) med små ændringer [32,33]. Kort fortalt blev 10 µL olieprøver (PSO1, PSO2, COM1, COM2) blandet med 40 µL 0,03 U/mL elastaseopløsning fra svinebukspytkirtlen, derefter 50 µL 200 mM Tris-HCL-buffer (pH 8,0) og 100 µl. 0,8 mM N-succinyl-Ala-Ala-Ala-p-nitroanilid (AAAPVN) substratopløsning blev tilsat. OD blev straks detekteret ved 410 nm og derefter kontinuerligt målt i 20 minutter ved hjælp af en mikropladelæser (Microplate readers EZ Read 2000, Biochrome, England). Oleanolsyre (1 % vægt/volumen) blev anvendt som en positiv kontrol. Forsøgene blev udført i tre eksemplarer og udført i tre uafhængige. Procentdelen af ​​elastaseinhibering blev beregnet ved hjælp af ligning (5):

Elastasehæmning ( procent )=[(ODA − ODB)/ODA] × 100, (5)
hvor ODA er OD for blandingen indeholdende olieprøver, elastaseopløsning, Tris-HCl-buffer og AAAPVN-substrat; og ODB er OD for blandingen indeholdende DMSO, elastaseopløsning, Tris-HCl-buffer og AAAPVN-substrat.

2.7. Bestemmelse af anti-tyrosinase-aktiviteter

Den blegende effekt af et naturligt ekstrakt blev etableret ved anti-tyrosinase aktivitetsmåling, som blev udført ifølge Saeio et al. (2011) og Laosirisathian et al. (2020) [29,34]. L-tyrosin og L-DOPA var substraterne for tyrosinase-enzymet i denne undersøgelse. Kort fortalt blev 10 µL olieprøver (PSO1, PSO2, COM1, COM2) blandet med 30 µL tyrosinase i en 96-brøndsplade og derefter inkuberet ved stuetemperatur i 10 min. Efter inkubation blev 100 µL af substratet, som er 2,5 mM L-tyrosin eller L-DOPA, tilsat og inkuberet i 30 min. OD blev bestemt ved 450 nm under anvendelse af en mikropladelæser (Mikropladelæser EZ Read 2000, Biochrome, England). Kojinsyre (20 µg/ml) blev anvendt som en positiv kontrol. Forsøgene blev udført i tre eksemplarer og udført i tre uafhængige. Procentdelen af ​​tyrosinaseinhibering blev beregnet ved hjælp af ligning (6):

Tyrosinasehæmning ( procent )={[(ODA − ODB) − (ODC − ODD)]/(ODA − ODB)} × 100, (6)
hvor ODA er OD for blandingen indeholdende DMSO, tyrosinaseenzym og L-tyrosin; ODB er OD for blandingen indeholdende tyrosinaseenzym og PBS med en pH på 6,8; ODC er OD for blandingen, der indeholder olieprøver, tyrosinaseenzym og L-tyrosin; og ODD er OD for blandingen indeholdende olieprøver, tyrosinaseenzym og PBS med en pH på 6,8.

2.8. Statistisk analyse

Alle data blev demonstreret som en gennemsnitlig ± standardafvigelse (SD). Statistisk signifikans blev analyseret ved hjælp af en-vejs variansanalyse (ANOVA) efterfulgt af Tukeys post-hoc test med GraphPad Prism (version 8.0, GraphPad Software), og p < 0.05 blev betragtet statistisk signifikant.

cistanche herb

3. Resultater og diskussioner

3.1. Karakter af græskarfrøolie

I denne undersøgelse brugte vi vandig enzymatisk ekstraktion i stedet for organisk opløsningsmiddelekstraktion til at ekstrahere græskarfrøolie fra C. moschata Duch. Ex Poir (PSO1) og C. moschata (PSO2), fordi det er en enkel, effektiv og produktiv proces [15,21]. PSO1 var en mørkebrun væske med lav viskositet, hvorimod PSO2 var en grønlig-brun væske med lav viskositet. Begge græskarfrøolier havde deres karakteristiske lugt. Udbyttet af PSO1 og PSO2 var henholdsvis 17,7 % v/w og 15,6 % v/w. Bortset fra olien er græskarfrø blevet rapporteret at indeholde en række forskellige ernæringsmæssige forbindelser. De nærliggende sammensætninger af C. moschata var hovedsageligt kulhydrat (39,51 procent), efterfulgt af henholdsvis fedt (28,49 procent), protein (19,23 procent), vand (7,67 procent) og aske (5,18 procent) [35]. Sammenlignet med de tidligere undersøgelser med opløsningsmiddel og mekanisk presning afslørede denne undersøgelse imidlertid lavere udbytter af C. moschata-olie. Selvom opløsningsmiddelekstraktion er blevet beskrevet som den mest effektive olieekstraktionsmetode, der ekstraherer op til 98 procent af olierne fra frø, er der nogle spørgsmål vedrørende opløsningsmiddelrester og renheden af ​​den producerede olie [36]. Derudover påvirkede opløsningsmidlet anvendt i ekstraktionsprocessen udbyttet af den genererede olie. Ekstraktion med hexan, petroleumsether, petroleumsbenzen, cyclohexan, isopropylether, ethylacetat, tetrahydrofuran, propan-2-ol og acetone gav 43,4-64,4 procent [37,38]. Derfor var koldpresning at foretrække frem for opløsningsmiddelekstraktion. En koldpresse kan dog forårsage nogle kompleksiteter i den indledende fase af brugen af ​​en skruepresse [39]. Derfor kunne vandig enzymatisk ekstraktion være en alternativ ekstraktionsmetode, da den gav et højere indhold af græskarfrøolie (36,0 procent) sammenlignet med koldpresset olie (33,5 procent) [21]. Selvom processen med vandig enzymatisk ekstraktion var mere kompliceret end koldpressen, omfatter den en relativt billigere investeringsomkostning, et fortsat fald i omkostningerne til kommercielle enzympræparater, et potentiale til samtidig at isolere unikke og værdifulde fytokemiske komponenter, samt adressering det udbredte ønske om implementering af grønne teknologier [21]. Foreløbige undersøgelser beskrev, at adskillige enzymer såsom cellulaser, pectinaser, hemicellulase og protease ofte er blevet brugt til at ødelægge plantecellevægsstruktur for at forbedre bioaktiv ekstraktion fra planter [16,17]. Derfor designede vi denne undersøgelse til at ekstrahere frøolie ved at bruge en enzymblanding indeholdende pectinase, cellulase og protease (1:1:1) som tidligere beskrevet af Kanopka et al. (2016), som optimerede de enzymatiske hydrolysebetingelser for at opnå det højeste udbytte af græskarfrøolie [21]. Desuden viser denne metode sikrere og mere miljømæssigt bæredygtige alternativer til opløsningsmiddeludvinding, her kaldet "grøn udvinding".

3.2. Kemisk sammensætning af græskarfrøolie

Til fedtsyresammensætningsanalyse blev græskarfrøolie under anvendelse af vandig enzymatisk ekstraktion (PSO1 og PSO2) sammenlignet og analyseret sammen med kommerciel græskarfrøolie (COM1 og COM2) fremstillet ved koldpresseekstraktion. Fedtsyresammensætningerne af PSO1, PSO2, COM1 og COM2 er vist i tabel 1. Alle prøver af græskarfrøolie bestod af flerumættede (PUFA), monoumættede (MUFA) og mættede fedtsyrer. Cis-linolsyre (C18:2) var hovedbestanddelen i alle olieprøver. COM2 indeholdt det højeste indhold af fedtsyre (51,74 procent), efterfulgt af henholdsvis COM1 (48,00 procent), PSO1 (39.09 procent) og PSO2 (37,63 procent). På samme måde var cis-oleinsyre (C18:1) til stede i en høj procentdel, især i PSO2 (37,45 procent), efterfulgt af COM1 (33,39 procent), PSO1 (31,22 procent) og COM2 (28,64 procent). Mættede fedtsyrer såsom palmitinsyre (C16:0) og stearinsyre (C18:0) blev kun fundet i små mængder i hver af olieprøverne. Spormængder af andre PUFA, MUFA og mættede fedtsyrer blev også observeret og identificeret.

I litteraturen er linolsyre også kendt som omega-6, en essentiel fedtsyre, der ikke kan syntetiseres af den menneskelige krop, men kun modtages via kosten. Linolsyre er et vigtigt næringsstof for sundhedsfunktioner hos mennesker, der involverer en forløber for ceramider, som er en vigtig bestanddel af cellulære membraner, vitamin D og en række hormoner [40,41]. Dyreforsøg har vist, at mangel på linolsyre kan forårsage skællende og kløende hud [23]. Derudover har linolsyre fra planteolie understøttet hudsårheling sammen med forebyggelse af hudbetændelse og acne [23]. Desuden har oliesyre eller omega-9 været gavnligt til at forebygge kræft, autoimmune og inflammatoriske sygdomme [42]. Faktisk reducerede oliesyre signifikant produktionen af ​​nitrogenoxid på sårstedet, hvilket resulterede i hurtigere sårlukning [43]. Disse data understøtter, at græskarkerneolie, som beriger linolsyre (omega-6) ​​og oliesyre (omega-9), udviser potentielle sundhedsmæssige fordele.

cistanche tubulosa

Ud fra vores fund bestod græskarfrøolie (PSO1, PSO2, COM1 og COM2) af mange fedtsyrer, herunder linolsyre (C18:2), oliesyre (C18:2), palmitinsyre (C16:0) og stearinsyre (C18:0), som er almindelige komponenter, der findes i græskarfrøolie [44]. Linolsyre (omega-6) og oliesyrer (omega-9) var dominerende i alle olieprøver. Den højeste mængde linolsyre var COM2, efterfulgt af henholdsvis COM1, PSO1 og PSO2. Den højeste mængde oliesyre var også PSO2, efterfulgt af COM1, PSO1 og COM2. Disse resultater forklarer, at vandig enzymatisk ekstraktion af græskarfrøolie havde en lidt lavere linolsyre, men ikke oliesyre end koldpresseekstraktion. Årsagen til det lavere indhold af linolsyre i græskarfrø fra vandig enzymatisk ekstraktion end i kommercielle olieprøver skyldtes en forskel i ekstraktionsprocessen. Tidligere undersøgelser har fundet uoverensstemmelser i mængden af ​​umættede fedtsyrer, især oliesyre og linolsyre, i græskarfrøolier fra forskellige ekstraktioner [39]. Indholdet af oliesyre varierede fra 28,19 procent i koldpresset græskarkerneolie til 30,56 procent i græskarkerneolie ekstraheret med pentan, hvorimod indholdet af linolsyre varierede fra 43,86 procent i græskarkerneolie ekstraheret med pentan til 46,67 procent i koldpresset græskarkerneolie [39]. Udover forskellige ekstraktionsmetoder har opløsningsmidlerne i ekstraktionsprocessen og temperaturen under frømodningen også påvirket linolsyreindholdet i plantefrø. En tidligere undersøgelse fremhævede, at petroleumsether gav linolie med lavt linolindhold (26,2 procent), mens n-hexan gav modstridende resultater med et linolsyreindhold på 46,5 procent [45]. Derudover er linolsyre omvendt proportional med temperaturen under solsikkefrømodning [46].

Desuden opdagede en relativ undersøgelse, at den kemiske sammensætning med hensyn til fedtsyresammensætning afslørede, at linolsyre og oliesyre var til stede i henholdsvis 47,45 procent og 35 procent i græskarfrøolie (C. maxima) ekstraheret med diethylether [47] . Ifølge Akin et al. (2018) varierede indholdet af linolsyre fra 53,19 procent til 53,27 procent, efterfulgt af oliesyre, som også var til stede i store mængder varierende fra 27,52 procent til 27,59 procent i koldpresset C. pepo L. frøolieekstraktion [48 ]. Derfor opnåede vandig enzymatisk ekstraktion i denne undersøgelse også lavere udbytter af fedtsyrer end opløsningsmiddelekstraktion og koldpresseekstraktion nævnt i tidligere undersøgelser. I sortsammenligning fandt vi, at PSO1 (C. moschata Duch. Ex Poir) viste en højere mængde linolsyre end PSO2 (C. moschata, eller japansk græskar). På forskellig vis præsenterede PSO2 en højere mængde oliesyre end PSO1. Det er vigtigt, at variationer i fedtsyreprofiler og mængder af græskarfrøolie var afhængige af oprindelsen af ​​bestemte kultivarer, klimatiske forhold og håndtering efter høst [49]. Bortset fra forskelle i fedtsyreprofiler af græskarfrøolier opnået fra forskellige ekstraktionsmetoder, blev olierne fra vandig enzymatisk teknologi rapporteret at være rige på phytosterol og tocopherol [50]. Derfor foreslås PSO1 og PSO2, som blev fremstillet ved den grønne ekstraktionsmetode, som alternative græskarfrøolier til yderligere anvendelser.


For flere oplysninger: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

Du kan også lide