Effekter af polygona-polysaccharose på ferroptose hos diabetiske nefropati rotter

Nøgleord:diabetisk nefropati;polygona-polysaccharose; ferroptose; transferrin; FTH1; GPX4

 

Diabetisk nefropati(DN) er en alvorlig mikrovaskulær komplikation afdiabetes mellitus[1] DN er en seriøsmikrovaskulær komplikation af diabetesmellitus [1], som sædvanligvis viser sig som mikroalbuminuri i de tidlige stadier, efterfulgt af progressiv udvikling af. Det tidlige stadie viser sig sædvanligvis med mikroalbuminuri, efterfulgt af progressiv udvikling af massiv proteinuri, progressivt fald i glomerulær filtrationshastighed og progressiv stigning i blodkreatinin [2] ]. progressiv stigning i kreatinin[2]. Hvis sygdommen ikke behandles, kan den føre til kronisk sygdom. Hvis det ikke behandles, kan det føre til kronisk progressiv nyreskade og i sidste ende sygdom i slutstadiet. Hvis det ikke behandles, kan det føre til kronisk progressiv nyreskade og i sidste ende nyresvigt i slutstadiet[3]. Jerndød Jerndød er en jernafhængig ophobning af umættede fedtsyrer jerndød er en jernafhængig ophobning af umættede fedtsyrer phospholipidoxidation, der fører til celledød, hovedsageligt manifesteret af Den vigtigste manifestation af jerndød er ophobning af jernafhængig intracellulære lipidperoxider[4]. [4] . Undersøgelser Det har vist sig, at beskadigelse af tubulær epitelcelle i nyrene er tæt forbundet med jerndød[5]. Wang et al.

Wang et al[6] fandt, at ekspression af glutathionperoxidase 4 (GPX4) i renal tubulær interstitiel (GPX4) ekspression er tæt forbundet med sværhedsgraden og progressionen af ​​DN-sygdom. GPX4, som et vigtigt mål for udløsning af jerndødsprogram, er en sensor for oxidativ stress og celledødssignalering, og reduceret GPX4-ekspression fører til en signifikant stigning i fald i levende GPX4-ekspression, hvilket resulterer i en signifikant stigning i levende ilt i kroppen[ 7] . . Derfor kan hæmning af renal tubulær epitelcelledød gennem regulering af jerndød Derfor kan inhibering af renal tubulær epitelcelledød gennem regulering af jerndød for at lindre DN nyreskade være en effektiv strategi til behandling af DN Derfor kan hæmning af renal tubulær epitelcelledød gennem regulering af jerndød kan være en effektiv strategi for DN-behandling.
DetpolysaccharidafC. flavuser den mest udbredte og vigtige farmakologiske Det er en af ​​de mest udbredte og vigtige farmakologiske komponenter i C. flavus. Den eksperimentelle undersøgelse fandt, at den spiller en vigtig rolle i at forbedre nyrefunktionen af ​​DN og lindre det inflammatoriske respons. Li et al[8]. Li et al[9]. fandt, at Li et al[9] fandt, at indgrebet af C. flavus polysaccharid signifikant forbedrede glucolipidmetabolismeforstyrrelser og insulintolerance hos diabetiske mus. Li et al. En anden undersøgelse viste, at glukose, 24 timers glukose og insulintolerance hos mus med diabetisk nefropati var signifikant forbedret efter indgrebet af gult ekstrakt polysaccharid. En anden undersøgelse viste, at blodsukker, 24-h urin mikroalbumin, blodkreatinin (SCr) og blodurinstofnitrogen (BUN) i modelmus for diabetisk nefropati blev signifikant forbedret efter indgrebet af Fructus flavus polysaccharide. og blodurea-nitrogen-niveauer (BUN) blev signifikant reduceret i en diabetisk nefropatimodel[10]. Behandlingen af ​​DN med polysaccharid fra Flos Chrysanthemi Den specifikke virkningsmekanisme er imidlertid ikke klar. I denne undersøgelse blev en diæt med højt fedtindhold kombineret med streptozotocin (STZ) injektion brugt til at etablere en DN-rottemodel.
Derfor etablerede vi i denne undersøgelse en DN-rottemodel ved højfedt kost kombineret med streptozotocin (STZ) injektion og observerede effekten af ​​C. flavus polysaccharid på jerndød hos rotter. Derfor blev nærværende undersøgelse udført for at observere effekten af ​​C. flavus polysaccharid på jerndød hos rotter fodret med højfedtfoder kombineret med streptozotocin (STZ) injektion, og for at klarlægge virkningsmekanismen af ​​C. flavus polysaccharid på DN.

Materialer og metoder
1.1 Dyr
Halvtreds sunde SD-hanrotter med en kropsmasse på (200±20) g blev anbragt på Institute of Radiology, Chinese Academy of Medical Sciences, Beijing, Kina, under en 12-t lys-mørke cyklus ved en temperatur på (25±2) grader og relativ luftfugtighed på (50±15) procent, og fodret ad libitum. Diæt med højt sukkerindhold og højt fedtindhold (10 procent svinefedt, 20 procent saccharose, 2,5 procent kolesterol, 67,5 procent konventionelt foder), (4,8 procent fedt, 20 procent protein og 59,4 procent totalt sukker), Beijing Huafukang Biotechnology Co. Dette eksperiment blev godkendt af Cangzhou Hospital of Integrative Medicine (CZX2022-KY-023).

1.2 Lægemiddel og præparat
PolysaccharidafFlos Astragalus(renhed 70 procent, batchnummer S27804), Shanghai Yuanye Biotechnology Co. Ltd. Ltd. blev fremstillet med saltvand i en koncentration på henholdsvis 200, 800 mg/ml. 800 mg/ml opløsning. Irbesartan-tabletter (parti 8A411), Sanofi (Hangzhou) Pharmaceutical Co. (Hangzhou) Pharmaceutical Co., Ltd. blev fremstillet i saltvand ved 30 mg/ml. løsning.

 

1.3 Vigtigste reagenser og instrumenter
Urinprotein (batchnummer C035-2-1), SCr (batchnummer C011-2-1), BUN (batchnummer C013-2-1) BUN (batchnummer C013-2-1), malondialdehyd ( MDA, batchnummer C003-1- 2), glutathion (GSH, parti C006-2-1), totalt jernionindhold (batchnummer A039-2-1), Nanjing Jiancheng Biological Engineering Research Institute Institute of Biological Engineering , Nanjing, Kina; Transferrin (batchnummer ab278498), ferritin Transferrin (parti ab278498), ferritin tung kæde (FTH1, lot ab75973), GPX4 (parti ab252833) og -ferritin (parti ab252833). ab252833), -actin (parti ab179467), Abcam, Storbritannien. iMark680 multifunktionel enzymmarkør, Bio-Rad, USA. Fresco17 centrifuge, Thermo, USA; 5810 benchtop frossen centrifuge, Eppndorf, Tyskland; ABI Prism® 7500 fluorescens kvantificering Applied Biosystems, USA; DYCZ-24DN vertikal elektroforesetank, Beijing Liuyi Instrument Factory, Beijing, Kina; SH-523 chemiluminescence imaging Ltd, Hangzhou Shenhua Technology Co.

 

1.4 Modellering, gruppering og lægemiddeladministration
Efter 1 uges adaptiv fodring blev 10 rotter tilfældigt udvalgt som normale. De resterende 40 rotter blev henvist til litteraturmetoden [11] for at etablere DN-rottemodellen. Rotterne blev fodret med kost med højt sukkerindhold og højt fedtindhold i 7 uger og fastede derefter i 12 timer uden vand. Rotterne blev fodret med kost med højt sukkerindhold og højt fedtindhold i 7 uger, hvorefter de fastede med mad og vand i 12 timer. STZ blev injiceret intraperitonealt ved 30 mg/kg. Efter 72 timer blev blod opsamlet fra halevenen for at detektere tilfældig blodsukker, og en blodsukker på større end eller lig med 16,7 mmol/L blev betragtet som en vellykket modellering af diabetes. Rotterne blev fodret med kost med højt sukkerindhold og højt fedtindhold i 1 uge, og 24-h urin blev opsamlet fra stofskifteburet.

 

 

1.5.5 Western blot-assay
Saml nyrevæv, tilsæt 150 μL RIPA-lysebuffer, homogeniser Proteinsupernatanten blev tilbageholdt efter centrifugering. Den totale proteinkoncentration blev bestemt ved anvendelse af BCA-proteinassay-kittet. Den totale proteinkoncentration blev bestemt ved anvendelse af BCA-proteinassay-kit, og proteinkoncentrationen blev homogeniseret. Lige store mængder protein 20 ug, 8 procent -12 procent SDS-PAGE blev brugt til proteinseparation, og proteinet blev overført. Membranerne blev lukket med 5 procent skummetmælkspulver ved stuetemperatur i 2 timer. Primært anti-rotte-antistof fra kanin Transferrin (1:2 000), FTH1 (1:3 000) og GPX4 (1:3 000) blev tilføjet. 3,000), GPX4 (1:3,000), -actin (fortyndet 1:5,000), og inkuberet natten over ved 4 grader . Inkuber natten over ved 4 grader. Membranen blev vasket, sekundært antistof (1:9 000) blev tilsat og inkuberet i 2 timer ved stuetemperatur. Membranerne blev vasket med TBST, udviklet ved ECL-kemiluminescens og detekteret vha
Image J-software blev brugt til at analysere gråtoneværdierne af båndene.

 

1.6 Statistiske metoder
SPSS Statistics25.0 statistisk software blev brugt til analyse. Eksperiment Resultaterne blev udtrykt som xˉ±s, og alle data blev testet for normalitet og chi-kvadrat. Alle data blev testet for normalitet og chi-kvadrat, og t-test blev brugt, hvis de var opfyldt, og ikke-parametriske test blev brugt, hvis de ikke var opfyldt. P<0.05 indicates that the difference is statistically significant.

 

2 resultater
2.1 Effekter af Flavopiridium polysaccharid på kropsmasse og fastende blodsukker hos modelrotter Sammenlignet med normalgruppen var kropsmassen af ​​rotter i modelgruppen signifikant reduceret (P<0.01) and FBG was significantly increased (P<0.01); compared with the model group, the body mass of rats in the positive drug group was significantly increased (P<0.05), and the differences in FBG of rats in each group were not statistically significant (P>0.05). Se tabel 2.

2.2 Effekter af Flavopiridium polysaccharid på nyrefunktionsindekser hos modelrotter
Sammenlignet med den normale gruppe var SCr-, BUN-niveauet og 24 timers urinproteinindhold hos rotter i modelgruppen signifikant højere (P<0.01); compared with the model group, the Cr, BUN level and 24 h urine protein content of rats in the positive drug group and the high dose group of Flavopiridium polysaccharide were significantly lower (P<0.05, P<0.01). See Table 3.

2.3 Effekter af gult ekstrakt polysaccharid på den histopatologiske morfologi af nyren hos modelrotter
Glomerulus- og rørstrukturen af ​​normale grupperotter viste ingen abnormiteter, og thylakoidmembranen og thylakoidstromaen blev ikke prolifereret, og der var ingen inflammatorisk celleinfiltration osv.; modellen Hos modelrotterne blev der observeret fokal tubulær degeneration og atrofi, og den glomerulære basalmembran var let. Rotterne i modelgruppen viste fokal tubulær degeneration og atrofi, let fortykket glomerulær basalmembran, thylakoid hyperplasi og fedtdegeneration af glomeruli og tubuli. Rotterne i hver lægemiddeladministrationsgruppe viste reducerede læsioner, og forbedringen var mere tydelig i den positive lægemiddelgruppe og den høje dosis Flavopiridium polysaccharid. Forbedringen var mere tydelig i den positive lægemiddelgruppe og den høje dosis Flavopiridium polysaccharid. Se figur 1.