Virkninger af cistanche-polysaccharider på den biologiske opførsel af lungekræftcelle A549

Abstrakt: Formål At undersøge effekten afCistanche polysaccharidom den biologiske adfærd af lungekræftcelle A549. Metoder Lungekræftcellerne A549 blev opdelt i kontrolgruppe,Cistanche polysaccharid100, 200, 400 ng/mL gruppe, si-NC gruppe, si-LINC01410 gruppe,Cistanche polysaccharid400 ng/ml plus pcDNA,Cistanche polysaccharid400 ng/ml plus pcDNA-LINC01410 gruppe. Proliferationshastigheden af ​​A549-celler blev påvist ved MTT-metoden, kloningsevnen af ​​A549-celler blev påvist ved kolonidannelsesassay, og 549 celler blev påvist ved flowcytometri

Celleapoptosehastighed, Transwell-metoden blev brugt til at detektere migrations- og invasionsevnen af ​​A549-celler, og RT-qPCR-metoden blev brugt til at detektere ekspressionen af ​​LINC01410 mRNA i A549-celler.

Resultater:Cistanche polysaccharidkunne hæmme A549-celleproliferation, kolonidannelse, migration og invasionsevne, LINC01410 mRNA-ekspression (P<0.05), and="" promote="" cell="" apoptosis="" in="" a="" dose-dependent="" manner.="" after="" inhibiting="" the="" expression="" of="" linc01410,="" the="" growth,="" migration="" and="" invasion="" abilities="" of="" a549="" cells="" were="" inhibited=""><0.05). overexpression="" of="" linc01410="" could="" reverse="" the="" effects="" of="">Cistanche polysaccharidom spredning, apoptose, migration og invasion af A549-celler. Konklusion:Cistanche polysaccharidkan hæmme aktiviteten, klondannelsen, migrationen og invasionsevnen af ​​lungecancerceller og fremme celleapoptose ved at reducere ekspressionen af ​​LINC01410.

Nøgleord:Cistanche polysaccharid; lungekræftcelle A549; LINC01410; spredning; apoptose

Klik her for at få en gratis prøve af Cistanche til

Reduktion af leverskader

Lungekræft er den ondartede tumor med den første morbiditet og dødelighed i mit land. Behandlingsmetoderne for lungekræft omfatter immunisering, kirurgi og kemoterapi [1].

Undersøgelser har vist, at traditionel kinesisk medicin og dens komponenter har store fordele i behandlingen af ​​lungekræft og kan forbedre effektiviteten af ​​lungekræft [2-3].Cistancheer et værdifuldt medicinsk materiale i mit land, og dets hovedkomponenter omfatter phenethylalkohol totale glycosider, polysaccharider, iridoider, alkaloider og lignaner. Undersøgelser har fundet det i altphenylethyl glucosider af Cistanchekanreducere leverskader hos H22-tumorbærende mus og hæmme tumorvækst[4]. Ergosterosid, den aktive ingrediens i Cistanche, kan hæmme tumorvækst og kolorektal cancercelleproliferation i nøgne mus xenograft-model og inducere apoptose [5].

Cistanche polysacchariderkan hæmme Lewis lungecancer og S180 sarkomceller ved at øge aktiviteterne af naturlige dræberceller og interleukin 2 (IL-2).

Men de potentielle funktioner, biogeneseprocesser og underliggende mekanismer vedCistanche polysaccharideri lungekræft forbliver uklare. Undersøgelser har vist, at lncRNA'er ofte dereguleres i lungekræft og spiller en vigtig rolle i forekomsten, udviklingen og behandlingen af ​​lungekræft [7]. LINC01410 er stærkt udtrykt i endometriecancer og påvirker prognosen for endometriecancerpatienter [8]; LINC01410 overekspression fremmer gastrisk cancer angiogenese og metastase ved at hæmme miR-532-5p [9]; Papillære skjoldbruskkirtelkræftceller prolifererer, migrerer og invaderer [10-11], mens LINC01410's rolle i lungekræft er uklar. Formålet med dette eksperiment var at undersøge virkningerne afCistanche polysacchariderog LINC01410 om den ondartede fænotype af lungekræftceller, og om LINC01410 var involveret i reguleringen afCistanche polysacchariderom lungekræftcellers ondartede biologiske adfærd, for at give grundlag for yderligere forskning vedrCistanche polysaccharider.

Cistanche polysaccharider

Materiale af Cistanche polysaccharider på behandling af kræftundersøgelse

Lungecancerceller A549 blev købt fra American Type Culture Collection (ATCC).Cistanche polysaccharid(renhed større end eller lig med 98 procent, produktnummer D3281) blev købt fraWecistanche Bio-Tech Biotechnology Co., Ltd. Føtalt bovint serum blev købt fra Guangzhou Shuoheng Biotechnology Co., Ltd.;

RPMI-1640 medium blev købt fra Hangzhou Qiannuo Biotechnology Co., Ltd.; MTT kit blev købt fra Shanghai Meixuan Biotechnology Co., Ltd.; Transwell-kammeret og Matrigel blev købt fra Beijing Unicon Biotechnology Co., Ltd.; Apoptosis kit blev købt fra PromoCell, Germany Company; SYBRremix ExTaqTM-sættet blev købt fra Shanghai Shanran Biotechnology Co., Ltd.

2 metoder til Cistanche polysaccharider på Treat Cancer Study

2.1 Cellekultur og gruppering

A549-celler blev dyrket i RPMI-1640-medium indeholdende 10 procent føtalt bovint serum i en 37 grader, 5 procent CO2-inkubator. Cellerne i den logaritmiske vækstfase blev behandlet medCistanche polysaccharidved massekoncentrationer på henholdsvis 100, 200 og 400 ng/mL og registreret somCistanche polysaccharid100, 200 og 400 ng/ml grupper; de A549-celler, der ikke blev behandlet med Cistanche-polysaccharid, var kontrolgruppen. A549-celler blev transficeret med henholdsvis si-NC eller si-LINC0141, betegnet som si-NC-gruppe, si-LINC01410-gruppe; si-NC og si-LINC01410 blev transficeret ind i A549-celler og behandlet med 400 ng/mlCistanche polysaccharid, betegnet somCistanche polysaccharid400 ng/ml plus pcDNA-gruppe,Cistanche polysaccharid400 ng/ml plus pcDNA-LINC01410 gruppe.

2.2 MTT-metodedetektion

A549-celleproliferationshastighed A549-celler blev behandlet medCistanche polysaccharidved massekoncentrationer på henholdsvis 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350 og 400 ng/ml. Saml A549-celler i hver gruppe og anbring dem i en 96-brøndplade, tilsæt 20 μL MTT til hver brønd, fortsæt med at dyrke i inkubatoren i 4 timer, kassér supernatanten, tilsæt 150 μL DMSO til hver brønd og detekter lyset fra hver gruppe af celler ved en bølgelængde på 490 nm. Tæthedsværdier (OD) blev brugt til at beregne celleproliferationshastigheden.

Cistanche dyrkning

2.3 Kolonidannelsesassay

A549 cell cloning ability Collect A549 cells in each group, adjust the density to 1 × 105 /mL, and inoculate 100 μL per well in a 6-well plate, incubate in an incubator until visible cell clones appear, wash 2 times with PBS, 4 % paraformaldehyde was fixed for 20 min, stained with 1% crystal violet solution for 15 min, observed under a light microscope, and the number of colonies (>50 celler) blev registreret.

2.4 Flowcytometri detektion

A549-celleapoptosehastighed A549-celler i hver gruppe blev opsamlet og resuspenderet i 100 μL fosfatbufret saltvandsbuffer (1×106 /ml), og 1 mL cellesuspension, 10 μL Annexin V-FITC og 5 μLPI blev tilsat til reagensglasset , beskyttet mod lys. Efter inkubation i 30 minutter blev celler opsamlet og analyseret ved flowcytometri.

apoptose.

2.5 Detektion ved Transwell-metoden

A549-cellemigration og -invasionsevne A549-cellesuspensionerne (2×104/200 μL, serumfrit medium) fra hver gruppe blev jævnt fordelt i det øvre kammer i Transwell-kammeret og 500 μL RPMI{{ 7}} medium indeholdende 10 procent FBS blev tilsat til det nedre kammer. Cellerne i det øvre kammer blev fjernet, og cellerne i det nedre kammer blev fikseret med 4 procent paraformaldehyd og farvet med 0,1 procent krystalviolet. Cellerne blev observeret under et lysmikroskop, og 5 synsfelter blev tilfældigt udvalgt til optælling. I celleinvasionseksperimentet blev Matrigel præcoatet på det øvre kammer i Transwell-kammeret, og resten af ​​trinene var de samme som i migrationsforsøget.

2.6 RT-qPCR-detektion

Ekspression af LINC01410 mRNA i A549-celler Totalt RNA blev ekstraheret fra celler under anvendelse af TRIzol-reagens, og cDNA blev syntetiseret i overensstemmelse med instruktionerne til revers transkriptionskit. Reaktionssystemet var 2 μL revers transkriptionsprodukt, 10 μL SYBR Green Mix, 0,5 μL forward og reverse primere og 7 μL sterilt vand. Reaktionsbetingelserne var 95 grader i 30 sekunder, 60 grader i 30 sekunder og 72 grader i 30 sekunder i i alt 40 cyklusser; den relative ekspression af LINC01410mRNA blev beregnet ved 2-ΔΔCT-metoden med GAPDH som intern reference. Primersekvenserne er LINC01410 fremad 5'-TGACAAGAATGGCCCAAGC-3', omvendt 5'-ACTGTGCACCTGTTACACCA-3'; intern reference GAPDH fremad 5'-TGTTGCCATCAATCACCCCTT-3', omvendt 5'-CTCCACGACGTACTC AGCG-3'.

2.7 Statistisk analyse

SPSS 20.0-software blev brugt til behandling, måledata blev udtrykt som (x±s), uafhængige samples t-test blev brugt til sammenligning mellem to grupper, envejs-variansanalyse blev brugt til sammenligning mellem flere grupper, og LSD-t test blev brugt til parvis sammenligning mellem grupper. P<0.05 indicated="" that="" the="" difference="" was="" statistically="">

Cistanche ekstrakt pulver

3 resultater af Cistanche polysaccharides on Treat Cancer Study

3.1 Effekten afCistanche polysaccharidom spredning og apoptose af A549-celler Sammenlignet med kontrolgruppen er proliferationshastigheden af ​​A549-celler i hver dosisgruppe afCistanche polysaccharidøget (s<0.05), ic50="" was="" 319.8="" ng/ml,="" see="" table="" 1="" .="" compared="" with="" the="" control="" group,="" the="" proliferation="" rate="" of="" a549="" cells="" in="" the="" polysaccharide="" 100,="" 200,="" and="" 400="" ng/ml="" groups="" of="" cistanche="" decreased="" (="" p="" <="" 0.="" 05="" )="" ,="" the="" number="" of="" clones="" was="" decreased="" (="" p="" <="" 0.="" 05)="" ,="" and="" the="" apoptosis="" rate="" was="" increased="" (="" p="" <="" 0="" ).="" .05)="" ,="" in="" a="" dose-dependent="">

3.2 Effekten afCistanche polysaccharidom A549-cellers migrations- og invasionsevne Sammenlignet med kontrolgruppen er antallet af A549-celler i hver dosisgruppe afCistanche polysaccharidfaldet (s<0.05) in="" a="" dose-dependent="" manner,="" as="" shown="" in="" figure="" 2,="" table="">

3.3 Effekten afCistanche polysaccharidom ekspression af LINC01410 mRNA i A549-celler Sammenlignet med kontrolgruppen er ekspressionen af ​​LINC01410 mRNA i A549-celler i hver dosisgruppe afCistanche polysaccharidblev nedsat (P＜0.05) på en dosisafhængig måde.