Virkning af cistanches Herba vandig ekstrakt på knogletab hos ovariektomerede rotter

Kontakt: Audrey Huaudrey.hu@wecistanche.com

Haidong Liang 1,*, Fang Yu 2, Zhihong Tong 1 og Zaiguo Huang 3

1 Hands and feet microsurgery, Dalian Municipal Central Hospital, Dalian 116033, China; E-Mail: tongzhih37@sina.cn

2 School of Medicine, Dalian University, Dalian 116033, China; E-Mail: yufangk7@sina.cn

3 Orthopedics Department, Dalian Municipal Central Hospital, Dalian 116033, China; E-Mail: huangzg41@sina.com

Abstrakt:For at vurdere evnen af ​​traditionel kinesisk medicin Cistanches Herba-ekstrakt (CHE) til at forhindre knogletab i den ovariektomiserede (OVX) rotte, blev Cistanches Herba-ekstrakt (CHE) administreret intragastrisk til rotterne. Hunrotter blev bedøvet med pentobarbitalnatrium (40 mg kg-1, ip), og deres æggestokke blev fjernet bilateralt. Rotterne i den sham-opererede gruppe blev bedøvet, laparotomier og syet uden at fjerne deres æggestokke. Efter 1 uges restitution fra operationen blev OVX-rotterne tilfældigt opdelt i tre grupper og oralt behandlet med H2O (OVX-gruppe) eller CHE (100 eller 200 mg kg-1 dagligt) i 3 måneder. Den sham-opererede gruppe (n=8) blev oralt behandlet med H2O. Efter 3 måneder blev den samlede kropsknoglemineraltæthed (BMD), knoglemineralindholdet (BMC), knoglebiomekaniske indeks, blodmineralniveauer og blodantioxidantenzymers aktiviteter undersøgt i sham-opererede, ovariektomiserede og Cistanches Herba-ekstraktbehandlede rotter. Resultaterne viste, at behandling med Cistanches Herba ekstrakt signifikant dosisafhængigt øgede knoglemineraltæthed (BMD), knoglemineralindhold (BMC), maksimal belastning, forskydning ved maksimal belastning, stress ved maksimal belastning, belastning ved autopause, forskydning ved automatisk pause , og stress ved auto break, og blodets antioxidantenzymer aktiviteter, nedsatte blod Ca, Zn og Cu niveauer sammenlignet med OVX gruppen. Dette eksperiment viser, at administrationen af ​​Cistanches Herba-ekstrakt til ovariektomiserede rotter reverserer knogletab og forhindrer osteoporose.

Nøgleord:ovariektomi; rotte; knogle; antioxidant; Cistanches Herba

Cistanches Herba

1. Introduktion

Osteoporose er en ældningssygdom forbundet med knogletab, der ofte forekommer uden symptomer, indtil mikroarkitektonisk forringelse bliver så signifikant, at knoglebrud uvægerligt opstår på det punkt, hvor en reduktion i knoglemassen er under, hvad der kræves for knogleintegritet. Osteoporose er af stor betydning i sundhedsvæsenet. Selvom de er reduceret i masse, er knoglerne normale med hensyn til mineralisering, men histologisk er der et fald i tykkelsen af ​​cortex og antallet og størrelsen af ​​trabeculae i den grove spongeknogle [1-3].

Masser af undersøgelser af denne sygdom er blevet udført i de senere år. Akkumulerede data har indikeret, at tabet af østrogen i overgangsalderen er en væsentlig bidragyder til patogenesen af ​​sygdommen, fordi dette hormon er en primær negativ regulator af osteoklastaktivitet [4-6], og osteoklaster er de vigtigste celler, der er ansvarlige for knogleomdannelse ved osteoporose [7].

Postmenopausal osteoporose er den hyppigste metaboliske knoglesygdom, den er karakteriseret ved et hurtigt tab af mineraliseret knoglevæv, forstyrrelse af trabekulær arkitektur af knoglen og ændringer i de krystallinske egenskaber af mineralaflejringer, som resulterer i struktursvigt (fraktur) af steder, der er rige på spongiöse knogler, såsom ryghvirvler, hofte og distale underarm [8-11]. Østrogenmangel anses for at være den vigtigste determinant for knogletab hos postmenopausale kvinder. Ovariektomerede rotter og hunde er blevet brugt i vid udstrækning i osteoporosemodeller. I 1996 blev virkningerne af ibandronat på ovarieektomerede hunde [12] rapporteret.

Cistanches Herba (CH), holoparasitisk plante af Cistanche deserticola YC Ma, er klassificeret som et tonificerende middel i orientalsk traditionel medicin og bruges almindeligvis til at behandle glemsomhed, høretab, infertilitet og kronisk forstoppelse. CH har forskellige farmakologiske aktiviteter, herunder antinociceptive, anti-inflammatoriske og immunforstærkende virkninger [13,14]. En tidligere undersøgelse har rapporteret, at Cistanches Herba kan vejlede knoglemesenchymale stamceller (BMSC'er) til at differentiere til osteoblaster, hvilket lover en gunstig udsigt til behandling af osteoporose og knoglebrudsbrud [15]. Chen et al. [16] rapporterede, at Cistanches Herba-polysaccharider kan fremme knoglemarvscellecyklusovergangen og genopretning af hæmatopoietisk funktion hos knoglemarvsdeprimerede anæmiske mus, accelerere hæmatogenese i rubrum-stamme og makronukleus-stamme.

I denne undersøgelse blev knoglemineraltæthed (BMD), knoglemineralindhold (BMC), knoglebiomekanisk indeks, blodmineralniveauer og blodantioxidantenzymers aktiviteter undersøgt i sham-opererede, ovariektomerede og Cistanches Herba-behandlede rotter for at studere virkningerne af behandlingen med Cistanches Herba-ekstrakt på knoglekvalitet.

Traditionel kinesisk medicin Cistanches Herba-ekstrakt (CHE)

2. Materialer og metoder

2.1. Fremstilling af Cistanches Herba vandige ekstrakter

Cistanches Herba blev indsamlet fra ørkenen i alxa-ligaen i Nei Monggol (Indre Mongoliet) Autonome Region i 2010.

Den tørrede stilk af Cistanches Herba blev ekstraheret med destilleret vand ved 100 grader i 2 timer. Opløsningen blev centrifugeret ved 4000 r/min i 10 min. Rester blev fjernet ved filtrering, og det kombinerede filtrat blev inddampet ved opvarmning for at opnå en ønsket koncentration (2,1 g tør planteækvivalent ekstrakt/ml). Udbyttet af ekstraktion var 13,7 % (vægt/vægt). Den vandige ekstrakt blev opbevaret ved 2-8 grader.

2.2. Dyr

Toogtredive Wistar-hunrotter på 3 måneder gamle, der vejede mellem 240 og 270 g ved begyndelsen af ​​eksperimentet, blev brugt til undersøgelsen. De blev holdt under standard laboratorieforhold med 12 timers lys og mørke cyklus, med fri adgang til standard laboratorierottefoder og postevand.

2.3. Dyreforsøg.

Hunrotter blev bedøvet med pentobarbitalnatrium (40 mg kg-1, ip), og deres æggestokke blev fjernet bilateralt. Rotterne i den sham-opererede gruppe blev bedøvet, laparotomier og syet uden at fjerne deres æggestokke. Efter 1 uges bedring fra operationen blev OVX-rotterne tilfældigt opdelt i tre grupper (n=8 i hver gruppe) og intragastrisk behandlet med H2O (OVX-gruppe), Cistanches Herba-ekstrakt (CHE) (100 eller 200 mg kg. -1 dagligt) i 3 måneder. Den sham-opererede gruppe (n=8) blev oralt behandlet med H2O.

På den sidste dag af undersøgelsen blev dyrene vejet og aflivet, og blodprøver blev indsamlet samtidigt. Lårbenene blev dissekeret og fjernet fra blødt væv til måling af biomekanisk testning.

Alle forsøg blev udført i overensstemmelse med forskningsprotokoller etableret af dyreplejeudvalget i Kina.

2.4. Knogledensitometri

Femoral knoglemineralindhold (BMC) og knoglemineraltæthed (BMD) blev bestemt ved hjælp af en Hologic QDR{{0}}W DXA. Instrumentet var tilpasset til en ultrahøj opløsningstilstand med linjeafstand på 0.0254 cm, opløsning på 0,0127 cm og kollimator på 0,9 cm i diameter. Knoglerne blev lagt i en petriskål. For at simulere densitet af blødt væv, der omgiver knoglerne, blev postevand hældt rundt om knoglerne for at opnå en dybde på 1 cm. Resultater er givet for BMC og for det målte areal. BMD for dette areal beregnes som BMC divideret med areal. Ud over resultater for det totale lårben blev den distale og midterste region af lårbenet analyseret som underregioner [17].

2.5. Knogle biomekanisk testning

Lårbensknogler blev holdt ved 4 grader indtil bestemmelse af brudstyrke ved hjælp af en 5-kN Flexure Fixture, konfigureret til trepunkts-bøjningstest og fastgjort til en Instron Universal Testing Machine Model 4502 udstyret med en 10- kN vejecelle (Instron, Canton, MA, USA), som tidligere beskrevet [18]. Krydshovedets hastighed var 50 mm/min, og datasamplingshastigheden var 10 prøver/s. Maksimal belastning, belastning ved maksimal belastning, belastning ved svigt og stress ved svigt blev bestemt i lårbenene ved hjælp af Series IX, v 8.08.00 software (Instron).

2.6. Biokemisk Analyse

Ca-, Zn- og Cu-niveauer i blodet blev målt ved atomabsorptionsspektrofotometri.

Baseret på metoden ifølge King og Armstrong [19] blev alkalisk phosphatase (ALP) aktivitet analyseret under anvendelse af dinatriumphenylphosphat som et substrat. Den fremkaldte farve blev aflæst ved 510 nm i et UV-vis spektrofotometer efter 10 min. Aktiviteter af ALP blev udtrykt som IU/L.

Koncentrationen af ​​malondialchehyche (MDA) i blodet blev bestemt ved anvendelse af metoden beskrevet af Jain et al. [20], baseret på TBA-reaktivitet. Kort fortalt, 0,2 mL erytrocytpellets eller supernatant opnået fra væv, 0,8 mL fosfatbuffer (pH 7,4), 0.025 mL BHT og { {19}},5 ml 30 procent TCA blev tilsat til rørene og blandet. Efter 2 timers inkubation ved -20 grader blev blandingen centrifugeret (4000 x g) i 15 min. Herefter blev 1 mL supernatant taget og tilsat til hvert rør, og derefter 0,075 mL 0,1 M EDTA og

0.25 ml 1 procent TBA blev tilsat. Disse rør med teflon-forede skruelåg blev inkuberet ved 90 grader i et vandbad i 15 minutter og afkølet til stuetemperatur. Den optiske densitet blev målt til 532 for blod-MDA-koncentration.

Aktiviteten af ​​glutathionperoxidase (GSH-Px) blev bestemt ifølge Lawrence og Burks metode [21]. Analyseblandingen bestod af 2,0 mL 75 mM fosfatbuffer (pH 7.0), 50 μL 60 mM glutathion, {{15} },1 mL 30 enheder/ml glutathionreduktase, 0,1 mL 15 mM EDTA, 0,1 mL 3 mM NADPH og den passende mængde vævssupernatant til et slutvolumen på 3,0 mL . Reaktionen blev startet ved tilsætning af 0,1 ml 7,5 mM H2O2. Hastigheden for ændring af absorbans under omdannelsen af ​​NADPH til NADP plus blev registreret spektrofotometrisk ved 340 nm i 3 minutter. GSH-Px-aktivitet for væv blev udtrykt som μmol NADPH oxideret til NADP plus min-1 mg-1 protein.

Aktiviteten af ​​superoxiddismutase (SOD) blev bestemt i blodet ifølge metoden ifølge Sun et al. [22]. Princippet i metoden er baseret på hæmning af nitroblåt tetrazolium (NBT) reduktion ved at bruge xanthin-xanthin oxidase-systemet som superoxid-generator. Aktiviteten blev vurderet i supernatanterne af 10.000 g methanol/chloroform (5/3, v/v) ekstrakter af vævshomogenater (10 procent). En enhed SOD blev defineret som den enzymmængde, der forårsagede 50 procent hæmning af NBT-reduktionshastigheden.

Katalase (CAT) aktiviteten blev målt ved anvendelse af Abeis [23] metode. Serum blev tilsat til en kuvette indeholdende 2,89 ml af en 50 mmol/L phosphatbuffer (pH 7,0). Reaktionen blev påbegyndt ved at tilsætte 0,1 mL frisklavet 30 mmol/L H2O2 for at opnå et slutvolumen på 3,0 mL ved 25 grader. Nedbrydningshastigheden af ​​H2O2 blev målt ved 240 nm i 5 minutter på et spektrofotometer. En enhed (U) CAT blev defineret som mængden af ​​enzym, der kræves for at nedbryde 1 nmol H2O2 pr. minut ved 25 grader og pH 7,8.

2.7. Statistisk analyse

De eksperimentelle resultater blev udtrykt som middelværdi ± SD for otte dyr i hver gruppe. De biokemiske parametre blev analyseret statistisk under anvendelse af en envejs-variansanalyse ANOVA, efterfulgt af Dunnetts multiple comparison test (DMCT). P-værdi på<0.05 was="" considered="" statistically="">

3. Resultater

To dyr udløb i løbet af undersøgelsen. Følgelig var tallene for grupperne ved undersøgelsens konklusion: 8 i den falske kontrol; 7 i OVX-gruppen; 7 i CHE-behandlingsgruppen (100 mg kg−1 dagligt) og 8 i CHE-behandlingsgruppen (200 mg kg−1 dagligt). To dage efter operationen var rotternes føde- og vandindtag lidt lavere end før operationen. Ingen dyr led af infektion og anabiose. Der blev ikke observeret nogen klinisk tydelige bivirkninger hos rotter.

Før operationen var der ingen signifikant (p > {{0}}.01) forskel i rotters kropsvægt mellem grupperne. Kropsvægten for OVX-gruppen var signifikant (p < 0.01)="" lavere="" end="" den="" for="" den="" falske="" gruppe="" (tabel="" 1).="" administration="" af="" cistanches="" herba-ekstrakt="" i="" en="" dosis="" på="" 100="" og="" 200="" mg/kg="" dagligt="" øgede="" signifikant="" (p="">< 0,05)="" rotters="" kropsvægt="" i="" den="" che-behandlede="" gruppe="" (100="" og="" 200="" mg/kg="" dagligt).="" data="" opnået="" fra="" dyr="" viste,="" at="" der="" var="" statistisk="" signifikante="" forskelle="" mellem="" bmd="" og="" bmc="" for="" ovx-gruppen="" og="" for="" den="" falske="" kontrol="" (p="">< 0,01).="" som="" forventet="" førte="" administration="" af="" cistanches="" herba-ekstrakt="" i="" en="" dosis="" på="" 200="" mg/kg="" til="" en="" signifikant="" stigning="" i="" bmd="" og="" bmc="" i="" den="" che-behandlede="" gruppe="" (p="">< 0,05;="" p=""><>

4. Diskussion

Osteoporose er en af ​​de mest almindelige lidelser forbundet med østrogenmangel og aldring. Overgangsalderen resulterer i forhøjet knogleomsætning, en ubalance mellem knogledannelse og knogleresorption og netto knogletab. Knogletab forårsaget af østrogenmangel skyldes primært en stigning i osteoklastisk knogleresorption hos både mennesker og forsøgsdyr [24].

Selvom osteoporose påvirker både ældre mænd og kvinder, har postmenopausale kvinder været det primære fokus for osteoporose [25,26]. En dramatisk mangel på kvindelige hormoner er den vigtigste faktor for postmenopausale kvinders osteoporose. OVX-rottemodellen er mest almindeligt anvendt i forskning i postmenopausal osteoporose [27,28], hvor ovariektomi resulterer i en overskydende knogleresorption i forhold til knogledannelse initialt og forårsager knogletab. OVX-operation forårsager en betydelig stigning i kropsvægten, som kunne være en guidepost til at evaluere operationens succes [29]. Ved afslutningen af ​​denne undersøgelse var OVX-gruppens kropsvægte markant reduceret sammenlignet med dem i den falske gruppe, og behandling med Cistanches Herba-ekstrakt forhindrede fuldt ud disse fald. Vi formoder, at OVX forårsagede alvorligt fysiologisk ubehag, som påvirkede rotternes fødeindtagelse. Efterfølgende blev OVX-gruppens kropsvægt markant reduceret.

Knoglemineraltæthed er blevet beskrevet som blot et surrogatmål for knoglestyrke [30]; mikroarkitektoniske egenskaber er imidlertid en nyligt opstået markør for evalueringen af ​​behandlingens sande indvirkning på kvaliteten af ​​trabekulær knogle. Selvom lav knoglemasse er en væsentlig risikofaktor for fraktur [31], bidrager bevarelsen af ​​trabekulær knoglearkitektur væsentligt til knoglestyrken og kan reducere frakturrisiko ud over BMD og BMC, som påvist af en række undersøgelser, der har rapporteret tætte korrelationer mellem mikrostrukturelle egenskaber og den biomekaniske styrke af knogler [32,33]. I dette arbejde blev BMD og BMC fundet at være signifikant forskellige mellem de sham- og ovariektomiserede grupper. Behandling med Cistanches Herba-ekstrakt forbedrede BMD og BMC signifikant hos OVX-rotter. Derudover øgede administrationen af ​​Cistanches Herba ekstrakter stadig betydeligt dosisafhængigt maksimal belastning, forskydning ved maksimal belastning, stress ved maksimal belastning, belastning ved auto break, forskydning ved auto break og stress ved auto break-in CHE-behandlede grupper sammenlignet med OVX-gruppen. Disse resultater indikerede, at lårbensknogler fra rotter fodret med Cistanches Herba-ekstrakt havde højere belastning ved svigt og derved kunne være mere modstandsdygtige over for stressfrakturer. Derudover havde rotter i OVX-gruppen højere Ca-, Zn- og Cu-niveauer i blodet end dem i den falske gruppe. Administration af Cistanches Herba-ekstrakt havde reduceret Ca-, Zn- og Cu-niveauer i blodet hos OVX-rotter.

Forestillingen om, at oxidativ status er vigtig ved osteoporose, stemmer overens med den stærke epidemiologiske sammenhæng mellem osteoporose og åreforkalkning, en sygdom, hvor oxidant-stress spiller en stor rolle. Desuden blev det for nylig observeret, at der er en sammenhæng hos kvinder mellem oxidant stress (målt ved en biomarkør for oxidativ stress, 8-iso-PGF2-) [34], antioxidantniveauer [35] og knoglemineraltæthed. Kliniske undersøgelser, der har undersøgt sammenhængen mellem kost og/eller supplerende ascorbat og knoglemasse hos mennesker, tyder også på en sammenhæng med øget knoglemasse [36].

Da MDA har høj reaktivitet over for aminogrupper, hæmmer det syntesen af ​​nukleinsyrer og proteiner og deaktiverer også enzymerne [37,38]. Faldet i femur-antioxidantenzymer observeret efter OVX kan således skyldes øget lipidperoxidation. Antioxidantenzymer er involveret i forsvarssystemet mod frie radikaler-medieret væv eller cellulær skade. De metaboliserer enten frie radikaler eller reaktive oxygenmellemprodukter til ikke-radikale produkter. Disse enzymer omfatter en familie af glutathion-afhængige enzymer [39]. I denne undersøgelse rapporterer vi et signifikant fald i niveauerne af antioxidantenzymer, dvs. SOD, GSH-Px, CAT i blodet fra ovariektomiserede rotter. Disse resultater tyder på, at mangel på ovariehormoner korrelerer med manglende bekæmpelse af oxidativt stress. Administration af Cistanches Herba-ekstrakter øgede signifikant dosisafhængigt blod-SOD, GSH-Px og CAT-aktiviteter hos OVX-rotter. Disse resultater synes at indikere en bedre beskyttende effekt af Cistanches Herba-ekstrakt mod oxidativ stress-induceret under OVX.

Sammenfattende er Cistanches Herba-ekstrakt effektivt til at forhindre knogletab forårsaget af ovariehormonmangel, set fra lårbens BMD, BMC-værdier og blod Ca, Zn og Cu-niveauer. Da osteoporose er forbundet med oxidativ stress, vidner undersøgelser af denne art om vigtigheden af ​​antioxidanters terapeutiske værdier. Vi antager, at Cistanches Herba-ekstrakt forbedrer knoglekvaliteten muligvis delvist ved at forbedre OVX-rotters antioxidante enzymaktiviteter og reducere knoglemineralelementer.

Cistanches Herba-ekstrakt: forhindrer knogletab

Referencer

1. Canalis, E.; Giustina, A.; Bilezikian, JP Mekanismer af anabolske terapier for osteoporose. N. Engl. J. Med. 2007, 357, 905-916.

2. Heaney, RP; Recker, RR; Saville, PD Menopausale ændringer i knogleombygning. J. Lab. Clin. Med. 1978, 92, 964-970.

3. McNamara, LM; Ederveen, AGH; Lyons, CG; Pris, C.; Schaffer, MB; Weinans, H.; Prendergast, PJ Styrke af cancelløst knogletrabekulært væv fra normale, ovariektomiserede og lægemiddelbehandlede rotter i løbet af aldring. Bone 2006, 39, 392-400.

4. Compston, JE Hormonerstatningsterapi. Clin. Rheumatol. 1997, 11, 583-596.

5. Meiner, SE En ekspanderende landskabsknogleskørhed: Behandlingsmuligheder i dag. Adv. Nurse Practice.1999, 7, 26-31.

6. Aubin, JE; Bonnelye, E. Osteoprotegerin og dets ligand: Et nyt paradigme for regulering af osteoklastogenese og knogleresorption. Osteoporos. Int. 2000, 11, 905-913.

7. Roodman, GD Fremskridt i knoglebiologi: Osteoklasten. Endocr. Rev. 1996, 17, 308-332.

8. Kastanje, CH, III. Lægemiddelbehandling: Calcitonin, bisfosfonater og anabolske steroider. I osteoporose: Ætiologi, diagnose og behandling; Riggs, BL, Melton, LJ, III, red.; Lippincott-Raven: Philadelphia, PA, USA, 1995.

9. Quan, Q.-M.; Wu, W.; Li, Y.-X.; Cai, Q.-R. Variation i indholdet af icariin og flavonoider i Barrenwort-arter. J. Med. Planter Res. 2010, 4, 1176-1181.

10. Du, XG; Pan, HZ; Zhang, CY; Zhang, HY; Liu, HM; Chen, ZY; Zeng, XY Zingiber officinale-ekstrakt modulerer g-stråle-induceret immunsuppression hos mus. J. Med. Planter Res. 2010, 4, 1647-1655.

11. Paschalis, EP; Betts, F.; DiCarlo, E.; Mendelsohn, R.; Boskey, AL FTIR mikrospektroskopisk analyse af human iliac crest biopsier fra den ubehandlede osteoporotiske knogle. Calcif. Tissue Int. 1997, 61, 487-492.

12. Motoie, H.; Kanoh, H.; Ogata, S.; Kawamuki, K.; Shikama, H.; Fujikura, T. Forebyggelse af knogletab med bisphosphonat YM175 hos ovarieektomerede hunde med diætcalciumrestriktion. Jpn. J. Pharmacol. 1996, 71, 239-246.

13. Lin, LW; Hsieh, MT; Tsai, FH; Wang, WH; Wu, CR Anti-nociceptiv og antiinflammatorisk aktivitet forårsaget af Cistanche deserticola hos gnavere. J. Ethnopharmacol. 2002, 83, 177-182.

14. Wu, XM; Gao, XM; Tsim, KW; Tu, PF En arabinogalactan isoleret fra stænglerne af Cistanche deserticola inducerer spredningen af ​​dyrkede lymfocytter. Int. J. Biol. Macromol. 2005, 37, 278-282.

15. Zeng, JC; Fan, YG; Liu, JR; Zeng YR; Yi, CZ; Liang Y. Eksperimentel undersøgelse af retningsbestemt differentiering af knoglemesenchymale stamceller (BMSC'er) til osteoblaster styret af serumholdig cistanche deserticola. Zhongguo Gu Shang 2010, 23, 606–608.

16. Chen, Z.-W.; Zhu, B.-D.; Xu H.-Y. Eksperimentundersøgelse af ørkenlevende cistanche-polysaccharider på reguleret hæmatogenese i knoglemarvsdeprimerede anæmimus. Hage. Arch. Tradition. Hage. Med. 2007, 25, 1473-1474.

17. Prakasam, G.; Ja, JK; Chen, M.-M.; Castro-Magana, M.; Liang, CT; Aloia, JF Virkninger af væksthormon og testosteron på kortikal knogledannelse og knogletæthed hos gamle ovariektomiserede rotter. Bone 1999, 24, 491-497.

18. McClung, JP; Stahl, CH; Marchitelli, LJ; Morales-Martinez, N.; Makin, KM; Young, AJ; Scrimgeour, AG Effekter af diætfytase på kropsvægtøgning, kropssammensætning og knoglebiomekanik hos voksende rotter fodret med en lav-zink-diæt. J. Nutr. Biochem. 2006, 170, 190-196.

19. King, EJ; Armstrong, AR En bekvem metode til bestemmelse af serum- og galdefosfataseaktivitet. Kan. Med. Assoc. J. 1934, 31, 376-381.

20. Jain, SK; McVie, R.; Duett, J.; Herbst, JJ Erytrocytmembranlipidperoxidation og glykosyleret hæmoglobin ved diabetes. Diabetes 1989, 38, 1539-1543.

21. Lawrence, RA; Burk, RF Glutathionperoxidaseaktivitet i selen-mangelfuld rottelever. Biochem. Biofys. Res. Commun. 1976, 71, 952-958.

22. Sun, Y.; Oberley, LW; Ying, L. En simpel metode til klinisk analyse af superoxiddismutase. Clin. Chem. 1988, 34, 497-500.

23. Abei, H. Catalase in vitro. Metoder Enzymol. 1988, 10, 121-126.

24. Mozaffari, Z.; Azarnia, M.; Abdolhamid Angaji, S. Evaluering af toksiske virkninger af Trigonella foenum-graecum bladvandekstrakt på udviklingen af ​​langt knoglevæv hos rottefostret. J. Med. Planter Res. 2010, 4, 1148-1155.

25. Buencamino, MCA; Sikon, AL; Jain, A.; Thacker, HL En observationsundersøgelse om overholdelse af retningslinjer for behandling af osteopeni. J. Women's Health 2009, 18, 873-881.

26. Schmitt, MN; Schmitt, J.; Dören, M. Fysisk aktivitets rolle i forebyggelsen af ​​osteoporose hos postmenopausale kvinder - en opdatering. Maturitas 2009, 63, 34-38.

27. Lelovas, PP; Xanthos, TT; Thomas, SE; Sangtekster, GP; Dontasi, IA Laboratorierotten som dyremodel til osteoporoseforskning. Comp. Med. 2008, 58, 424-430.

28. Ncango, DM; Pohl, CH; van Wyk, PWJ; Kock, JLF Ikke-steroide antiinflammatoriske lægemidler (NSAID'er) hæmmer væksten af ​​gærpatogener. Afr. J. Microbiol. Res. 2011, 5, 1123-1125.

29. Fazliana, M.; Nazaimoon, WMW; Gu, HF; Ostenson, CG Labisia pumila-ekstrakt regulerer kropsvægt og adipokiner hos ovariektomiserede rotter. Maturitas 2009, 62, 91-97.

30. Bourrin, S.; Ammann, P.; Bonjour, JP; Rizzoli, R. Genopretning af proksimal tibia-knoglemineraltæthed og -styrke, men ikke spongøs knoglearkitektur, efter langvarig bisphosphonat- eller selektiv østrogenreceptormodulatorterapi hos ældre rotter. Bone 2002, 30, 195-200.

31. Borah, B.; Dufresne, TE; Chmielewski, PA; Gross, GJ; Prenger, MC; Phipps, RJ Risedronat bevarer den trabekulære arkitektur og øger knoglestyrken i hvirvlen på ovariektomerede minigrise målt ved tredimensionel mikrocomputertomografi. J. Bone Miner. Res. 2002, 17, 1139-1147.

32. Müller, R.; Hannan, M.; Smith, SY; Bauss, F. Intermitterende ibandronat bevarer knoglekvalitet og knoglestyrke i lændehvirvelsøjlen efter 16 måneders behandling hos den ovariektomiserede cynomolgusabe. J. Bone Miner. Res. 2004, 19, 1787-1796.

33. Lane, NE; Kumer, JL; Majumdar, S.; Khan, M.; Lotz, J.; Stevens, RE; Klein, R.; Phelps, KV Virkningerne af syntetiske konjugerede østrogener, a (Cenestin) på trabekulær knoglestruktur og styrke i den ovariektomiserede rottemodel. Osteoporose Int. 2002, 13, 816-823.

34. Basu, S.; Michaelsson, K.; Olofsson, H.; Johansson, S.; Melhus, H. Sammenhæng mellem oxidativ stress og knoglemineraltæthed. Biochem. Biofys. Res. Commun. 2001, 288, 275-279.

35. Maggio, D.; Barabani, M.; Pierandrei, M.; Cristina Polidori, M.; Catani, M.; Mecocci, P.; Senin, U.; Pacifici, R.; Cherubini, A. Markant fald i plasmaantioxidanter hos ældre osteoporotiske kvinder: Resultater af en tværsnitsundersøgelse. J. Clin. Endokrinol. Metab. 2003, 88, 1523-1527.

36. Morton, DJ; Barrett-Connor, EL; Schneider, DL Vitamin C supplement brug og knoglemineraltæthed hos postmenopausale kvinder. J. Bone Miner. Res. 2001, 16, 135-140.

37. Fugl, RP; Draper, HH Effekt af malonaldehyd og acetaldehyd på dyrkede pattedyrceller: Vækstmorfologi og syntese af makromolekyler. J. Environ. Sundhed 1980, 6, 811-823.

38. Abdelhalim, MAK Den potentielle indflydelse af kost-induceret oxidativ stress med højt kolesterol på sammensætning og egenskaber af røde blodlegemer i kaniner. Afr. J. Microbiol. Res. 2010, 4, 836-843.

39. Chaudiere, J.; Ferrari-Illiou, R. Intracellulære antioxidanter fra kemiske til biokemiske mekanismer. Food Chem. Toxicol. 1999, 37, 949-962.