Forskel mellem phenylethanolglycosider i tabelcistancher Herba Fra 2 værter En forskel mellem phenylethanolglycosider i tabelcistancher Herba fra 2 værter baseret på UPLC-QQQ-MS og PLS-DA analyseret på UPLC-QQQ-MS og PLS-DA-analyse
May 30, 2025
Cistanche deserticolaer en flerårig holoparasitisk plante, der tilhører familien Orobanchaceae. Det er den tørrede kødfulde stilk dækket med skællignende blade afCistanche deserticola YC Ma[1-2]. Denne plante er hovedsageligt distribueret i Indre Mongoliet, Xinjiang og Gansu, hvor den parasittererHaloxylon ammodendron (CA Mey.) Bunge, en Chenopodiaceae xerofytisk ørkenplante [3-4]. De primære aktive komponenter afCistanche deserticolaomfatter phenylethanoidglycosider, iridoider og polysaccharider [5-7], som udviser egenskaber såsom beskyttelse af reproduktionsfunktioner, antioxidation og leverbeskyttelse [8-10]. Med mere end 2.000 års brug i Kina rangerer det først i recepter på traditionel kinesisk medicin, der sigter mod at styrke vitalitet og på andenpladsen i anti-aging formuleringer [11]. Men på grund af overhøst og miljøødelæggelse, vilde ressourcer afCistanche deserticolaer på randen af udryddelse, hvilket fører til dens klassificering som en nationalt beskyttet plante (Kategori II) og dens optagelse iInternational liste over vilde plantebeskyttelser[12]. For at imødegå ubalancen mellem udbud og efterspørgsel på lægemiddelmarkedet er kunstig dyrkning blevet afgørende for en bæredygtig udvikling afCistanche deserticolaindustri.
Cistanche deserticola ekstrakt til salg
Nylige undersøgelser har rapporteret vellykket inokulering afCistanche deserticolapåAtriplex canescens[13], en stedsegrøn busk af familien Chenopodiaceae. Almindeligvis omtalt som "biologisk afsaltningsmaskine",Atriplex canescenser en træart af høj kvalitet til salt-alkali jordforbedring [14]. DyrkerCistanche deserticolapåAtriplex canescensgiver betydelige fordele, såsom højt udbytte og overlegen kvalitet. Som et resultat evaluerer kvaliteten afAtriplex canescens-Cistanche deserticolaer blevet et forskningshotspot [15-16]. Tidligere forskning har hovedsageligt fokuseret på de medicinske egenskaber ved tørretCistanche deserticola, mens undersøgelser af de aktive komponenter i sin friske form forbliver sparsomme. Især efter medtagelsen afCistanche deserticolasom en fødevare og et lægemiddel under forsøgsstyringssystemet (Notice No. 9 of the National Health Commission, 2023), har dets udvikling og anvendelse som en lægeurt med to formål opnået betydelig opmærksomhed inden for traditionel kinesisk medicin [17]. FriskCistanche deserticolaer begunstiget for sin fremragende smag og bekvemmelighed, hvilket gør det meget lovende for udvikling. Friske medicinske materialer refererer til uforarbejdede friske plante-, dyre- eller svampestoffer med terapeutiske eller sundhedsfremmende egenskaber. Blandt de 2.000 almindeligt anvendte kinesiske lægeurter er 486 friske varianter [18].
Ultra-performance væskekromatografi-triple quadrupole tandem massespektrometri (UPLC-QQQ-MS) metoden er meget følsom, hvilket gør den velegnet til at detektere lav koncentration og komplekse komponenter [19]. For at løse problemet med højt vandindhold iCistanche deserticola, hvor phenylethanoidglycosider er tilbøjelige til enzymatisk hydrolyse, hvilket resulterer i reduceret indhold, bevarer en enzyminaktiverende tørringsmetode effektivt phenylethanoidglycosidindholdet [20]. Denne undersøgelse anvender UPLC-QQQ-MS til at evaluere 8 phenylethanoidglycosider, inklusive echinacosid og acteosid, som vigtige aktive komponenter i friskeCistanche deserticolafra to værtsplanter [21-22]. Undersøgelsen undersøger forskelle i komponentindholdet af juice og rester fra friskCistanche deserticoladyrket på to værter. Derudover blev resten underkastet enzyminaktiveringsbehandling ved 80 grader i 5 minutter efterfulgt af tørring for yderligere at sammenligne tilbageholdelsen af aktive komponenter iCistanche deserticola. Resultaterne sigter mod at give videnskabelig dokumentation og teknisk støtte til den dobbelte værdi af friskCistanche deserticolaog optimering af dets behandlingsteknikker.
1 Instrumenter og materialer
1.1 Instrumenter
1290-6460 ultra-performance væskekromatografi-tredobbelt kvadrupol tandem massespektrometer (Agilent Technologies, USA).
AL104 elektronisk analytisk vægt (Mettler-Toledo, Schweiz).
H-2050R centrifuge (Changsha Xiangyi Centrifuge Instrument Co., Ltd.).
SB25-12DTD ultralydsrens (Ningbo Xinzhi Biological Technology Co., Ltd.).
1.2 Materialer
DeAtriplex canescens-Cistanche deserticolaogHaloxylon ammodendron-Cistanche deserticolaprøver blev indsamlet i marts, april og maj 2024 fraCistanche deserticoladyrkningsbase i Xiquan Town, Jingtai County, Gansu-provinsen. Prøverne blev identificeret af professor Sun Xuegang fra Gansu Agricultural University som de kødfulde stængler afCistanche deserticola YC Mamed skælblade.
Referencestandarder:
Echinacoside (batchnummer: 23031605; renhed: 99,74%).
Acteosid (batchnummer: 21102103; renhed: 98,83%).
Cistanoside A (batchnummer: 23041703; renhed: 98,30%).
Isoacteosid (batchnummer: 23052508; renhed: 99,90%).
2'-acetylacteosid (batchnummer: 210053102; renhed: 97,12%).
Salidroside (batchnummer: 22051208; renhed: 98,43%).
Cistanoside B (batchnummer: 20120903; renhed: 98,57%).
Tubulosid A (batchnummer: 21060302; renhed: 93,24%).
Alle blev købt fra Chengdu Pfeide Biotechnology Co., Ltd.
Reagenser:
Methanol (batchnummer: O1140576, kromatografisk ren).
Acetonitril (batchnummer: S3641440, kromatografisk rent). Begge blev købt fra Shanghai Anpu Experimental Technology Co., Ltd.
Myresyre (batchnummer: 20230710, kromatografisk ren) blev købt fra Tianjin Kermio Chemical Reagent Co., Ltd.
Renset vand (Hangzhou Wahaha Group Co., Ltd.).
2 Metoder og resultater
2.1 Metoder
2.1.1 Prøveforberedelse
Tre partier afAtriplex canescens-Cistanche deserticola(batchnumre: 20240330-1, 20240420-1, 20240510-1) og tre batcher afHaloxylon ammodendron-Cistanche deserticola(batchnumre: 20240330-2, 20240420-2, 20240510-2), i alt seks batcher, med fem planter pr. batch, blev indsamlet. Planterne blev vasket rene med vand.
Forarbejdning:
Prøverne blev knust og saftpresset, hvilket resulterede i saft og rester fra de to værts-afledteCistanche deserticola.
Remanenserne blev tørret under to betingelser:
Uden enzyminaktivering.
Med enzyminaktivering (5 minutter ved 80 grader i ovn).
De tørrede rester blev opbevaret til yderligere analyse. Hver batch af medicinsk materiale blev opdelt i fire grupper, som vist i tabel 1.
Fane. 1 Eksempel på grupperingsoplysninger
| Gruppe | Type | Atriplex canescens-Cistanche deserticola | Haloxylon ammodendron-Cistanche deserticola |
|---|---|---|---|
| ① | Rest | C1 | S1 |
| ② | Juice | C2 | S2 |
| ③ | Enzyminaktiveret rest (5 min tørring, knust) | C3 | S3 |
| ④ | Ikke-enzym-inaktiveret rest (tørret og knust) | C4 | S4 |
2.1.2 Kromatografiske betingelser
Kolonne: Agilent Zorbax Eclipse Plus C18-søjle (2,1 mm × 150 mm, 1,8 μm).
Flowhastighed: 0,3 ml/min.
Injektionsvolumen: 1 μL.
Kolonnetemperatur: 35 grader.
Mobil fase: 0,1 % myresyre i vand (A) og acetonitril (B).
Analyse tid: 12 minutter.
Elueringsgradient:
0–1,5 min.: 10 % → 20 % B.
1,5–3 min.: 20 % → 30 % B.
3–5 min: 30 % → 32 % B.
5–8 min: 32 % → 38 % B.
8–9,6 min.: 38 % → 10 % B.
9,6-12 min.: 10 % B.
Kromatogrammerne for de blandede referencestandarder og testprøver er vist i figur 1.(Bekræft venligst, om den mobile fase er 0,01 % myresyre i vand (A) og acetonitril (B).)
Fig. 1 Kromatogrammer af referencestoffer(A) og prøve(B) 1−salidrosid; 2-echinacosid; 3-cistanosideA; 4−tubulosidA; 5-acteosid; 6-isoacteosid; 7-2'-acetylacteosid; 8-tubulosid B.
2.1.3 Massespektrometriske forhold
Ionkildetype: Elektrospray-ionisering (ESI).
Mode: Multipel reaktionsovervågning (MRM) i negativ ion-tilstand.
Ionkildetemperatur: 350 grader.
Nebulisatortryk: 35 psi.
Kollisionsgas: Nitrogen, indstillet til medium niveau.
Massespektrometriparametrene for komponenterne, der skal analyseres, er vist i tabel 2.
2.1.4 Fremstilling af blandet standardopløsning
Vej nøjagtigt passende mængder af referencestandarderneechinacoside, akteosid, cistanoside A, isoacteosid, 2'-acetylacteosid, salidroside, cistanoside B, ogtubulosid A, og anbring dem i 10 ml ravgule reagensflasker. Tilsæt 50 % methanol for at fremstille en blandet standardopløsning med en koncentration på 0,2 mg·mL⁻¹ og opbevar den til senere brug.
2.1.5 Forberedelse af testopløsninger
Vej nøjagtigt 0,2 g friskAtriplex canescens-Cistanche deserticolarest (Cl), friskHaloxylon ammodendron-Cistanche deserticolaremanens (S1), tørretAtriplex canescens-Cistanche deserticolarester (C3, C4) og tørretHaloxylon ammodendron-Cistanche deserticolarester (S3, S4). Anbring prøverne i 10 mL ravfarvede målekolber, tilsæt 50 % methanol, bring til volumen, og optag massen. Udblød i 0,5 time, ultralydbehandles i 40 minutter (250 W, 35 kHz), afkøles til stuetemperatur, og optag massen igen. Brug 50 % methanol til at kompensere for ethvert vægttab, bland godt, centrifuger, og lad opløsningen bundfælde sig. Filtrer supernatanten gennem en 0,22 μm mikroporøs membran for at opnå filtratet.
Til friskAtriplex canescens-Cistanche deserticolajuice (C2) og friskHaloxylon ammodendron-Cistanche deserticolajuice (S2), tag 10 mL af hver, vej nøjagtigt, bland godt, centrifuger og lad opløsningen bundfælde sig. Filtrer supernatanten gennem en 0,22 μm mikroporøs membran for at opnå filtratet.
2.1.6 Linearitetsundersøgelse
Passende mængder af den blandede standardopløsning fremstillet i afsnit 2.1.4 blev fortyndet for at skabe en koncentrationsgradient på51,2, 128,0, 320,0, 800,0, 4.000,0 og 20.000,0 ug·L⁻¹. Prøver blev injiceret sekventielt fra lave til høje koncentrationer efter betingelserne beskrevet i afsnit 2.1.2 og 2.1.3. En lineær regression blev udført under anvendelse af injektionskoncentrationen som X-aksen og toparealet som Y-aksen. De lineære forhold mellem de otte komponenter er vist i tabel 3.
Fane. 3 Lineære relationsundersøgelsesresultater af 8 komponenter i tabel Cistanches Herba
| Komponent | Regressionsligning | r | Lineært område (ug·L⁻¹) |
|---|---|---|---|
| Echinacoside | Y = 16.410 × X − 0.804 | 0.9996 | 51.2–20,000.0 |
| Acteosid | Y = 102.794 × X − 55.793 | 0.9998 | 51.2–20,000.0 |
| Isoacteosid | Y = 31.007 × X − 45.169 | 0.9999 | 51.2–20,000.0 |
| 2'-Acetylacteosid | Y = 110.235 × X − 8.953 | 0.9992 | 51.2–20,000.0 |
| Salidroside | Y = 19.678 × X − 0.557 | 0.9993 | 51.2–20,000.0 |
| Tubulosid A | Y = 26.785 × X − 13.630 | 0.9997 | 51.2–20,000.0 |
| Tubulosid B | Y = 71.810 × X − 0.993 | 0.9998 | 51.2–20,000.0 |
| Cistanoside A | Y = 0.578 × X + 1.531 | 0.9994 | 51.2–20,000.0 |
2.1.7 Præcisionstest
Den blandede standardopløsning fremstillet under betingelserne i afsnit 2.1.4 blev fortyndet med 50 % methanol og injiceret seks på hinanden følgende gange under betingelserne i afsnit 2.1.2 og 2.1.3. De relative standardafvigelser (RSD'er) af toparealerne forechinacoside, akteosid, isoacteosid, 2'-acetylacteosid, salidroside, cistanoside B, tubulosid A, ogcistanoside Avar henholdsvis 0,95 %, 1,47 %, 0,56 %, 1,05 %, 0,93 %, 1,08 %, 1,19 % og 0,91 %, hvilket indikerer god præcision.
2.1.8 Stabilitetstest
En enkelt prøve afCistanche deserticola(S4) blev fremstillet under betingelserne beskrevet i afsnit 2.1.5. Testopløsningen blev injiceret og analyseret efter 0, 2, 4, 8, 12 og 24 timer under betingelserne beskrevet i afsnit 2.1.2 og 2.1.3. RSD'erne for topområderne forechinacoside, akteosid, isoacteosid, 2'-acetylacteosid, salidroside, cistanoside B, tubulosid A, ogcistanoside Avar henholdsvis 1,46 %, 0,79 %, 0,95 %, 1,29 %, 1,22 %, 0,56 %, 0,49 % og 1,18 %, hvilket indikerer, at prøveopløsningen var stabil inden for 24 timer.
2.1.9 Repeterbarhedstest
Et enkelt parti afCistanche deserticola(S4) prøve (batchnummer: 20240420-2) blev fremstillet i seks parallelle testopløsninger under betingelserne beskrevet i afsnit 2.1.5. Prøverne blev injiceret og analyseret under betingelserne beskrevet i afsnit 2.1.2 og 2.1.3. RSD'erne for indholdet tilechinacoside, akteosid, isoacteosid, 2'-acetylacteosid, salidroside, cistanoside B, tubulosid A, ogcistanoside Avar henholdsvis 1,26 %, 0,98 %, 1,55 %, 1,06 %, 1,33 %, 0,99 %, 1,65 % og 0,95 %, hvilket viser god repeterbarhed.
2.1.10 Gendannelsestest
Ni prøver fra samme batch afCistanche deserticola(S4, batchnummer: 20240420-2) blev fremstillet med 0,1 g pr. prøve. Prøverne blev opdelt i tre grupper med tre replikater pr. gruppe. Hver gruppe blev tilsat 80 %, 100 % og 120 % af referencestandardindholdet iCistanche deserticolaprøve. Testopløsningerne blev fremstillet efter metoden beskrevet i afsnit 2.1.5 og analyseret under betingelserne i afsnit 2.1.2 og 2.1.3. Genvindingerne af de otte phenylethanoidglycosider blev beregnet, og resultaterne er vist i tabel 4.
Fane. 4 Gendannelseshastigheder for 8 testede komponenter i Cistanches Herba
| Komponent | Eksempelindhold (mg) | spids (mg) | Målt (mg) | Gennemsnitlig gendannelse (%) | RSD (%) |
|---|---|---|---|---|---|
| Echinacoside | 0.513 8 | 0.410 1 | 0.911 2 | 99.85 | 1.37 |
| Echinacoside | 0.513 8 | 0.513 8 | 1.015 2 | 99.88 | 0.95 |
| Echinacoside | 0.513 8 | 0.616 5 | 1.129 4 | 99.85 | 1.06 |
| Acteosid | 0.421 5 | 0.337 2 | 0.759 6 | 99.90 | 1.02 |
| Acteosid | 0.421 5 | 0.421 5 | 0.843 5 | 99.87 | 1.18 |
| Acteosid | 0.421 5 | 0.505 8 | 0.926 7 | 99.84 | 1.24 |
| Isoacteosid | 0.327 1 | 0.261 7 | 0.588 6 | 99.85 | 0.86 |
| Isoacteosid | 0.327 1 | 0.327 1 | 0.654 2 | 99.86 | 1.05 |
| Isoacteosid | 0.327 1 | 0.392 5 | 0.719 1 | 99.84 | 1.13 |
| 2'-Acetylacteosid | 0.110 2 | 0.088 2 | 0.198 3 | 99.87 | 1.15 |
| 2'-Acetylacteosid | 0.110 2 | 0.110 2 | 0.220 1 | 99.86 | 1.09 |
| 2'-Acetylacteosid | 0.110 2 | 0.132 2 | 0.242 4 | 99.85 | 1.21 |
| Salidroside | 0.081 6 | 0.065 3 | 0.146 7 | 99.84 | 1.18 |
| Salidroside | 0.081 6 | 0.081 6 | 0.163 1 | 99.85 | 1.02 |
| Salidroside | 0.081 6 | 0.097 9 | 0.179 7 | 99.84 | 1.17 |
| Tubulosid B | 0.072 3 | 0.057 9 | 0.130 0 | 99.86 | 1.09 |
| Tubulosid B | 0.072 3 | 0.072 3 | 0.144 1 | 99.86 | 1.05 |
| Tubulosid B | 0.072 3 | 0.086 8 | 0.159 2 | 99.84 | 1.24 |
| Tubulosid A | 0.043 8 | 0.035 0 | 0.078 5 | 99.86 | 1.16 |
| Tubulosid A | 0.043 8 | 0.043 8 | 0.087 5 | 99.86 | 1.02 |
| Tubulosid A | 0.043 8 | 0.052 5 | 0.096 2 | 99.84 | 1.15 |
