Bestemmelse af Echinacosid i vandekstrakt af Cistanche Herba ved HPLC

Abstrakt:

Formål En HPLC-metode blev etableret forbestemmelse af echinacosidivandekstrakt af Cistancheherba.

Metoder Echinacoside blev bestemt ved HPLC. Adskillelsen blev udført på Inertsil ODS-SP C18-søjlen med en mobil fase bestående af acetonitril(A) og 0.4% phosphorsyreopløsning(B), ved gradienteluering. Detektionsbølgelængden blev sat til 333 nm, og kolonnetemperaturen var 30 grader. Strømningshastigheden var 1,0 mL·min-1 og injektionsvolumenet var 10 μL. Resultater Den lineære relation mellem echinacosid inden for koncentrationsområdet 44.939 7-539.276 4 ug ·mL- 1 var god(r=0.999 8). Gendannelserne var 94,59 %-105,31 % (RSD= 2,93 %,n=9). Indholdet af echinacosid i vandekstrakter af Cistanche herba var 15.527,7.347,12.267 mg·g-1. Konklusion Den etablerede HPLC-metode med god repeterbarhed er nøjagtig, enkel og gennemførlig. Det er velegnet til bestemmelse af echinacosid i vandekstraktet af Cistanche herba.

Nøgleord:HPLC;vandekstrakt af Cistanche herba; echinacoside; fastlæggelse af indhold

Cistanche deserticola er en tonic traditionel kinesisk medicin, der almindeligvis anvendes i klinisk praksis og er kendt som "ørkenginseng" [1]. Cistanche deserticola optaget i 2015-udgaven af ​​den kinesiske farmakopé er den tørrede kødfulde stilk med skællende blade af Cistanche deserticola YC Ma eller Cistanche tubulosa (Schenk) Wight. Den er varm, sød og salt og vender tilbage til nyrernes og tyktarmens meridianer. Det har virkningerne af nærende nyre-yang, genopfyldning af essens og blod og fugter tarmene og afføringsmidler [2]. "Shen Nongs Materia Medica," siger, at den kan "tonificere midten, nære de fem indre organer, styrke yin og nære essensen". Cistanche deserticola indeholder hovedsageligt phenylethanoidglycosider, iridoider og deres glycosider, lignaner og deres glycosider, polysaccharider, esterforbindelser og alkaloider [3]. Phenylethanolglycosider er de vigtigste aktive ingredienser i Cistanche deserticola. Blandt dem er echinacoside og verbascoside opført i Cistanche deserticola i den kinesiske farmakopé.

Vejledende komponenter til identifikation og indholdsbestemmelse. Farmakologiske undersøgelser [4] viser, at Cistanche deserticola har forskellige farmakologiske virkninger såsom afføringsmiddel, leverbeskyttelse, anti-osteoporose, antioxidant, anti-aging og anti-træthed. Cistanche deserticola vandig ekstrakt kan fremme ekspressionen af ​​knoglemorfogenetisk protein 2-gen i rotte-osteoblaster, tartrat-resistent sur fosfatase, osteocalcin i serum fra ovariektomiserede mus og Smad1, mad5-gener, transformerende vækstfaktor- osv. i knoglemarven. , har anti-osteoporose virkninger [5-6].

Echinacea kan fremme proliferationen af ​​osteoblaster og fremme differentieringen af ​​knoglemarvs mesenkymale stamceller dyrket in vitro til osteoblaster [7-9]. I de senere år har der været mange forskningsrapporter om indholdsbestemmelse af echinacosid og verbascosid i Cistanche deserticola ethanolekstrakt og dets sammensatte præparater [10-12], men der er få rapporter om indholdsbestemmelse af indekskomponenter i Cistanche deserticola vandigt ekstrakt. I denne undersøgelse blev højtydende væskekromatografi (HPLC) brugt til at bestemme indholdet af echinaceaside i det vandige ekstrakt af Cistanche deserticola.

1 materiale

1.1 Instrumenter

LC-20AT højtydende væskekromatografi, SPD-20A-detektor, SIL-20A autosampler, CTO-10ASvp-søjleovn, LC-væskekromatografiarbejdsstation, Shimadzu Corporation of Japan; MES125P-OCE-DU elektronisk analytisk vægt, Sartorius Company, Tyskland; SHZ-D (Ⅲ) cirkulerende vand multi-purpose vakuumpumpe, Henan Yuhua Instrument Co, Ltd; RC2B SO25 rotationsfordamper kølecirkulationssystem, RV 10 D S96 rotationsfordamper, IKA Company, Tyskland; DK-S26

Elektrisk konstant temperatur vandbad, Shanghai Jinghong Experimental Equipment Co, Ltd; UPR-serien ultrarent vandmaskine, Sichuan Youpu Ultrapure Technology Co., Ltd.

1.2 Medicinske materialer og reagenser

Cistanche deserticola medicinsk materiale blev købt fra Guangzhou Lingnan Traditional Chinese Medicine Pieces Co., Ltd., batchnummer: 1801001, 1806001, 181001. Tu Xingming, den traditionelle kinesiske cheffarmaceut ved Third Affiliated Hospital of Guangzhou University of Chinese Medicine, som den tørrede kødfulde stilk med skællende blade af Cistanche deserticola YCMa. Prøven opbevares i Drug Testing Room på det tredje tilknyttede hospital ved Guangzhou University of Chinese Medicine; Echinacea Glycoside referencestof, indhold 89,7 %, China Institute of Food and Drug Control, batchnummer: 111670-

201706; acetonitril er kromatografisk ren (Merck, Tyskland); methanol og phosphorsyre er analytisk rene (Tianjin Fuyu Fine Chemical Co., Ltd.); vand er ultrarent vand.

2 Metoder og resultater

2.1 Fremstilling af vandekstrakt af Cistanche deserticola

Tag det grove pulver af Cistanche deserticola medicinsk materiale, tilsæt 10 gange mængden af ​​destilleret vand, opvarm og tilbagesval til ekstraktion to gange, 1 time hver gang, filtrer, kombiner filtratet og koncentrer filtratet med en rotationsfordamper til et råstofindhold på 0,100 g·mL-1, og opbevar det ved 4 grader til senere brug.

2.2 Kromatografiske forhold og systemegnethed

Kromatografisk søjle: Inertsil ODS SP C18 søjle (150 mm × 4,6 mm, 5 μm); mobil fase: acetonitril (A)-0.4 % fosforsyreopløsning (B), gradienteluering: 0 ~ 5 min., 17 %

EN; 5 ~ 25 min, 20% A; 25 ~ 30 min., 17% A; detektionsbølgelængde: 333 nm; kolonnetemperatur: 30 grader; flowhastighed: 1,0 mL·min-1;

Injektionsvolumen: 10 μL. Under disse kromatografiske forhold er adskillelsen mellem echinacoside og tilstødende komponenttoppe større end 1,5, og antallet af teoretiske plader baseret på echinaceaside-toppen bør ikke være mindre end 4,000. Kromatogrammet er vist i figur 1.

2.3 Fremstilling af opløsning

2.3.1 Referencestofopløsning Vej en passende mængde echinacosid-referencestof, vej det nøjagtigt, anbring det i en 10 ml målekolbe, tilsæt methanol for at opløse det, og klargør en referencestofopløsning indeholdende 898.794 ug echinaceaside pr. ml, 4 grader Gem til senere brug.

2.3.2 Testopløsning

Mål nøjagtigt 2.0 mL vandig Cistanche deserticola-ekstrakt, inddamp til tørhed i et vandbad, tilsæt methanol for at opløse, fortynd til volumen i en 10 mL målekolbe, ryst godt og filtrer med en 0,22 μm mikroporøs membran for at opnå.

2.4 Undersøgelse af lineær sammenhæng

Mål præcist {{0}}.25, 0.50, 1.00, 2.00, 2.50, 3.00 mL af referenceopløsningen under punkt 2.3.1, anbring den i en 5 mL målekolbe, tilsæt methanol for at fylde op til volumen, og ryst godt for at opnå en gradientkoncentration på 44.{{17} }, 89.879 4. 179.758 8, 359.517 6, 449.397 0, 539.276 4 ug·mL-1 referenceopløsning, filtreret gennem 0,22 μm mikroporøs membran. Mål i henhold til de kromatografiske betingelser under 2.2, og optag toparealet. Udfør lineær regression med massekoncentrationen af ​​referencestoffet som abscisse (X, ug·mL-1) og toparealet som ordinat (Y), og regressionsligningen opnås: Y=13 185 .0X-32 273.0, r=0.999 8. Resultaterne viser, at echinacea har et godt lineært forhold inden for koncentrationsområdet på 44.939 7 ~ 539.276 4 ug·mL-1.

2.5 Præcisionstest

Tag 539.276 4 ug ·mL- 1 referenceopløsning, injicer og mål 6 gange kontinuerligt i henhold til de kromatografiske forhold under 2.2, og noter toparealet. Resultaterne viste, at RSD for echinacoside-topområdet var 1,81%, hvilket indikerer god instrumentpræcision.

2.6 Stabilitetstest

Mål nøjagtigt 2.0 mL vandig Cistanche deserticola-ekstrakt, inddamp til tørhed i et vandbad, tilsæt methanol for at opløse, fortynd til en 10 mL målekolbe, ryst godt, filtrer med en {{ 7}}.22 μm mikroporøs membran, følg de kromatografiske betingelser under punkt 2.2 og anbring ved henholdsvis 0 og 2. , 4, 8, 12, 24 timers injektionsmåling, optag toparealet. Resultaterne viste, at RSD for echinacoside-topområdet var 1,16 %, hvilket indikerer, at testopløsningen havde god stabilitet inden for 24 timer.

2.7 Repeterbarhedstest

Mål nøjagtigt 2,0 mL Cistanche deserticola-vandekstrakt og tilbered 6 testopløsninger parallelt i overensstemmelse med metoden under 2.3.2. Injicer prøver til måling i henhold til de kromatografiske betingelser under 2.2 og noter toparealet. Resultaterne viste, at RSD forechinacosidemassekoncentrationen var 1,28%, hvilket indikerer god repeterbarhed af metoden.

2.8 Prøve recovery test

Mål nøjagtigt 9 portioner af 1,0 mL Cistanche deserticola-vandekstrakt, tilsæt 0.8, 1.0 og 1,2 mL referenceopløsning (1,552 mg·mL{{11 }}), inddamp til tørhed i et vandbad, tilsæt methanol for at opløse, og juster til en 10 ml målekolbe; Ryst godt og filtrer gennem en 0,22 μm mikroporøs membran for at forberede høj-, medium- og lavkoncentrationsprøveopløsninger. Forbered 3 kopier af hver koncentration parallelt. Mål efter de kromatografiske betingelser under 2.2. Registrer toparealet og beregn prøvegenvindingen. Sats. Resultaterne er vist i tabel 1.

2.9 Bestemmelse af prøveindhold

Mål nøjagtigt 3 portioner af 2,0 mL vandig Cistanche deserticola-ekstrakt, inddamp til tørhed i et vandbad, tilsæt methanol for at opløse, fortynd til en 10 mL målekolbe, ryst godt, filtrer med en 0,22 μm mikroporøs membran, og mål efter de kromatografiske forhold under 2.2. Registrer toparealet og beregn indholdet af echinaceaside. Resultaterne er vist i tabel 2.

Tabel 1 Resultater af restitutionstest af echinacosid

Tabel 2 Resultater af indholdsbestemmelse af echinacosid i vandekstrakt af Cistanche herba