Indholdsbestemmelse af fem forbindelser i Semen Rehmanniae og etablering af dets HPLC-fingeraftryk

Tabel 3 Resultater af gendannelsestest (n=6)

2.4 Prøvebestemmelse

De seks partier af Rehmannia opsamlet blev fremstillet ifølge metoden under "2.2.2" og prøvet og bestemt i overensstemmelse med de kromatografiske betingelser under "2.1". Resultaterne af indholdsbestemmelsen er vist i tabel 4. Resultaterne viser, at blandt de fem komponenter er indholdet af rehmannia glycosid D det højeste, der spænder fra 0.460 % til {{1 0}}.730 %; indholdet af leonuri-glykosid er nummer to, der spænder fra 0,100 % til 0,270 %, og indholdet af de to komponenter i prøver fra forskellige produktionsområder er ikke signifikant forskelligt. I prøve SX1, bortset fra echinacoside, er indholdet af de andre fire komponenter væsentligt højere end indholdet af andre batcher af prøver; indholdet af echinacoside, cistancheside A og verbascoside i Rehmannia glutinosa fra forskellige produktionsområder er ret forskellige og uregelmæssige.

CISTANCHE URT MEDGOD KVALITET KONSISTENS

2.5 Etablering og lighedsevaluering af HPLC-fingeraftryk af Rehmannia glutinosa

Kromatogrammerne og dataene for multikomponentindholdsbestemmelsen i Rehmannia glutinosa blev importeret til "Chinese Herbal Medicine Chromatography Fingerprint Similarity Evaluation System (2012 Edition)"-software, og kromatogrammet for SX1-testprøven blev valgt som referencespektrum. Tidsvinduets bredde blev sat til 0.10 min, og medianmetoden blev brugt til at generere overlejrede spektre og referencespektre. I alt 23 almindelige toppe blev identificeret (se figur 3). Ligheden mellem fingeraftrykkene fra Rehmannia glutinosa-prøven og referencen var 0,904~0,950, hvilket indikerer, at prøverne af Rehmannia glutinosa fra forskellige produktionsområder og mellem rå Rehmannia glutinosa og kogt Rehmannia glutinosa var ens og havde god konsistens.

Tabel 4 Indholdsbestemmelsesresultater af 5 komponenter i Semen Rehmanniae/%

13. rehmanniosid D; 17. leonurid; 19. echinacoside; 20. castanosid A; 21. akteosid

Figur 3 Overlejrende HPLC-kromatogrammer af 6 batches af Semen Rehmanniae (SX1-SX4, HN1, HN2) og reference (R)

3 Diskussion

3.1 Valg af kromatografiske forhold

Fire mobilfasesystemer, acetonitril-vand, acetonitril-0,1 % myresyreopløsning, methanol-vand og methanol-0,1 % myresyreopløsning, blev undersøgt i denne undersøgelse. Resultaterne viste, at de fem komponenter havde gode separationseffekter i acetonitrilsystemet; sammenlignet med acetonitril-vand-mobilfasesystemet var toppene af rehmannia glutinosa og motherwort-glycosider i acetonitril--0.1 % myresyreopløsnings-mobilfase smallere og havde god topsymmetri. Samtidig varierer indholdet af komponenterne meget på grund af den forskellige ultraviolette absorption af de fem komponenter. For mere præcist at bestemme indholdet af hver komponent og sikre, at absorptionsintensiteten af ​​de fem komponenter er jævnt fordelt i samme kromatogram, skal den ultraviolette absorption afrehmannia glycosid D, moderurtglycosid, echinacosid, cistancheside A og verbascoside blev analyseret, og variabel bølgelængdebestemmelse blev valgt, dvs. 0-24 min., det første separerede rehmannia-glycosid blev bestemt ved 203 nm og 24-40 min. det adskilte echinacoside, cistancheside A og verbascoside blev bestemt ved 330 nm. Derudover undersøgte denne undersøgelse også ekstraktionseffekterne af methanol, 70% methanolopløsning, 50% methanolopløsning og 50% acetonitrilopløsning som ekstraktionsopløsningsmidler. Resultaterne viste, at 70 % methanolopløsning som ekstraktionsopløsningsmiddel bedre kan opløse de komponenter, der skal testes, og den ekstraherede prøve har færre urenheder. Derfor valgte denne undersøgelse 70% methanol som ekstraktionsopløsningsmidlet, acetonitril-0.1% myresyreopløsning som mobilfasesystemet og brugte variabel bølgelængde til at bestemme indholdet af de fem komponenter i Rehmannia.

3.2 Analyse af prøvebestemmelsesresultater

Af bestemmelsesresultaterne kan det ses, at efter dampning, bortset fra en let stigning i indholdet af echinacosid, var indholdet af de øvrige fire komponenter væsentligt reduceret, især indholdet af leonurisid og cistancheside A; indholdet af rehmannia glycosid D og cistancheside A i Rehmannia glutinosa fra samme produktionsområde var lidt forskelligt, og indholdet af leonurisid, echinacosid og verbascosid var signifikant forskelligt; indholdet af echinacosid i Rehmannia glutinosa fra Henan produktionsområde var signifikant højere end i prøverne fra Shanxi produktionsområde, og indholdet af de andre fire komponenter var lidt anderledes. Samtidig var ligheden mellem de 6 batcher af Rehmannia-prøver og kontrolfingeraftrykket i henhold til HPLC-fingeraftrykket etableret i denne undersøgelse 0.904~0.950, hvilket indikerer, at det vigtigste kemikalie komponenterne i de 6 batcher af Rehmannia-prøver før og efter behandling var meget konsistente.

Sammenfattende er indholdsbestemmelsesmetoden og HPLC-fingeraftryk etableret i denne undersøgelse nøjagtige, pålidelige og har god specificitet. De kan bruges til at karakterisere ændringerne i komponenterne og graden af ​​forarbejdning af Rehmannia glutinosa før og efter forarbejdning, og yde teknisk support til kvalitetskontrollen af ​​Rehmannia glutinosa. Denne undersøgelse har dog ulemperne ved små prøvepartier og ufuldstændig dækning af produktionsområder, hvilket kræver yderligere analyse og verifikation.

Referencer

[1] Udvalget for den kinesiske farmakopé. Farmakopé af Folkerepublikken Kina: bind 1 [S]. Beijing: China Medical Science and Technology Press, 2020: 129-130.

[2] Xu Jun, Fu Zhetong. Forskning i den historiske udvikling af navnene på forarbejdet Rehmannia glutinosa og undersøgelsen af ​​dens effektivitet [J]. Chinese Patent Medicine, 2017, 39 (9): 1913-1916.

[3] Zhu Jue, Zhu Xiangmei, Shi Yuhe, et al. Forskningsfremskridt om Rehmannia glutinosa og forudsigelsesanalyse af dets kvalitetsmarkører [J]. Chinese Patent Medicine, 2022, 45 (2): 1273-1281.

[4] Chen Jinpeng, Zhang Kexia, Liu Yi, et al. Forskningsfremskridt om den kemiske sammensætning og farmakologiske virkninger af Rehmannia glutinosa [J]. Chinese Herbal Medicine, 2022, 52 (6): 1772-1784.

[5] Li Hongwei, Meng Xiangle. Forskningsfremskridt om kemiske komponenter og farmakologiske virkninger af Rehmannia glutinosa［J］.

Drug Evaluation Research, 2015, 38(2): 218-228.

[6] Zhang Boyong, Jiang Zhenzuo, Wang Yuefei, et al. Analyse af kemiske komponenter i frisk Rehmannia glutinosa, rå Rehmannia glutinosa og kogt Rehmannia glutinosa ved UPLC/ESI-Q-TOF MS［J］. Kinesisk patentmedicin, 2016, 38(5): 1104-1108.

[7] Zhang Lixian, Wei Yue, Li Feifei, et al. Fingeraftryksmønstergenkendelse og multi-komponent indholdsbestemmelse af forskellige forarbejdede Rehmannia glutinosa produkter［J］. Hubei Agricultural Sciences, 2023, 62(9): 135-141.

[8] Chen Jinpeng, Zhang Kexia, Liu Yi, et al. Forskningsfremskridt om kemiske komponenter og farmakologiske virkninger af Rehmannia glutinosa［J］. Chinese Herbal Medicine, 2021, 52(6): 1772-1784.

[9] Tao Yi, Jiang Yanhui, Tang Kejian, et al. Sammenlignende undersøgelse af kemiske komponenter af Rehmannia glutinosa før og efter behandling med UHPLC-Q-TOF/MS［J］. New Chinese Medicines and Clinical Pharmacology, 2016, 27(1): 102-106.

［10］ Xu Zhuo, Dai Xinxin, Su Shulan, et al. Dynamisk akkumulering af nukleosid- og aminosyrekomponenter i Rehmannia glutinosa baseret på UPLC-TQ-MS［J］. Chinese Herbal Medicine, 2021, 52(23): 7323-7330.

［11］ Li Yujiao. Undersøgelse af behandlingsteknologien og mekanismen for "ni dampning og ni eksponering" af Rehmannia glutinosa［D］. Jinan: Shandong University, 2023.

［12］ Wang Yue, Zhou Qiao, Zhang Xuelan, et al. HPLC Samtidig bestemmelse af indholdet af otte komponenter i Rehmannia glutinosa og dets forskellige forarbejdede produkter ved UPLC fingeraftryksanalyse og multi-indeks komponent indholdsbestemmelse [J]. Chinese Medicinal Materials, 2021, 44 (7): 64-68.

[13] Guo Xiaokai, Xue Shujuan, Chen Suiqing. Kvalitetsevaluering af Rehmannia glutinosa baseret på UPLC-fingeraftryk og multi-indeks komponentindholdsbestemmelse [J]. Chinese Medicinal Materials, 2021, 44 (4): 917-923.