Sammenligning af indholdsforskelle mellem otte kemiske komponenter i rå- og vinforarbejdede produkter af to slags Cistanche Deserticola baseret på UPLC Ⅱ

2. Metoder og resultater

2.1 Kromatografiske forhold

UPLC-analyse blev udført under anvendelse af enWaters ACQUITY UPLC™ BEH C18 kolonne (100 mm × 2,1 mm, 1,7 μm partikelstørrelse). Den mobile fase bestod afmethanol (A)og0,1 % vandig myresyreopløsning (B)med følgende gradienteluering:

0–4 min: 10 % → 26 % A

4–18 min.: 26 % → 40 % A

18–20 min: 40 % → 50 % A

Flowhastighed:0,3 ml/min
Injektionsvolumen:3 μL
Kolonnetemperatur:35°C
Detektionsbølgelængde:330 nm

2.2 Udarbejdelse af løsninger

2.2.1 Blandet referenceopløsning

Vej nøjagtigt følgende standardforbindelser:cistanoside F, echinacoside, cistanoside A, verbascoside, tubulosid A, isoverbascoside, 2'-acetylverbascosid, ogtubulosid B. Opløs i 50 % methanol for at fremstille en referenceblanding med følgende koncentrationer (µg·mL⁻¹):

Cistanoside F: 32,7

Echinacoside: 102,4

Cistanosid A: 50,2

Verbascoside: 80,6

Tubulosid A: 25,6

Isoverbascoside: 86.3

2'-acetylverbascosid: 77,3

Tubulosid B: 60,8

2.2.2 Prøveopløsning

Rå Cistanche skiverblev tilberedt ved at blødgøre urten, skære den i skiver og tørre den.
Vindampet Cistancheblev tilberedt ved at lægge rå skiver i blød i 30 % risvin, dampe blandingen i 12 timer, afkøle og tørre igen.

Tilnærmelsesvis0.2 gtørret pulver (passeret gennem en 65-mesh sigte) blev vejet i en 50 ml ravfarvet målekolbe, ekstraheret med 25 ml 50% methanol, sonikeret i 40 minutter (250 W, 35 kHz) og bragt tilbage til vægten. Opløsningen blev filtreret gennem en0,22 μm membranog filtratet blev anvendt til analyse.

Note: H. Desert Cistanche; G. Tubulosa Cistanche; RH. Cistanche deserticola rå skiver; RG. Cistanche tubulosa rå skiver; WH. Cistanche deserticola stuvet med vin; WG. Cistanche tubulosa stuvet med vin; Figur 4 til 7 er de samme.
Figur 1 Billeder af Cistanche deserticola og Cistanche tubulosa medicinske materialer, rå skiver og kogt med vin

en berømt cistanche-vin, der sælges i Kina

Køb nu

Understøttende service af Wecistanche-The Kontakt os for at få en prøve eller engrosoplysninger
E-mail:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/tlf.:+86 15292862950

2.3 Kvantitativ analyse af 8 hovedforbindelser i rå- og vinforarbejdede Cistanche

2.3.1 Systemets egnethed

Under de beskrevne kromatografiske forhold, teoretisk pladenummer forechinacoside exceeded 6000 with good resolution (>1,5). Kromatogrammer af den blandede standard, rå ørken Cistanche og vinbearbejdede prøver er vist i figur 2.

Peak Identifikation:

Cistanoside F

Echinacoside

Cistanoside A

Verbascoside

Tubulosid A

Isoverbascoside

2'-acetylverbascosid

Tubulosid B

cistanche deserticola

cistanche tubulosa

2.3.2 Linearitet og detektionsgrænser

Standardkalibreringskurver blev etableret under anvendelse af serielle fortyndinger af referenceblandingen ved koncentrationer på 0,1 til 5,0 ml. Kalibreringskurver blev genereret ved plotningkoncentration (X)modtopareal (Y). Detektionsgrænser (LOD, S/N=3) og kvantificeringsgrænser (LOQ, S/N=10) blev bestemt og bekræftede god linearitet på tværs af de testede områder.

2.3.3 Præcision

Seks gentagne injektioner af den blandede referenceopløsning visterelative standardafvigelser (RSD'er)af topområder spænder fra0,48 % til 2,14 %, hvilket indikerer fremragende instrumentpræcision.

2.3.4 Stabilitet

Prøve løsninger afrå Cistanche-pulver (batchnr.. 160901)blev analyseret efter 0, 2, 4, 8, 12 og 24 timer. RSD'erne for topområder for alle 8 forbindelser varierede fra0,71 % til 1,93 %, bekræfteropløsningsstabilitet inden for 24 timer.

Tabel 1. Prøveoplysninger om Cistanche-materialer

2.3.5 Gentagelighed

Seks uafhængigt fremstillede replikater af den samme Cistanche-batch viste god repeterbarhed. Gennemsnitligt indhold (mg·g⁻¹) og RSD'er var som følger:

2.3.6 Gendannelsestest

Gendannelse blev testet ved spikingseks replikater af Cistanche-pulver (0,1 g)med kendte koncentrationer af de 8 referenceforbindelser. Gennemsnitlige inddrivelser varierede fra95,56 % til 102,71 %, med RSD'er imellem1,44 % og 2,97 %, angiverfremragende ekstraktions- og kvantificeringssikkerhed.

Bemærk: A. Blandet reference; B. Rå Cistanche deserticola; C. Stuvet Cistanche deserticola i vin; 1. Cistancheside F; 2. Echinacoside; 3. Cistancheside A; 4. Verbascoside; 5. Tubulosid A; 6. Isoverbascosid; 7. 2΄-acetylverbascosid; 8. Tubulosid B.

2.3.7 Kvantificering af aktive forbindelser i rå vs. vinbearbejdet Cistanche

Hver prøve blev testet i to eksemplarer. De 8 målforbindelser blev kvantificeret i10 partier Cistanche deserticola(rå og vinforarbejdet) og10 partier Cistanche tubulosa. Resultaterne er opsummeret i tabel 3, der giver indsigt i:

Artsspecifikke forskelle i sammensætning

Ændringer i fytokemisk indhold efter vinforarbejdning

Analytisk fingeraftryk til Cistanche kvalitetskontrol

Tabel 2. Kalibreringskurver, korrelationskoefficienter (r), lineære områder, LOD og LOQ for otte forbindelser

2.4 Sammenlignende analyse af kemisk sammensætning mellem Cistanche-arter

For at undersøgefytokemiske forskellemellemCistanche deserticolaogCistanche tubulosa, koncentrationerne af otte nøglephenylethanoid glycosiderfra10 partier af rå- og vinforarbejdede prøveraf hver art blev visualiseret vhaboksplot (figur 3). Statistisk analyse viste, at bortset fra2'-acetylverbascosidogtubulosid Bviste de fleste andre forbindelsersignifikante forskelle (P < 0,05)mellem de to arter i både rå og forarbejdet form.

Specifikt:

Irå Cistanche, indholdet afcistanosid F, echinacosid, isoverbascosid, tubulosid A og verbascosidvarvæsentligt lavereiC. deserticolasammenlignet medC. tubulosa(P < 0,05).

Devinforarbejdede prøverafspejlede lignende tendenser.

Isærcistanoside Ablev fundet klhøjere niveauer iC. deserticolaog varuopdageligeiC. tubulosa, hvilket tyder på, at det kan tjene som enpotentiel markørforbindelsetil artsdifferentiering.

PLS-DA Kemometrisk Analyse af Cistanche-arter

A Partial Least Squares Discriminant Analysis (PLS-DA)blev udført under anvendelse af koncentrationsdata for de otte forbindelser. Det resulterendescoreplot (figur 4A)viste, at rå og forarbejdede prøver fra begge arter gjordeikke klynges i klart adskilte grupper.

Imidlertid,tilfældige permutationstests (figur 4B)afslørede, at modellen varikke overmonteret, som de sande værdier afR²Y og Q²var højere end for de permuterede modeller. Den relativtlave Q²-værdierforeslåbegrænset forudsigelighed, sandsynligvis pgaintra-gruppe variabilitetogoverlappende sammensatte områdermellem rå og forarbejdede former.

Yderligere PLS-DA Modellering og VIP Analyse

Separate PLS-DA-modeller blev konstrueret til rå- og vinbearbejdede prøver af begge arter for at udforskeartsspecifikke kemiske forskelle. Følgende blev observeret:

Scoreplot (figur 5A og 5C)vistedistinkt klyngedannelsemellemC. deserticolaogC. tubulosai både rå og forarbejdet form.

Modelvalidering (figur 5B og 5D)bekræftet god forudsigelsesevne uden overfitting.

Variabel betydning i projektion (VIP) plots (figur 6A og 6B)identificerede nøgleforbindelser, der bidrager til artsdiskrimination:

Forråprøver: Cistanoside A, cistanoside F, echinacoside, ogverbascosidevar mest informative.

Forvinforarbejdede prøver: Cistanoside Aogtubulosid Bspillede dominerende roller.

2.5 Indvirkning af vinforarbejdning på Cistanche-fytokemi

På grund af betydelig variation i indholdet af sammensatte på tværs af batcher,parrede sammenligningerblev lavet mellem rå og vin-forarbejdede prøver afsamme batch. Resultaterne, visualiseret vhaviolinplot (figur 7), afslørede følgende:

IC. deserticola, niveauer af2'-acetylverbascosid, cistanosid A, cistanosid F, echinacosid, tubulosid A og verbascosid betydeligt faldetefterbehandling (P < 0,05), menstubulosid B steget.

IC. tubulosa, niveauer af2'-acetylverbascosid, echinacosid og verbascosidogsåfaldet, mensisoverbascosid og tubulosid B stegetsignifikant (P < 0,05).

Disse resultater tyder på, at vinforarbejdning kan føre tilhydrolyse, isomerisering, ellerkemisk omdannelseaf aktive ingredienser.

3. Diskussion

Ifølge2020-udgaven af ​​den kinesiske farmakopé, Cistanche deserticolaskal indeholde ikke mindre end0.3%af det samlede indhold afechinacoside og verbascoside, hvorimodCistanche tubulosaskal indeholde ikke mindre end1.5%af disse to forbindelser. I denne undersøgelse opfyldte alle rå og forarbejdede prøver - undtagen en batch (180710) disse standarder.

Trodsbatch-til-batch variabilitetinden for hver art (nogle forbindelser adskilte sig med op til 10 gange, såsom tubulosid A og isoverbascosid), blev der konsekvent observeret statistisk signifikante forskelle i forbindelsesindhold mellem de to arter. Dette bekræfter detarternes oprindelse er en væsentlig faktorindflydelse på den fytokemiske sammensætning.

Desudencistanoside Avarkun opdaget iC. deserticolaog fraværende iC. tubulosa, hvilket gør det til enværdifuld markør for artsgodkendelse, især i farmakognostiske eller kvalitetskontrolindstillinger.

🔬 Virkning af vinforarbejdning på kemisk sammensætning

Efter vinforarbejdning viste begge arter en konsekvent tendens:

Nedsatte niveaueraf:
Cistanosid F, echinacosid, cistanosid A, verbascosid, tubulosid A og 2'-acetylverbascosid

Forhøjede niveaueraf:
Tubulosid B og isoverbascosid

Disse tendenser kan skyldeskemisk hydrolyse, nedbrydning, ellerstrukturel omlægningunder dampningsprocessen. Interessant nokstørrelsen og retningen af ​​ændringer varierede på tværs af partier, sandsynligvis på grund af forskelle i:

Startkoncentrationer af forbindelse

Urtemorfologi (størrelse, tykkelse)

Følsomhed over for behandlingsforhold

Dette understreger vigtigheden afstandardisering af behandlingsparametreog dirigerebatch-specifikke kvalitetsvurderingerunder urtetilberedning.