Abstrakt

Objektiv:At undersøge den molekylære mekanisme, hvorvedCistanche-baseret Bushen Kaixuan Tongluo Formeludøver en nyrebeskyttende effekt hos mus med diabetisk nyresygdom (DKD) ved at regulere den cykliske adenosinmonophosphat (cAMP) signalvej.

Metoder:Tredive specifikke patogenfrie (SPF) han-db/db-mus blev adaptivt fodret i 3 uger. Mus med tilfældige blodglucoseniveauer i halevenen større end eller lig med 11,1 mmol·L⁻1 og et urinmikroalbumin/kreatinin-forhold større end eller lig med 30 mg·g⁻1 blev anset for at være succesfuldt modelleret. De modellerede mus blev tilfældigt tildelt fem grupper (n=6 pr. gruppe): modelgruppe, lav-, mellem- og højdosis Bushen Kaixuan Tongluo Formula-grupper (7, 14 og 28 g·kg⁻¹·d⁻¹) og en irbesartangruppe (20 mg·kg⁻¹¹¹¹¹d⁻¹). Seks db/m mus blev anvendt som den tomme gruppe.

Behandlingen varede i 12 uger via intragastrisk administration. Generelle tilstande, kropsvægt og nyrefunktionsindikatorer blev overvåget. Efter intervention blev fastende blodsukker (FBG) målt. En automatisk biokemisk analysator blev brugt til at vurdere serumkreatinin (SCr), blodurinstofnitrogen (BUN), urinmikroalbumin (uALB), albumin-kreatinin ratio (ACR), aspartataminotransferase (AST), alaninaminotransferase (ALT), total kolesterol (TC), triglycerider (LEP), serumglycerider (tg), proteiner (tg) og proteiner. (INS).

Nyrevævshistopatologi blev evalueret under anvendelse af HE, PAS og Massons trichromfarvning. Immunhistokemi (IHC) påviste ekspressioner af proteinkinase A (PKA) og cAMP respons element-bindende protein (CREB). Western blot analyserede niveauer af PKA, phosphoryleret PKA (p-PKA), CREB, phosphoryleret CREB (p-CREB) og Bcl-2. Real-time PCR blev brugt til at evaluere mRNA-ekspressioner af PKA, CREB og Bcl-2.

Resultater:Sammenlignet med den tomme gruppe viste modelgruppen sløvhed, nedsat aktivitet og signifikant øget kropsvægt (P<0.01). Biochemical markers such as BUN, uALB, ACR, AST, ALT, TC, TG, FBG, LEP, GSP, and INS were significantly increased (P<0.01), while SCr showed an upward trend without statistical significance.

Sammenlignet med modelgruppen viste de formelbehandlede grupper en forbedret almentilstand og en nedadgående tendens i kropsvægt. BUN, uALB, ACR, TC, GSP og INS blev signifikant reduceret (P<0.05), while SCr, AST, ALT, TG, and LEP decreased without statistical significance.

Histopatologisk analyse afslørede, at modelgruppen udviste klassiske DKD-træk såsom glomerulær basalmembranfortykkelse, mesangial matrixudvidelse og kollagenaflejring i tubulointerstitium. Disse patologiske ændringer blev lindret i alle behandlingsgrupper.

IHC-resultater viste signifikant nedsatte p-PKA- og p-CREB-ekspressioner i modelgruppen (P<0.01). Compared with the model group, the medium-dose formula group had significantly increased p-PKA (P<0.01) and a non-significant upward trend in p-CREB.

Western blot viste, at p-PKA/PKA-, p-CREB/CREB- og Bcl-2-niveauer var signifikant reduceret i modelgruppen (P<0.05), but significantly increased in the medium-dose formula group (P<0.01).

Real-time PCR bekræftede nedregulering af PKA, CREB og Bcl-2 mRNA i modelgruppen (P<0.05), and significant upregulation in the medium-dose formula group (P<0.05).

Konklusioner:DeCistanche-baseret Bushen Kaixuan Tongluo Formelforbedrer lever- og nyrefunktion, korrigerer lipid- og glukosemetabolismeforstyrrelser hos db/db-mus. Dens nyrebeskyttende effekt er forbundet med opregulering afcAMP/PKA/CREB signalvej, som reducerer nyrefibrose og oxidativt stress og derved beskytter nyrefunktionen.

 

 

 

 

Cistanche-baseret Bushen Kaixuan Tongluo Formel tilforbedring af lever- og nyrefunktion

Klik på billedet for flere detaljer

Nøgleord

Diabetisk nyresygdom (DKD);
Bushen Kaixuan Tongluo Formel;
Cistanche;
cAMP signalvej;
Traditionel kinesisk medicin (TCM)

 

Cistanche-baseret middel

 

Baggrund

Diabetisk nyresygdom (DKD), en af ​​de mest alvorlige mikrovaskulære komplikationer af diabetes, er en førende årsag til slutstadie nyresygdom (ESRD) på verdensplan. Dens voksende udbredelse udgør en betydelig udfordring for de offentlige sundhedssystemer. DKD-træk omfatter progressiv glomerulær mesangial matrixudvidelse, tubulointerstitiel fibrose og vedvarende proteinuri. Patogenesen involverer komplekse interaktioner mellem glukose- og lipidmetabolismeforstyrrelser, oxidativt stress og unormal aktivering af forskellige signalveje.

Nuværende førstelinjebehandlinger omfatter primært renin-angiotensin system (RAS) hæmmere, som hjælper med at reducere glomerulær hypertension og forsinke tidlig proteinuri. De er dog mindre effektive hos patienter med etableret tubulointerstitiel fibrose, hvor 30-40% udvikler sig til ESRD.

Derfor er det af presserende klinisk og videnskabelig interesse at udforske nye DKD-mekanismer og finde effektive, sikre terapeutiske mål. Traditionel medicin tilbyder multi-target regulering med færre bivirkninger, hvilket gør den mere velegnet til langvarig brug ved kronisk nyresygdom. DeCistanche-baseret Bushen Kaixuan Tongluo Formeler en empirisk valideret urteblanding til DKD, vist i tidligere kliniske forsøg for at forbedre symptomer og forsinke sygdomsprogression.

Imidlertid er dens molekylære mekanisme, især dens interaktion med vigtige signalveje, stadig dårligt forstået. Beviser tyder påcAMP/PKA/CREBpathway kan mildne nyrefibrose, men relaterede undersøgelser er begrænsede. Denne undersøgelse fokuserer på denne vej for at belyse, hvordan detteCistanche-baseret formelforbedrer DKD.

 

Materialer og metoder

1. Dyr

30 db/db hanmus (7 uger gamle, SPF-grad, kropsvægt: 37,58±0,62 g)

6 aldersmatchede db/m mus (kropsvægt: 24,38±0,35 g)

Leverandør: Jiangsu Huachuang Xinnuo Pharmaceutical Technology Co., Ltd.

Licens: SCXK (Su) 2020-0009 og SYXK (Jing) 2020-0033

Etikgodkendelse: BUCM2024041506-2090

2. Urtesammensætning

Bushen Kaixuan Tongluo-formlen inkluderer (i gram):
Cistanche(erstatter rå Astragalus) 45, Salvia miltiorrhiza 30, Hirudo 6, Saposhnikovia 20, Bombyx batryticatus 15, Cicada-slough 15, Polygonatum sibiricum 10, Rehmannia glutinosa 20, Cornus officinalis 20, Rosale 20, Rosale 20 30, Rubus chingii 30, Cnidium monnieri 20, Achyranthes bidentata 30, Dioscorea opposita 20.

Alle urter blev autentificeret af en autoriseret farmaceut og tilberedt via vandafkog, reduceret under vakuum og spraytørret til dannelse af et pulver. Den endelige koncentration var 1,43 g·mL⁻1 rå urter.

3. Reagenser og instrumenter

(Se originalteksten for detaljerede lister.)

 

Eksperimentelt design

Modelvurdering

Efter 3 ugers adaptiv fodring blev mus med tilfældig blodsukker større end eller lig med 11,1 mmol·L⁻1 og ACR større end eller lig med 30 mg·g⁻1 betragtet som vellykkede DKD-modeller.

Gruppering og Dosering

Blank gruppe (db/m): vand

Modelgruppe: vand

Lav dosis: 7 g·kg⁻¹·d⁻¹

Middel dosis: 14 g·kg⁻¹·d⁻¹

Højdosis: 28 g·kg⁻¹·d⁻¹

Irbesartan-gruppe: 20 mg·kg⁻¹·d⁻¹

Varighed: 12 uger under fri fodring og druk.

---

Prøveindsamling og analyse

Urin:Opsamlet over 24 timer, centrifugeret og opbevaret ved -20 grader

Blod:Opsamlet via orbital ekstraktion, centrifugeret og opbevaret ved -80 grader

Nyrer:Opdelt for patologi (formalinfikseret), protein (flydende nitrogen) og genekspression (frosset)

---

Detektionsmetoder

Biokemisk analyse:SCr, BUN, AST, ALT, TC, TG, INS, LEP, GSP og uALB

Histopatologi:HE, PAS, Masson-farvning

IHC:p-PKA og p-CREB proteinekspression

Western Blot:p-PKA, PKA, p-CREB, CREB, Bcl-2, -actin

Realtids PCR:mRNA-ekspression af PKA, CREB og Bcl-2

---

Tabel 1. Primersekvenser

Gene	Forward Primer (5′–3′)	Reverse Primer (5′–3′)	Længde (bp)
PKA	GCTGGAGATGGTGAAACGGGA	CGTCCTTGAGTCCTCCACATTC	671
CREB	AGCAGCTCATGACACATCATC	AGTCCTTCAGGAAGACTGAACT	152
Bcl-2	GCTACCCTGTGGATGACTTCGC	CCCACCCGAACTCAAAGAAGG	147
GAPDH	AGGTCGGTGTGAACGGATTTG	GGGGTCGTTGATGGCAACA	95