Cirkulær RNA CircDVL1 hæmmer clearcelle nyrecellekarcinomprogression gennem MiR-412-3p/PCDH7-aksen

Abstrakt

Klarcellet nyrecellekarcinom (ccRCC) er en primær nyrekræft med høj aggressiv fænotype og ekstremt dårlig prognose. Akkumulerende beviser tyder på, at cirkulære RNA'er (circRNA'er) spiller en afgørende rolle i forekomsten og udviklingen af ​​forskellige humane kræftformer. Imidlertid forbliver ekspressionen, den kliniske betydning og den regulerende rolle af circRNA'er i ccRCC stort set uklar. Her rapporterer vi, at circDVL1 er reduceret i serum og væv hos ccRCC-patienter og korrelerer negativt med ccRCC maligne træk. Overekspression af circDVL1 hæmmer proliferation, inducerer G1/S-stop, udløser apoptose og reducerer migration og invasion i forskellige ccRCC-celler in vitro. Tilsvarende undertrykker circDVL1 overekspression ccRCC tumorigenicitet i en muse xenograft model. Mekanistisk fungerer circDVL1 som en svamp for onkogen miR-412-3p og forhindrer derved miR-412-3p-medieret undertrykkelse af dets målprotocadherin 7 (PCDH7) i ccRCC-celler. Samlet viser vores resultater, at circDVL1 udøver tumor-undertrykkende funktion under ccRCC-progression gennem circDVL1/miR-412-3p/PCDH7-aksen, og antyder, at circDVL1 kunne være en ny diagnostisk og prognostisk markør og terapeutisk mål for ccRCC.

Nøgleord

circDVL1; Nyrecellekarcinom; miR-412-3p; PCDH7; biomarkør

Klik her for at se, hvad der er fordelene ved Cistanche

Introduktion

Nyrecellekarcinom (RCC) er et ekstremt dødeligt malignt karcinom i det urologiske system og har en alvorlig indvirkning på menneskers sundhed [1]. Forekomsten af ​​RCC er steget i de seneste årtier, med 73.750 nye tilfælde diagnosticeret i USA i 2020 [2, 3]. Clear cell RCC (ccRCC), den mest almindelige og aggressive undertype af RCC, tegner sig for 70-75 procent af RCC tilfælde [4]. Det er vigtigt, at mere end 30 procent af ccRCC-patienter er forbundet med metastase ved den første diagnose. Desuden, selvom radikal kirurgi er den vigtigste behandlingsmulighed for primær ccRCC, oplevede omkring 40 procent af patienterne stadig tilbagefald og metastaser med 5-års samlet overlevelse på mindre end 10 procent [5, 6]. Disse dilemmaer understreger det presserende behov for at udforske de molekylære mekanismer, der ligger til grund for udviklingen af ​​ccRCC, både som diagnostiske og prognostiske biomarkører og som potentielle terapeutiske mål.

Cirkulære RNA'er (circRNA'er) er ikke-kodende RNA'er med enkeltkædede closed-loop strukturer, der gør dem meget stabile [7, 8]. Nylige undersøgelser har vist, at circRNA'er er rigelige i blod [9, 10], spyt [11] og exosomer [12], hvilket indikerer, at de kunne tjene som nye diagnostiske biomarkører [13]. Da flydende biopsi er mindre invasiv end traditionel vævsbiopsi [14], er circRNA'er blevet betragtet som værdifulde prædiktive værktøjer til præcisionsmedicin [15-17]. Specifikt kan flere circRNA'er, såsom cricNOX4, circEGLN3 og circPRRC2A, fungere som potentielle biomarkører for RCC-diagnose og/eller prognose, som er blevet opsummeret i vores nylige gennemgang [18]. Derudover fokuserer den nuværende forskning hovedsageligt på vekslen af ​​circRNA-ekspression i ccRCC-væv [19, 20], men deres niveauer i flydende biopsi forbliver stort set ukendte, hvilket hindrer udforskningen af ​​potentielle biomarkører. Selvom flere circRNA'er, herunder circHIAT1 [21], circ-AKT3 [22] og cRAPGEF5 [23], har vist sig at spille vigtige roller i initieringen og progressionen af ​​ccRCC [18], systematisk undersøgelse af circRNA'er impliceret i ccRCC udvikling, såvel som deres underliggende molekylære mekanismer, mangler stadig.

Her bestemte vi først ekspressionen af ​​circRNA'er i serumprøver fra ccRCC-patienter og raske kontroller ved hjælp af et circRNA-mikroarray. Det er væsentligt, at vi identificerede et nyt ccRCC-associeret circRNA circDVL1 (slagtekroppens ID: hsa_circ_ 0009267), som er kodet i DVL1-genet. CircDVL1 er signifikant reduceret i serum fra ccRCC-patienter, og dets ekspression er omvendt korreleret med ccRCC Fuhrman-gradering, hvilket tyder på potentialet som en biomarkør. Desuden er CircDVL1 nedsat i ccRCC tumorvæv. Tilsvarende kan circDVL1 hæmme proliferation, inducere cellecyklusstandsning, udløse apoptose og reducere ccRCC-cellemigration og -invasion. Mekanistisk fungerer circDVL1 som en miR-412-3p-svamp for at opregulere PCDH7-ekspression. Samlet identificerer disse resultater circDVL1 som en tumorundertrykker for ccRCC og antyder dets potentiale som både en diagnostisk biomarkør og et terapeutisk mål.

Cistanche tillæg

Materialer og metoder

1. Kliniske prøver

Denne undersøgelse blev godkendt af den etiske komité for det første tilknyttede hospital ved Zhejiang University (2021-104). Atten matchede prøver af ccRCC og tilstødende ikke-tumorvæv blev indsamlet fra ccRCC-patienter. Prøverne blev hurtigt konserveret i flydende nitrogen efter operationen og derefter opbevaret ved -80 grad indtil videre brug. Serumprøver fra 60 ccRCC-patienter og 66 raske kontroller blev indsamlet. Derefter blev prøverne behandlet under anvendelse af passende metoder, og det opnåede serum blev opbevaret ved -80 grad indtil videre brug.

2. Cellelinjer og cellekultur

Alle cellelinjer blev købt fra National Collection of Authenticated Cell Cultures (Kina). 786-O- og Caki-1-celler blev dyrket i RPMI 1640 (HyClone), ACHN-celler blev dyrket i MEM (HyClone), og 293T-celler blev dyrket i DMEM (Gibco)-medier. Alle cellekulturmedier blev suppleret med 10 procent føtalt bovint serum (Gibco) og 1 procent penicillin og streptomycinblanding (Gibco). Cellekulturer blev holdt i en fugtig inkubator ved 37 grader og 5 procent CO₂.

3. CircRNA mikroarray analyse

CircRNA-mikroarray-profilering i serumprøver blev udført under anvendelse af en Arraystar human CircRNA Array V2 (Capital Biotechnology, Kina). GeneSpring-software V13.0 (Agilent Technologies) blev brugt til dataopsummering, normalisering og mikroarray-kvalitetskontrol. CircRNA'er med en tærskel for foldændringen på større end eller lig med 2 og mindre end eller lig med -2 ​​og P-værdi < 0.05 blev betragtet som statistisk signifikante. Hierarkisk klyngeanalyse blev udført ved hjælp af standardiseret euklidisk afstand med fuldstændig kobling.

4. RNA-sekventering (RNA-seq) og dataanalyse

Næste generations RNA-seq blev udført som beskrevet tidligere [24, 25]. miR-412-3p og kontrolmimic-transficerede 786-0-celler blev brugt til RNA-sekventering. Bibliotekskonstruktion og bioinformatiske analyser af rådataene blev udført af Novogene Co., Ltd. (Beijing, Kina). RNA-seq-dataene blev deponeret i Gene Expression Omnibus (GEO) under accessionsnummer GSE175492.

5. RNA-ekstraktion og kvantitativ RT-PCR i realtid (RT-qPCR)

RT-qPCR blev udført som beskrevet tidligere [26, 27]. Total RNA blev isoleret fra serum, celler og tumorvæv under anvendelse af AG RNAex Pro Reagent (AG, Hunan, Kina). Til circRNA-detektion blev 1 ug totalt RNA fordøjet med RNase R (3 U/ug, Epicenter Technologies, Madison, USA, Cat#RNR07250) ved 37 grader i 10 minutter, og komplementært DNA (cDNA) blev genereret ved hjælp af HiScript II 1. Strand cDNA Synthesis Kit (Vazyme). CircRNA- og mRNA-ekspressionsniveauer blev normaliseret til -actin. For at bestemme miRNA-ekspression blev revers transkription udført med et miR-XTM miRNA First-strand Synthesis-kit (Takara Bio USA, CA, USA, Kat. #638313) med U6 (Rnu6-1) ekspression som en endogen kontrol. Det relative RNA-ekspressionsniveau blev bestemt med 2-ΔΔCt-metoden. Alle QRT-PCR-analyseprimersekvenser er vist i tabel S2.

6. Plasmidkonstruktion og stabil transfektion

For at konstruere circDVL1 og circDVL1-MUT overekspressionsvektoren blev circDVL1 og den muterede circDVL1 sekvens klonet ind i pcDNA 3.1(plus) Laccase 2 MCS Exon vektoren, som blev bestilt fra Addgene (#69893) [28]. ACHN- og 786-O-celler blev transficeret med circRNA og negative kontrolvektorer under anvendelse af Lipofectamine 3000 (Invitrogen, Carlsbad, CA). Efter 48 timer blev stabilt transficerede celler, der udtrykker circDVL1, selekteret ved tilsætning af 800 ug/ml G418 til dyrkningsmediet.

7. Cellelevedygtighed

Cellelevedygtighedsassay blev bestemt med CCK8-kittet (Dojindo Laboratories, Kumamoto, Japan, Kat # CK04), som tidligere beskrevet [29]. 786-O- og ACHN circDVL1-overudtrykkende og kontrolceller blev podet i 96-brøndsplader. CCK8-opløsning (10 μL) blev tilsat på det angivne tidspunkt og inkuberet ved 37 grader i 2 timer, og absorbansen blev målt ved hjælp af et spektrofotometer.

Herba Cistanche

8. Kolonidannelse

Kolonidannelsesassays blev udført som beskrevet tidligere [24]. ACHN (800 celler/brønd) og 786-O-celler (400 celler/brønd) blev dyrket i 10 dage og efterfølgende fikseret med 4 procent paraformaldehyd i ca. 30 minutter efterfulgt af farvning med 0,1 procent krystalviolet opløsning i ca. 15 min. Kloner indeholdende mere end 50 celler blev talt som en enkelt koloni.

9. Cellecyklusanalyse

Celler blev synkroniseret i RPMI 1640-medium uden FBS natten over og skiftet til medium med 10 procent FBS i de næste 48 timer. Cellerne blev vasket, resuspenderet i 70 procent ethanol i PBS og opbevaret ved -20 grader natten over. Derefter blev celler farvet med propidiumiodid (PI) opløsning indeholdende RNase A til cellecyklusanalyse.

10. Apoptoseanalyse

ACHN- og 786-O-celleapoptoseanalyse blev udført med et Annexin V-FITC/PI-apoptosedetektionskit (Beijing Biosea Biotechnology, Kina) efter producentens instruktioner.

11. Cellemigration og invasionsassays

In vitro blev cellemigrationskapaciteten evalueret ved hjælp af transwell-kamre med 8 μm pore polycarbonatmembraner (Millipore, MA, USA). Celleinvasionsassays blev udført med transwell-kamrene coatet med 100 μL Matrigel (BD Biosciences, USA). 786-O-celler (2×104) eller ACHN-celler (4×104) blev suspenderet i 200 μL RPMI 1640 uden serum og podet i de øvre transwell-kamre, og derefter blev 600 μL medium indeholdende 20 procent FBS tilsat ind i de nederste kamre. Derefter blev celler dyrket i 24 timer for at måle migrationen og i 48 timer for at evaluere invasionen. Celler i det øvre kammer blev omhyggeligt skrabet, og celler i det nederste rum blev fikseret med 4 procent paraformaldehyd og farvet med krystalviolet. Billeder blev taget, og celler blev talt med et mikroskop.

12. Vestlig blot

Totalt protein blev ekstraheret, kvantificeret og separeret på 10 procent SDS-PAGE geler og derefter overført til polyvinylidendifluoridmembraner (Millipore, MA, USA), som blev inkuberet med primær anti-glyceraldehyd 3-phosphatdehydrogenase (GAPDH) (Proteinch, 60004-1-Ig), anti-PCDH7 (Abcam, ab139274) primære antistoffer ved 4 grader natten over.

13. Immunfluorescensfarvning

Celler blev podet på dækglas i 24 timer og fikseret med 4 procent paraformaldehyd, permeabiliseret med 0.2 procent Triton X-100 i 20 minutter og inkuberet med 5 procent bovint serumalbumin. Derefter blev celler inkuberet med et primært antistof specifikt for Ki67 (1:400, ab48027, Abcam) ved 4 grader natten over og efterfølgende inkuberet med en 488-konjugeret gede-anti-kanin IgG (1:150, D110088, Sangon) ) ved 37 grader i 1 time. Cellerne blev farvet med 4',6-diamidino-2-phenylindol (DAPI), og billeder blev opnået med et Leica-fluorescensmikroskop (DM4000).

14. In vivo tumordannelse og Ki67-farvning

Seks uger gamle BALB/c nøgne hanmus (købt fra Shanghai SLAC) blev opdelt i 2 grupper (n=5 for hver gruppe). Mus blev inokuleret med ca. 3 x 106 kontrolceller eller circDVL1-overudtrykkende ACHN-celler ved subkutan injektion. Tumorstørrelsen blev målt med en glidende skydelære hver 3. dag, startende dag 6 efter injektionen. Tumorvolumen blev beregnet som længde × bredde × højde/2. Alle eksperimenter blev udført i overensstemmelse med retningslinjerne for pleje og brug af forsøgsdyr (NIH-publikation 80-23, revideret 1996) og blev godkendt af Animal Care Committee ved Zhejiang University, Hangzhou, Kina.

Cistanche kapsler

15. Fluorescens in situ hybridisering (FISH)

En circDVL1-dobbelt-digoxigenin (DIG)-peberrodsperoxidase (HRP)-probe (Exon Biotechnology, Guangzhou, Kina) blev syntetiseret. Kontrol- og circDVL1-overudtrykkende ACHN-celler blev dyrket på dækglas og inkuberet med den mærkede probe ved 37 grader i 24 timer. Efter vask blev objektglassene inkuberet i et anti-DIG sekundært antistof ved 37 grader i 1 time. En tyraminsignalforstærkningsmetode blev brugt til at detektere circDVL1-signaler, og celler blev modfarvet med DAPI. For co-FISH blev dækglas inkuberet med DIG-mærket circDVL1 og biotin-mærket miR-412-3s.

16. RNA-immunpræcipitation (RIP) assay

RIP-assays blev udført med Magna RIP™ RNA-bindende protein immunpræcipitationskit (Millipore, MA, USA). 786-O-celler blev lyseret i komplet RIP-lysebuffer og derefter inkuberet med immunpræcipitationsbuffer indeholdende magnetiske perler, som var konjugeret med AGO2 (Abcam, MA, USA) eller IgG-antistofkompleks ved 4 grader natten over. Derefter blev immunpræcipiterede RNA'er testet ved RT-qPCR.

17. Dual-luciferase reporter assay

CircDVL1-, PPM1H-3'UTR- og PCDH7-3'UTR-sekvenser, som indeholdt muterede miR-412-3p-bindingssteder og deres tilsvarende muterede sekvenser, blev syntetiseret og derefter subklonet ind i luciferase-reporteren vektor psiCHECK-2 (Promega) for at producere circDVL1-WT, circDVL1-Mut1, circDVL1-Mut2, PPM1H-3'UTR-WT, PCDH{ {14}}'UTRWT, PCDH7-3'UTR-Mut1 og PCDH7-3'UTR-Mut2 vektorer. De forskellige 3'UTR-sekvenser af PPM1H og PCDH7 indeholder 500 bp-fragmentet indeholdende potentielle miR-412-3p-bindingssteder (flankeret af 250 bp). Den relative luciferaseaktivitet blev vurderet med et dobbelt-luciferase reporterassay (Promega, USA). Alle assays blev udført i tre uafhængige replikater.

18. Statistisk analyse

Statistiske analyser blev udført med GraphPad Prism 7.0 (GraphPad Software, La Jolla, CA). Forskellene mellem grupperne blev vurderet med Students t-test eller envejsvariansanalyse (ANOVA). Forskelle mellem grupper blev anset for at være statistisk signifikante, når P-værdier var < 0.05.

Diskussion

Forskellige typer af ccRCC biomarkører er blevet foreslået og evalueret eksperimentelt, herunder mRNAs [32], miRNAs [33], lncRNAs [34] og circRNAs [35]. Ingen af ​​dem er dog blevet bekræftet som nøjagtige diagnostiske biomarkører til rutinemæssig klinisk brug hos ccRCC-patienter. Her illustrerede vores undersøgelse, at circDVL1 spiller en vigtig rolle i ccRCC-progression. Først screenede vi serum fra ccRCC-patienter og sunde kontroller for at identificere differentielt udtrykte circRNA'er ved hjælp af et circRNA-mikroarray. RT-qPCR-dataene afslørede, at circDVL1 var dramatisk nedreguleret i ccRCC-prøver. Tidligere undersøgelser har vist, at circRNA'er kunne tjene som latente serumbiomarkører i forskellige kræftformer [36, 37]. For eksempel beskriver Bei et al. påvist, at exosomal has-circ-0004771 var øget i serum indsamlet fra kolorektal cancerpatienter [38]. Ikke desto mindre er forskning i den specifikke rolle af circRNA som en ikke-invasiv biomarkør i ccRCC stadig begrænset. Vores undersøgelse afslørede, at circDVL1 var signifikant nedreguleret i serum fra ccRCC-patienter, og at den nedsatte ekspression af serum circDVL1 kan være tumor-afledt. Desuden havde serum circDVL1 niveau signifikant diagnostisk værdi ved at skelne mellem patienter med Fuhrman grad I-II og Fuhrman grad III-IV tumorer. Derfor kunne serum circDVL1 være en lovende diagnostisk markør for ccRCC. Imidlertid viste flere raske patienter lave niveauer af circDVL1 i deres serum, hvilket indikerer, at patientmonitorering udelukkende baseret på analysen af ​​dette cirkulerende RNA kunne resultere i falsk-positive resultater. Derfor er værdien af ​​circDVL1 som en enkelt diagnostisk markør noget begrænset, og en kombination af forskellige cirkulerende RNA'er skal muligvis analyseres for at opnå en pålidelig forudsigelse for tumorudvikling og metastase.

Som et nyligt identificeret circRNA var den biologiske og patologiske rolle af circDVL1 ikke blevet undersøgt. I denne undersøgelse evaluerede vi rollen og reguleringsmekanismen for circDVL1 i ccRCC. Funktionelle assays viste, at overudtrykt circDVL1 kunne reducere ccRCC-celleproliferation, kolonidannelsesevne og tumorigent potentiale, sandsynligvis på grund af øget celleapoptose in vitro og undertrykt tumorudvikling in vivo. Dataene antydede, at circDVL1 kunne have en tumorsuppressorfunktion i ccRCC.

CircRNA'er kan fremme tumorinitiering og -progression ved at fungere som miRNA-svampe. Derfor undersøgte vi, om circDVL1 kunne regulere miRNA-biogenese under ccRCC-karcinogenese. Ved hjælp af miRanda og miRWalk-software fandt vi ud af, at circDVL1 havde et potentielt bindingssted for miR-412-3p. Luciferase reporter-assays viste en direkte forbindelse mellem circDVL1 og miR-412-3s. Tidligere undersøgelser har vist, at miR-412-3p var involveret i patogenesen af ​​forskellige kræftformer gennem forskellige molekylære mekanismer [31, 39, 40]. For eksempel havde miR-412-3p en onkogen rolle i tyktarmskræft, hvilket fremmer migration, invasion og celleproliferation af cancerstamceller [31]. Desuden blev miR-412-3p-ekspression opreguleret i ekstracellulære vesikler fra orale pladecellecarcinom-patienter (OSCC) [39]. På samme måde antydede vores resultater, at miR-412-3p var en vigtig tumorpromotor i ccRCC.

Cistanche pulver

Derudover blev målet for circDVL1/miR-412-3p også identificeret. Protocadheriner (PCDH'er) er transmembrane proteiner, der tilhører cadherin-superfamilien, som spiller en væsentlig rolle i celleadhæsion og signalveje. PCDH7 er medlem af PCDH-familien og har veletablerede roller i celle-celle-genkendelse og celleadhæsion [41]. Det er almindeligt kendt, at tab af adhæsion er et tidligt trin i tumorcelleinvasion og metastasering. Nye beviser tyder på, at PCDH7 er afvigende udtrykt i en række forskellige tumortyper. For eksempel i human ikke-småcellet lungecancer blev PCDH7 ofte overudtrykt og fungerede som et onkogen til at inducere cellulær transformation og fremme lungetumorigenese ved at forstærke MAPK-signalering [42]. Omvendt hæmmede PCDH7 migration og invasion af mavekræftceller via E-cadherin [43]. Desuden er reduceret PCDH7-ekspression blevet fundet i kolorektal [44] og blærekræft [45]. Disse data indikerede, at PCDH7 havde forskellige funktioner i forskellige tumortyper. I denne undersøgelse viste vi, at PCDH7-niveauer blev reduceret i ccRCC-tumorprøver. Interessant nok afslørede funktionelle redningseksperimenter, at tumorsuppressoregenskaberne af circDVL1 delvis skyldes dets virkning på PCDH7. Vores undersøgelse tyder stærkt på vigtigheden af ​​circDVL1/miR-412-3p/PCDH7 regulatoriske akse i ccRCC-progression.

Denne undersøgelse har flere begrænsninger. Vi testede tre specifikke siRNA'er for endogen circDVL1, men desværre lykkedes det ikke for alle disse siRNA'er at slå circDVL1 ned sandsynligvis på grund af den unikke struktur af dette circRNA såvel som dets lave basale ekspression i ccRCC-celler. Derudover viste vores resultater, at circDVL1 kunne være et terapeutisk mål i ccRCC-patienter, kliniske undersøgelser med store kohorter af patienter er nødvendige for yderligere at demonstrere dets kliniske betydning. I vores undersøgelse undersøgte vi ikke årsagen til nedreguleringen af ​​circDVL1 i ccRCC-læsioner. Det er blevet rapporteret, at RNA-bindende proteiner (RBP'er), inklusive quaking (QKI), epithelial-splejsende regulatorisk protein 1 (ESRP1) og fusioneret-i-sarkom (FUS) er involveret i den posttranskriptionelle dannelse af circRNA'er [{{10 }}]. Derudover er nogle transkriptionsfaktorer (f.eks. ZEB1, c-Myb og c-Jun) også impliceret i biogenesen af ​​specifikke circRNA'er [49-52]. Undersøgelser har også vist, at m6A-modifikation medierer circRNA-nedbrydning. Park et al. rapporterede, at m6A-modificerede circRNA'er også blev nedreguleret via en YTHDF2- HRSP12-RNase P/MRP-akse [53]. Hvorvidt disse RBP'er, transkriptionsfaktorer og m6A-methylering er involveret i nedreguleringen af ​​circDVL1 er fortsat usikkert. I vores fremtidige forskning vil vi forsøge at udforske den opstrøms reguleringsmekanisme af circDVL1 i ccRCC-udvikling og tumorigenese.

Sammenfattende viste vi, at circDVL1-niveau blev reduceret i serum fra ccRCC-patienter. Navnlig undersøgte vi yderligere de regulatoriske mekanismer af circDVL1 og demonstrerede, at circDVL1 undertrykte ccRCC tumorigenese ved at fremme PCDH7-ekspression ved at sponge miR -412-3p. Derfor viste vores undersøgelse, at circDVL1 kan være et potentielt terapeutisk mål for fremtidige ccRCC-behandlinger.

Referencer

1.Cheng SK, Chuah KL. Metastatisk nyrecellekarcinom til bugspytkirtlen: En gennemgang. Arkiv for patologi og laboratoriemedicin. 2016; 140: 598-602.

2. Jonasch E, Walker CL, Rathmell WK. Klarcellet nyrecellekarcinom ontogeni og dødelighedsmekanismer. Nat Rev Nephrol. 2021; 17: 245-61.

3. Siegel RL, Miller KD, Jemal A. Kræftstatistik, 2020. CA Cancer J Clin. 2020; 70.

4. Shuch B, Amin A, Armstrong AJ, Eble JN, Ficarra V, Lopez-Beltran A, et al. Forståelse af patologiske varianter af nyrecellekarcinom: destillering af terapeutiske muligheder fra biologisk kompleksitet. europæisk urologi. 2015; 67: 85-97.

5. Koul H, Huh JS, Rove KO, Crompton L, Koul S, Meacham RB, et al. Molekylære aspekter af nyrecellekarcinom: en gennemgang. Am J Cancer Res. 2011; 1: 240-54.

6. Sanchez-Gastaldo A, Kempf E, Gonzalez Del Alba A, Duran I. Systemisk behandling af nyrecellekræft: En omfattende gennemgang. Cancer Treat Rev. 2017; 60: 77-89.

7. Kristensen LS, Andersen MS, Stagsted LVW, Ebbesen KK, Hansen TB, Kjems J. Biogenese, biologi og karakterisering af cirkulære RNA'er. Naturanmeldelser Genetik. 2019; 20: 675-91.

8. Patop IL, Wüst S, Kadener S. Fortid, nutid og fremtid for circRNAs. EMBO-journalen. 2019; 38: e100836.

9. Perez de Acha O, Rossi M, Gorospe M. Circular RNAs in Blood Malignancies. Front Mol Biosci. 2020; 7: 109.

10. Zhang SJ, Chen X, Li CP, Li XM, Liu C, Liu BH, et al. Identifikation og karakterisering af cirkulære RNA'er som en ny klasse af formodede biomarkører i diabetesretinopati. Undersøgende oftalmologi & visuel videnskab. 2017; 58: 6500-9.

11. Bahn JH, Zhang Q, Li F, Chan TM, Lin X, Kim Y, et al. Landskabet af mikroRNA, Piwi-interagerende RNA og cirkulært RNA i menneskets spyt. Klinisk kemi. 2015; 61: 221-30.

12. Li Y, Zheng Q, Bao C, Li S, Guo W, Zhao J, et al. Cirkulært RNA er beriget og stabilt i exosomer: en lovende biomarkør for kræftdiagnose. Celleforskning. 2015; 25: 981-4.

13. Li S, Han L. Cirkulære RNA'er som lovende biomarkører i cancer: påvisning, funktion og videre. Genom medicin. 2019; 11:15.

14. Ye Q, Ling S, Zheng S, Xu X. Væskebiopsi i hepatocellulært karcinom: cirkulerende tumorceller og cirkulerende tumor-DNA. Mol Cancer. 2019; 18:114.

15. Wen G, Zhou T, Gu W. Potentialet ved at bruge blodcirkulært RNA som en flydende biopsibiomarkør for menneskelige sygdomme. Proteincelle. 2020.

16. Zhang Z, Yang T, Xiao J. Cirkulære RNA'er: lovende biomarkører for menneskelige sygdomme. EBioMedicine. 2018; 34: 267-74.

17. Wang S, Zhang K, Tan S, Xin J, Yuan Q, Xu H, et al. Cirkulære RNA'er i kropsvæsker som cancerbiomarkører: den nye grænse for flydende biopsier. Mol Cancer. 2021; 2013.

18. Wang Y, Zhang Y, Wang P, Fu X, Lin W. Cirkulære RNA'er i nyrecellekarcinom: implikationer for tumorgenese, diagnose og terapi. Mol Cancer. 2020; 19:149.

19. Chen D, Chen W, Xu Y, Zhu M, Xiao Y, Shen Y, et al. Opreguleret immunkontrolpunkt HHLA2 i klarcellet nyrecellekarcinom: en ny prognostisk biomarkør og potentielt terapeutisk mål. J Med Genet. 2019; 56: 43-9.

20. Lv Q, Wang G, Zhang Y, Shen A, Tang J, Sun Y, et al. CircAGAP1 fremmer tumorprogression ved at svampe miR-15-5p i klarcellet nyrecellecarcinom. J Exp Clin Cancer Res. 2021; 40:76.

21. Wang K, Sun Y, Tao W, Fei X, Chang C. Androgenreceptor (AR) fremmer migration og invasion af clear cell renal cell carcinoma (ccRCC) ved at ændre circHIAT1/miR-195-5p/29a{{ 4}}p/29c-3p/CDC42-signaler. Kræftbreve. 2017; 394: 1-12.

22. Xue D, Wang H, Chen Y, Shen D, Lu J, Wang M, et al. Circ-AKT3 hæmmer klarcellet nyrecellekarcinommetastase via ændring af miR-296-3p/E-cadherin-signaler. Molekylær cancer. 2019; 18:151.

23. Chen Q, Liu T, Bao Y, Zhao T, Wang J, Wang H, et al. CircRNA cRAPGEF5 hæmmer væksten og metastasen af ​​nyrecellecarcinom via miR-27a-3p/TXNIP-vejen. Kræftbreve. 2019; 469: 68-77.

24. Guo X, Lin W, Wen W, Huyghe J, Bien S, Cai Q, et al. Identifikation af nye modtagelighedsgener for kolorektal cancerrisiko fra en transkriptomomfattende associationsundersøgelse af 125.478 forsøgspersoner. Gastroenterologi. 2021; 160.

25. Wang J, Nie W, Xie X, Bai M, Ma Y, Jin L, et al. MicroRNA-874-3p/ADAM (A Disintegrin and Metalloprotease) 19 medierer makrofagaktivering og nyrefibrose efter akut nyreskade. Forhøjet blodtryk. 2021; 77: 1613-26.

26. Kun-Peng Z, Chun-Lin Z, Jian-Ping H, Lei Z. En ny cirkulerende hsa_cirkel_0081001 fungerer som en potentiel biomarkør for diagnose og prognose for osteosarkom. Int J Biol Sci. 2018; 14: 1513-20.

27. Yuan Y, Bao J, Chen Z, Villanueva AD, Wen W, Wang F, et al. Multi-omics-analyse for at identificere modtagelighedsgener for kolorektal cancer. Hum Mol Genet. 2021.

28. Kramer MC, Liang D, Tatomer DC, Gold B, March ZM, Cherry S, et al. Kombinatorisk kontrol af Drosophila cirkulær RNA-ekspression ved introniske gentagelser, hnRNP'er og SR-proteiner. Genes Dev. 2015; 29: 2168-82.

29. Guo X, Lin W, Bao J, Cai Q, Pan X, Bai M, et al. En omfattende cis-eQTL-analyse afslørede målgener i brystkræftmodtagelighedsloci identificeret i foreningsstudier i hele genomet. Am J Hum Genet. 2018; 102: 890-903.

30. Zhong S, Wang J, Zhang Q, Xu H, Feng J. CircPrimer: en software til annotering af circRNA'er og bestemmelse af specificiteten af ​​circRNA-primere. BMC Bioinformatik. 2018; 19:292.

31. Zhu K, Wang Y, Liu L, Li S, Yu W. Langt ikke-kodende RNA MBNL1-AS1 regulerer proliferation, migration og invasion af cancerstamceller i tyktarmskræft ved at interagere med MYL9 via sponging microRNA -412-3s. Klinikker og forskning i hepatologi og gastroenterologi. 2020; 44: 101-14.

32. Schrödter S, Braun M, Syring I, Klümper N, Deng M, Schmidt D, et al. Identifikation af dopamintransportøren SLC6A3 som en biomarkør for patienter med nyrecellekarcinom. Molekylær cancer. 2016; 15:10.

33. Ran L, Liang J, Deng X, Wu J. miRNA'er i forudsigelse af prognose i klarcellet nyrecellekarcinom. Biomed Res Int. 2017; 2017: 4832931.

34. Li JK, Chen C, Liu JY, Shi JZ, Liu SP, Liu B, et al. Langt ikke-kodende RNA MRCCAT1 fremmer metastasering af klarcellet nyrecellecarcinom via inhibering af NPR3 og aktivering af p38-MAPK-signalering. Molekylær cancer. 2017; 16:111.

35. Sheng JQ, Liu L, Wang MR, Li PY. Cirkulære RNA'er i fordøjelsessystemkræft: potentielle biomarkører og terapeutiske mål. Am J Cancer Res. 2018; 8: 1142-56.

36. Vea A, Llorente-Cortes V, de Gonzalo-Calvo D. Circular RNAs in Blood. Adv Exp Med Biol. 2018; 1087: 119-30.

37. Vo JN, Cieslik M, Zhang Y, Shukla S, Xiao L, Zhang Y, et al. Landskabet af cirkulært RNA i kræft. Celle. 2019; 176.

38. Pan B, Qin J, Liu X, He B, Wang X, Pan Y, et al. Identifikation af serum exosomal has-circ-0004771 som en ny diagnostisk biomarkør for kolorektal cancer. Front Genet. 2019; 10: 1096.

39. Gai C, Camussi F, Broccoletti R, Gambino A, Cabras M, Molinaro L, et al. Spyt ekstracellulære vesikel-associerede miRNA'er som potentielle biomarkører i oral pladecellecarcinom. BMC Cancer. 2018; 18:439.

40. Lenherr SM, Tsai S, Silva Neto B, Sullivan TB, Cimmino CB, Logvinenko T, et al. MicroRNA-ekspressionsprofil identificerer højkvalitets, ikke-muskelinvasive blæretumorer med forhøjet risiko for at udvikle sig til en invasiv fænotype. Gener (Basel). 2017; 8.

41. Yoshida K. Fibroblastcelleform og adhæsion in vitro er ændret ved overekspression af 7a og 7b isoformerne af protocadherin 7, men ikke 7c isoformen. Cell Mol Biol Lett. 2003; 8: 735-41.

42. Zhou X, Updegraff BL, Guo Y, Peyton M, Girard L, Larsen JE, et al. PROTOCADHERIN 7 Virker gennem SET og PP2A for at forstærke MAPK-signalering af EGFR og KRAS under lungetumorigenese. Cancer Res. 2017; 77: 187-97.

43. Chen HF, Ma RR, He JY, Zhang H, Liu XL, Guo XY, et al. Protocadherin 7 hæmmer cellemigration og invasion gennem E-cadherin i mavekræft. Tumor Biol. 2017; 39: 1010428317697551.

44. Bujko M, Kober P, Mikula M, Ligaj M, Ostrowski J, Siedlecki JA. Ekspressionsændringer af celle-celleadhæsionsrelaterede gener i kolorektale tumorer. Oncol Lett. 2015; 9: 2463-70.

45. Lin YL, Wang YL, Fu XL, Li WP, Wang YH, Ma JG. Lav ekspression af protocadherin7 (PCDH7) er en potentiel prognostisk biomarkør for primær ikke-muskelinvasiv blærekræft. Oncotarget. 2016; 7: 28384-92.

46. ​​Conn SJ, Pillman KA, Toubia J, Conn VM, Salmanidis M, Phillips CA, et al. Det RNA-bindende protein quaking regulerer dannelsen af ​​circRNA'er. Celle. 2015; 160: 1125-34.

47. Errichelli L, Dini Modigliani S, Laneve P, Colantoni A, Legnini I, Capauto D, et al. FUS påvirker cirkulær RNA-ekspression i murine embryonale stamcelle-afledte motoriske neuroner. Nat Commun. 2017; 8: 14741.

48. Yu CY, Li TC, Wu YY, Yeh CH, Chiang W, Chuang CY, et al. Det cirkulære RNA circBIRC6 deltager i det molekylære kredsløb, der kontrollerer menneskelig pluripotens. Nat Commun. 2017; 8: 1149.

49. Lee YH, Kim HS, Kim JS, Yu MK, Cho SD, Jeon JG, et al. C-my Regulerer Autophagy for Pulp Vitality i Glucose Oxidative Stress. J Dent Res. 2016; 95: 430-8.

50. Li Q, Wang Y, Wu S, Zhou Z, Ding X, Shi R, et al. CircACC1 Regulerer samling og aktivering af AMPK-kompleks under metabolisk stress. Celle Metab. 2019; 30.

51. Ren C, Zhang Z, Wang S, Zhu W, Zheng P, Wang W. Cirkulært RNA hsa_circ_0001178 letter invasionen og metastaseringen af ​​kolorektal cancer gennem opregulering af ZEB1 via sponging af flere miRNA'er. Biol Chem. 2020; 401: 487-96.

52. Zeng K, Chen X, Xu M, Liu X, Hu X, Xu T, et al. CircHIPK3 fremmer vækst og metastasering af tyktarmskræft ved at svampe miR-7. Celledød Dis. 2018; 9:417.

53. Park OH, Ha H, Lee Y, Boo SH, Kwon DH, Song HK, et al. Endoribonukleolytisk spaltning af mA-holdige RNA'er med RNase P/MRP-kompleks. Mol Cell. 2019; 74.

Ying Wang1,2, Yunjing Zhang1,2, Xinwan Su3, Qiongzi Qiu4, Yuan Yuan2, Chunhua Weng2, Sailan Zou5, Yan Tian5, Weidong Han6, Pengyuan Liu4, Xingyi Guo7, Jianhua Mao8, Xianghui Pqing Wang Lin, Wei 5,

1. Det fjerde tilknyttede hospital og International Institutes of Medicine, Zhejiang University School of Medicine, Jinhua 322000, Zhejiang, Kina.

2. Nyresygdomscenter, det første tilknyttede hospital og Institut for Translationel Medicin, Zhejiang University School of Medicine, Hangzhou 310003, Zhejiang, Kina.

3. Urologisk afdeling, det første tilknyttede hospital, Zhejiang University School of Medicine, Hangzhou 310003, Zhejiang, Kina.

4. Institut for Respiratorisk Medicin, Sir Run Run Shaw Hospital og Institut for Translationel Medicin, Zhejiang University School of Medicine, Hangzhou 310016, Zhejiang, Kina.

5. Afdeling for Endokrinologi og Metabolisme, State Key Laboratory of Biotherapy and Cancer Center, West China Hospital, Sichuan University og Collaborative Innovation Center of Biotherapy, Chengdu 610041, Sichuan, Kina.

6. Afdeling for medicinsk onkologi, Sir Run Run Shaw Hospital, Zhejiang University School of Medicine, Hangzhou 310016, Zhejiang, Kina.

7. Division of Epidemiology, Department of Medicine, Vanderbilt Epidemiology Center og Vanderbilt-Ingram Cancer Center, Vanderbilt University School of Medicine, Nashville 37203, TN, USA.

8. Nefrologisk afdeling, National Clinical Research Center for Child Health, Children's Hospital, Zhejiang University School of Medicine, Hangzhou 310003, Zhejiang, Kina.