Bredbåndselektrisk spektroskopi for at skelne enkeltcellede Ca2+ ændringer på grund af ionomycinbehandling i en skeletmuskelcellelinje Del 1

Abstrakt:Mange skeletmuskelsygdomme såsom muskeldystrofi, myalgisk encephalomyelitis/kronisk træthedssyndrom (ME/CFS) og sarkopeni deler dysreguleringen af ​​calcium (Ca2+) som en nøglemekanisme for sygdom på cellulært niveau. Cytosoliske koncentrationer af Ca2+ kan signalere dysregulering i organeller, herunder mitokondrier, kerne og sarkoplasmatisk retikulum i skeletmuskulaturen. I dette arbejde anvendes en behandling for at efterligne Ca2+-stigningen forbundet med disse atrofi-relaterede sygdomstilstande, og bredbåndsimpedansmålinger foretages for enkeltceller med og uden denne behandling ved hjælp af en mikrofluidisk enhed. De resulterende impedansmålinger tilpasses ved hjælp af en single-shell kredsløbssimulering for at vise beregnede elektriske dielektriske egenskabsbidrag baseret på disse Ca2+ ændringer. Ud fra dette blev lignende fordelinger set i Ca2+ fra fluorescensmålinger og fordelingen af ​​S-parameteren ved en enkelt frekvens, hvilket identificerede Ca2+ som den vigtigste bidragyder til, at de elektriske forskelle blev identificeret. Ekstraherede dielektriske parametre viste også forskellige fordelingsmønstre mellem de ubehandlede og ionomycinbehandlede grupper; dog tyder de overordnede elektriske parametre på virkningen af ​​Ca2+-inducerede ændringer ved et bredere frekvensområde.

Cistanche kan fungere som en anti-trætheds- og udholdenhedsforstærker, og eksperimentelle undersøgelser har vist, at afkog af Cistanche tubulosa effektivt kunne beskytte leverhepatocytter og endotelceller beskadiget i vægtbærende svømmemus, opregulere ekspressionen af ​​NOS3 og fremme hepatisk glykogen syntese og udøver således anti-træthedseffektivitet. Phenylethanoid-glycosid-rigt Cistanche tubulosa-ekstrakt kunne signifikant reducere serum-kreatinkinase, lactat-dehydrogenase og lactat-niveauer og øge hæmoglobin- (HB) og glukoseniveauer i ICR-mus, og dette kunne spille en anti-træthedsrolle ved at mindske muskelskaden og forsinkelse af mælkesyreberigelsen til energilagring i mus. Compound Cistanche Tubulosa-tabletter forlængede den vægtbærende svømmetid betydeligt, øgede leverglykogenreserven og sænkede serumurinstofniveauet efter træning hos mus, hvilket viste dens anti-træthedseffekt. Afkog af Cistanchis kan forbedre udholdenheden og fremskynde elimineringen af ​​træthed hos motionsmus og kan også reducere forhøjelsen af ​​serumkreatinkinase efter belastningsøvelser og holde ultrastrukturen af ​​skeletmuskulaturen hos mus normal efter træning, hvilket indikerer, at det har virkningerne for at øge fysisk styrke og anti-træthed. Cistanchis forlængede også signifikant overlevelsestiden for nitritforgiftede mus og forbedrede tolerancen over for hypoxi og træthed.

Klik på kronisk træthedssyndrom

【For mere info:george.deng@wecistanche.com / WhatsApp:8613632399501】

Nøgleord:bredbåndsimpedansspektroskopi; kredsløb modellering; enkeltcelle karakterisering; intracellulært calcium

1. Introduktion

Koncentrationen af ​​calcium-ioner (Ca2+) i forbindelse med muskelcelledrift har flere komplekse og dynamiske funktioner. Ca2+ i cytoplasmaets skeletmuskelceller har en række dybt vigtige funktioner, herunder regulering af mitokondriefunktionen og styring af signalveje mellem celler. I skeletmuskelsystemer har Ca2+ roller i excitation-kontraktion (EC) koblingen, mitokondriel funktion og som en signalregulator for protein og nedbrydning [1-3]. Disse funktioner styres omhyggeligt af den rytmiske bevægelse af Ca2+ fra opbevaring i det sarkoplasmatiske reticulum (SR) til cytosolen, fremmet af en række velkarakteriserede proteiner i skeletmuskelceller [4,5]. Som nævnt spiller Ca2+ en kontinuerlig rolle i muskelsammentrækning og udvikling af mitokondrielle abnormiteter, der fører til sygdomme, der hovedsageligt er karakteriseret ved symptomer, der involverer tab af muskelkontrol og træthed [6]. Naturlig muskelstruktur ændres med alderen, kaldet sarkopeni, eller som følge af en genetisk sygdom såsom Duchenne muskeldystrofi (DMD) eller atrofi som følge af cancerkakeksi eller erhvervet immundefektsyndrom (AIDS) [4,5,7,8]. I disse sygdomme resulterer det øgede cytoplasmatiske Ca2+ i den endelige nedbrydning af muskelfilamenter og proteolytiske veje, der opretholder muskelintegritet og mitokondriel polarisering, der hjælper med energistyring [9]. Derfor indebærer evnen til at skelne Ca2+-ændringer intracellulært potentielle diagnostiske og terapeutiske evner.

Ioner såsom Ca2+ og andre ladede partikler kan påvirke passagen af ​​intracellulære ladninger og eksterne elektriske stimuli. Elektrisk diagnose udgør en lovende metode til at karakterisere enkeltcellede cytoplasmatiske ændringer forbundet med sygdomme med muskelintegritet og kunne udvikle et unikt kvantitativt diagnostisk og evaluerende værktøj. Skift til elektrisk måling giver også mulighed for at anvende en hurtig og etiketfri tilgang til fremtidige diagnoser. Udvikling af en modelleret forståelse af, hvordan visse specifikke ændringer i sygdomsprogression i skeletmuskelceller påvirker celleimpedansen, lægger grundlaget for generering af en sygdomsspecifik elektrisk profil, der kunne være både tunerbar og forudsigelig. Bredbåndsspektroskopi måler celleimpedans over en bred vifte af frekvenser, der har været fremtrædende i at skelne enkeltcellekarakteristika, især i det sidste årti [10-13]. Ved at studere en bred båndbredde af frekvenser ved hjælp af spektroskopi kan impedansmålingen muliggøre karakterisering af forskellige cellulære rum baseret på spredningen af ​​signalet og dielektriske egenskaber af rummet. Biologiske væv og celler har dielektriske egenskaber af konduktivitet (σ) og permittivitet (ε), hvis vigtigste intracellulære spredningspåvirkninger er bredt udvidet i oversigtsartikler [14-16]. Forskellige undersøgelser har identificeret frekvenser af interesse for sygdomsidentifikation [17]. Ved frekvenser i megahertz-området er den dominerende spredningsmetode -spredning, hvilket gør, at de primære signalændringer kan tilskrives cytoplasmatiske ændringer på enkeltcelleniveau [16]. Ved at kombinere denne forståelse af bredbåndsmålinger med modellering af elektriske kredsløb studerer vi to cellepopulationers fysiologiske og dielektriske egenskaber.

2. Materialer og metoder

2.1. Cellekultur

L6 rottemyoblastceller (ATCC, CRL-1458) blev dyrket i overensstemmelse med American Type Culture Collection (ATCC) retningslinjer [18]. Cellerne blev dyrket i Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) base (Corning 10014CV, Corning, NY, USA) suppleret med 10% FBS (Gibco 10082147, Billings, MT, USA) og 5% Penicillin/Streptomycin (Carl440 Technologies 121, 125 , CA, USA) og inkuberet ved 37 ◦C med 5 % CO2. Medierne blev genopfrisket regelmæssigt, og cellerne blev delt, når konfluens på kolbens overflade blev opnået. I figur 1 er layoutet af, hvordan disse adhærente celler behandles og bruges til biologisk og elektrisk karakterisering, skitseret.

2.2. Ionomycin behandling

Celler blev løsrevet fra dyrkningskolberne og underkastet en tidligere etableret ionomycinbehandlingsprotokol [19,20]. Til elektriske målinger blev spun-down og løsnede celler suspenderet i 1 µM ionomycin (MilliporeSigma, Bedford, MA, USA, 56092-81-0) i en opløsning af fosfatbufret saltvand (PBS) med Ca2+ ( 1,5 mM). Cellerne forblev i denne opløsning i 10 minutter ved stuetemperatur, før de blev skyllet med Ca2+-fri PBS og klargjort til elektrisk måling i en opløsning af 8,5 % saccharose og 0,3 % dextrose. Lignende trin blev udført på adhærente celler efter introduktionen af ​​Ca2+-billeddannelsesmidlerne, som vist i figur 1.

2.3. Ca2+ billedbehandling

Til målinger af den intracellulære calciumkoncentration ([Ca{{0}}]i ) blev cellerne podet i en 96-brøndsplade i dyrkningsmediet beskrevet tidligere ved en tæthed på 1{{43 }}00 celler pr. brønd i tre dage ved 37 ◦C med 5 % CO2. Cellerne blev inkuberet med en fysiologisk opløsning indeholdende (mM) NaCl 140, KCl 2,8, CaCl2 2, MgCl2 2, glucose 10, Hepes-NaOH 10, pH 7,4, kaldet normal ekstern opløsning (NES) indeholdende 10 mg mL−1 bovint serumalbumin og 5 µM Fura-2 AM (Molecular Probes, Eugene, OR, USA) i 45 min. Derefter blev cellerne skyllet ved inkubation i NES med Ca2+ i 40 minutter ved 37 ◦C for at tillade de-esterificering af farvestoffet inde i cellerne. Ca2+-billeddannelse blev udført ved hjælp af epifluorescensmikroskopi, der hjælper med erhvervelsen af ​​Fura-2-emissionsfluorescensen ved både en excitation på 340 nm og derefter ved en excitation på 380 nm. Disse excitationer og målinger blev udført under anvendelse af en Xenon-lampe og monokromator-bølgelængdeomskifter Polychrome II (Till Photonics, Gräfelfing, Tyskland) for at isolere bølgelængden af ​​interesse. De emissionsfluorescerende billeder blev opsamlet ved hjælp af en 40× olieobjektivlinse, erhvervet af et intensiveret CCD-kamera eller et C6790 afkølet CCD-kamera (Hamamatsu Photonics, Hamamatsu, Japan), digitaliseret og opbevaret i en interface-computer. Softwaren Aquacosmos (version 2.0) blev brugt til at analysere det resulterende emissionsfluorescensforhold (f[340/380]) på udvalgte repræsentative cellulære områder efter subtraktion af baggrundsfluorescens. Efter at en initial baseline var etableret, blev 1 µM ionomycin i 1,5 mM Ca2+ tilsat i 10 minutter, mens fluorescens blev målt. Disse målinger blev udført i en tidsmæssig sekvens, der genererede spektrale målinger, der viser cellefluorescensforholdet før ionomycinbehandling, under behandling på 10 minutter, efter en vask af Ca2+-fri PBS og efter inkubation i en 8,5 % saccharose og 0,3 % dextrose løsning. De gennemsnitlige begyndelsesværdier og efterbehandlingsværdier blev beregnet ved hjælp af 25-tidspunkter i det indledende plateau og plateauet efter vask, som blev brugt til at beregne forholdet. Optagelsestiden for hver fluorescensemission var 0,5 s, og den samlede billeddannelse varede 1,5 time. Yderligere eksperimenter blev udført under anvendelse af saccharoseopløsning med 10 mM EGTA, en calciumchelator, for at forhindre enhver mulig ekstern Ca2+-interferens-postionomycinbehandling, hvilket viste lignende resultater.

2.4. Elektrisk måling

Før celleforberedelse eller behandling blev en coplanar waveguide (CPW) elektrodeanordning samlet ved at fastgøre en polydimethylsiloxan (PDMS) kanal til CPW overfladen på linje med et seriemellemrum. Yderligere detaljer om CPW og kanaldesign kan findes i tidligere publikationer [21-23], og et forenklet skema kan ses i figur 2. Den samlede enhed blev placeret på et mikroskopbord og en isotonisk opløsning af 8,5 % saccharose og {{ 5}},3 % dextrose i deioniseret vand blev ledt igennem for at teste samlingsforseglingen før tilsætning af prøver. Celler behandlet med ionomycin og vasket med Ca2+-fri PBS blev suspenderet i den samme saccharose- og dextroseopløsning i en koncentration på 500,000 celler/ml, og en prøve blev taget op i en sprøjte til injektion i kanalsamlingen. Baseret på tidligere arbejde forbliver cellerne i deres integritet i op til en time, hvilket muliggør kontinuerlig måling.

Når alle komponenter var på plads, blev celler indført i kanalen med en prøvestrømningshastighed på {{0}},1 µL/min sammen med en strøm af sheath-saccharose med en hastighed på 0,2 µL/min. Et elektrisk dielektroforetisk (DEP) signal på -9 dBm ved en frekvens på 500 MHz blev indført mellem seriegabet i elektroderne for at fange cellen. Derefter blev et bredbåndssweeping-signal på -15 dBm fra 9 kHz til 9 GHz anvendt til at måle S-parametrene med og uden cellen til stede ved hjælp af en virtuel netværksanalysator (Keysight E5080A, Santa Rosa, CA, USA). S-parametrene inkluderer reflektionskoefficienten (S11) og transmissionskoefficienten (S21). S11 er repræsentativ for den effekt, der reflekteres til strømindgangsport 1 af systemet, mens S21 er repræsentativ for den effekt, der passerer gennem systemet til port 2 [24]. Disse målinger blev gentaget efter frigivelsen af ​​den tidligere fangede celle for at bestemme baggrundsmålingen af ​​saccharoseopløsningen for disse parametre. De differentielle S-parametre med og uden cellen til stede, ∆S11 og ∆S21, repræsenterer cellens bidrag til effektreflektion og transmission. S-parameterspektrene som funktion af sweeping-frekvensen blev yderligere tilpasset til en kredsløbsmodel for at udtrække impedans forbundet med cellen.

De rå signaler for ∆S11 og ∆S21 taget fra Keysight-netværksanalysatoren for hver celle ved alle 201 frekvenser vises som spektre. Ved at bruge impedansmålingerne for disse spektre blev kurvetilpasning ved hjælp af simuleret kredsløbsmodellering brugt til at opnå dielektriske parametre.

2.5. Simuleret kredsløbsmodellering

Simulering af en enkeltskalskredsløbsmodel blev udført for at finde den optimale tilpasning af cytoplasmamodstanden og kapacitansen for hver elektrisk målt celle ved hjælp af Advanced Design System (ADS, version 2023.01) software fra Keysight. Kredsløbsdesignerne for simuleringerne kan ses i figur 2b,c. For hver baggrundsfil blev variabler indstillet til at passe til egenskaberne af elektrodesystemet og opløsningen i et repræsentativt kredsløb for at bestemme de bedste værdier til at fortsætte med at matche selve cellen. Ved at bruge de optimale baggrundskarakteristika blev et kredsløb, der modellerede cellelagene af membran og cytoplasma som modstand-kondensator-par, brugt til at finde det bedste estimat af cytoplasmaegenskaberne. Baseret på tidligere målinger af L6-celler blev membranmodstanden og kapacitansen holdt konstant ved 235 MOhm og 34,5 pF [25]. Tilpasningsprocessen blev automatiseret ved at behandle filnummeret som en variabel for hvert matchende par af baggrunds- og cellemålingsfiler i lister. Målvægtene beskrevet i tabel 1 blev tildelt ved at lave et fælles mål for hver optimering og signaltype og minimere fejlen for at passe til alle frekvenser og et område af interesse. De anvendte vægte blev bestemt ved at sammenligne den fejl, der blev genereret ved at tilpasse en tilfældig mindre delmængde af spektre for bedst at repræsentere baggrunden og spektreformen (figur A1 og A2). De valgte vægtværdier for at reducere den samlede tilpasningsfejl for differentialdelta (∆) spektrene, som endte med at være 5 gange baggrundsvægtene (Figur A3). De mere specifikke og stærkt vægtede mål blev anvendt på frekvensområder, hvor de behandlede og ubehandlede celler har den største forskel i S-parameterspektrene. Disse frekvensområder matcher den teoretiske forståelse af de frekvenser, hvor cytosolbidraget dominerer [26]. Derudover blev en samlet vægtstigning brugt til at værdiansætte tilpasningen af ​​∆S11 for at kompensere for de mindre målte værdier.

For hvert par blev baggrundsvariablerne tunet ved at minimere forskellen mellem intervallerne beskrevet i tabel 1 ved at anvende de beskrevne mål- og vægtværdier. Tilpasningsvariablerne blev derefter anvendt til at passe til cellekredsløbsmodellen baseret på de resterende mål for at finde Rc og Cc. Ud fra de ekstraherede variable blev den dielektriske permittivitet (σ) og ledningsevne (ε) af cytoplasmaet beregnet ved hjælp af ligning (1) og (2), som set i tidligere single-shell fittings [21].

I denne enkeltskalsmodel hjælper den gennemsnitlige celleradius som bestemt ved mikroskopisk billedanalyse (r0) med at beregne den cytoplasmatiske dielektriske permittivitet (εc) og ledningsevne (σc).

2.6. Statistisk analyse

Statistisk analyse blev udført under anvendelse af Python (3.11.2) pakken Scipy. statistik (v1.10.1) at sammenligne betyder at bruge en uparret Elevs t-test. Statistisk sammenligning af fordelinger blev udført ved hjælp af en Kolmogorov-Smirnov-test. For begge blev en p-værdi på mindre end 0,05 betragtet som statistisk signifikant.

3. Resultater

For at bestemme Ca{0}}-ændringen blev fluorescensen overvåget over tid og den gennemsnitlige f[34{{20}}/380] i perioderne før ionomycin tilsætning og efter den maksimalt bestemte forsøgslængde på 1,5 time, baseret på levedygtighed i saccharose, som vist i figur 3a. Selvom cellen langsomt vendte tilbage til det oprindelige fluorescensniveau, sås der stadig en stigning i mange af cellerne. Efter måling af disse gennemsnitsværdier før og efter behandling for hver behandlet celle, blev fordelingen analyseret for at bestemme, hvordan behandlingen ændrede f[340/38{{30}}] eller relativ Ca {{10}} koncentration, som er vist i figur 3b. Fordelingen af ​​f[340/380] viser en let topforskydning højere efter behandling med ionomycin og en bemærkelsesværdig bredere spredning. Middel- og standardfordelingen af ​​f[340/380]-signaler fra præ- og postionomycinbehandlingsceller er henholdsvis 0,083 ± 0,008 og 0,084 ± 0,025. Mens middelværdien af ​​det fluorescerende signal kun er lidt højere for befolkningen efter behandlingen med ionomycin, er der en signifikant ændring i formen af ​​selve fordelingen (p=0.012). Men ser man på fordelingen i midten af ​​den periode, hvor elektrisk måling finder sted, er der en signifikant stigning i middelværdien til 0,102 ± 0,041 (p < 0,0009) og et signifikant skift i fordelingen (p < 0,0008). Dette indikerer, at selvom cellerne til sidst vender tilbage til det oprindelige Ca2+-niveau, er der en stigning i den periode, hvor målingen finder sted. Ved at behandle L6 skeletmuskelceller med ionomycin i en kort periode førte Ca2+-mobilitet til en udvidet stigning i cytoplasmatisk Ca2+ ved at flytte det nødvendige elektriske potentiale for gatede kanaler [19]. Baseret på dette tidligere arbejde er membranhyperpolarisering begrænset til de første tre minutters behandling, hvor ionomycin kan fremkalde forbigående udadgående strømme såsom Ca2+-aktiveret K+-strøm (IKCa), som vist i vores tidligere artikel [19]. Det tidligere arbejde fandt dog også, at stabilt membranpotentiale genetableres inden for 10 min. På grund af dette og den eksterne tilsætning af calcium skyldes den lille ændring i fordelingen primært internaliseringen af ​​eksternt tilgængeligt calcium. På trods af det synlige skift i distributionen er der stadig et betydeligt overlap, noget der også ses i fordelingen af ​​senere elektriske målinger.

Efter etableringen af ​​ionomycinbehandlingen som en metode til at øge den intracellulære Ca2+ i den L6-muskulære cellelinje, blev bredbåndsimpedansspektroskopi anvendt som en metode til hurtig celleindfangning og karakterisering af intracellulære egenskaber. Samlingen af ​​spektre for hver celle blev undersøgt og derefter kompileret til statistisk sammenligning af middelkurver og afvigelser i signaler mellem behandlingstyper, som vist i figur 4. I denne figur er den ubrudte middellinje ledsaget af et lysere skyggeområde, der viser afvigelse mellem elektrisk målte celler ved hver frekvens. Ud fra denne figur, mens overlapningen mellem grupperne er til stede ved de fleste frekvensværdier, skelner adskillige forskellige regioner ubehandlede L6-celler (UNT) og de ionomycinbehandlede celler (TRT) inklusive 10 MHz til 1 GHz-området for ∆S11-signalet (figur 4a) og 1 MHz til 10 MHz-området for ∆S21-signalet (figur 4b). Disse intervaller er relevante for cytoplasmaegenskaberne i betragtning af spredningsegenskaberne for de fleste biologiske materialer. Ved disse frekvenser menes -spredning at dominere det elektriske signal [16]. Selvom de er visuelt forskellige i flere områder, især MHz-regionen, er forskellene bedre karakteriseret og forklaret ved brugen af ​​kredsløbsmodellering til at udtrække de dielektriske ændringer i rummet.

Overlapningen på grund af de subtile forskelle mellem UNT- og TRT-populationerne kan også visualiseres fra impedansmålingerne svarende til den fluorescerende Ca2+-fordeling, vist i figur 3. Selvom varigheden af ​​den elektriske måling er længere end den for calcium-billeddannelse, var der ingen observeret signaldrift ved sammenligning af celler målt i begyndelsen eller slutningen af ​​timen, hvilket indikerer, at lækstrøm, hvis den findes, er svag efter cellevask. Således negligeres indflydelsen af ​​lækstrøm på cytoplastisk impedans i sensingsperioden. Ser man på et relevant frekvenspunkt ved 190 MHz, ligner ∆ S11-signalfordelingen spredningen set i figur 5, hvor TRT-populationen har en bredere fordeling, specifikt i den stigende signalretning. UNT-populationen har et ∆S11-signal på 3,5 ± 3,3 × 10−4 sammenlignet med TRT-populationen, som havde et signifikant højere signal på 8,1 ± 4,5 × 10−4 målt ved 190 MHz (p=0.021 ). Ved denne frekvens er der et signifikant skift i fordelingen, som afspejler Ca2+-skiftet, hvilket indikerer en følsomhed over for ioniske ændringer (p=0.017). I MHz-området kan det elektriske signal trænge igennem cellemembranen til målinger af cytoplasmaet, og i det nedre MHz-område er der minimal måleinterferens fra organelstruktur eller store molekyler inde i cellen, hvilket gør 190 MHz til en ideel frekvens at se på de dielektriske egenskaber af selve cytoplasmaet [15,16].

For bedre at forstå implikationerne af de indsamlede ∆S11- og ∆S21-spektre passer en enkelt skalkredsløbsmodel til de elektriske egenskaber af cytoplasmamodstanden (Rc) og kapacitansen (Cc). Kredsløbsmodellen bygger på den antagelse, at den inducerede stigning i Ca2+ ikke påvirker membranegenskaberne, eller at membranen hurtigt vender tilbage til sin typiske homeostase. Antagelsen understøttes af den gradvise tilbagevenden af ​​Ca2+ over tid til den oprindelige koncentration, da homeostase-processerne regulerer de enkelte celler. Ved at anvende modellen på hver kurve kan den måde, egenskaber påvirker spektrene, undersøges. I spektrene fundet i figur 6 er repræsentative celler fra hver behandlingsgruppe vist med simuleringer, der nøje matcher de spektrale former for de eksperimentelt genererede kurver. De ekstraherede værdier af disse celler er groft sagt 0,3 MOhm for Rc for begge behandlingstyper og 3,89 fF og 3,76 fF for Cc for henholdsvis UNT- og TRT-cellerne. Mens forskellene var minimale i selve kredsløbsværdierne, svarer de dielektriske parametre til at have signifikant forskellige tilpasningsværdier.

Ved at bruge single-shell-modellen og ligning (1) og (2), kan fitmodstanden (Rc) og kapacitansen (Cc) af cytoplasmaet også udvides til beregninger af cytoplasmatisk permittivitet (εc) og ledningsevne (σc). Baseret på de ekstraherede parametre var σc for UNT- og TRT-populationerne 0.1929 ± 0.0002 S/m og { {19}}.1933 ± 0.0henholdsvis 008 S/m. Selvom TRT-cellerne var små i størrelse, havde de en signifikant højere ledningsevne (p=8.3 × 10−5). Den ekstraherede εc af UNT-celler var 11,3 ± 0,34 ε0 og havde et signifikant lavere (p=0.0063) gennemsnit på 10,9 ± 0,13 ε0 for TRT. Ser man på fordelingen af ​​ekstraheret σc og εc i figur 7, er der også signifikante forskelle i fordelingen af ​​tilpassede parametre mellem ubehandlede og ionomycinbehandlede celler. Proportionalt set har en højere procentdel af behandlede celler en lidt større ledningsevne og en mindre permittivitet end den ubehandlede cellefordeling.

【For mere info:george.deng@wecistanche.com / WhatsApp:8613632399501】