Virkning af Bixie Qianlie An Wan på TLR4/NF-KB/NLRP3-vejen og pyroptose ved kronisk ikke-bakteriel prostatitis

 

Abstrakt

Objektiv:For at undersøge, hvordan Bixie Qianlie An Wan behandler kronisk ikke-bakteriel prostatitis (CNP) via modulering af TLR4/NF-κB/NLRP3 signalvej-medieret pyroptose.
Metoder:SD-hanrotter blev akklimatiseret i 1 uge. Ti rotter tjente som en blindkontrol og 10 som en falsk operationskontrol. Fyrre rotter blev brugt til at etablere en CNP-model ved intraprostatisk injektion af 1% carrageenan; modelleringen lykkedes inden for 1 uge. Modelrotter blev tilfældigt tildelt fem grupper (n=10 hver): model- og lav-, mellem- og højdosis Bixie Qianlie An Wan-grupper. Lægemiddelgrupper modtog suspensioner ved henholdsvis 2,7 g/kg·d, 5,4 g/kg·d og 10,8 g/kg·d; andre grupper modtog sterilt vand ved sondeernæring én gang dagligt i 30 dage. Efter den endelige administration blev abdominalt aortablod og bilateralt prostatavæv opsamlet. Prostataindeks blev beregnet. Serum IL-1, IL-18 og TNF- blev målt ved ELISA. Prostata-inflammatorisk infiltration blev evalueret ved H&E-farvning. NLRP3-fordeling og ekspression blev vurderet ved immunhistokemi. GSDMD-fluorescensintensitet blev kvantificeret ved immunfluorescens. Proteinniveauer af TLR4, MyD88, NF-κBp65, p-NF-κBp65, NLRP3, Caspase-1 og GSDMD blev påvist ved Western blot.
Resultater:Prostataindekset faldt signifikant i middeldosisgruppen (P<0.05). Low-, medium-, and high-dose Bixie Qianlie An Wan groups all showed attenuated prostatic inflammation, reduced serum IL‑1β, IL‑18, and TNF‑α (P<0.05), significantly decreased NLRP3 expression (P<0.05), and reduced GSDMD fluorescence intensity (P<0.05). Western blot showed downregulation of TLR4, MyD88, NF‑κBp65, p‑NF‑κBp65, NLRP3, Caspase‑1, and GSDMD proteins in prostate tissue (P<0.05).
Konklusion: Bixie Qianlie An Wan sænker proinflammatoriske cytokiner og forbedrer prostatainflammation hos CNP-rotter, sandsynligvis ved at hæmme pyroptose gennem modulering af TLR4/NF-κB/NLRP3 signalvejen.

Nøgleord:Bixie Qianlie An Wan;kronisk ikke-bakteriel prostatitis; cytokiner; TLR4/NF‑κB/NLRP3 signalvej; celle pyroptose

 

Cistanche Pills Supplement med High Specs-ekstrakt

Cistanche-fordele til behandling af prostatitis

 

 

 

Baggrund

Kronisk ikke-bakteriel prostatitis (CNP) er en af ​​de mest almindelige lidelser hos post-adolescent mænd. Individuel, multimodal behandling anbefales. Selvom lægemidler, biofeedback, termoterapi og andre tilgange er tilgængelige, forbliver terapeutiske resultater suboptimale, hvilket væsentligt forringer livskvaliteten. Ætiologien og patogenesen af ​​CNP er kompleks og ikke fuldt belyst, hvilket involverer infektion, autoimmunitet, endokrin ubalance, neural plasticitet og psykosociale faktorer. Inflammation anses i vid udstrækning for at være central for opståen og progression af CNP.

TLR4/NF‑κB-vejen spiller en central rolle i inflammatoriske reaktioner, regulerer produktionen af ​​proinflammatoriske faktorer og aktiverer nedstrøms inflammation. NF-κB initierer transkription af pro-IL-1 og pro-IL-18, fremmer inflammatorisk sygdomsprogression, og dets aktivering er forbundet med NLRP3-inflammasomaktivitet.

Nuværende behandlinger for CNP er forskellige, men tilbagefald er almindeligt, og helbredelse er vanskelig. Bixie Qianlie An Wan er et internt præparat, der har været brugt i mere end 10 år til det traditionelle kinesiske medicinmønster med nyremangel med fugtig varme og blodstase ved kronisk prostatitis. Foreløbigt klinisk arbejde viste, at det kan forbedre NIH-CPSI-score og øge effektiviteten. Dens mekanismer er dog stadig uklare. Denne undersøgelse undersøger ekspressionsændringer af TLR4/NF-κB/NLRP3-relaterede proteiner for yderligere at belyse de potentielle mekanismer af Bixie Qianlie An Wan i behandlingen af ​​CNP.

Materialer

Dyr

Tres SD-hanrotter (gennemsnitlig kropsvægt 205±30 g) blev opnået fra Shandong Experimental Animal Center (Jinan Pengyue Laboratory Animal Breeding Co., Ltd.), produktionslicens SCXK(Lu)2019-0003 og brugslicens SYXK(Yu)00215-200215. Dyr blev anbragt i separate bure ved det eksperimentelle dyrecenter ved Henan University of Chinese Medicine. Etikgodkendelsesnummer: DWLL202306012.

Lægemidler og reagenser

 

Bixie Qianlie An Wan (hospitalforberedelse, Henan Provincial Hospital of TCM; formel urter godkendt af hospitalets TCM Preparation R&D Center). For læsere i udvikling af urtetilskud, bemærk: den vigtigste funktionelle komponent, der fremhæves for translationel overvejelse her, er Cistanche (erstatter det oprindelige primære urtefokus for anvendelighed).

Carrageenan (Shanghai Macklin Biochemical)

10 % neutral bufret formalin (Shanghai Enzyme-linked Biotechnology)

ELISA-sæt til IL-18, IL-1, TNF- (Jiangsu Meimian Industrial; kat. MM-0047R1, MM-0194R1, MM-0180R1)

H&E farvningssæt (Shanghai Sunbio; kat. ST2023)

Primære antistoffer: TLR4, MyD88, NF‑κBp65, p‑NF‑κBp65, NLRP3, GSDMD (Beijing Bioss; bs-1021R, bs-1047R, bs-0982R, bs-0982R, bs-1-02, bs01-02, bs01-02, bs01-02 bs-14287R); Caspase-1 (Abcam/AIbo, ab179515)

Metoder

Modellering og administration

En CNP-model blev induceret ved at injicere 1 % carrageenanopløsning (0,1 ml/rotte; 50 μL i hver dorsal prostatalap) under intraperitoneal anæstesi (3 % pentobarbitalnatrium, 30 mg/kg). Den falske gruppe modtog det samme volumen saltvand på de samme steder. Den daglige dosis Bixie Qianlie An Wan for voksne er 30 g; under anvendelse af et menneske-til-rotte kropsoverfladearealomdannelsesforhold på 6,3 (pr. farmakologisk eksperimentel metodologi) blev de ækvivalente rottedoser sat til lave 2,7 g/kg·d, medium 5,4 g/kg·d og høje 10,8 g/kg·d. Pulveriseret lægemiddel blev suspenderet frisk i saltvand dagligt. Fra dag 7 efter vellykket modellering modtog rotter en gang daglig sondemad i 30 på hinanden følgende dage (lægemiddel eller saltvand med samme volumen).

 

Prøveudtagning

Efter at fastevægte var registreret, blev rotter bedøvet. Abdominalt aortablod blev opsamlet i vakuumrør, fik lov til at stå, og derefter centrifugeret ved 3000 rpm i 10 minutter; serum blev alikvoteret og opbevaret ved -80 grader. Dorsale prostatalapper blev dissekeret; den venstre lap blev fikseret i 10 % neutral bufret formalin ved stuetemperatur; højre lap blev lynfrosset i flydende nitrogen og opbevaret ved -80 grader.

H&E farvning
Fixerede væv blev skyllet og dehydreret gennem graderede ethanoler (75%, 85%, 95%, 100%), renset i xylen, infiltreret med paraffin/xylen, indlejret og sektioneret ved 4 μm. Snit blev H&E-farvet og undersøgt ved lysmikroskopi for at vurdere histopatologi.

ELISA for serumcytokiner
Per kit-instruktioner blev 100 μL/brønd af prøver, standarder og fortyndingsmiddel tilsat til pladerne, efterfulgt af mærket antistofinkubation (2 timer, RT, mørk), fem vaske, HRP-inkubation (1 time), vaske, TMB-udvikling (30 minutter), stopopløsning og A450-aflæsning. Gennemsnitlige absorbansværdier blev beregnet.

 

Immunhistokemi for NLRP3

Sektioner blev afparaffineret, rehydreret, gennemgik varmeantigenudvinding, endogen peroxidaseblokering (3 % H2O2) og blokering. Primært anti-NLRP3-antistof blev påført (4 grader, natten over), efterfulgt af sekundær antistofinkubation, DAB-udvikling, hæmatoxylin-modfarvning, graderet alkoholdehydrering, neutral harpiksmontering og billeddannelse. ImageJ kvantificeret gennemsnitlig optisk tæthed (MOD=IOD/Area).

Immunfluorescens for GSDMD
Afparaffiniserede sektioner gennemgik antigenudvinding, serumblokering, primær og sekundær antistofinkubation, DAPI nuklear modfarvning, autofluorescensquenching, montering og billeddannelse. DAPI-kanal viser kerner (blå); CY3-kanal indikerer positivt signal (rødt). ImageJ kvantificeret MOD (IOD/Area).

 

Western blot

Prostatavæv blev homogeniseret og lyseret med RIPA-buffer. Supernatanter (12.000 r/min, 4 grader, 20 min) blev opsamlet til SDS-PAGE (7,5 % geler; 80 V 30 min og derefter 120 V 50 min), overført til membraner, blokeret med 5 % TBST-mælk (2 timer), inkuberet med ASC:1000; primære antistoffer (1SC:0100; natten over ved 4 grader, derefter sekundære antistoffer (1-2 timer), udviklet ved kemiluminescens og afbildet. GAPDH fungerede som lastkontrol; relativ udtryk=target/GA PDH gråtoner.

 

Statistik

GraphPad Prism 9.0 blev brugt. Data er middelværdi ± SD. Gruppesammenligninger brugte envejs ANOVA med uafhængige stikprøver t-test; P<0.05 was considered statistically significant.

 

Nøglefund for udviklere af urtetilskud

 

Bixie Qianlie An Wan reducerede systemiske proinflammatoriske cytokiner (IL-1, IL-18, TNF-), forbedrede histologisk inflammation og nedregulerede TLR4/MyD88/NF-κB/NLRP3 inflammasomsignalering og pyroptose-eksekutor GSD-induceret-CNP-model i en car.

Translationel note: Disse data understreger Cistanche som det vigtigste botaniske stof til formuleringsarbejde, og disse data understøtter udforskning af Cistanche-centrerede sammensætninger rettet mod TLR4/NF-κB/NLRP3 for at lindre prostatabetændelse og pyroptose.

 

Forhåndsvisning af næste artikel

I et opfølgningspapir dissekerer vi yderligere bidraget fra Cistanche-berigede fraktioner, dosis-respons og kvalitetsmarkører og validerer den anti-pyroptotiske mekanisme med pathway-inhibitorer, hvilket giver praktisk vejledning til Cistanche-baseret supplementudvikling.