Antioxidant, antiinflammatorisk og antialdringspotentiale af en Kalmia Angustifolia-ekstrakt og identifikation af nogle vigtige forbindelser del 2

Venligst kontaktoscar.xiao@wecistanche.comfor mere information

3. Resultater

3.1.Evaluering af cellernes levedygtighed

Sikkerheden af ​​ekstraktet blev vurderet ved hjælp af MTT-assayet, som evaluerer cellens metaboliske aktivitet [27,28]. Derfor giver det indblik i cellernes levedygtighed og mere præcist i primære humane keratinocyters levedygtighed i denne undersøgelse. Resultaterne viste, at efter 48 timers behandlinger er K. Angustifolia-ekstraktet sikkert ved op til 200 ug/mL med cellelevedygtighed på 88±12 procent (figur 1). K. Angustifolia forårsagede cytotoksicitet ved en koncentration på 400 ug/mL med en cellelevedygtighed på 51 ±8 procent. Kort sagt bevarer K.angustifolia-ekstraktet et højt niveau af cellelevedygtighed ved koncentrationer fra 0 til 200 ug/ml.

Figur 1. Cytotoksicitetsvurdering af K. Angustifolia-ekstraktet på primære humane keratinocytter blev udført ved at måle metabolisk aktivitet med et MTT-assay. Alle eksperimenterne blev udført i mindst tre eksemplarer, og de præsenterede resultater er repræsentative for mindst to forskellige eksperimenter (N=2, n=3). Data præsenteres som middel af triplikaterne ± SD Den vandrette linje er sat til 50 procent cellelevedygtighed. Statistisk signifikans blev bestemt ved hjælp af en envejs ANOVA efterfulgt af en Dunnett's post hoc test (p-værdi<0.05 compared="" to=""><>

Klik venligst her for at vide mere

3.2. Antioxidant kapacitet

Antioxidantpotentialet blev vurderet med to forskellige assays, ORAC-assayet og et cellebaseret assay ved brug af DCFH-DA. Den første målte inhiberingen af ​​peroxylradikaler af det undersøgte ekstrakt. Resultater indikerer, at K.angustifolia-ekstraktet havde en stærk antioxidantkapacitet med en ORAC-værdi på 16±3 μmol TE/mg (tabel 1).cistanche wirkungDette resultat kan sammenlignes med de positive kontroller quercetin og catechin, kendt som stærke antioxidantforbindelser, som præsenterede ORAC-værdier på henholdsvis 21±2 og 20±2 μmol TE/mg, hvilket bekræfter antioxidantevnen af ​​det undersøgte ekstrakt.

Tabel 1. Antioxidantaktivitet målt ved et ORAC-assay af K.angustifolia-ekstraktet. Data præsenteres som middelværdier af triplikaterne ± SD. Alle eksperimenterne blev udført i tre eksemplarer, og de præsenterede resultater er repræsentative for mindst to forskellige eksperimenter (N=2, n =3). Quercetin og catechin blev anvendt som positive kontroller.

Antioxidantpotentialet af K.angustifolia blev yderligere bekræftet ved hjælp af det DCFH-DA cellebaserede assay på humane hudfibroblaster WS1 (figur 2). Resultaterne viste, at K. Angustifolia-ekstraktet var stærkt antioxidant i koncentrationer så lave som 3,13 ug/mL med en inhibering på 83,7±0,8 procent af DCFH-oxidation. Dette resultat kan sammenlignes med det positive kontrol-quercetin ved en koncentration på 1,56 ug/mL, som præsenterede en hæmningsprocent af DCFH-oxidation på 87,41±0.03 procent. Bestemmelsen af ​​den halvmaksimale inhiberende koncentration (IC50) viste imidlertid, at quercetin er ca. 2 gange mere effektivt sammenlignet med K. Angustifolia-ekstraktet med respektive ICso-værdier på 0.168±{ {25}},009 ug/ml og 0,37±0,02 ug/mL.

Figur 2. Antioxidantaktivitet af K. Angustifolia-ekstrakterne på den humane hudfibroblast WS1-cellelinje behandlet med tertbutylhydroperoxid(t-BuOOH), bestemt ved et cellebaseret assay under anvendelse af DCFH-DA. Alle eksperimenter blev udført i mindst tre eksemplarer, og de præsenterede resultater er repræsentative for mindst to forskellige eksperimenter (N=2, n=3). Data præsenteres som middel af triplikaterne ± SDDen vandrette linje er sat til 50 procent inhibering. Statistisk signifikans blev bestemt ved hjælp af en envejs ANOVA efterfulgt af en Dunnett's post hoc test (p-værdi<0.05 compared="" to="" control="" of="" cells="" treated="" with="" only="" t-buooh（200μm）;*=""><0.05）or bonferroni's="" post="" hoc="" test=""><0.05 compared="" to="" positive="" control="" quercetin="" （1.56="" μg/ml）;#="" p-value=""><>

3.3. Anti-inflammatorisk potentiale

Den antiinflammatoriske aktivitet af K.angustifolia-ekstraktet blev evalueret på grundlag af dets evne til at reducere nitritproduktion i makrofager aktiveret med LPS (figur 3).citrus bioflavonoiderResultaterne præsenteret i figur 3 viste, at K.angustifolia-ekstraktet signifikant inhiberede NO-overproduktion ved en koncentration så lav som 20 ug/ml. En større inhibering blev observeret ved koncentrationer på 40 og 80 ug/ml, med inhiberingsprocenter af NO-produktion på henholdsvis 25 ± 3 procent og 49± 2 procent. Dette kan sammenlignes med L-NAME positive kontrol ved en koncentration på 250 uM (67 ug/mL), som hæmmede overproduktionen af ​​NO med 37±2 procent.

3.4. Histologiske analyser

Anti-aldringspotentialet af K. Angustifolia-ekstraktet blev evalueret ved hjælp af rekonstruerede huderstatninger fremstillet efter selvsamlende metoden.cynomorium fordeleHistologiske analyser af Massons trichromfarvede sektioner (Figur 4A) bekræftede huderstatningens integritet for hver tilstand, da hver huderstatning præsenterede en dermal laver og en differentieret epidermis. Fra disse histologiske snit blev tykkelsesmålinger af den levende epidermis og dermis udført (figur 4B). For den levende epidermis blev der ikke observeret nogen signifikant stigning med K.angustifolia-ekstraktet med en foldændring på 1.0(defineret som forholdet mellem den behandlede erstatnings tykkelse og tykkelsen af ​​kontrollen uden behandling). Hvad angår dermis, blev der observeret en signifikant stigning i dermal tykkelse (med en foldændring på 1,36) for K.angustifolia-ekstraktet ved 25 ug/mL, hvilket tyder på, at ekstraktet har en effekt på det dermale lag og mere præcist på fibroblaster, og kunne endda fremme syntesen af ​​ekstracellulære matrixkomponenter.

En DMSO-kontrol på {{0}},2 procent (u/o) blev testet for hvert eksperiment, da ekstraktet blev opløst i 0,2 procent DMSO, men der blev ikke observeret nogen forskel sammenlignet med kontrollen uden behandling (data ikke vist). Endvidere blev koncentrationer på 50 ug/mL og 100 ug/mL K. Angustifolia også testet på huderstatninger, og den samme stigning i dermal tykkelse blev observeret som for 25 ug/mL med foldændringer på henholdsvis 1,3 og 1,2 (data ikke vist). Således var 25 ug/ml den optimale koncentration, og yderligere analyser blev udført med denne koncentration.

Figur 4. Virkning af K.angustijolia-ekstraktet på rekonstrueret huderstatningshistologi. (A) Histologiske analyser af Massons trichromfarvede huderstatningssektioner. Stratum corneum i mørkeblå, levende epidermis i violet og dermis i lyseblå. Mål 10×, målestok:100 um. (B) Foldeændring i tykkelsen af ​​den levende epidermis og dermis. Foldændring er defineret som forholdet mellem behandlede erstatningers tykkelsesværdi og kontrol (uden behandling) tykkelsesværdi. To erstatninger for hver tilstand blev analyseret og bekræftet med tre forskellige cellepopulationer (N =3, n =6). Data præsenteres som gennemsnit af de tre forskellige cellepopulationer ± SDStatistisk signifikans blev bestemt ved hjælp af en t-test,**p-værdi<>

3.5. Immunfluorescensfarvning

Fire proteiner, hvis mængder generelt er nedsat i hudens aldring, blev observeret med immunfluorescensfarvning: elastin, type I kollagen (kollagen-1), type alt kollagen (kollagen-3) og aquaporin-3 （ Figur 5）. K. Angustifolia-ekstraktet ved 25 ug/ml så ud til at øge elastinekspression (figur 5E) i det dermale rum sammenlignet med kontrollen (figur 5A). I kontroltilstanden (uden behandling) var elastinproteinet svagt udtrykt. En semikvantificering af fluorescensintensitet blev udført på de immunfluorescensfarvede sektioner for at få indsigt i stigningen i fluorescens efter behandlinger.ørkenhyacintPixelintensitetsanalysen bekræftede resultaterne vist i figur 5. Huderstatninger behandlet med K. Angustifolia-ekstraktet ved 25 ug/ml viste en stigning i pixelintensitet for elastin på 18 procent sammenlignet med kontrollen uden behandling. Med hensyn til kollagen-1 forbedrede behandling med K. Angustifolia dets ekspression (figur 5F) sammenlignet med kontrollen (figur 5B). Faktisk resulterede behandling med ekstraktet ved 25 ug/mL i den højeste stigning i pixelintensitet for kollagen-1 med en stigning på 46 procent. For kollagen-3 forblev udtrykket imidlertid ens (figur 5G) sammenlignet med dets modstykke (figur 5C). Endelig syntes ekspressionen af ​​aquaporin-3, et membranprotein fundet på epidermale keratinocytter, også at være ens efter behandlinger ved 25 ug/ml (figur 5H) sammenlignet med kontrollen (figur 5D). Der var ingen signifikant stigning i pixelintensitet for kollagen-3 og aquaporin-3-ekspression efter behandling med K. Angustifolia-ekstraktet ved 25 ug/mL.

Figur 5. Ældningsmarkører visualiseres ved immunfluorescensfarvning. Elastin (A, E), kollagen-1(B, F), kollagen-3(C, G) og aquaporin-3(D, H) udtryk, som normalt falder under huden aldring, er vist i sunde huderstatninger ubehandlet (AD) og behandlet med K.angustifolia-ekstraktet ved 25 ug/mL(EH). Kernerne blev farvet med DAPI (blå). Den stiplede linje repræsenterer adskillelsen mellem epidermis og dermis. To erstatninger for hver tilstand blev analyseret og bekræftet med tre forskellige cellepopulationer (N= 3, n= 2; skalalinje: 100 um).

3.6. Isolering og identifikation af nogle hovedforbindelser af K. Angustifolia-ekstrakten

Oprensning af ekstraktet blev udført på en åben Diaion9-søjle ved eluering med MeOH/HO med stigende procenter af MeOH (0-100 procent). Denne første oprensning førte til opnåelsen af ​​fire fraktioner (fraktioner AD). Fraktion B blev underkastet silicagelsøjlekromatografi, og dette førte til isolering af catechin og epicatechin (fraktion B1). Forbindelsernes identitet blev bestemt ved NMR-analyse og ved sammenligning med kommercielle standarder. Catechin og epicatechin er allerede blevet identificeret i K. Angustifolia [9]. Fraktion C blev også oprenset ved silicagelsøjlekromatografi, og denne proces resulterede i 7 separate fraktioner (C1 til C7). Oprensning af C3-fraktionen udført på octadecylsilan-kromatografisøjlen førte til isolering af en bleggul forbindelse. Molekylformlen (C20Hj8O) af denne forbindelse blev bestemt ud fra dens HR-ESI-MS-spektrum på basis af en kvasimomolekylær iontop ved m/z 434,3511 [M plus H]t. Baseret på NMR 'H og 13C spektre blev den isolerede forbindelse identificeret som avicularia (fraktion C3B). Så vidt vi ved, blev denne forbindelse først rapporteret i K. Angustifolia, men er fælles for adskillige planter [29]. Fraktion C4 blev også underkastet octadecylsilan-kromatografi-søjleoprensning, og dette førte til isolering af proanthocyanidin A2 (epicatechin-dimer; fraktion C4A) og en anden epicatechin-dimer identificeret som epicatechin-(2 -O-7, {{ 25}})-ent-epicatechin (proanthocyanidin Axe; fraktion C4C). Disse to forbindelser blev identificeret på basis af NMR-data [30,31]. Så vidt vi ved, er det første gang, at proanthocyanidin Axe er blevet identificeret i K. Angustifolia, men proanthocyanidin A2 er allerede blevet identificeret [9].flavonoid ekstraktionsmetode pdfSuccessive oprensninger af fraktion Don-silicagel resulterede i en forbindelse i form af hvide krystaller (fraktion D4). NMR-dataene svarede i alle henseender til dataene rapporteret for biotin i litteraturen [32]. Asotin er blevet identificeret i slægten Kalmia [33].

3.7. Biologiske aktiviteter af de identificerede forbindelser af K.angustifolia-ekstrakten

En undersøgelse af de aktive forbindelser af K.angustifolia blev udført ved at vurdere antioxidant- og antiinflammatoriske potentialer af hver identificeret forbindelse (tabel 2). For antioxidantaktiviteten blev der udført et ORAC-assay og et cellebaseret assay under anvendelse af DCFH-DA. Ifølge disse tests udviste catechin, avicularia, proanthocyanidin A2 og proanthocyanidin Axe stærke antioxidantaktiviteter, mens epicatechin udviste en moderat antioxidantaktivitet. ORAC-værdierne var henholdsvis 6,7±0.3,4.1±0.3, 4.5±0.8,5.3±0.6 og 4.6±{{ 23}}.6 μmolTE/μmol, mens IC'erne0 for det cellebaserede assay var henholdsvis 0.8±0.3, 0.4{{ 33}} ± 0.03,0.30 ± 0.03,0.24 ±0.02 og 1,22± 0.06 uM De positive kontroller, quercetin og Trolox, præsenterede ORAC-værdier på 7,6 ±0,7 og 0,91±0,11 mol TE/mol henholdsvis og en ICso på 0,21±0,024±0,002μM.

Tabel 2. Antioxidant- og anti-inflammatoriske aktiviteter af de K. Angustifolia identificerede forbindelser. Data præsenteres som middelværdier af triplikaterne ±S.ID. Alle eksperimenterne blev udført i tre eksemplarer, og de præsenterede resultater er repræsentative for mindst to forskellige eksperimenter (N=2,n=3). Quercetin og Trolox blev brugt som positive kontroller.

Hvad angår det antiinflammatoriske potentiale, vurderet ved hæmningen af ​​NO-overproduktion i LPS-stimulerede RAW 264.7 makrofager, udviste ingen af ​​de isolerede forbindelser et antiinflammatorisk potentiale, der kunne være ansvarlig for den antiinflammatoriske aktivitet af K.anqustifolia.

4. Diskussion

Få naturlige aktive ingredienser har bevist effektivitet til at reducere hudens aldring med udtømmende effektivitetsundersøgelser, som begrænser udviklingen baseret på videnskabelig dokumentation for hudplejeprodukter, der markant kan reducere hudens aldring. In vitro-modeller er gode værktøjer til at etablere produkters sikkerhed og effektivitet på det kosmetiske område, hvilket gør det muligt at undgå brugen af ​​dyremodeller, som er meget kontroversielle og endda forbudte eller begrænsede i visse lande eller stater som EU, Canada, Indien , Brasilien (syv stater), New Zealand, Australien og USA (Californien, Nevada, Illinois)[34-37]. Formålet med denne undersøgelse var at evaluere sikkerheden og effektiviteten af ​​et K.angustifolia-ekstrakt ved hjælp af rekonstruerede huderstatninger for at fastslå den potentielle anvendelse af K, Angustifolia i kosmetik. Denne undersøgelse fremhæver anti-aging potentialet af en K. Angustifolia ekstrakt.

For at kunne bruges i hudplejeprodukter skal ingredienser først bevises, at de er sikre for huden og dermed for hudcellerne. Toksicitetsvurderingen af ​​hver kosmetisk ingrediens i en formulering er grundlaget for vurdering af sikkerheden af ​​kosmetiske produkter. I denne undersøgelse blev ekstraktet vist at være sikkert til anvendelse på keratinocytter i en koncentration på op til 200 ug/ml. Sikkerheden af ​​K.angustifolia-ekstraktet ved 25 ug/ml blev også understøttet af histologiske analyser af de rekonstruerede huderstatninger. Disse analyser viste, at integriteten af ​​alle de rekonstruerede hudlag (epidermis og dermis) blev bevaret ved en koncentration på 25 ug/ml. Selv når den blev behandlet med ekstraktet, var tykkelsen af ​​den levende epidermis sammenlignelig med de ubehandlede huderstatninger (kontroller), og den dermale tykkelse blev forbedret. Huderstatninger blev behandlet tre gange i løbet af en uge, hvilket tyder på sikkerheden af ​​K.angustifolia-ekstraktet med gentagne behandlinger. Således kunne K Angustifolia bruges i dermo-kosmetik, da det ser ud til at bevare cellernes levedygtighed. Yderligere eksperimenter, såsom perkutan absorption, bør også udføres for at bekræfte brugen af ​​dette ekstrakt efter de korrekte instansretningslinjer [38].

En anden vigtig parameter i udviklingen af ​​hudplejeprodukter er uden tvivl den aktive ingrediens effektivitet understøttet af videnskabelig dokumentation. Flere eksperimenter og analyser kan udføres for at evaluere dette aspekt. Med planteekstrakter udføres vurderingen af ​​deres antioxidantpotentiale almindeligvis for at fastslå deres effektivitet39-41]. Hudens aldring er et komplekst fænomen, der involverer forskellige mekanismer, og flere teorier er blevet foreslået for at forklare det molekylære grundlag[1]. En af disse forklaringer er oxidativ stress. Adskillige miljøfaktorer, der fører til hudens aldring, såsom solstråling, luftforurening og cigaretrøg, genererer reaktive oxygenarter (ROS), der tilsættes til den ROS, der naturligt produceres i celler [42-44]. Denne stigning i ROS-niveauer forårsager en ubalance mellem frie radikaler og naturlige antioxidanter, hvilket fører til oxidativ stress og vævsskade, deraf vigtigheden af ​​antioxidantforbindelser i hudanti-aldringsprodukter [45]. Antioxidanter i hudplejeprodukter hjælper med at forstærke hudens antioxidantkapacitet for at modvirke de skadelige virkninger af oxidativt stress. Evalueringen af ​​antioxidantaktiviteten af ​​K. Angustifolia-ekstraktet, vurderet med ORAC-assayet, viste, at ekstraktet havde et antioxidantpotentiale svarende til de positive kontrollers quercetin og catechin, to stærke antioxidantforbindelser, hvilket tyder på en fremragende antioxidantkapacitet. Resultaterne opnået for de positive kontroller er i overensstemmelse med en tidligere undersøgelse af Ou et al., som viser, at testen er pålidelig [24]. En anden plante fra Ericaceae-familien, der også findes i den boreale skov og bruges på grund af sit antioxidantpotentiale, er Rhododendron groenlandicum. Antioxidantkapaciteten af ​​R.groenlandicum blev vurderet i en tidligere undersøgelse rapporteret af Dufour et al. og de undersøgte ekstrakter viste en antioxidantkapacitet sammenlignet med ORAC-værdien for K. Angustifolia-ekstraktet, hvilket endnu en gang bekræfter det store antioxidantpotentiale i dette ekstrakt og interessen for at bruge dette planteekstrakt i kosmetik [39]. Antioxidantaktiviteten af ​​K. Angustifolia-ekstraktet målt med ORAC-analysen blev bekræftet med DCFH-DA-analysen, som er mere repræsentativ for det biologiske miljø. Resultaterne af det cellebaserede assay ved anvendelse af DCFH-DA til at bestemme den cellulære antioxidantaktivitet var i overensstemmelse med ORAC-resultaterne. I lyset af disse resultater bør K. Angustifolia-ekstraktet være en fantastisk aktiv ingrediens i kosmetik som en antioxidantforbindelse. Det bør anvendes i en koncentration på mindst 3,13 ug/mL, hvis der søges et antioxidantpotentiale, mens sikkerhedsniveauet for ekstraktet respekteres.

Antioxidantaktiviteten af ​​K.angustifolia-ekstraktet kan skyldes de phenoliske forbindelser, der findes i dets komponenter, såsom (plus )-catechin, (-)-epicatechin og proanthocyanidin A2, som er blevet isoleret fra ekstraktet, og p-cumarsyre syre, quercetin 3-O-galactosid (peroxid), quercetin 3-O-rhamnosid (quercitrin) og myricetin, som er blevet identificeret i andre undersøgelser, men yderligere undersøgelse ville være nødvendig for at bekræfte denne hypotese [9 ,10,39, A6]. I denne undersøgelse blev to forbindelser identificeret for første gang i K.angustifolia, som også kunne være ansvarlige for ekstraktens antioxidantaktivitet. Avicularia, en flavonoid, og proanthocyanidin Axe, en A-type proanthocyanidin, begge fundet i K. Angustifolia-ekstraktet, præsenterede interessante antioxidantpotentialer baseret på deres ORAC-værdi og det cellebaserede assay.

En anden forklaring på ældningsprocessen er kronisk betændelse. Akkumulerende beviser fra studier af hudens aldringsprocessen har ført til hypotesen om en molekylær betændelse med aldring. En forklaring er, at beskadigelse af celler, forårsaget af for eksempel et overskud af ROS, genkendes af immunsystemet, hvilket forårsager infiltration og aktivering af immunceller såsom makrofager [1]. En stigning i pro-inflammatoriske cytokiner, såsom IL-1, IL-6og TNF-, ses generelt med hudens aldring [46]. Således er et anti-inflammatorisk potentiale et interessant træk for en anti-aldringsaktiv ingrediens. Den antiinflammatoriske aktivitet vurderet ved niveauet af produktion af NO afslørede et godt antiinflammatorisk potentiale for K.angustifolia-ekstraktet ved koncentrationer på 40 og 80 ug/ml sammenlignet med den lavere koncentration af den positive kontrol, L-NAME. Da de højere koncentrationer af ekstraktet er sammenlignelige med 250 μM L-NAME, tyder det på, at K. Angustifolia også kunne bruges i kosmetik som en anti-inflammatorisk ingrediens. Det lykkedes at hæmme en del af produktionen og viste dermed en antiinflammatorisk aktivitet. Ingen af ​​forbindelserne identificeret i K. Angustifolia-ekstraktet udviste en anti-inflammatorisk aktivitet, der kunne forklare ekstraktens. Yderligere undersøgelse af sammensætningen af ​​ekstraktet ville være påkrævet for at vurdere de antiinflammatoriske forbindelser.

Antioxidantforbindelser præsenterer interessante egenskaber for dermo-kosmetiske produkter. Det er faktisk kendt, at reaktive oxygenarter (ROS), genereret af flere miljøfaktorer, der forårsager hudens aldring, kan føre til nedbrydning af vigtige komponenter i den dermale ekstracellulære matrix, såsom kollagen og elastin [47-49]. Faldet i deres mængde er generelt forårsaget af en stigning i matrixmetalloproteinaser (MMP'er) og et fald i deres syntese [48,50]. En god balance mellem den endogene produktion af antioxidanter og oxidanter muliggør vedligeholdelse af hudens homeostase. Men med hudens aldring opstår der en ubalance, og brugen af ​​eksogene antioxidanter er da relevant. Således førte antioxidantpotentialet i K. Angustifolia-ekstraktet til undersøgelsen af ​​dets anti-aldringspotentiale.

Med hudens aldring kan der ofte observeres et fald i tykkelsen af ​​den levende epidermis og dermis. Førstnævnte er forårsaget af et fald i keratinocytproliferation, mens sidstnævnte skyldes ekstracellulær matrixnedbrydning og et fald i dets syntese [4751-53]. Således søges en stigning i deres respektive tykkelser med anti-aging produkter. Der blev ikke observeret nogen signifikant stigning i den levende epidermale tykkelse med K, Angustifolia-ekstraktet ved 25 ug/ml. Dog en markant stigning (p-værdi<0.05） in="" the="" dermal="" thickness="" was="" observed.="" an="" increase="" could="" suggest="" matrix="" reorganization,="" or="" even="" an="" increase="" in="" the="" synthesis="" of="" dermal="" extracellular="" matrix="" components,="" such="" as="" elastin="" or="" collagens,="" which="" is="" an="" interesting="" property="" for="" an="" anti-aging="" extract.="" the="" immunofluorescence="" staining="" of="" several="" proteins="" was="" performed="" to="" further="" investigate="" the="" effect="" of="" the="" extract="" on="" the="" extracellular="">

Niveauet af elastin, kollagen-1 og kollagen-3 falder sædvanligvis i hudens aldring, hvilket blandt andet fører til dannelse af rynker, tab af trækstyrke, øget skrøbelighed og nedsat sårheling [ 54]. Faldet i dermale ekstracellulære matrixkomponenter skyldes en stigning i nedbrydningen af ​​disse proteiner og et fald i deres genekspression og derfor i deres syntese [1,53-55]. Deres nedbrydning er hovedsageligt forårsaget af elastaser (såsom human neutrofil elastase og neprilysin) og MMP'er (såsom MMP-1 og MMP-3). MMP-induktion forekommer i hudens aldring gennem aktivering af forskellige transduktionsveje [46,56]. I hudens ældningsprocessen kan adskillige produkter, såsom ROS og tumornekrosefaktoren (TNF-), føre til aktivering af nuklear faktor-kappa B (NF-kB)-vejen eller mitogen-aktiveret protein (MAP) kinase veje, herunder ekstracellulære signalregulerede kinaser (ERK), p38 mitogenaktiverede proteinkinaser (p38) og c-Jun N-terminale kinaser (JNK) [57,58]. Denne aktivering vil derefter føre til ekspressionen af ​​transkriptionsfaktoren NF-kB eller transkriptionsfaktoraktivatorproteinet 1(AP-1), som spiller en rolle i transkriptionen af ​​MMP'er. Aktiveringen af ​​NF-kB eller AP-1 øger ekspressionen af ​​MMP'er og øger derved nedbrydningen af ​​dermale komponenter. I denne undersøgelse viser stigningen i elastin og kollagen-1 udtryk med behandlingen, at K.angustifolia effektivt kunne modvirke nogle af hovedkarakteristikaene ved hudens aldring. De øgede niveauer af elastin registreret efter K. Angustifolia-behandlingen er særligt overbevisende, da det er relativt veldokumenteret, at dette protein normalt er svagt eller endda ikke syntetiseret i rekonstrueret dermis ved hjælp af dyrkningsbetingelser suppleret med ascorbinsyre, som det er tilfældet i vores hudmodel (som vist med kontrollen uden behandling, figur 5A). Selv om ascorbat fremmer ekstracellulær matrixproduktion, især kollagensyntese af dermale fibroblaster, har nogle undersøgelser vist, at det også har en hæmmende effekt på blastogeneseprocessen, hvilket resulterer i et fald i elastinakkumulering [59,60]. Så hvis 25 ug/mL af ekstraktet er tilstrækkeligt og potent nok til at overvinde effekten af ​​ascorbat i vores hudmodel, burde K. Angustifolia være en stor potentiel kandidat i hudplejeprodukter til at modvirke hudens aldring ved denne koncentration. Det kunne hjælpe huden med at genvinde styrke, fasthed og elasticitet og dermed reducere forekomsten af ​​rynker, men yderligere kliniske undersøgelser bør udføres for at bekræfte disse antagelser.

5. Konklusioner

I denne undersøgelse har vi bevist, at den huderstatningsmodel, der er udviklet i vores forskningscenter, er et nyttigt værktøj til at vurdere anti-aldringseffektivitet på det dermo-kosmetiske område. Vi har ikke kun vist, at K.angustifolia-ekstraktet ser ud til at være sikkert til brug i kosmetik, men også at det har en stærk antioxidantkapacitet og en god anti-inflammatorisk aktivitet. Denne undersøgelse tyder på, at K.angustifolia-ekstraktet ved 25 ug/mL kunne have en potentiel anti-aldringseffekt på det dermale rum, da ekstraktet øgede dermal tykkelse og forbedrede elastin og kollagen-1-ekspression. Yderligere undersøgelser af mekanismerne involveret i ekstraktens anti-aldringspotentiale ville være af interesse. Isoleringen og karakteriseringen af ​​adskillige forbindelser i K.angustifolia-ekstraktet gjorde det muligt for os at fastslå, at anti-aldringseffektiviteten til dels kunne komme fra disse forbindelsers antioxidantpotentiale. Sammensætningen af ​​K.angustifolia er imidlertid meget lidt undersøgt og skal undersøges mere fuldstændigt for at forstå omfanget af dets biologiske aktivitet og identificere de aktive forbindelser. Derfor tyder denne undersøgelse på, at K.angustifolia ville være en interessant naturlig aktiv ingrediens til dermo-kosmetik. K. Angustifolia har lovende antioxidant- og anti-aldringseffekter, især på den dermale ekstracellulære matrix.

Denne artikel er uddraget af Antioxidants 2021, 10, 1373. https://doi.org/10.3390/antiox10091373 https://www.mdpi.com/journal/antioxidants