Et heterologt AZD1222-priming- og BNT162b2-forøgelsesregime fremkalder mere effektivt neutraliserende antistoffer, men ikke hukommelses-T-celler, end det homologe BNT162b2-regimen

abstrakt

Baggrund: Sammenlignende analyser af SARS-CoV-2-specifikke immunresponser fremkaldt af forskellige prime-boost-regimer er nødvendige for at etablere effektive regimer til kontrol af COVID-19. Metode: I denne prospektive observationelle kohorteundersøgelse, spidsspecifik immunoglobulin G (IgG) og neutraliserende antistoffer (nAbs) sammen med spidsspecifikke T-celleresponser i aldersmatchede grupper af homolog BNT162b2/BNT162b2 eller AZD1222/AZD1222/AZD1222/AZD1222-vaccination, heterolog. BNT162b2-vaccination og tidligere vildtype SARS-CoV-2-infektion/vaccination blev evalueret. Resultater: Maksimal immunrespons blev opnået efter den anden vaccinedosis i de naive vaccinerede grupper og efter den første dosis i den tidligere infektion/vaccinationsgruppe. Toptitre for anti-spike-IgG og nAb var signifikant højere i AZD1222/BNT162b2-vaccinations- og tidligere infektions-/vaccinationsgrupper end i BNT162b2/BNT162b2- eller AZD1222/AZD1222-grupperne. Hyppigheden af ​​interferon-c-producerende CD4 plus T-celler var dog højest i BNT162b2/BNT162b2 vaccinationsgruppen. Lignende resultater blev observeret i analysen af ​​polyfunktionelle T-celler. Når nAb og CD4 plus T-celle-responser mod Delta-varianten blev analyseret, udviste den tidligere infektion/vaccinationsgruppe højere responser end grupperne af andre homologe eller heterologe vaccinationsregimer. Konklusion: nAbs fremkaldes effektivt af heterolog AZD1222/BNT162b2-vaccination såvel som tidligere infektion/vaccination, hvorimod spike-specifikke CD4 plus T-celle-responser fremkaldes effektivt af homolog BNT162b2-vaccination. Variantgenkendende immunitet genereres mere effektivt ved forudgående infektion/-vaccination end de andre homologe eller heterologe vaccinationsregimer.

cistanche tubulosa-forbedrer immunsystemet

1. Introduktion

Svært akut respiratorisk syndrom coronavirus 2 (SARS-CoV-2) har spredt sig globalt siden dets fremkomst i december 2019, og udviklingen af ​​effektive vacciner mod coronavirus sygdom 2019 (COVID-19) er blevet fremskyndet [1 ]. Succesen med forsøget blev set relativt hurtigt, og adskillige vacciner, der anvender spike (S)-protein som et vaccineantigen, demonstrerede med succes sikkerhed og effektivitet til at forhindre symptomatisk COVID-19. Specifikt blev mRNA-baseret vaccine BNT162b2 (Comirnaty, Pfifizer-BioNTech) og adenovirus vektor-baseret vaccine AZD1222 (Vaxzevria, AstraZeneca) oprindeligt godkendt og bredt administreret som en to-dosis prime-boost-kur. To doser BNT162b2 havde 95 procent (95 procent konfidensinterval [CI], 90-98 procent) effekt mod symptomatisk COVID-19 [2], og to doser AZD1222 havde 70 procent (95 procent CI, 55-81) procent ) effektivitet [3]. Spændende nok vandt heterologe prime-boost-regimer af licenserede COVID-19-vacciner stor interesse og blev efterfølgende påbegyndt i flere lande på trods af utilstrækkelige data vedrørende immunogenicitet og sikkerhed. BNT162b2 givet som en boostdosis hos individer, der er primevaccineret med AZD1222, inducerede robuste S-specifikke immunglobulin G (IgG) antistof (Ab) titere, neutraliserende antistof (nAb) responser og interferon-c plus (IFN-c plus) T-celler [4 ,5]. Imidlertid har få undersøgelser evalueret effektiviteten af ​​heterolog AZD1222/BNT162b2-vaccination sammenlignet med homolog BNT162b2/BNT162b2-vaccination [6-8], og disse undersøgelser manglede omfattende evaluering af S-specifikke T-celle-responser. Hvorvidt heterolog AZD1222/BNT162b2-vaccination resulterer i potente krydsvariante nAb- eller T-celleresponser, forbliver derfor uklart. Et andet eksempel på heterolog priming-boosting kan ses hos individer, der var blevet inficeret med SARS-CoV-2 og senere vaccineret mod virussen. Adskillige undersøgelser antydede, at specifikke bindende Ab- og nAb-niveauer påvises i høje niveauer hos personer med tidligere infektion og vaccination, selvom der ikke var nogen sammenlignende analyser [9,10]. Sundhedspersonale med tidligere SARS-CoV-2-infektion har højere Ab-titre som respons på en enkelt dosis mRNA-vaccine end dem, der ikke tidligere var inficeret [11]. Desuden udviser personer med tidligere infektion forbedrede S-specifikke T-celle-responser og Ab-udskillende hukommelses-Bcell-responser efter den primære dosis uden boostdosis [12]. I denne undersøgelse undersøgte vi omfattende den humorale og cellulære immunogenicitet af homologe og heterologe prime-boost-regimer i en prospektiv observationskohorte med side-by-side sammenligninger af S-specifik binding Ab, nAb og Specifikke CD4 plus T-celle responser . Vi evaluerede også de immunologiske resultater hos deltagere, der var blevet inficeret med vildtype SARS-CoV-2 og modtog COVID-19-vacciner for at afgøre, om tidligere infektion og vaccination effektivt fremkalder immunreaktioner mod Delta-varianten.

cistanche fordele for mænd styrker immunsystemet

2. Metoder

2.1. Studere design

En potentiel multicenterkohorte blev etableret i marts 2021 for at undersøge immunresponser på COVID-19-vaccination. Deltagerne i denne kohorte blev frivilligt rekrutteret blandt sundhedspersonale og oprindeligt planlagt til at modtage to doser BNT162b2 med 3-ugers interval eller AZD1222 med 12-ugers interval. Imidlertid modtog en del af individer primevaccineret med AZD1222 boosterdosis af BNT162b2 mellem maj og juni 2021 og blev inkluderet i AZD1222/BNT162b2-vaccinationsgruppen. Blandt deltagerne i kohorten var de, der havde tidligere vildtype SARSCoV-2-infektion og modtog BNT162b2 eller AZD1222, inkluderet som den tidligere infektion/vaccinationsgruppe. Alle vaccinemodtagere analyseret i denne undersøgelse var aldersmatchede blandt grupperne. Perifere blodprøver blev indsamlet fra alle deltagere i kohorten på hvert tidspunkt (T): før og 3 uger efter den 1. vaccinedosis (henholdsvis T1 og T2), 5 uger efter den 1. BNT162b2-dosis eller 11 uger efter den 1. AZD1222 dosis (T3), og 14 uger efter 1. vaccinedosis (T4). En skematisk repræsentation af undersøgelsesprotokollen er tilvejebragt i fig. 1. Til sammenligning blev rekonvalescentprøver opnået fra uvaccinerede patienter inficeret med SARSCoV-2 Delta-varianten bekræftet ved real-time revers transkription polymerase-kædereaktion under anvendelse af Seegene Allplex { {38}}nCoV-assaykit (Seegene, Korea) og Illumina BTSeq SARS-CoV-2 helgenomsekventeringskit (Celemics Inc, Korea) på en MiSeq-sequencer (150-bp parret ende-tilstand; Illumina, San Diego, CA, USA). Basesekvensen opnået gennem BTseq blev sammenlignet med NCBI-referencesekvensen NC_045512.2 ved at bruge IGV 2.10-softwaren til at bekræfte Delta-varianten. Undersøgelsen blev godkendt af de institutionelle revisionsnævn for hvert deltagende institut og udført i overensstemmelse med principperne i Helsinki-erklæringen. Alle deltagere gav skriftligt informeret samtykke inden tilmelding.

2.2. Studiedeltagere

Denne kohorte omfattede 22 deltagere, som modtog homolog BNT162b2/BNT162b2-vaccination (gennemsnitsalder, 38.0 år; 31,8 procent mænd), 20 deltagere, der modtog homolog AZD1222/AZD1222-vaccination (gennemsnitsalder, 39,7 år; 23,8 procent mænd) , og 9 deltagere, der modtog heterolog AZD1222/BNT162b2-vaccination (gennemsnitsalder, 38,2 år; 33,3 procent mænd). Af de 11 deltagere med tidligere vildtype SARS-CoV-2-infektion (gennemsnitsalder, 38,5 år; 27,3 procent mænd), blev 2 og 9 vaccineret med henholdsvis BNT162b2/BNT162b2 og AZD1222/AZD1222. Demografien for de forskellige vaccinerede grupper er angivet i supplerende tabel 2. Alle deltagere med tidligere vildtype SARS-CoV-2-infektion oplevede asymptomatisk eller mild COVID-19, og 3 af dem havde lungebetændelse. Mediantiden fra bekræftelse af COVID-19 til den første vaccination var 121,5 (interkvartilområde [IQR], 102,3-252,5) dage. Demografien for deltagerne med tidligere vildtype SARS-CoV-2-infektion og -vaccination er angivet i supplerende tabel 1. Rekonvalescensprøver blev opnået fra 17 patienter (gennemsnitsalder, 53 år; 52,9 procent mænd) inficeret med SARS -CoV-2 Delta-variant og indlagt for moderat til kritisk COVID-19 (moderat, 17,6 procent; svær, 35,3 procent; kritisk syg, 47,1 procent). Mediantiden fra debut af COVID-19-relaterede symptomer til prøvetagning var 24 (IQR, 22-32) dage. Demografien for SARS-CoV-2 Delta-rekonvalescentdeltagere er angivet i den supplerende tabel 2 og tabel 3.

2.3. Bindende antistoffer

SARS-CoV-2 S-specifikke bindende Abs blev analyseret ved hjælp af et kommercielt immunassay. Elecsys anti-S proteinanalysen (Roche Diagnostics, Tyskland) er en elektrokemiluminescens immunoassay, der bruges til at påvise SARS-CoV-2 S-specifikke antistoffer på Cobas e411 analysatoren (Roche Diagnostics, Tyskland), med et måleområde fra { {8}}.4 U/mL til 250 U/mL (op til 2500 U/ml med indbygget 1:10-fortynding og op til 12.500 U/mL med indbygget 1:50-fortynding). Det rekombinante receptorbindingsdomæne af S-proteinet blev anvendt med et dobbelt antigensandwichprincip. Antigenerne i reagenset opfanger overvejende anti-SARSCoV-2 IgG. Elecsys anti-nukleocapsid-proteinassay (Roche Diagnostics, Tyskland) blev brugt til at påvise tidligere SARS-CoV-2-infektioner med et cut-off-indeks på 1,0.

cistanche supplement fordele-øge immunitet

2.4. Plak-reduktion neutraliseringsanalyse

Plakreduktionsneutraliseringsassays for vildtype SARS-CoV- 2-vira (BetaCoV/Korea/KCDC03/2020) og Delta-variantstammen YS117 (GenBank accessionsnummer MZ798798 og GISAID accessionsnummer EPI{ {8}}ISL_3411836) blev udført ved hjælp af plasmaprøver. Virusset blev dyrket på Vero E6-celler i et biosikkerhedsniveau 3-laboratorium ved Avison Biomedical Research Center i Seoul, Korea. Inaktiverede plasmaprøver (135 l) af inaktiverede plasmaprøver blev 2-fold seriefortyndet (1:40 til 1:1280) og tilsat til et lige så stort volumen på 100 gange 50 procent vævskultur infektiøs dosis (TCID50) af virus. Isolaterne indeholdende 100 gange TCID50 blev inkuberet i 96-brøndsplader i 60 minutter ved 37°C. Virus-plasmablandinger blev inkuberet i 60 minutter ved 37°C i en CO2-inkubator. Virus-plasmablandingerne blev derefter tilsat til Vero E6-celler podet i en 24-brøndsplade med 1x105 celler/brønd og inkuberet i 1 time ved 37 C. Overlejringsmedier sammensat af 2 procent føtalt bovint serum (FBS) i DMEM og 1 procent agar blev tilsat til E6-cellerne og inkuberet i 3 dage ved 37°C i en CO2-inkubator. Efter at en plak var dannet, blev 10 procent formaldehydopløsning og 0,33 procent neutral rød i phosphatpufret saltvand (PBS) anvendt til at fiksere og farve cellekulturlaget. Neutraliserende fortynding af hver prøve blev bestemt ved at identificere brønden med den højeste plasmafortynding uden en observerbar cytopatisk effekt. De 50 procent neutralisationsdoser (ND50) blev udtrykt som den reciproke fortynding af plasma, hvilket resulterede i en 50 procent reduktion i plaqueantal sammenlignet med den positive viruskontrol. Spearman-Kärber-metoden blev brugt til at beregne ND50-titrene. Ved sammenligning med WHOs internationale standardsera (NIBSC 20-136; nAb-titer: 1000 IU/mL), blev nAb-titere omdannet til internationale enheder pr. milliliter (IU/mL).

Fig. 1. Skematisk fremstilling af vaccinemodtagerkohorterne. Undersøgelsesskema til påvisning af SARS-CoV-2 spidsspecifikke bindingsantistoffer, neutraliserende antistoffer og T-celleresponser i perifere blodprøver fra individer, der er vaccineret mod COVID-19. Undersøgelsen omfatter BNT162b2/BNT162b2 (n=22), AZD1222/AZD1222 (n=20), AZD1222/BNT162b2 (n=9) og tidligere vildtype SARS-CoV{{20 }} infektions-/vaccinationsgrupper (n=11). Blandt de tidligere vildtype SARS-CoV-2-infektioner/vaccinationer blev 2 og 9 vaccineret med henholdsvis BNT162b2/BNT162b2 og AZD1222/AZD1222. Anamnese med SARS-CoV-2-infektion blev bekræftet af en positiv anti-SARS-CoV-2-nukleocapsid-antistoftest. T, tidspunkt; uger, uger.

2.5. T-celle assays

Mononukleære celler fra perifert blod (PBMC'er) blev isoleret ved tæthedsgradientcentrifugering under anvendelse af Leucosep-rør (Greiner Bio-One) indeholdende lymfocytseparationsmedium. Efter centrifugering ved 800 g i 15 minutter med bremsen-off blev den berigede cellefraktion bestående af PBMC'er høstet og vasket med 20 ml PBS. Efter centrifugering ved 300 g i 10 minutter blev cellepelleten resuspenderet i 10 ml PBS til tælling. Efter centrifugering ved 300 g i 10 minutter blev celler kryokonserveret i FBS med 10 procent dimethylsulfoxid ved 180 C indtil brug. Til intracellulær cytokinfarvning (ICS) af IFN-c, interleukin-2 (IL-2) og tumornekrosefaktor (TNF) brugte vi peptidpuljer af 15-mer-peptider, der overlapper med 11 aminosyrer, der dækker de immundominante dele af SARS-CoV-2 Wuhan S-protein (aa 304-338, 421-475, 492-519, 683-707, 741-770, 785-802 og 885-1273; Biotek). For at sammenligne T-celleresponser mod Wuhan- og Delta-stammerne brugte vi to forskellige sæt af S-peptidpuljer, der omfattede ikke-konserverede regioner af S-sekvenser mellem Wuhan- og Delta-stammerne (B.1.617.2-afstamning) (Miltenyi Biotec). Efter optøning af PBMC'er og hvile dem natten over, blev 1  106 PBMC'er stimuleret med peptidpuljer ved en slutkoncentration på 1 mg/ml og anti-human CD28/CD49d (1 mg/ml; BD Biosciences) i 1 time i en { {45}}brøndplade i RPMI-1640-medier indeholdende 1 procent penicillin-streptomycin, 2 mM L-glutamin og 10 procent FBS. PBMC-kultur blev inkuberet i yderligere 5 timer efter tilsætning af brefeldin A og monensin (BD Biosciences) ved 37 C i 5 procent CO2. Efter stimuleringen blev cellerne vasket med PBS og farvet med Live/Dead-Aqua (Invitrogen) i 20 minutter ved stuetemperatur, efterfulgt af en cocktail af overflade Abs i 20 minutter ved stuetemperatur, inklusive anti-CD14- BV510, anti-CD19-BV510, anti-CD4- BV650, anti-CD3-BV786 og anti-CD8-APC-Cy7 (BD Bioscience). Celler blev fikseret og permeabiliseret ved hjælp af et Foxp3/Transcription Factor Staining Buffer Set (eBioscience) og derefter farvet med en cocktail af intracellulære Abs, inklusive anti-TNF-FITC, anti-IL-2-PE (eBioscience) og anti- IFN-c-APC (BD Biosciences) i 20 minutter ved stuetemperatur. Efter endt farvning blev celler analyseret på et LSR II-instrument med FACSDiva (BD Biosciences), og dataene blev analyseret i FlowJo-software (FlowJo LLC).

cistanche planteforøgende immunsystem

2.6. Statistisk analyse

Data plottet i lineær skala blev udtrykt som middel ± standardafvigelse. Data plottet i logaritmiske skalaer blev udtrykt som geometrisk middelværdi ± geometrisk standardafvigelse. Mann-Whitney U- eller Wilcoxon-test blev anvendt til henholdsvis uparrede eller parrede sammenligninger. Statistiske analyser var {{0}}halede, med P < 0.05 betragtet som signifikant. Alle analyser blev udført i R studio eller GraphPad Prism v9.0.

3. Resultater

3.1. Kinetik af immunresponser fremkaldt af forskellige vaccinationsregimer

Først undersøgte vi anti-S IgG titere efter vaccination med forskellige regimer. Som forventet øgede den første dosis signifikant anti-S IgG-titere (T2), og den anden dosis øgede yderligere signifikant anti-S IgG-titre i den homologe BNT162b2/BNT162b2 (T3) og AZD1222/AZD1222-vaccination (T4) og heterologe AZD1222/ BNT162b2-vaccinations (T4) grupper (fig. 2A). I gruppen med tidligere infektion/vaccination øgede den første dosis maksimalt anti-S IgG-titrene (T3), men den anden dosis øgede ikke yderligere anti-S IgG-titrene (T4). Vi undersøgte også S-specifikke CD4 plus T-celle-responser efter direkte ex vivo-stimulering med peptidpuljer, der dækker SARSCoV-2 Wuhan vildtype S-proteinsekvensen. Baseret på ICS øgede den første dosis signifikant hyppigheden af ​​IFN-c-producerende celler blandt CD4 plus T-celler, og den anden dosis øgede frekvensen yderligere signifikant i BNT162b2/BNT162b2 (T3) og AZD1222/BNT162b2 vaccinations (T4) grupperne. (Fig. 2B). I grupperne AZD1222/AZD1222 og tidligere infektion/vaccination øgede den første dosis signifikant hyppigheden af ​​IFN-c plus-celler blandt CD4 plus T-celler, men den anden dosis øgede ikke frekvensen yderligere.

3.2. Sammenligning af Ab-titere mellem forskellige regimer

Dernæst sammenlignede vi toptiterne for binding af Ab blandt de forskellige vaccinationsregimer. Som toptitre valgte vi anti-S IgG titere efter den anden dosis i BNT162b2/BNT162b2, AZD1222/AZD1222 og AZD1222/BNT162b2 vaccinationsgrupperne og efter den første dosis i den tidligere infektion/vaccinationsgruppe. Toptitre for anti-S IgG var signifikant højere i AZD1222/BNT162b2-vaccinationsgruppen end i BNT162b2/BNT162b2- eller AZD1222/AZD1222-vaccinationsgrupperne (fig. 3A). På samme måde var toptiterne for anti-S IgG signifikant højere i den tidligere infektion/vaccinationsgruppe end i BNT162b2/BNT162b2 eller AZD1222/AZD1222 vaccinationsgrupperne. Der var ingen forskel i anti-S IgG titere mellem AZD1222/BNT162b2 og tidligere infektion/-vaccinationsgrupper. Vi evaluerede også nAb-titre ved spidsbelastningstidspunkter: efter den anden dosis i BNT162b2/BNT162b2-, AZD1222/AZD1222- og AZD1222/BNT162b2-vaccinationsgrupperne og efter den første dosis i den tidligere infektion/vaccinationsgruppe. Bemærkelsesværdigt var nAb-titre signifikant højere i AZD1222/BNT162b2-vaccinationsgruppen end i BNT162b2/BNT162b2- eller AZD1222/AZD1222-vaccinationsgrupperne (fig. 3B). Derudover var nAb-titre signifikant højere i den tidligere infektion/vaccinationsgruppe end i BNT162b2/BNT162b2- eller AZD1222/AZD1222-vaccinationsgrupperne. Der var ingen forskel i nAb-titre mellem AZD1222/BNT162b2 og tidligere infektion/vaccinationsgrupper. Niveauet af humoral respons fremkaldt af forskellige vaccinationsregimer blev kategoriseret i stærke, moderate og ingen/svage respondere baseret på percentilrangeringen. Andelen af ​​stærke respondere var højest i den tidligere infektion/vaccinationsgruppe, efterfulgt af AZD1222/BNT162b2-vaccinationsgruppen vedrørende analysen af ​​anti-S IgG (fig. 3C) og nAb (fig. 3D). Tilsammen indikerer disse resultater, at heterolog priming og boosting, inklusive både AZD1222/BNT162b2-vaccination og tidligere infektion/vaccination, er mere effektiv til generering af humorale responser end homolog priming og boosting.

3.3. Sammenligning af S-specifikke CD4 plus T-celle responser mellem forskellige regimer

Vi sammenlignede også S-specifikke CD4 plus T-celle responser blandt de forskellige vaccinationsregimer på spidsbelastningstidspunkter: efter den anden dosis i BNT162b2/BNT162b2, AZD1222/AZD1222 og AZD1222/BNT162b2 vaccinationsgrupperne og efter den første dosis i de foregående infektion/vaccinationsgruppe. I modsætning til anti-S IgG og nAb titere var frekvensen af ​​IFN-c plus celler blandt CD4 plus T celler højest i BNT162b2/BNT162b2 vaccinationsgruppen (fig. 4A). Andelen af ​​stærke respondere var også højest i BNT162b2/BNT162b2-vaccinationsgruppen efterfulgt af den tidligere infektion/vaccinationsgruppe (fig. 4B). Disse resultater viser, at immunisering med det andet homologe boost af BNT162b2 mere effektivt fremkalder hukommelses-T-celle-responser end den anden heterologe boost-vaccination eller den første dosis-vaccination efter naturlig SARS-CoV-2-infektion. Tværtimod er heterologe prime-boost-regimer mere tilbøjelige til at udvikle højere niveauer af humorale immunresponser. Vi analyserede også den relative frekvens af polyfunktionelle CD4 plus T-celler, der samtidig producerer flere cytokiner (dvs. IFN-c, IL-2 og/eller TNF). BNT162b2/BNT162b2-vaccinationsgruppen udviste signifikant højere frekvenser af polyfunktionelle celler, der producerede 2 cytokiner blandt S-specifikke CD4 plus T-celler end AZD1222/AZD1222- eller AZD1222/BNT162b2-vaccinationsgrupperne (fig. 4C). Der var ingen forskel i frekvensen mellem BNT162b2/BNT162b2-vaccination og tidligere infektion/vaccinationsgrupper. Hyppigheden af ​​polyfunktionelle celler var signifikant højere i AZD1222/BNT162b2-vaccinationsgruppen end i AZD1222/AZD1222-vaccinationsgruppen. Cirkeldiagrammer, der repræsenterer enkelt-, dobbelt- og triple-positive CD4 plus T-celler med hensyn til cytokinproduktion, der reagerer på S-overlappende peptidpuljer, indikerede også en relativt høj frekvens af dobbelt- eller triple-positive celler i BNT162b2/BNT162b2-vaccinationen og tidligere infektion/- vaccinationsgrupper (fig. 4D).

3.4. Immunresponser mod Delta-varianten blandt forskellige regimer

Til sidst analyserede vi immunresponser mod Delta-varianten. I denne analyse inkluderede vi rekonvalescente personer, der kom sig fra SARS-CoV-2 Delta-infektion til sammenligning. Delta-variant-specifikke nAb-titere var signifikant højere i den tidligere infektion/vaccinationsgruppe end i BNT162b2/BNT162b2-, AZD1222/AZD1222- eller AZD1222/BNT162b2-vaccinationsgrupperne og var endda højere end dem i de rekonvalescente individer fra Delta (fig. 5A). . Vi undersøgte også CD4 plus T-celle-responser mod S-proteinet fra Delta-varianten. I denne analyse udførte vi ICS af IFN-c efter direkte ex vivo-stimulering under anvendelse af to forskellige sæt S-peptidpuljer omfattende ikke-konserverede regioner af S-sekvenser mellem Wuhan- og Delta-stammerne og beregnede forholdet mellem frekvensen af ​​Delta Specifikke IFN-c plus celler til frekvensen af ​​Wuhan S-specifikke IFN-c plus celler. Som forventet var forholdet højest hos Delta rekonvalescent individer. Spændende nok var forholdet højere i den tidligere infektion/vaccinationsgruppe end i BNT162b2/BNT162b2-vaccinationsgruppen (fig. 5B), selvom Wuhan S-specifikke CD4 plus T-celle-responser var højest i BNT162b2/BNT162b2-vaccinationsgruppen (fig. 4A). Tilsammen indikerer disse resultater, at nAb og CD4 plus T-celle-responser, der krydsgenkender Delta-varianten, genereres mere effektivt ved forudgående infektion/vaccination end de homologe eller heterologe vaccinationsregimer.

Fig. 2. Antistof- og T-celle-responser fremkaldt af forskellige prime-boost-regimer. Longitudinelle immunresponser i henhold til prøveudtagningsplanen fra før vaccination til 14 uger efter første vaccination. (A) SARS-CoV-2 spike-specifikke bindingsantistoffer blev målt i BNT162b2/BNT162b2 (n=22), AZD1222/AZD1222 (n=20), AZD1222/BNT162b2 (n {{ 20}}), og tidligere infektion/vaccination (n=6) grupper. (B) SARS-CoV-2 spike-specifikke CD4 plus T-celle-responser blev målt i BNT162b2/BNT162b2 (n=19), AZD1222/AZD1222 (n=18), AZD1222/BNT162b2 (n=9), og tidligere infektion/vaccination (n=7) grupper. Data præsenteres som geometrisk middelværdi ± geometrisk SD (A) eller middelværdi ± SD (B). Statistiske analyser mellem tidspunkter inden for hver gruppe blev udført under anvendelse af Wilcoxon signed-rank test. ns, ikke signifikant; *P < 0.05, **P < 0,01, ***P < 0,001, ****P < 0,0001.

Fig. 3. Humorale immunresponser ved spidsbelastningstidspunkter. (A) SARS-CoV-2 spike-specifikke bindingsantistoffer blev sammenlignet blandt BNT162b2/BNT162b2 (n=22), AZD1222/AZD1222 (n=20), AZD1222/BNT162b2 (n {{ 15}}), og tidligere infektion/vaccination (n=6) grupper på spidsbelastningstidspunkter. (B) Neutraliserende antistoffer blev sammenlignet blandt BNT162b2/BNT162b2 (n=22), AZD1222/AZD1222 (n=20), AZD1222/BNT162b2 (n=9) og tidligere infektion/vaccination ( n=11) grupper på spidsbelastningstidspunkter. Spidspunkter blev valgt som følger: efter den anden dosis i BNT162b2/BNT162b2, AZD1222/AZD1222 og AZD1222/BNT162b2 vaccinationsgrupperne og efter den første dosis i den tidligere infektion/vaccinationsgruppe. Data præsenteres som geometrisk middelværdi ± geometrisk SD og analyseres for signifikans ved hjælp af Mann-Whitney-testen. (C og D) Procentdelen af ​​deltagere med varierende niveauer af humorale immunresponser. Kvantificering af typen af ​​responder (stærk, moderat og ingen/svag) udtrykkes som en brøkdel af antallet af vaccinemodtagere i hver gruppe. Typer af respondere blev bestemt af percentil-score beregnet fra alle vaccinerede deltagere. ns, ikke signifikant; *P < {{40}}.05, **P < 0,01, ***P < 0,001, ****P < 0,0001.

4. Diskussion

De aktuelt godkendte mRNA-vacciner og adenovirusvektorvacciner har vist bemærkelsesværdig effektivitet til at forebygge COVID-19. Imidlertid er heterolog prime-boost-vaccination blevet anset for at forbedre immunogeniciteten og afbøde intermitterende forsyningsmangel [13]. Derudover er sikkerhedsproblemer blevet rejst med adenovirusvektorvaccinerne efter erkendelsen af ​​alvorlige bivirkninger, herunder livstruende venøs trombose forbundet med AZD1222-vaccination, især hos yngre kvinder [14,15]. Disse har ført til heterolog mRNA-booster-immunisering for dem, der allerede havde modtaget den første dosis AZD1222. Selvom der ikke var tilgængelige effektivitetsdata, indførte mange nationale sundhedsmyndigheder heterologe regimer med godkendte COVID-19-vacciner. Således er en sammenlignende undersøgelse af humorale og cellulære immunresponser fremkaldt af forskellige prime-boost-vaccinationsregimer informativ og hjælper med bedre at forstå udfordringer i den virkelige verden. I denne undersøgelse demonstrerede vi differentiel induktion af humoral og cellulær immunitet ved heterologe prime-boost-vaccinationer (Supplerende tabel 4). I skarp kontrast til både Specifikke bindende Ab-niveauer og neutraliseringstitre, som var højest i AZD1222/BNT162b2-vaccinationsgruppen, var S-specifikke CD4 plus T-cellerespons højest i BNT162b2/BNT162b2-vaccinationsgruppen, ikke i AZD1222/BNT162b2-vaccinationen gruppe. De relativt lave niveauer af S-specifikke CD4 plus T-celleresponser i AZD1222/BNT162b2-vaccinerede deltagere var uventede og kan stadig sætte disse personer i risiko for alvorlig SARS-CoV-2-infektion. Vores resultater adskiller sig fra dem, der er rapporteret af Schmidt og kolleger, som foreslog, at efter heterolog BNT162b2-boosting, var nAb-titere og T-celleresponser signifikant forøgede hos AZD1222-primede individer [7]. Imidlertid var den absolutte frekvens af CD69 plus IFN-c plus celler blandt CD4 plus T-celler kun marginalt øget, og denne undersøgelse udelukkede dybdegående analyser af polyfunktionaliteten af ​​S-specifikke T-celle-responser. For personer, der tidligere var inficeret, kan den første vaccinedosis fungere som en booster-immunisering og potentielt inducere humorale og cellulære responser [16,17]. Da nAb-titeren formodes at være en nøglekorrelation af beskyttelse mod SARS-CoV-2-infektion [18], passer vores resultater godt med det nylige fund af et gavnligt boost til infektionserhvervet immunitet med justeret vaccineeffektivitet af > 90 procent efter den første dosis hos vaccinemodtagere, som havde tidligere SARS-CoV-2-infektion [19]. På trods af den betydelige flugt af nAb-responser mod Delta-varianten blandt deltagerne i undersøgelsen observerede vi desuden de højeste niveauer af nAb, der krydsgenkendte Delta-varianten i gruppen af ​​deltagere med tidligere vildtype SARS-CoV-2-infektion og vaccination. Men i overensstemmelse med den heterologe AZD1222/BNT162b2-vaccinationsgruppe havde de med tidligere infektion, som blev vaccineret, et svagere S-specifikt CD4 plus T-cellerespons end personer med homolog BNT162b2/BNT162b2-vaccination uden forudgående infektion. Vores resultater viser især, at to doser af BNT162b2 fører til pålidelig og robust induktion af S-specifikke CD4 plus T-celle-responser, signifikant højere end andre prime-boost-vaccinationsregimer. Disse resultater stemmer overens med en nylig rapport om fire forskellige COVID-19-vacciner [20], mens vores analyse inkluderede heterologe prime-boost-regimer og hybridimmunitet fra tidligere infektion og vaccination. Derfor kan mRNA-vaccineplatforme udvælges for deres evne til at inducere robuste hukommelses-CD4 plus T-celleresponser. Efterhånden som forekomsten af ​​gennembrudsinfektion efter vaccination stiger på verdensplan, er der stigende interesse for immunitetsbeskyttelse mod alvorlig COVID-19. Da nye SARS-CoV-2-varianter fortsætter med at dukke op og undgå humoralt immunforsvar, kan cellulær immunitet, som retter sig mod et bredt spektrum af SARS-CoV-2-epitoper, der genkendes af T-celler, give stabil beskyttende immunitet [21 ], selvom determinanter for cellulære responser i vaccinemedieret beskyttelse endnu ikke er præcist defineret. Derfor er det stadig uklart, om den øgede humorale immunogenicitet af heterolog AZD1222/BNT162b2-vaccination konsekvent udmønter sig i forbedret beskyttelse, og dette kræver yderligere undersøgelse. Derudover skal det undersøges, om personer, der har udviklet dårlige Tcell-reaktioner efter vaccination, såsom dem, der er primet med AZD1222, kan drage fordel af T-cellevaccineformuleringer [22]. Både infektionsinduceret og vaccineinduceret immunitet aftager naturligt over tid; dog ser det ud til, at der er givet større beskyttelse til personer, der tidligere var blevet inficeret med SARS-CoV-2 [23]. Hos vaccinerede individer inducerer gennembrudsinfektion med Omicron-varianten mindre nAb-reaktioner end infektion med Delta-varianten [24], og relativt lidt er kendt om de potentielle konsekvenser af hybridimmunitet, der tildeles ved infektion og vaccination med forskellige stammer. Ikke desto mindre er tilstedeværelsen af ​​polyfunktionelle S-specifikke T-celler i tidligere inficerede og vaccinerede deltagere i vores undersøgelse i overensstemmelse med et langsommere fald i beskyttelse mod alvorlig COVID-19 i denne population og kan bidrage til at ændre sygdommens sværhedsgrad efter geninfektion med SARS -CoV{100}} varianter [25,26]. Den nuværende undersøgelse har flere begrænsninger. For det første gør de små stikprøvestørrelser i kohorten robust statistisk analyse udfordrende; derfor skal vores resultater valideres yderligere i større kohorter. For det andet var vi ikke i stand til at teste prøver på senere tidspunkter for at bestemme holdbarheden og aftagende humorale og cellulære immunresponser. For det tredje kan vores resultater undervurdere virkningen af ​​subdominante T-celleepitoper uden for de dominerende epitoper. For det fjerde undersøgte vi kun cirkulerende lymfocytter, og fremtidige undersøgelser af drænende lymfeknuder efter vaccination kan være nødvendige for at forstå de mekanismer, der ligger til grund for de differentielle responser, der er observeret her. Sammenfattende kaster den aktuelle undersøgelse med direkte, aldersmatchede sammenligninger lys over den uoverensstemmende humorale og cellulære immunogenicitet af heterolog priming og boosting i forbindelse med SARS-CoV{106}}-antigeneksponeringer. Vores resultater fremhæver, hvordan individuel immunologisk erfaring former den efterfølgende immunrespons fremkaldt af COVID-{107}}-vaccination. Yderligere effektivitetsdata fra den virkelige verden og laboratorieundersøgelser vil yderligere informere den mest passende vaccinationsstrategi til beskyttelse mod nye SARS-CoV-2-varianter, med implikationer for udviklingen af ​​næste generations vaccineplatforme.

Fig. 4. Cellulære immunresponser ved spidsbelastningstidspunkter. (A) Frekvenserne af spike-specifikke IFN-c plus-celler blandt CD4 plus T-celler blev sammenlignet blandt BNT162b2/BNT162b2 (n=19), AZD1222/AZD1222 (n=18), AZD1222/BNT162b2 ( n=9), og tidligere infektion/vaccination (n=7) grupper på spidsbelastningstidspunkter. Spidspunkter blev valgt som følger: efter den anden dosis i BNT162b2/BNT162b2, AZD1222/AZD1222 og AZD1222/BNT162b2 vaccinationsgrupperne og efter den første dosis i den tidligere infektion/vaccinationsgruppe. (B) Procentdelen af ​​deltagere med varierende niveauer af cellulære immunresponser. Kvantificering af typen af ​​responder (stærk, moderat og ingen/svag) udtrykkes som en brøkdel af antallet af vaccinemodtagere i hver gruppe. Typer af respondere blev bestemt af percentil-score beregnet fra alle vaccinerede deltagere. (C) Frekvenserne af polyfunktionelle spidsspecifikke CD4 plus T-celler, der producerer en hvilken som helst kombination af IFN-c, IL-2 eller TNF i hver gruppe af vaccinerede deltagere. (D) Fraktionen af ​​spike-specifikke CD4 plus T-celler er positiv for et givet antal cytokiner. Data præsenteres som middelværdi ± SD. Signifikans blev analyseret ved hjælp af Mann-Whitney testen (A og C). ns, ikke signifikant; *P < 0.05, **P < 0.01, ***P < 0,001, ****P < 0,0001.

Desuden den traditionelle kinesiske medicin ingredienscistanche urtkan også forbedre immuniteten, Cistanche deserticolas mekanisme til at øge immuniteten

cistanche supplement fordele-hvordan man styrker immunsystemet

Klik her for at se produkter fra Cistanche Enhance Immunity

【Spørg om mere】 E-mail:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Cistanche tubulosapolysaccharider kan fremme spredningen af ​​T- og B-lymfocytter, men spredningseffekten af ​​B-lymfocytter er betydeligt stærkere end T-lymfocytternes. Cistanche deserticola polysaccharider fremmer frigivelsen af ​​cytokin IL22 fra lymfocytter, som er relateret til at fremme splenisk lymfocytproliferation. Cistanche deserticola kan aktivere makrofager og regulere immunsystemet. Cistanche deserticola polysaccharider, echinaside og pilosid har betydelige virkninger på dannelsen og aktiviteten af ​​humane lymfocytter. Det kan øge spredningsresponsen af ​​lymfocytter og derved forbedre kroppens immunfunktion.

cistanche ekstrakt

De funktionelle komponenter afCistanche tubulosatotale glykosider har en betydelig indvirkning på cellegenvinding efter 60Coy-strålingsskade og kan også forbedre immunfunktionen mod strålingsskader.

Cistanche tubulosa-ekstrakt kan ikke kun kompensere for medfødt immundefekt, men også forbedre erhvervet immunitet.

Fig. 5. Krydsvariante immunresponser mod Delta fremkaldt af forskellige prime-boost-regimer. (A) Plasmaprøver blev analyseret ved plakreduktionsneutraliseringsassays for SARS-CoV-2 Delta-varianten i BNT162b2/BNT162b2 (n {{10}}), AZD1222/AZD1222 (n {{ 13}}), AZD1222/BNT162b2 (n=9), tidligere infektion/vaccination (n=11) og Delta-rekonvalescerende (n {{20}}) grupper. Delta-neutraliserende antistoffer blev sammenlignet blandt grupper på følgende tidspunkter: efter den anden dosis i BNT162b2/BNT162b2-, AZD1222/AZD1222- og AZD1222/BNT162b2-vaccinationsgrupperne og efter den første dosis i den tidligere infektion/vaccinationsgruppe. (B) PBMC'er blev analyseret ved intracellulær farvning for IFN-c efter direkte ex vivo-stimulering under anvendelse af to forskellige sæt S-peptidpuljer omfattende ikke-konserverede områder af spidssekvenser mellem Wuhan- og Delta-stammerne i BNT162b2/BNT162b2 (n {{37} }), AZD1222/AZD1222 (n {{40}}), AZD1222/BNT162b2 (n=9), tidligere infektion/vaccination (n=7) og Delta-rekonvalescent ( n=17) grupper. Forholdet mellem frekvensen af ​​IFN-c-producerende CD4 plus T-celler mod Delta-spidsen og frekvensen af ​​IFN-c-producerende CD4 plus T-celler mod Wuhan-spidsen blev beregnet i hver gruppe. Data præsenteres som det geometriske middel ± geometriske SD (A) eller middel ± SD (B) og analyseres for signifikans ved hjælp af Mann-Whitney testen. ns, ikke signifikant; *P < 0,05, **P < 0,01, ***P < 0,001, ****P < 0,0001.

Referencer

[1] Bok K, Sitar S, Graham BS, et al. Accelereret COVID-19-vaccineudvikling: milepæle, lektioner og udsigter. Immunitet 2021;54:1636-51. https://doi. org/10.1016/j.immuni.2021.07.017.

[2] Polack FP, Thomas SJ, Kitchin N, et al. Sikkerhed og effektivitet af BNT162b2 mRNA Covid-19-vaccinen. N Engl J Med 2020;383:2603–15. https://doi.org/ 10.1056/NEJMoa2034577.

[3] Falsey AR, Sobieszczyk ME, Hirsch I, et al. Fase 3 Sikkerhed og effektivitet af AZD1222 (ChAdOx1 nCoV-19) Covid-19-vaccine. N Engl J Med 2021;385:2348–60. https://doi.org/10.1056/NEJMoa2105290.

[4] Borobia AM, Carcas AJ, Pérez-Olmeda M, et al. Immunogenicitet og reaktogenicitet af BNT162b2-booster i ChAdOx1-S-primede deltagere (CombiVacS): et multicenter, åbent, randomiseret, kontrolleret fase 2-forsøg. Lancet 2021;398:121-30. https://doi.org/10.1016/S0140-6736(21) 01420-3.

[5] Barros-Martins J, Hammerschmidt SI, Cossmann A, et al. Immunresponser mod SARS-CoV-2-varianter efter heterolog og homolog ChAdOx1 nCoV-19/BNT162b2-vaccination. Nat Med 2021;27:1525–9. https://doi.org/ 10.1038/s41591-021-01449-9.

[6] Hillus D, Schwarz T, Tober-Lau P, et al. Sikkerhed, reaktogenicitet og immunogenicitet af homolog og heterolog prime-boost immunisering med ChAdOx1 nCoV-19 og BNT162b2: en prospektiv kohorteundersøgelse. The Lancet Respir Med 2021;9:1255-65. https://doi.org/10.1016/S2213-2600(21)00357- X.

[7] Schmidt T, Klemis V, Schub D, et al. Immunogenicitet og reaktogenicitet af heterolog ChAdOx1 nCoV-19/mRNA-vaccination. Nat Med 2021;27:1530–5. https://doi.org/10.1038/s41591-021-01464-w.

[8] Liu X, Shaw RH, Stuart ASV, et al. Sikkerhed og immunogenicitet af heterologe versus homologe prime-boost-skemaer med en adenoviral vektoreret og mRNA COVID-19-vaccine (Com-COV): et enkeltblindt, randomiseret, noninferiority-forsøg. Lancet 2021;398:856–69. https://doi.org/10.1016/S0140- 6736(21)01694-9.

[9] Krammer F, Srivastava K, Alshammary H, et al. Antistofresponser hos seropositive personer efter en enkelt dosis SARS-CoV-2 mRNA-vaccine. N Engl J Med 2021;384:1372–4. https://doi.org/10.1056/NEJMc2101667.

[10] Bradley T, Grundberg E, Selvarangan R, et al. Antistofresponser efter en enkelt dosis SARS-CoV-2 mRNA-vaccine. N Engl J Med 2021;384:1959–61. https:// doi.org/10.1056/NEJMc2102051.

[11] Saadat S, Rikhtegaran Tehrani Z, Logue J, et al. Bindings- og neutraliseringsantistoftitre efter en enkelt vaccinedosis hos sundhedspersonale, der tidligere er inficeret med SARS-CoV-2. JAMA 2021;325:1467–9. https://doi.org/ 10.1001/jama.2021.3341.

[12] Reynolds CJ, Pade C, Gibbons JM, et al. Tidligere SARS-CoV-2-infektion redder B- og T-celleresponser på varianter efter første vaccinedosis. Science 2021;372:1418-23. https://doi.org/10.1126/science.abh1282.

[13] Ledford H. Kunne blanding af COVID-vacciner booste immunrespons? Nature 2021;590:375–6. https://doi.org/10.1038/d41586-021-00315-5.

[14] Schultz NH, Sorvoll IH, Michelsen AE, et al. Trombose og trombocytopeni efter ChAdOx1 nCoV-19-vaccination. N Engl J Med 2021;384:2124–30. https:// doi.org/10.1056/NEJMoa2104882.

[15] Greinacher A, Thiele T, Warkentin TE, et al. Trombotisk trombocytopeni efter ChAdOx1 nCov-19-vaccination. N Engl J Med 2021;384:2092-101. https://doi.org/10.1056/NEJMoa2104840.

[16] Mazzoni A, Di Lauria N, Maggi L, et al. MRNA-vaccination med første dosis er tilstrækkelig til at reaktivere immunologisk hukommelse til SARS-CoV-2 hos forsøgspersoner, der er blevet raske efter COVID-19. J Clin Invest 2021;131:e149150.

[17] Samanovic MI, Cornelius AR, Gray-Gaillard SL, et al. Robuste immunresponser observeres efter én dosis af BNT162b2 mRNA-vaccinedosis hos SARS-CoV-2--erfarne individer. Sci Transl Med 2022;14:eabi8961.. https://doi.org/ 10.1126/scitranslmed.abi8961.

[18] Khoury DS, Cromer D, Reynaldi A, et al. Neutraliserende antistofniveauer er meget prædiktive for immunbeskyttelse mod symptomatisk SARS-CoV-2-infektion. Nat Med 2021;27:1205–11. https://doi.org/10.1038/s41591-021-01377-8.

[19] Hall V, Foulkes S, Insalata F, et al. Beskyttelse mod SARS-CoV-2 efter Covid- 19-vaccination og tidligere infektion. N Engl J Med 2022;386:1207–20. https://doi.org/10.1056/NEJMoa2118691.

[20] Zhang Z, Mateus J, Coelho CH, et al. Humoral og cellulær immunhukommelse til fire COVID-19-vacciner. Cell 2022;185:2434-51. https://doi.org/10.1016/ j.cell.2022.05.022.

[21] Vardhana S, Baldo L, Morice WG, et al. At forstå T-cellers reaktioner på COVID-19 er afgørende for at informere om folkesundhedsstrategier. Sci Immunol 2022;7:eabo1303.. https://doi.org/10.1126/sciimmunol.abo1303.

[22] Moss P. T-cellens immunrespons mod SARS-CoV-2. Nat Immunol 2022;23:186-93. https://doi.org/10.1038/s41590-021-01122-w.

[23] Goldberg Y, Mandel M, Bar-On YM, et al. Beskyttelse og aftagende naturlig og hybrid immunitet over for SARS-CoV-2.N Engl. J Med 2022;386:2201-12. https://doi. org/10.1056/NEJMoa2118946.

[24] Rossler A, Knabl L, von Laer D, et al. Neutraliseringsprofil efter genopretning fra SARS-CoV-2 Omicron-infektion. N Engl J Med 2022;386:1764–6. https://doi. org/10.1056/NEJMc2201607.

[25] Guerrera G, Picozza M, D'Orso S, et al. BNT162b2-vaccination inducerer holdbare SARS-CoV-2-specifikke T-celler med en stamcellehukommelsesfænotype. Sci Immunol 2021;6(eabl5344). https://doi.org/10.1126/sciimmunol.abl5344.

[26] Goldblatt D. SARS-CoV-2: fra flokimmunitet til hybridimmunitet. Nat Rev Immunol 2022;22:333-4. https://doi.org/10.1038/s41577-022-00725-0.