Xinjiang Cistanche-polysaccharider: I stand til at fjerne reaktive iltarter og frie radikaler

abstrakt

Antioxidantaktiviteten af ​​Cistanche deserticola polysaccharid in vitro blev undersøgt. At tage ascorbinsyre som kontrol, tage den Fenton-lignende reaktion til at producere hydroxylradikaler, autooxidationsreaktionen af dopamin til at producere superoxidanionradikaler, reaktionen af natriumhypochlorit med hydrogenperoxid til at producere singlet oxygen, diphenylbittre hydrazinradikaler som den eksperimentelle model, virkningerne af Cistanche- og hydroxysaccharide-radikaler på polysaccharide-radikaler, radikaler DPPH · frit radikal (diphenyl bitter hydrazin radikal), den rensende virkning af singlet oxygen. Resultaterne viste, at polysacchariderne fra Cistanche deserticola havde tydelige rensende virkninger på ovennævnte frie radikaler, og den rensende effekt var positivt korreleret med koncentrationen af ​​polysaccharider.

Nøgleord :Cistanche deserticola; polysaccharid; Fri radikal

1 . Introduktion

Kroppen producerer løbende forskellige reaktive iltfrie radikaler (ROS) i processen med oxidativ metabolisme af livsaktiviteter, som er mellemprodukterne af oxidations-reduktionsreaktionen af ​​aerob metabolisme.Forskning har fundet ud af, at overskydende frie radikaler vil angribe livets makromolekyler og forskellige organeller, hvilket forårsager forskellige skader på molekylært niveau, celleniveau, væv og organniveau, accelererer kroppens ældningsprocessen og inducerer sygdomme som trombose, diabetes, åreforkalkning, tumorer osv.. [1]. På grund af toksiciteten af ​​kemisk syntetiserede antioxidanter til den menneskelige krop, er søgning efter naturlige antioxidanter med høj effektivitet og lav toksicitet, der kan fjerne iltfrie radikaler, blevet et varmt forskningsemne inden for medicin, mad, kemiteknik og andre områder i de senere år.

Cistanche deserticola (Y.C...)er en sjælden kinesisk traditionel medicin og er kendt som "ørkenginseng" [2]. Cistanche deserticola mapolysaccharid er en af ​​de vigtigste bioaktive komponenter i Cistanche deserticola, men der er ingen rapport om, hvorvidt Cistanche deserticolas polysaccharid har den virkning, at det fjerner frie radikaler. I dette papir blev de rensende virkninger af Cistanche deserticola polysaccharid på superoxidanionradikal, hydroxylradikal, DPPH · frit radikal og singlet oxygen bestemt ved spektralanalyse for at evaluere dets antioxidantaktivitet og give et videnskabeligt grundlag for den fulde udvikling og udnyttelse af denne naturressource.

Kinesisk urtecistanche

2. Eksperimentel del

2.1 Instrumenter og reagenser

UV-2401 UV-synligt spektrofotometer (Shimadzu, Japan); LumatLB9507 ultra-følsomt rør luminometer (Tyskland

BertholdTechnologies); RE-52CS rotationsfordamper (Shanghai Yarong Biochemical Instrument Factory); HW-SY elektronisk termostatisk vandbad (Jintan Xinhang Instrument Factory); PHS-3C pH-meter (Shanghai Precision Scientific Instrument Co., Ltd.); DZF-6020 vakuumtørreovn (Shanghai Yiheng Technology Co., Ltd.). Cistanche deserticola: købt fra Kuitun Pharmaceutical Corporation. Luminol (Sigma, USA), dopamin (Kinas institut for kontrol med farmaceutiske og biologiske produkter), FeSO4, EDTA, vitamin C, H2O2, NaClO, Na2CO3, NaHCO3 osv., er alle indenlandske analytiske reagenser. Forsøgsvandet er ionbytterdestilleret vand.

2.2 Eksperimentel metode

2.2.1 Ekstraktionsmetode for Cistanche deserticola polysaccharid

Tag 30 g Cistanche deserticola-pulver og kom det i en 500 ml konisk kolbe. Nedsænk den i petroleumsether (60-90 grader), ether og 80 % ethanol varm opløsning (30 grader) i henholdsvis 6 timer, og resten fordampes for at tørre opløsningsmidlet. Udblød filterresten i vand i et forhold på 1:10 i 24 timer, opvarm det ved 30 grader og ekstraher det i 100 minutter. Efter ekstraktion centrifugeres for at opnå supernatanten. Efter at supernatanten er koncentreret under reduceret tryk, udfældes den med 95% ethanol på 3 gange volumenet. Den får lov at stå i 24 timer ved 4 grader. Efter centrifugering opsamles og udfældes. Efter vakuumtørring kan det rå polysaccharid af Cistanche deserticola opnås. Vej 1,00 g råt polysaccharid, opløs det med vand, og kom det i en 50 ml målekolbe til standby.

Desert ginseng-antioxidant

Klik her for at se Cistanche pulverprodukter

【Spørg om mere】 E-mail:cindy.xue@wecistanche.com / WhatsApp: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

2.2.2 Test af Cistanche deserticola polysaccharid's opfangningsevne til O2 · frit radikal

Cistanche deserticola-polysaccharid's evne til at fjerne O-2 · blev testet ved produktion af frie superoxid-radikaler (O-2 ·) fra dopamin-autoxidation [3]. Tilsæt 3,0 mL 0,1 mmol/LpH=10.12 carbonatbufferopløsning, 3,0 mL vand og 0,5 mL polysaccharidprøveopløsning af forskellige koncentrationer i det tørrereagensglas med skala efter tur. Efter forvarmning i et 30 graders vandbad i 5 minutter, tilsæt 1,0mL 2,0mmol/L dopamin forvarmet i et 30 graders vandbad, bland straks og tid, hold reaktionen ved 30 grader i 5min, og stop straks reaktionen med 2 dråber 10mol/L HCl. Brug bufferopløsningen som reference, mål absorbansen (prøve A) ved 221 nm, udskift prøven (blind A) med 0,5 mL vand i blindprøvegruppen, og erstat prøven med 0,5 mL ascorbinsyre i kontrolgruppen, mål hver prøve tre gange parallelt, og tag gennemsnitsværdien. O-2 · clearance rate (%)=(En blank - En prøve)/A blank × 100 %

2.2.3 Test af Cistanche deserticola polysaccharid's opfangende evne til · OH frie radikaler

Desert levende cistanche-Antioxidant

EDTA-Fe (Ⅱ) - methylenblåt - H2O2-system blev brugt til at teste opfangningsevnen af ​​Cistanche deserticola polysaccharid på hydroxylradikal. Princippet er, at EDTA-Fe (Ⅱ) reagerer med brintoverilte for at producere · OH frie radikaler, hvilket reducerer den karakteristiske absorptionstoppe af methylenblå opløsning ved 660 nm.

Tilsæt 1,0mL 5mmol/L LFeSO4-opløsning, 1,2mL 5mmol/L LEDTA-opløsning, 2,0mL 0,03mol/L NaH2PO4-Na2HPO4 (pH=7.4) bufferopløsning, og 1,3mL 20mmol/L 20mmol/L-reagensglasopløsning, skub i en serie af hydrogenperoxid-opløsning10m. godt, tilsæt 0,7 mL 0,2 mmol/L methylenblåt opløsning, og tilsæt derefter 1,0 mL af opløsningen, der skal testes, og vitamin C1.0 i forskellige koncentrationer, fortynd til 10,00 mL med vand, bland godt, hold ved 37 grader i 30 minutter, og mål absorbansværdien for hver opløsning, og udskift prøveopløsningsgruppen med 660m. Hver prøve skal måles tre gange parallelt, og gennemsnitsværdien tages. · OH-radikalopfangningshastighed for prøven (%)=[(A2-A1)/(A0-A1) × I formlen på 100%: A0 -- absorbansværdi af ubeskadiget rør; A1 - absorbansværdi for beskadiget rør; A2 -- fotometrisk værdi efter tilføjelse af prøve.

2.2.4 Test på DPPH · rensende evne af Cistanche deserticola polysaccharid

Tag 0,1 ml Cistanche deserticola polysaccharidopløsning og tilsæt det til 5,0 ml DPPH · opløsning, bland det hurtigt og lad det stå i 10 minutter ved stuetemperatur,

Bestem dens absorbansændring ved 517nm bølgelængde [4]. Hver prøve skal måles tre gange parallelt, og gennemsnitsværdien tages. Prøveclearance-hastigheden for DPPH · (%)=1 - [(AB)/A0] × I formlen på 100%: A0 -- absorbansværdi for DPPH · (1,9mLDPPH ·+0.1mL50% ethanol) uden prøve; A - absorbansværdi af prøven efter reaktion med DPPH ·; B -- absorbansværdi af blindprøve (prøve 0,1 ml +1.9 ml 50 % ethanol).

2.2.5 Cistanche deserticola polysaccharid-opfangende singlet oxygen 1O2 test

Single-line oxygen (1O2) produceres ved den kemiske reaktion af NaClO og H2O2 ved 37 grader [5]. Opløsningen, der anvendes til bestemmelse af 1O2, er 100 μ L2,8 mmol/L NaClO-opløsning, 400 μL 5 mmol/NaOH-opløsning, 300 μL 10 mmol/H2O2-opløsning og 50 μL 1 mmol/L/Luminol-opløsning. Under reaktionen tilsættes reaktionsopløsningen til prøveopløsningen, og kemiluminescensinstrumentet registrerer automatisk reaktionsprocessen på samme tid. Tag NaClO-H2O2-NaOH-Luminol som blindkontrol. Start reaktionen, og tilsæt reaktionsopløsningen i prøverøret fra opbevaringsflasken på kemiluminescensinstrumentet i henhold til den mængde, der er indstillet af proceduren. Derefter registreres kemiluminescensintensiteten af ​​reaktionsblandingen på registreringspapiret hver 5. sekund, hver prøve måles tre gange parallelt, og gennemsnitsværdien tages.

Clearance rate beregnes i henhold til følgende formel: clearance rate (%)=(kontrol lysstyrke - prøve lysstyrke)/kontrol lysstyrke × 100%

3 Resultater og diskussion

3.1 Opfangende effekt af Cistanche deserticola polysaccharid på O-2 ·

Fordele ved cistanche tubulosa-Antioxidant

Den kemiske egenskab ved O-2 · er aktiv, hvilket kan få fedtsyrerne på biofilmen til at producere peroxid og derefter ødelægge cellerne [6]. I dette papir blev dopaminmetoden brugt til at bestemme opfangningsevnen af ​​O2 ·. Opfangningsevnen af ​​Cistanche deserticola til O2 · er vist i figur 1. Resultaterne viste, at Cistanche deserticola polysaccharid kunne inhibere O2 · produceret ved autooxidation af dopamin og steg med stigningen af ​​koncentrationen inden for det målte koncentrationsområde (0-8 mg/ml), men dens evne til at fjerne syre var lavere end den, der var til at fjerne.

3.2 Opfangende effekt af Cistanche deserticola polysaccharid · OH

·OH er et af de mest aktive oxygenfrie radikaler i de aktive oxygenarter. Det kan reagere med næsten ethvert biologisk makromolekyle i levende celler og kan føre til biokemiske processer såsom lipidperoxidation, proteinpolymerisering, depolymerisering, nukleinsyrebrud osv. i kropsvævet, hvilket forårsager vævs- og cellesygdomme, hvilket fører til forekomsten af ​​forskellige sygdomme og accelererer kroppens aldring [7]. Opfangningsevnen af ​​Cistanche deserticola polysaccharid til · OH er vist i figur 2. Resultaterne viste, at Cistanche deserticola polysaccharid havde en god rensende effekt på · OH, og den steg med stigningen i koncentrationen.

3.3 Opfangningsevnen af ​​Cistanche deserticola polysaccharid til DPPH ·

DPPH · (diphenyl bitter hydrazine radikal) er et stabilt frit radikal, som er lilla i organiske opløsningsmidler og har stærk absorption nær 517nm. Efter tilsætning af antioxidanter fjernes nogle frie radikaler, hvilket svækker absorptionen, hvilket kan bruges til at vurdere antioxidantaktiviteten af ​​dette stof [8]. Se figur 3 for DPPH · opfangningskapaciteten af ​​Cistanche deserticola polysaccharid. De eksperimentelle resultater viste, at opfangningskapaciteten af ​​Cistanche deserticola polysaccharid på DPPH · var positivt korreleret med dets koncentration, og opfangningskapaciteten var større end ascorbinsyres.

3.4 Opfangningsevne af Cistanche deserticola polysaccharid til 1O2

Single-line oxygen er exciteret molekylært oxygen med aktive kemiske egenskaber. Fordi uparrede elektroner har tendens til at parre sig, viser frie radikaler mere aktive kemiske egenskaber [9]. Opfangningsevnen af Cistanche deserticola polysaccharid til 1O2 er vist i figur 4. Forsøgsresultaterne viste, at opfangningskapaciteten af Cistanche deserticola polysaccharid var lavere end ascorbinsyre i området 0-4,0 mg/ml, og opfangningsevnen for Cistanche deserticola polysaccharid var højere end den rensende kapacitet for Cistanche deserticola polysaccharid i området 0-4,0 mg/ml, og den opfangende kapacitet af cistanche deserticola polysaccharid var højere. syre, når koncentrationen var større end 4,0 mg/ml.

 

4. Konklusion

Antioxidantaktiviteten af ​​Cistanche deserticola polysaccharider in vitro blev undersøgt i detaljer gennem forskellige reaktive iltfri radikalsystemer.Ud fra de eksperimentelle resultater kan det ses, at polysaccharidekstraktet af Cistanche deserticola inden for det eksperimentelle koncentrationsområde har rensende virkninger på O2 ·, · OH, DPPH · og 1O2, og de rensende effekter er forskellige for forskellige systemer.Det viste resultaterneCistanche deserticola polysaccharid er en effektiv eksogen naturlig antioxidant, som er værdig til yderligere forskning, udvikling og omfattende udnyttelse.

Cistanche 200mg- Antioxidant

reference

[1] Ling Guanting. Antioxidant mad og sundhed [M]. Beijing: Chemical Industry Press, 2004.1-58.

[2] Gao Ming, Tian Ziyu, Cai Hongmei, et al. Alkaliekstraktion og kemisk analyse af polysaccharider fra Cistanche deserticola [J]. Agricultural and Food Science and Technology, 2008,2 (3): 32-34.

[3] Shi Shuangqun, Song Xinfang. Autooxidationen af ​​dopamin [J]. Journal of Hebei Normal University, 1997,21 (4): 387-389.

[4] Zhang Zeqing, Tian Yingjuan, Zhang Jing. Undersøgelse af antioxidantaktiviteten af ​​Fangfeng polysaccharid [J]. Chinese Medicine, 2008,31 (2): 268-271.

[5] Li Haiping, Zhang Shuhai, Zhang Kunsheng. Undersøgelse af antioxidantaktiviteten af ​​lentinan [J]. Fødevareforskning og -udvikling, 2008,29 (4): 56-60.

[6] Mo Jian. Introduktion til medicinsk fri radikalbiologi [M]. Beijing: People's Health Publishing House, 1989.21-25.

[7]FrederickVL.FreeRadicals[J].ClinicalChemistry,1993,65(12):374-377.

[8]MatsudaM,NagahamaY,SatoTetal.DMYer et specifikt DMDomainGene, der kræves for mandlig udvikling iMedakaFish[J].Nature,2002,30:559-563.

[9]KanofskyJR.SingletOxygenProductionbyLactoperoxidase[J].JournaofBiologicalChemistry,1983,258(10):5991-5993.