Bredt målrettet metabolomisk analyse for at afsløre transformationsmekanisme for Cistanche Deserticola aktive forbindelser under dampnings- og tørringsprocesser

Cistanche deserticola er en af ​​de mest værdifulde planter, traditionelt som kinesisk medicin, og er for nylig blevet brugt i farmaceutiske og sunde fødevareindustrier. Dampning og tørring er to vigtige trin i behandlingen af ​​Cistanche deserticola.

Desværre er en omfattende forståelse af de kemiske sammensætningsændringer af Cistanche deserticola under termisk behandling begrænset. I denne undersøgelse blev ultra-performance væskekromatografi-tandem massespektrometri (UHPLC-MS/MS)-baseret bredt målrettet metabolomics-analyse brugt til at undersøge transformationsmekanismen af ​​Cistanche deserticola aktive forbindelser under dampnings- og tørringsprocesser. I alt 776 metabolitter blev identificeret i Cistanche deserticola under termisk behandling, blandt hvilke 77 metabolitter var differentielt reguleret (p < 0.05), hvor 39 var opreguleret (UR) og 38 var nedregulerede (DR). Syvogfyrre (17 UR, 30 DR) og 30 (22 UR, 8 DR) differentielle metabolitter blev identificeret under henholdsvis dampning og tørring.

Den største variation af kemikalierne blev observeret under dampningsprocessen. Metabolisk pathway-analyse indikerede, at phenylpropanoid, flavonoidbiosyntese og alaninmetabolisme blev observeret under dampning, mens glycin-, serin- og threoninmetabolisme, thiaminmetabolisme og umættet fedtsyrebiosyntese blev observeret under tørring. De mulige mekanismer for de kemiske ændringer under termisk behandling blev også leveret af Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) pathway-analyse. Ydermere forekom mørkningen af ​​udseendet af Cistanche deserticola hovedsageligt i dampningsstadiet frem for tørringsstadiet, som er forbundet med metabolismen af ​​aminosyrerne. Alle resultater indikerede, at dannelsen af ​​aktive forbindelser under forarbejdningen af ​​Cistanche deserticola hovedsageligt fandt sted i dampningsstadiet.

click cistanche tubulosa supplement effekter produkter

INTRODUKTION

Cistanche deserticola, der tilhører familien Orobanchaceae, er en af ​​de mest berømte toniske lægemidler og distribueres hovedsageligt i de tropiske og subtropiske områder i verden, såsom Kina, Iran, Indien, Mongoliet og så videre (1-3). Cistanche deserticola fungerer som en af ​​de mest almindeligt anvendte naturlægemidler til behandling af nyremangel, impotens, kvindelig infertilitet, sygelig leukorrhea, voldsom metrorrhagia og senil (4, 5). Moderne farmakologisk forskning viste, at Cistanche deserticola har virkningerne af at forbedre immunitet, antitræthed, anti-aldring og forbedre indlærings- og huskeevnen (6). På grund af disse sundhedsmæssige fordele er Cistanche deserticola te lavet af dens stængelknolde blevet udviklet som et nærende supplement og bliver i stigende grad begunstiget af forbrugerne. De aktive ingredienser i Cistanche deserticola er ansvarlige for dets medicinske funktioner (7). Nogle aktive ingredienser i Cistanche deserticola, såsom phenylpropanoider (for eksempel phenylethanoid glycosider), flavonoider, polysaccharider, oligosaccharider, iridoider og lignaner er blevet rapporteret i tidligere undersøgelser (6, 8).

På grund af de letfordærvelige og sæsonbestemte træk er forsyningen af ​​frisk Cistanche deserticola ikke tilgængelig året rundt, og derfor bliver den forarbejdede Cistanche deserticola den vigtigste forbrugsform. Kvaliteten af ​​Cistanche deserticola afhænger af mange faktorer, såsom klima, levesteder, værter, høsttid, forarbejdningsteknologi og plantens position, blandt hvilke forarbejdningsteknologi er særlig vigtig (4). Dampning og tørring er to vigtige trin i behandlingen af ​​Cistanche deserticola. Sædvanligvis blev det høstede Cistanche deserticola rhizom dampet i en dampkedel ved 93◦C i 30 minutter og derefter tørret ved 60◦C indtil fugtindholdet på 10 procent på våd basis (vb) (9).

Tidligere undersøgelser har vist, at dampning kan fremme akkumuleringen af ​​aktive ingredienser i Cistanche deserticola, såsom phenylethanoid glycosider, opløselige sukkerarter og polysaccharider, ledsaget af sortfarvning af udseendets farve (9-11). De fleste af de tidligere undersøgelser fokuserede dog på bestemte specifikke forbindelser, og meget sjælden forskning handler om ændringerne i alle de kemiske forbindelser og metabolitternes omdannelsesmekanisme under forarbejdning. Derfor er det nødvendigt at klarlægge metabolitændringerne af Cistanche deserticola i forskellige behandlingsstadier.

Metabolomics anvendes sædvanligvis til kvalitativ og kvantitativ analyse af alle små molekyler (nemlig målrettede og ikke-målrettede forbindelser) påvist i prøven (12). Analyse af ændringer i forskellige kemiske komponenter under fødevareforarbejdning hjælper med at uddybe forståelsen af ​​mekanismen for kemisk komponenttransformation i fødevareforarbejdning (12). I de senere år er metabolomics også blevet anvendt til studiet af Cistanche deserticola til skelnen mellem forskellige dele (11) og forskellige Cistanche deserticola-arter (13).

Påvisningsmetoderne for metabolitter i disse undersøgelser var for det meste baseret på målrettet og ikke-målrettet metabolomik. Blandt dem er målrettet metabolomics baseret på standardprodukter, med høj datanøjagtighed og pålidelighed, dog begrænset dækning af metabolitter. Målrettet metabolomics er en vigtig del af metabolomics forskning, det er målrettet og specifik påvisning og analyse af specifikke metabolitgrupper, snarere end alle komponenterne i prøven. Ikke-målrettet metabolomics-teknologi kan kvalitativt bestemme metabolitterne baseret på eksisterende databaser, med høj dækning af forbindelser, dog lav nøjagtighed. Nøglemetabolitterne skal bekræftes af standardprodukter (14). Bredt målrettet metabolomics er en ny teknologi, der integrerer fordelene ved ikke-målrettede og målrettede metabolitdetektionsteknologier for at opnå bred dækning, høj gennemstrømning og følsomhed (15).

Som følge heraf er denne teknologi blevet brugt i vid udstrækning i studiet af ingrediensændringer i forskellige materialer under forarbejdning, såsom aktive ingredienser i funktionelle fødevarer ved forskellige forarbejdningsmetoder (16), flavonoider og phenylpropanoider-forbindelser i kinesisk vandkastanje behandlet med forskellige metoder (17) , risgulningsmekanisme under gulningsprocessen (18), og dannelsesmekanismen for karakteristiske ikke-flygtige kemikalier udgøres under oolong-te-fremstillingsprocessen (19). Derfor er det teoretisk muligt at bruge bredt målrettet metabolitteknologi til at studere mekanismen for omdannelsen af ​​aktive ingredienser under behandlingen af ​​Cistanche deserticola.

Formålet med denne undersøgelse var således at (1) give nyttig information om de kemiske ændringer i Cistanche deserticola under dampnings- og tørringsprocesser ved at bruge ultraperformance væskekromatografi-tandem massespektrometri (UHPLC-MS/MS) kombineret med en bredt målrettet metabolomisk nærme sig; (2) identificere de differentielle metabolitter og deres reguleringsregler og afsløre de mulige omdannelsesveje i Cistanche deserticola under forarbejdning. Denne undersøgelse forventes derfor at give en teoretisk reference for dannelsesmekanismen for Cistanche deserticola af høj kvalitet.

MATERIALER OG METODER Materialer og kemikalier

Råmaterialer: Friske Cistanche deserticola-prøver blev opnået fra Hetian-regionen i Xinjiang-provinsen i Kina. Prøverne blev omhyggeligt udvalgt med samme størrelse (gennemsnitlig længde, diameter og vægt var henholdsvis 11,7 ± 1,1 cm, 7,0 ± 1,1 cm og 360 ± 8,9 g). Prøverne blev opbevaret ved stuetemperatur i et mørkt miljø med et initialt fugtindhold på omkring 78,56 procent ± 3,47 procent. Før eksperimenterne blev prøver fra Cistanche deserticola vasket med postevand for at fjerne støvet på overfladen. Overskydende vand på dens overflade blev fjernet ved at duppe papir.

Kemikalier: Methanol, acetonitril og myresyre var væskekromatografisk massespektrometrikvalitet (LC-MS) og købt hos Merck (Sigma Aldrich, MO, USA). De andre analytiske standarder viste en renhed på mere end 98 procent (Sigma Aldrich, MO, USA).

Eksperimentelt design

Tidligere undersøgelser har vist, at de kemiske forbindelser fordeler sig ujævnt i længderetningen af ​​Cistanche deserticola (1). For at opnå det samme oprindelige indhold af kemiske forbindelser i hver prøve blev alle udvalgte Cistanche deserticola i den nuværende forskning skåret i tre lige store dele for den friske gruppe (A), dampet uden tørringsgruppe (B) og tørret efter dampningsgruppe (C), henholdsvis ved langsgående segmentering med den langsgående symmetriakse som centrum (20).

For gruppe B blev prøverne successivt dampet i 8 minutter ifølge indledende eksperimenter. Et pulserende vakuumdampningsudstyr (selvudviklet af China Agricultural University, Beijing, Kina) blev brugt til dampbehandling af friske Cistanche deserticolas. Dampede prøver blev tørret i en vakuumfrysetørrer (LGJ-25C, Si Huan Scientific Instrument Factory Co., Beijing, Kina). Varmepladen og kuldefældens temperaturer var henholdsvis 30 og −60◦C. For gruppe C blev prøverne successivt dampet ved hjælp af pulserende vakuumudstyr i 8 minutter og tørret i varmluftsimpulstørreren (selvudviklet af China Agricultural University, Beijing, Kina) indtil det endelige fugtindhold på 10 procent (wb). Luftstrømshastigheden og temperaturen blev sat til henholdsvis 6 m/s og 60◦C, under henvisning til forskningsresultaterne fra Zou et al. (11). Alle prøver blev opbevaret ved -20◦C ikke mere end 7 dage før yderligere analyse.

Bestemmelse af udseendets farve af Cistanche Deserticola

Udseendefarven på Cistanche deserticola før og efter hver termisk behandling blev målt ved hjælp af et kolorimeter (SMY2000SF, Shengming Yang Co., Beijing, Kina), og sortheden blev karakteriseret ved en L ∗ værdi.

Prøveforberedelse og ekstraktion

Metabolitekstraktionen blev udført i overensstemmelse med metoden rapporteret tidligere af Chen et al. (21) med nogle mindre ændringer. Kort fortalt blev de tørrede prøver knust ved hjælp af en blandemølle (MM 400, Retsch Company, Haan, Tyskland) med en zirconia-perle i 2 minutter ved 60 Hz. Derefter blev 50 mg pulver (sigtet gennem en 65 mesh sigte) af hver prøve nøjagtigt vejet, overført til et Eppendorf-rør og ekstraheret med 1 ml methanol/vand-blanding (v:v=3:1). Efter 30 s vortex blev blandingen homogeniseret to gange ved 35 Hz i 4 minutter, sonikeret i 15 minutter i et isvandbad og derefter rystet natten over ved 4◦C. Efter centrifugering ved 12,000 rpm i 15 minutter ved 4◦C, blev supernatanten opsamlet og filtreret gennem en 0,22-µm membran, hvorefter den opnåede ekstrakt blev overført til 2 ml hætteglas og opbevaret ved -80◦C indtil UHPLC-MS/MS-analysen.

Metabolitteranalyse ved UHPLC-MS UHPLC-betingelser

UHPLC-separationen blev udført under anvendelse af et EXIONLC-system (Sciex Technologies, Framingham, MA, USA). De analytiske betingelser var som følger: kolonne: Waters ACQUITY UHPLC HSS T3 C18 (1,8 µm, 2,1 x 100 mm); opløsningsmiddelsystem: mobil fase A (0,1 procent myresyre i vand) og mobil fase B (indeholdende acetonitril). Gradientprogrammet: 98 procent A/2 procent B ved 0 minutter, 50 procent A/50 procent B ved 10 minutter, 5 procent A/95 procent B ved 11 minutter, 98 procent A/2 procent B ved 13,1 minutter og 98 procent A/2 procent B ved 15 min. Strømningshastighed: 0,40 ml/min; kolonnetemperatur: 40◦C; injektionsvolumen: 2 µl; automatisk indsprøjtningstemperatur: 4◦C.

ESI-QTRAP-MS/MS-betingelser

Et tredobbelt quadrupol (QQQ)-lineært ionfælde-massespektrometer (QTRAP, API 6500 QTRAP UHPLC-MS/MS) plus QQQ-spektrometer udstyret med en ESI turbo-ion-spray-grænseflade (Sciex Technologies, Framingham, MA, USA) blev anvendt til MS analyse. De analytiske betingelser var som følger: ionsprayspænding: plus 5.500 V (positiv iontilstand)/−4.500 V (negativ iontilstand), gardingas: 35 psi, kildetemperatur: 400◦C, ionkildegas 1: 60 psi, ionkildegas 2: 60 psi, declusteringspotentiale: ±100 V. QQQ-scanninger blev opnået som multiple reaktionsmonitorerings- (MRM) eksperimenter med kollisionsgas (nitrogen) sat til 5 psi.

Kvalitativ og kvantitativ analyse af metabolitter

Kvalitative og kvantitative analyser af metabolitter blev udført i henhold til metoderne af Liu et al. (18). Primære og sekundære massespektrometridata blev kvalitativt analyseret baseret på den selvbyggede humane metabolomdatabase (MWDB) (Metware Biotechnology Co., Ltd. Wuhan, Kina) og den offentlige database. I mellemtiden, for at sikre nøjagtigheden af ​​den kvalitative analyse af nogle stoffer, blev interferenser fra gentagne signaler af Na plus, NH plus 4, K plus og ioner og gentagne signaler fra fragmentioner afledt af andre relativt store molekyler og isotopsignaler fjernet under identifikation. Metabolitstrukturanalyse blev udført vedrørende de offentlige databaser (Mass Bank, KNApSAcK, HMDB, MoTo DB og METLIN).

Metabolitkvantificering blev udført under anvendelse af QQQ-massespektrometriens MRM-tilstand. I MRM-tilstanden blev forgængerionerne (moderioner) af målstofferne og udelukkede ioner svarende til andre stoffer med forskellig molekylvægt screenet først ved hjælp af quadrupolstangen for indledningsvis at eliminere interferens. Precursorionerne bryder derefter gennem kollisionskammeret for at danne mange fragmentjern efter ionisering, som blev filtreret af QQQ for at vælge enkeltfragmentioner med de ønskede egenskaber, mens interferens fra ikke-målioner elimineres. Endelig, efter at have opnået metabolitmassespektrometridata for forskellige prøver, blev massespektrumtoppene for alle stoffer integreret, og massespektretoppene for den samme metabolit i forskellige prøver blev integreret og korrigeret ved hjælp af Multi Quant version 3.0 .2 (ABSCIEX, Concord, Ontario, Canada). Det tilsvarende relative metabolitindhold blev repræsenteret som kromatografiske toparealintegraler.

Databehandling og analyse

De metaboliske data blev behandlet ved hjælp af ortogonal partiel mindste kvadraters-diskriminerende analyse (OPLS-DA) og hierarkisk klyngeanalyse (HCA). OPLS-DA blev brugt til at skelne mellem hver gruppe; den er mere følsom end andre statistiske metoder over for variabler med lave korrelationer (17). OPLS-DA modellerne blev valideret gennem en permutationsanalyse (200 gange). Modellen blev betragtet som stabil, når modelparametrene (R2 og Q2) begge var tæt på 1.

De variable vigtighedsprojektion (VIP) værdier af metabolitter blev beregnet. Enhver metabolit med VIP-værdier større end 1.0 og p-værdier mindre end 0.05 blev udvalgt som biomarkører for hver parret sammenligning mellem forskellige termiske behandlingsstadier af Cistanche deserticola. Screeningen af ​​forskellige metabolitter blev visualiseret i form af et vulkanplot. Metabolitakkumulering blandt forskellige prøver blev analyseret ved at bruge R-pakken (www.rproject.org/). Venn-diagrammet blev bygget i henhold til programmets webbaserede smartdiagram R (https://cloud.smartdraw.com/). Kommercielle databaser, såsom Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) (https: //www.kegg.jp/kegg/), Pub Chem (https://pubchem.ncbi.nlm. nih.gov/), Small Molecule Pathway Database (SMPDB) (https://smpdb.ca/) og HMDB (https://hmdb.ca/) blev brugt til berigelsesanalyse af differentielle metabolitter og til at finde metaboliske veje.

RESULTATER OG DISKUSSION Udseende Farveændringer af Cistanche Deserticola under termisk behandling

Forskellen i udseendesfarve på Cistanche deserticola mellem de friske, dampede og tørrede prøver er repræsentativt vist i figur 1. Fra friske til tørrede prøver, i løbet af forarbejdningsstadiet, ændrede udseendets farve af prøverne fra gul-brun til mørk sort , og mørket i farven blev mere og mere tydeligt (den tilsvarende L ∗ værdi blev reduceret fra 50,26 til 24,90). Udseendeændringerne af Cistanche deserticola opstod hovedsageligt i dampningsprocessen. Maillard-reaktionen, hvor sukkerarter reagerer med aminosyrer under termiske betingelser (22), ville være meget ansvarlig for det mørkefarvede udseende af forarbejdede jordstængler af Cistanche deserticola. Tidligere forskningsundersøgelser har vist, at prækursorer blev omdannet til farvestoffer og dannede stoffer med mørk farve i Maillard-reaktionen (23). Lignende fund blev også observeret i tidligere undersøgelser for dampning af Polygonum multiflorum (24) og rhizomer af Polygonatum cystoma (25). Mørket af de dampede prøver blev yderligere uddybet efter tørring. Dette fænomen skyldtes sandsynligvis forekomsten af ​​et fald i pigmentkoncentrationen under tørringsprocessen.

Oversigt over metabolitterne i rå og termisk behandlede Cistanche Deserticola prøver

Det totale ion-kromatogram (TIC) af kvalitetskontrolprøven (QC) (en blanding af alle de undersøgte prøver) og et multipeak-detektionsplot af kemikalier i MRM-tilstanden for den samme prøve er illustreret i supplerende figur 1. Forskellige farvede toppe repræsenteret forskellige komponenter i prøven. Som vist i figur 2 blev en samlet mængde på 776 metabolitter identificeret i den aktuelle undersøgelse (Supplerende tabel 1) i de friske Cistanche deserticola-prøver, som blev opdelt i 15 klasser, inklusive 40 aminosyrer og derivater, 33 phenylpropanoider, 23 flavonoider, 68 flavoner, 67 terpener, 67 phenoler, 87 alkaloider, 13 kulhydrater, 28 nukleotider og derivater, 5 alkoholer og polyoler, 3 purinnukleosider, 15

carboxylsyrer og derivater, 14 organiske syrer og derivater, 12 phytohormoner og 28 andre kemikalier. Blandt dem var den største gruppe aminosyrer og derivater, hvis relative indhold udgjorde 30,26 procent af den samlede metabolitsammensætning. Derudover blev 10 slags phenylethanoidglycosider, såsom echinacoside og verbascoside, påvist og klassificeret i phenylpropanoider-gruppen.

Akkumuleringsmønsteret af metabolitter blandt forskellige behandlingsgrupper blev analyseret af HCA. Som vist i figur 3 blev 107 identificerede metabolitter af Cistanche deserticola samlet i varmekort baseret på euklidisk afstandsregning. Metabolitter identificeret ved forskellige termiske behandlingsstadier blev samlet i tre klynger i henhold til dendrogrammet. Den lysere farve angiver det højere indhold af en bestemt metabolit i den respektive prøve. Varmekortet over HCA viste større forskelle i mængden mellem de friske og dampede prøver end dem mellem dampede og tørrede prøver, hvilket indikerer, at metabolitter i Cistanche deserticola kan have forskellige transformationer under dampnings- og tørringsstadiet, og typerne og mængderne af metabolitter involveret i dampningsprocessen er flere end dem i tørreprocessen.

Differentiel metabolitanalyse af Cistanche Deserticola ved forskellige termiske behandlingsstadier

For en bedre forståelse af virkningen af ​​hver behandling på metabolitterne af Cistanche deserticolas er OPLS-DA scatter-scorerne for parvise sammenligningsgrupper vist i figur 4A, hvilket viser, at de friske, dampede og tørrede efter dampning af Cistanche deserticolas var signifikant forskellige. Desuden indikerede R2Y og Q2 (som vist i Supplerende Figur 2) med høje testværdier, at denne model var yderst pålidelig uden overfitting.

For at screene ekspressionsniveauet af metabolitter mellem de friske, dampede og tørrede efter dampning af Cistanche deserticola blev analysen af ​​vulkanplottet yderligere anvendt blandt alle 776 metabolitter identificeret i henhold til fold-ændringen, kombineret med VIP-værdier for at screene de differentielt udtrykte metabolitter. Signifikante differentielle metabolitter blev udvalgt i henhold til kriteriet om, at en fold ændrer score på større end eller lig med 2 eller mindre end eller lig med 0.5 med en VIP større end eller lig med 1. Screeningsresultaterne er illustreret i Figur 4B. På det vulkanske kort repræsenterer hvert punkt en metabolit, og farven på de spredte prikker repræsenterer det endelige screeningsresultat. Rød repræsenterer metabolitter, der er signifikant opregulerede (UR), grøn repræsenterer signifikant nedregulerede (DR), og grå repræsenterer dem, der er uvæsentligt forskellige. Som vist i figur 4B, 47 metabolitter i den friske vs. dampede gruppe (17 UR og 30 DR), 30 metabolitter i den dampede vs. tørrede gruppe (22 UR og 8 DR) og 65 metabolitter i den friske vs. tørrede gruppe (29 UR og 36 DR) blev udvalgt til at være signifikant differentielle. Antallet af signifikant forskellige metabolitter i den friske vs. dampede gruppe var højere end dem i den dampede vs. tørrede gruppe, hvilket indikerer, at indflydelsen på metabolitter i dampningsprocessen er højere end i tørringsprocessen.

De differentielle metabolitter produceret under den termiske behandling af Cistanche deserticola blev yderligere klassificeret og sammenlignet. Disse differentielt udtrykte metabolitter blev klassificeret i 21 klasser, hovedsageligt aminosyrer og deres derivater, flavonoider og deres derivater, phenylpropanoider, alkaloider, terpener, phenoler og nukleotid og deres derivater (tabel 1). I gruppen frisk vs. dampet kan det konstateres, at flavonoider (såsom isoquercitrin, troxerutin, cyanidin og fisetin), phenylpropanoider (såsom chlorogensyre og 3-(3,4-dihydroxy{ {5}}methoxy)-2-propensyre) og nukleotid og deres derivater (uracil og betaNicotinamid mononukleotid) var signifikant DR, mens aminosyrer og deres derivater (såsom N6-Acetyl-L-lysin , 1- Methy-L-histidin og L-Phenylalanin) var signifikant UR.

I den dampede vs. tørrede gruppe var ekspressionstendenserne for disse typer differentielle metabolitter imidlertid det modsatte. Nogle aminosyrer og deres derivater (såsom N, N-Dimethylglycin), nukleotid og deres derivater (såsom 2'-Deoxyuridin; Deoxyuridin) var signifikant DR, mens de fleste af phenolerne (såsom methylgallat og 4'-Prenyloxyresveratrol), flavonoider (såsom isoquercitrin og cyanidin), phenylpropanoider (verbascoside) og terpener (såsom terpinolen og furanon) var signifikant UR. Disse resultater viste, at den kemiske sammensætning af Cistanche deserticola har undergået omdannelse under termisk behandling, hvilket hovedsageligt afspejles i omdannelsen af ​​flavonoider, phenylpropanoider og aminosyrer, og omdannelsesmekanismen af ​​disse komponenter er forskellig i forskellige forarbejdningsstadier.

Brugen af ​​en høj temperatur under dampnings- og tørringsprocesserne viste sig tidligere at fremme hydrolyse, redox, isomerisering, substitution og andre termofysiske og kemiske reaktioner af metabolitter (26). I denne undersøgelse blev det fundet, at metabolitterne, såsom flavonoider og phenylpropanoider, var signifikant akkumuleret i den dampede Cistanche deserticola sammenlignet med deres tilsvarende friske, hvilket indikerer, at nogle vigtige fysiologiske og metaboliske aktiviteter, der fører til syntesen af ​​flavonoider og phenylpropanoider, kan være aktiveres under høj temperatur og fugtighed. Dette resultat kan også understøttes af rapporten fra Peng et al. (10), som fandt, at indholdet af PhG'er (tilhørende phenylpropanoider) steg efter dampning. Akkumuleringen af ​​disse komponenter i den tørrede prøve efter dampning viste imidlertid et signifikant fald, hvilket kan tilskrives den termiske nedbrydning af disse varmefølsomme komponenter under den langsigtede tørringsproces. Tidligere undersøgelser har vist, at flavonoidglycosider kan nedbrydes til sukkerlegemer og flavonoidaglyconer under termiske forhold, og flavonoidtab under tørreprocessen blev syntetisk påvirket af temperatur og tørretid (26, 27). Opreguleringen af ​​aminosyrer og deres derivater (N6-Acetyl-L-lysin, 1-Methy-L-histidin og phenylalanin) tilskrives den højtemperaturfremmende proteinnedbrydning under dampbehandling. Derudover blev det også observeret, at nogle andre aminosyrer og deres derivater af N, N-dimethylglycin, L-Kynurenin, glycin, serin og threonin var DR. Faldet i indholdet af disse aminosyrer kan være forbundet med en termisk induceret Maillard-reaktion, hvor reducerende sukkerarter reagerer med aminosyrer for at generere 5-HMF, hvilket bidrager til produktionen af ​​et sort udseende i Cistanche deserticola (22) .

Resultaterne af sektionsudseende farveændringer af cistanche deserticola under termisk behandling bekræftede yderligere denne hypotese. Derfor var sværtningen af ​​Cistanche deserticola under dampning sandsynligvis relateret til metabolismen af ​​aminosyrer. Venn-diagram blev brugt til at differentiere de almindelige og eksklusive metabolitter af Cistanche deserticola under forskellige termiske behandlingsstadier. Som vist i figur 4C eksisterer både fælles og unikke metabolitter mellem de forskellige sammenligningsgrupper. Enogtyve almindelige metabolitter blev observeret mellem den friske og den dampede gruppe, mens kun 5 og 1 0 metabolitter blev fundet fælles mellem den friske og den tørrede gruppe, henholdsvis den dampede og den tørrede gruppe. Således blev i alt 23 og 17 eksklusive metabolitter (p < 0,05) observeret i Cistanche deserticola under det termiske behandlingsstadium med henholdsvis dampning og tørring. Dette resultat bekræftede yderligere, at dampning var særligt kritisk for omdannelsen af ​​metabolitter under behandling af Cistanche deserticola.

Berigelsesanalyse og KEGG Pathway Impact Analysis af differentielle metabolitter

De differentielle metabolitter (p < 0.05) i friske og behandlede prøver blev kortlagt til KEGG, HMDB og PubChem online databaser, som indeholder viden om molekylær interaktion, reaktion og relationsnetværk og berigelsesresultaterne og detaljerede metaboliske veje er vist i supplerende tabel 2 og figur 5. Som vist i figur 5a1 og a2 afslørede pathway-påvirkning berigelsen af ​​phenylpropanoid biosyntese, flavonoid biosyntese, alanin metabolisme, riboflavin metabolisme, taurin og hypotaurin metabolisme og nicotinamide metabolisme og nicotinamide. metabolisme under dampning af Cistanche deserticola. Hvorimod, under tørringsprocessen efter dampning, indeholdt de metaboliske veje for de differentielle metabolitter hovedsageligt glycin-, serin- og threoninmetabolisme, thiaminmetabolisme, pyrimidinmetabolisme og umættede fedtsyrebiosyntese.

Desuden overlappede nogle metaboliske veje mellem disse to parvise sammenligninger, såsom nikotinat- og nikotinamidmetabolisme, phenylpropanoidbiosyntese og flavonoidbiosyntese, men deres berigelsesniveauer var meget forskellige i de to parvise sammenligninger. Disse resultater antydede, at metabolitternes omdannelsesveje mellem dampnings- og tørringsprocesserne af Cistanche deserticola var forskellige, og forskellene i metaboliske veje kunne forklare forskellene i tilstedeværelsen af ​​differentielt eksklusive metabolitter under termisk behandling. Disse biokemiske ændringer kan bruges til at forstå virkningen af ​​termiske behandlingstrin på Cistanche deserticola-sammensætningen.

fire metaboliske veje (phenylpropanoidbiosyntese, flavonoidbiosyntese, alaninmetabolisme og glycin-, serin- og threoninmetabolisme) blev valgt som nøglemetabolitter for at karakterisere omdannelsen af ​​de vigtigste aktive komponenter i Cistanche deserticola under termisk behandling (figur 5b1,b2). Den nuværende undersøgelse viste, at phenylpropanoider og flavonoider blev akkumuleret, men aminosyrer blev nedbrudt i dampede Cistanche deserticola sammenlignet med friske og tørrede prøver. Phenylpropanoid-biosyntesevejen er opstrøms for flavonoiders biosyntesevej. Lignende konklusioner blev offentliggjort af Liu et al. (18), der rapporterede, at akkumuleringsniveauet af phenylpropanoider i processen med at gulne ris er steget betydeligt sammenlignet med normal ris. Phenylpropanoider er afledt af kanelsyre, og deres forløber er phenylalanin, som kan syntetiseres ved at aktivere aktiviteten af ​​phenylalanin ammoniak-lyase (PAL) ved opvarmning (28).

Tidligere undersøgelser rapporterede, at phenylpropanoid-vejen fører til biosyntesen af ​​coumariner, flavoner, isoflavoner og flavonoler, som er vigtige våben til planteforsvar (29), og for at forhindre celledød forårsaget af den stærke varmestress i dampningsprocessen, phenylpropanoiden vej kan blive forbedret på grund af den biologiske stress forårsaget af høj temperatur (30, 31). Flavonoider er de vigtigste sekundære metabolitter afledt af phenylpropanoider (32), og deres akkumulering kunne beskytte planter mod oxidativ skade ved opfangning af frie radikaler (33). Sammenlignet med den friske og tørrede Cistanche deserticola kan den højere biosyntese af flavonoider i den dampede Cistanche deserticola være forbundet med øget varmestress under dampningsprocessen, der beskytter reaktive oxygenarter (ROS) (34, 35). Som vist i figur 5b3 og b4 spillede aminosyremetabolisme en vigtig rolle i den termiske behandling af Cistanche deserticola. Indholdsændringer af alanin, glycin, serin og threonin efter dampning fundet i medicinske urter er blevet brugt til at indikere forekomsten af ​​Maillard-reaktionen (36).

Ikke desto mindre, på grund af den komplicerede proces med Cistanche deserticola-dampning, bør en omfattende evaluering af Cistanche deserticola-dampningen, såsom sortfarvning i udseende, aktive forbindelser og metaboliske biomarkører, undersøges yderligere.

KONKLUSIONER

I denne undersøgelse blev UHPLC-MS/MS-baseret bredt målrettet metabolomisk tilgang anvendt til at studere dannelsesmekanismen af ​​aktive forbindelser ved forskellige termiske behandlingsstadier af Cistanche deserticola. De nuværende resultater afslørede, at biosyntesen af ​​nogle nøglemetabolitter, såsom phenylpropanoider og flavonoider, blev signifikant forbedret under dampningsprocessen. Ekspressionsniveauet af aminosyrer i dampet Cistanche deserticola blev øget, hvilket indikerer transformationen mellem primære og sekundære metabolitter. Derudover forekom sortfarvningen af ​​udseendet af Cistanche deserticola hovedsageligt i dampningsstadiet snarere end i tørringsfasen, denne egenskab er forbundet med aminosyremetabolismens vej. Niveauerne af ovennævnte metabolitter faldt imidlertid betydeligt under tørreprocessen, hvilket tyder på, at dannelsen af ​​aktive forbindelser hovedsageligt forekom i dampningsstadiet under den termiske behandling af Cistanche deserticola. Så vidt vi ved, er dette første gang, at den bredt målrettede metabolomiske metode blev brugt til at afsløre mekanismen for ændringer i aktive forbindelser under termisk behandling og deres afgørende bidrag til Cistanche deserticola-sværtning. Yderligere undersøgelse er imidlertid nødvendig for en bedre forståelse af forholdet mellem biosyntesen af ​​aktive forbindelser og mørkningen af ​​udseendet under termisk behandling.

Berigelsesanalyse og KEGG Pathway Impact Analysis af differentielle metabolitter

De differentielle metabolitter (p < 0.05) i friske og behandlede prøver blev kortlagt til KEGG, HMDB og PubChem online databaser, som indeholder viden om molekylær interaktion, reaktion og relationsnetværk og berigelsesresultaterne og detaljerede metaboliske veje er vist i supplerende tabel 2 og figur 5. Som vist i figur 5a1 og a2 afslørede pathway-påvirkning berigelsen af ​​phenylpropanoid biosyntese, flavonoid biosyntese, alanin metabolisme, riboflavin metabolisme, taurin og hypotaurin metabolisme og nicotinamide metabolisme og nicotinamide. metabolisme under dampning af Cistanche deserticola. Hvorimod, under tørringsprocessen efter dampning, indeholdt de metaboliske veje for de differentielle metabolitter hovedsageligt glycin-, serin- og threoninmetabolisme, thiaminmetabolisme, pyrimidinmetabolisme og umættede fedtsyrebiosyntese. Desuden overlappede nogle metaboliske veje mellem disse to parvise sammenligninger, såsom nikotinat- og nikotinamidmetabolisme, phenylpropanoidbiosyntese og flavonoidbiosyntese, men deres berigelsesniveauer var meget forskellige i de to parvise sammenligninger. Disse resultater antydede, at metabolitternes omdannelsesveje mellem dampnings- og tørringsprocesserne af Cistanche deserticola var forskellige, og forskellene i metaboliske veje kunne forklare forskellene i tilstedeværelsen af ​​differentielt eksklusive metabolitter under termisk behandling. Disse biokemiske ændringer kan bruges til at forstå virkningen af ​​termiske behandlingstrin på Cistanche deserticola-sammensætningen.

Baseret på KEGG-annoteringen og berigelsesanalysen blev fire metaboliske veje (phenylpropanoidbiosyntese, flavonoidbiosyntese, alaninmetabolisme og glycin-, serin- og threoninmetabolisme) valgt som nøglemetabolitter for at karakterisere omdannelsen af ​​de vigtigste aktive komponenter i Cistanche deserticola under den termiske behandling (figur 5b1,b2). Den nuværende undersøgelse viste, at phenylpropanoider og flavonoider blev akkumuleret, men aminosyrer blev nedbrudt i dampede Cistanche deserticola sammenlignet med friske og tørrede prøver. Phenylpropanoid-biosyntesevejen er opstrøms for flavonoiders biosyntesevej. Lignende konklusioner blev offentliggjort af Liu et al. (18), der rapporterede, at akkumuleringsniveauet af phenylpropanoider i processen med at gulne ris er steget betydeligt sammenlignet med normal ris. Phenylpropanoider er afledt af kanelsyre, og deres forløber er phenylalanin, som kan syntetiseres ved at aktivere aktiviteten af ​​phenylalanin ammoniak-lyase (PAL) ved opvarmning (28).

Tidligere undersøgelser rapporterede, at phenylpropanoid-vejen fører til biosyntesen af ​​coumariner, flavoner, isoflavoner og flavonoler, som er vigtige våben til planteforsvar (29), og for at forhindre celledød forårsaget af den stærke varmestress i dampningsprocessen, phenylpropanoiden vej kan blive forbedret på grund af den biologiske stress forårsaget af høj temperatur (30, 31). Flavonoider er de vigtigste sekundære metabolitter afledt af phenylpropanoider (32), og deres akkumulering kunne beskytte planter mod oxidativ skade ved opfangning af frie radikaler (33).

Sammenlignet med den friske og tørrede Cistanche deserticola kan den højere biosyntese af flavonoider i den dampede Cistanche deserticola være forbundet med øget varmestress under dampningsprocessen, der beskytter reaktive oxygenarter (ROS) (34, 35). Som vist i figur 5b3 og b4 spillede aminosyremetabolisme en vigtig rolle i den termiske behandling af Cistanche deserticola. Indholdsændringer af alanin, glycin, serin og threonin efter dampning fundet i medicinske urter er blevet brugt til at indikere forekomsten af ​​Maillard-reaktionen (36). Ikke desto mindre, på grund af den komplicerede proces med Cistanche deserticola-dampning, bør en omfattende evaluering af Cistanche deserticola-dampningen, såsom sortfarvning i udseende, aktive forbindelser og metaboliske biomarkører, undersøges yderligere.

KONKLUSIONER

I denne undersøgelse blev UHPLC-MS/MS-baseret bredt målrettet metabolomisk tilgang anvendt til at studere dannelsesmekanismen af ​​aktive forbindelser ved forskellige termiske behandlingsstadier af Cistanche deserticola. De nuværende resultater afslørede, at biosyntesen af ​​nogle nøglemetabolitter, såsom phenylpropanoider og flavonoider, blev signifikant forbedret under dampningsprocessen. Ekspressionsniveauet af aminosyrer i dampet Cistanche deserticola blev øget, hvilket indikerer transformationen mellem primære og sekundære metabolitter. Derudover forekom sortfarvningen af ​​udseendet af Cistanche deserticola hovedsageligt i dampningsstadiet snarere end i tørringsfasen, denne egenskab er forbundet med aminosyremetabolismens vej. Niveauerne af ovennævnte metabolitter faldt imidlertid betydeligt under tørreprocessen, hvilket tyder på, at dannelsen af ​​aktive forbindelser hovedsageligt forekom i dampningsstadiet under den termiske behandling af Cistanche deserticola. Så vidt vi ved, er dette første gang, at den bredt målrettede metabolomiske metode blev brugt til at afsløre mekanismen for ændringer i aktive forbindelser under termisk behandling og deres afgørende bidrag til Cistanche deserticola-sværtning. Yderligere undersøgelse er imidlertid nødvendig for en bedre forståelse af forholdet mellem biosyntesen af ​​aktive forbindelser og mørkningen af ​​udseendet under termisk behandling.

ERKLÆRING AF DATA TILGÆNGELIGHED

De originale bidrag præsenteret i undersøgelsen er inkluderet i artiklen/Supplerende materiale, yderligere henvendelser kan rettes til den/de tilsvarende forfatter/e.

FORFATTERS BIDRAG

ZA udførte eksperimentelt design, udførte eksperimenterne, genererede dataene og skrev dette manuskript. YZ udførte metabolomics-analysen. XL leverede den statistiske analyse. WS foretog databehandling og undersøgelse. Finansieringsanskaffelse, overordnede rammer og skrive-anmeldelse blev afsluttet af YL. Alle forfattere bidrog til artiklen og godkendte den indsendte version.

FINANSIERING

Dette arbejde blev økonomisk støttet af Institut for Videnskab og Teknologi i Guangdong-provinsen (nr. 2018B020241003).

SUPPLERENDE MATERIALE

Det supplerende materiale til denne artikel kan findes online på: https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fnut.2021. 742511/fuld#tillægsmateriale

REFERENCER

1. Wang X, Wang J, Guan H, Xu R, Luo X, Su M, et al. Sammenligning af de kemiske profiler og antioxidantaktiviteter af forskellige dele af dyrket Cistanche deserticola ved hjælp af ultra-performance væskekromatografi-quadrupol time-of-flight massespektrometri og 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl-baseret assay. Molekyler. (2017) 22:2011. doi: 10.3390/molekyler22112011

2. Fu Z, Fan X, Wang X, Gao X. Cistanches Herba: en oversigt over dens kemi, farmakologi og farmakokinetiske egenskaber. J Ethnopharmacol. (2018) 219:233–47. doi: 10.1016/j.jep.2017.10.015

3. Piwowarczyk R, Carlón L, Kasinska J, Tofil S, Furma ´nczyk P. ´ Mikromorfologisk intraspecifik differentiering af nektarguider og landingsplatform for bestøvere i den iberiske parasitplante Cistanche phelypæa (Orobanchaceae). Bot Lett. (2016) 163:47-55. doi: 10.1080/12538078.2015.1124287

4. Jiang Y, Tu P. Analyse af kemiske bestanddele i Cistanche-arter. J Chromatogr a. (2009) 1216:1970-9. doi: 10.1016/j.chroma.2008. 07.031

5. Li Z, Lin H, Gu L, Gao J, Tzeng C. Herba Cistanche (Rou Cong-Rong): En af de bedste farmaceutiske gaver inden for traditionel kinesisk medicin. Front Pharmacol. (2016) 7:41. doi: 10.3389/fphar.2016.00041

6. Song Y, Zeng K, Jiang Y, Tu P. Cistanches Herba, fra en truet art til et stort mærke af kinesisk medicin. Med Res Rev. (2021) 5:1–39. doi: 10.1002/med.21768

7. Xiong Q, Kadota S, Tani T, Namba T. Antioxidative virkninger af phenylethanoider fra Cistanche deserticola. Biol Pharmac Bull. (1996) 19:1580-5. doi: 10.1248/bob.19.1580

8. Wang L, Ding H, Yu H, Han L, Lai Q, Zhang L, et al. Cistanches herba: kemiske bestanddele og farmakologiske virkninger. Chin Herbal Med. (2015) 7:135–42. doi: 10.1016/S1674-6384(15)60017-X

9. Peng F, Xu R, Wang X, Xu C, Liu T, Chen J. Effekt af dampningsprocessen på kvaliteten af ​​postharvest Cistanche deserticola til medicinsk brug under soltørring. Biol Pharm Bull. (2016) 39:2066-70. doi: 10.1248/bob.b16- 00250

10. Peng F, Chen J, Wang X, Xu C, Liu T, Xu R. Ændringer i niveauer af phenylethanoidglycosider, antioxidantaktivitet og andre kvalitetstræk i Cistanche deserticola-skiver ved dampbehandling. Chem Pharm Bull. (2016) 64:1024–30. doi: 10.1248/CPB.c16-00033

11. Zou P, Song Y, Lei W, Li J, Tu P, Jiang Y. Anvendelse af 1H NMR-baseret metabolomik til diskrimination af forskellige dele og udvikling af en ny behandlingsarbejdsgang for Cistanche deserticola. Acta Pharm Sin B. (2017) 7:647–56. doi: 10.1016/j.apsb.2017.07.003

12. Zheng J, Wu Z, Yang N, Zhou K, Hu W, Ou S, et al. Bredt målrettet UHPLC-MS/MS metabolomisk analyse af den kemiske variation i blåbærfyldte kager under forarbejdning. Grænser i ernæring. (2020) 7:569172. doi: 10.3389/fnut.2020.569172

13. Liu W, Song Q, Cao Y, Xie N, Li Z, Jiang Y, et al. Fra 1H NMR-baseret ikke-målrettet til LC-MS-baseret målrettet metabolomics-strategi for dybdegående kamillesammenligninger mellem fire Cistanche-arter. J Pharmaceut Biomed. (2019) 162:16-27. doi: 10.1016/j.jpba.2018.09.013

14. Wang H, Hua J, Yu Q, Li J, Wang J, Deng Y, et al. Bredt målrettet metabolomisk analyse afslører dynamiske ændringer i ikke-flygtige og flygtige metabolitter under forarbejdning af grøn te. Food Chem. (2021) 363:130131. doi: 10.1016/j.foodchem.2021.130131

15. Koistinen VM, Da Silva AB, Abrankó L, Low D, Villalba RG, Barberán FT, et al. Interlaboratorisk dækningstest på bioaktive stoffer i planteføde og deres metabolitter ved massespektrometri-baseret umålrettet metabolomik. Metabolitter. (2018) 8:46. doi: 10.3390/metabo8030046

16. Santin M, Lucini L, Castagna A, Chiodelli G, Hauser M, Ranieri A. UV-B-stråling efter høst modulerer metabolitprofilen i ferskenfrugt. Postharvest Biol Tec. (2018) 139:127– 34. doi: 10.1016/j.postharvbio.2018.02.001

17. Nie H, Chen H, Li G, Su K, Song M, Duan Z, et al. Sammenligning af flavonoider og phenylpropanoidforbindelser i kinesisk vandkastanje behandlet med forskellige metoder. Food Chem. (2021) 335:127662. doi: 10.1016/j.foodchem.2020.127662

18. Liu Y, Liu J, Wang R, Sun H, Li M, Strappe P, et al. Analyse af sekundære metabolitter induceret af gulningsproces for at forstå risgulningsmekanismen. Food Chem. (2021) 342:128204. doi: 10.1016/j.foodchem.2020.128204

19. Wu L, Huang X, Liu S, Liu J, Guo Y, Sun Y, et al. Forståelse af dannelsesmekanismen for oolong te karakteristiske ikke-flygtige kemikalier udgør under fremstillingsprocesser ved at bruge integreret bredt målrettet metabolom og DIA proteom analyse. Food Chem. (2020) 310:125941. doi: 10.1016/j.foodchem.2019.125941

20. Xie Y, Li X, Zhang Y, Zheng Z, Huang L, Liu D, et al. Effekter af dampning med høj luftfugtighed på Gastrodia elata: dampningsgrad, vægttab, tekstur, tørrekinetik, mikrostruktur og aktive komponenter. Food Bioprod Process. (2021) 127:255-65. doi: 10.1016/j.fbp.2021.03.005

21. Chen W, Gong L, Guo Z, Wang W, Zhang H, Liu X, et al. En ny integreret metode til storstilet påvisning, identifikation og kvantificering af bredt målrettede metabolitter: anvendelse i studiet af rismetabolomik. Mol Plant. (2013) 6:1769-80. doi: 10.1093/mp/sst080

22. Arena S, Renzone GD, Ambrosio C, Salzano AM, Scaloni A. Mejeriprodukter og Maillard-reaktionen: en lovende fremtid for omfattende fødevarekarakterisering ved integrerede proteomiske undersøgelser. Food Chem. (2017) 219:477–89. doi: 10.1016/j.foodchem.2016.09.165

23. Rizzi G P. Kemisk struktur af farvede Maillard-reaktionsprodukter. Food Rev Int. (1997) 13:1-28. doi: 10.1080/87559129709541096

24. Liu Z, Chao Z, Liu Y, Song Z, Lu A. Maillard reaktion involveret i dampningsprocessen af ​​roden af ​​Polygonum multiflorum. Planta Med. (2009) 75:84–8. doi: 10.1055/s-0028-1088349

25. Jin J, Lao J, Zhou R, He W, Qin Y, Zhong C, et al. Samtidig identifikation og dynamisk analyse af saccharider under dampbehandling af rhizomer af Polygonatum cystoma ved HPLC-QTOF-MS/MS. Molekyler. (2018) 23:2855. doi: 10.3390/molekyler23112855

26. Wan XC. Biokemi af te (tredje udgave). Beijing: China Agricultural Publishing House (2003). s. 41-5.

27. Xu Y, Xiao Y, Lagnika C, Li D, Liu C, Jiang N, et al. En sammenlignende evaluering af ernæringsmæssige egenskaber, antioxidantkapacitet og fysiske egenskaber af kål (Brassica oleracea var. Capitate var L), udsat for forskellige tørremetoder. Food Chem. (2020) 309:124935. doi: 10.1016/j.foodchem.2019.06.002

28. Dixon RA, Paiva N L. Stress-induceret phenylpropanoid metabolisme. Plantecelle. (1995) 7:1085-97. doi: 10.1105/tpc.7.7.1085

29. Gupta R, Min CW, Kim SW, Wang Y, Agrawal GK, Rakwal R, et al. Sammenlignende undersøgelse af frøskaller af brun- vs. gulfarvede sojabønnefrø ved hjælp af en integreret proteomik og metabolomik tilgang. Proteomics. (2015) 15:1706–16. doi: 10.1002/pmic.201400453

30. Commisso M, Toffali K, Strasser P, Stocchero M, Ceoldo S, Baldan B, et al. Indvirkning af phenylpropanoidforbindelser på varmestresstolerance i gulerodscellekulturer. Front Plant Sci. (2016) 7:1439. doi: 10.3389/fpls.2016.01439

31. Wahid A, Gelani S, Ashraf M, Foolad M. Varmetolerance i planter: en oversigt. Environ Exp Bot. (2007) 61:199-223. doi: 10.1016/j.envexpbot.2007.05.011

32. Wu X, Yuan J, Luo A, Chen Y, Fan Y. Tørkestress og genvanding øger sekundære metabolitter og enzymaktivitet i dendrobium moniliform. Ind afgrødeprod. (2016) 94:385–93. doi: 10.1016/j.indcrop.2016.08.041

33. Wang Y, Ren W, Li Y, Xu Y, Teng Y, Christie P, et al. Ikke-målrettet metabolomisk analyse for at afdække virkningen af ​​di(2-ethylhexyl)phthalat-stress på rodeksudater af lucerne (Medicago sativa). Sci Total Environ. (2019) 646:212– 9. doi: 10.1016/j.scitotenv.2018.07.247

34. Jia X, Sun C, Li G, Li G, Chen G. Effekter af progressiv tørkestress på fysiologien, antioxidative enzymer og sekundære metabolitter af Radix Astragali. Acta Physiol Plant. (2015), 37:262. doi: 10.1007/s11738-015- 2015-4

35. Paupière MJ, Müller F, Li H, Rieu I, Tikunov YM, Visser R GF, et al. Umålrettet metabolomisk analyse af tomatpollenudvikling og varmestressrespons. Plant Reprod. (2017) 30:81–94. doi: 10.1007/s00497-017-0301-6

36. Chen J, Ho C. Sammenligning af flygtig generation i serin/threonin/glutamin-ribose/glucose/fructose modelsystemer. J Agr Food Chem. (1999) 47:643-7. doi: 10.1021/jf980771a

Interessekonflikt:

Forfatterne erklærer, at undersøgelsen blev udført i fravær af nogen kommercielle eller finansielle relationer, der kunne opfattes som en potentiel interessekonflikt.

Udgiverens note:

Alle påstande udtrykt i denne artikel er udelukkende forfatternes og repræsenterer ikke nødvendigvis påstandene fra deres tilknyttede organisationer eller udgiverens, redaktørerne og anmelderne. Ethvert produkt, der kan evalueres i denne artikel, eller krav, der kan fremsættes af dets producent, er ikke garanteret eller godkendt af udgiveren.

Copyright © 2021 Ai, Zhang, Li, Sun og Liu. Dette er en artikel med åben adgang, der distribueres under vilkårene i Creative Commons Attribution License (CC BY). Brug, distribution eller reproduktion i andre fora er tilladt, forudsat at den eller de originale forfattere og copyright-indehaverne krediteres, og at den originale publikation i dette tidsskrift er citeret i henhold til accepteret akademisk praksis. Ingen brug, distribution eller reproduktion er tilladt, som ikke er i overensstemmelse med disse vilkår.

For more information:1950477648nn@gamil.com