Hvad kan Acteosid i Cistanche gøre med benign prostatahyperplasi?

Forskningen af ​​akteosid på virkningen hæmmede godartet prostatahyperplasi hos rotter

SØGEORD: Cistanche, akteosid, benign prostatahyperplasi, apoptose.

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

ABSTRAKT:

Beg nin prostatahyperplasi rottemodellen blev etableret, og tre dosisgrupper afakteosidblev administreret oralt i 4 uger for at undersøge effekten afakteosiddestilleret fraCistanchetubulosa påapoptoseog ultramikro struktur prostatakirtel hos rotter medbenign prostatahyperplasi. Den ultrastrukturelle ændring af prostatakirtlen blev observeret ved transmissionselektronmikroskopi. Det viste resultaterneApoptoseaf normal rotte prostata var ikke tydeligt, var der en lav

frekvens af prostataapoptosei modelgruppen, i højdosisakteosidfraCistanchetubulosabehandling, rotteprostataapoptosevar væsentligt højere end modellens.

I processen med godartet prostatahyperplasi, celleapoptoseer en af ​​de mekanismer, der i øjeblikket tiltrækker opmærksomhed. Genkodning bestemmer det og gør det muligt for celler at kontrollere programmeret celledød ved at reagere på specifikke signaler.

Efter at prostata udvikler sig til voksen størrelse, opretholdes proliferationshastigheden af ​​prostataceller på 1 procent til 2 procent gennem balancen af ​​den gennemsnitlige hastighed påapoptose. Når balancen er brudt, anses det for at være årsagen tilgodartet prostata hyperplasi. Under normale forhold er niveauerne af østrogen og androgen og normal cirkulation i prostata en slags selvbalancetilstand, der eksisterer i spredningsprocessen ogapoptose. Når balancen mellem spredning ogapoptoseer ude af balance, vil det føre til yderligere vækst og udvidelse af kirtlen, hvilket hovedsageligt forårsager udvidelsen af ​​epitelcellerummet [1].

I dette eksperiment etablerede vi en rotteprostatahyperplasimodel til at observere og analysere effekten afakteosid(koaktionslignende glycosid), en af ​​de kemiske komponenter iCistanchepå denapoptoseog ultrastrukturelle ændringer af rotteprostataceller, for at evaluere effekten afakteosidEffekten af ​​at hæmme prostatahyperplasi giver et videnskabeligt grundlag for udvikling og udnyttelse af nye anvendelser af kinesisk medicinCistanche.

Detakteosiddestilleret fraCistanchekan påvirkegodartetprostatahyperplasi.

Materialer og metoder

Forsøgsdyr

Halvtreds SD-hanrotter i alderen 6-7 uger, ren kvalitet, vejer 80-100 g, leveres af Center for Comparative Medicine ved Yangzhou University.

Reagenser og medicin

Testosteronpropionatinjektion er fra Shanghai General Pharmaceutical Co., Ltd., specifikationen er 25 mg·mL^-1, og batchnummeret er 060708. PI-farveopløsning er fra Yangzhou University Testing Center. Indholdet af Aktiside er 945 g·kg^-1, udarbejdet af Institut for kinesisk medicinanalyse, China Pharmaceutical University.

Eksperimentelt udstyr

Philips Tecnai 12 transmissionselektronmikroskop er fra Philips i Holland; FACSAria flowcytometer er fra BD i USA.

Grupperinger og modellering

Efter kastration i henhold til litteraturens metode [3] blev rotter injiceret med 5 mg·(kg·d)^-1testosteronpropionat på ryggen af ​​rotterne i 4 uger for at etablere en prostatahyperplasimodel. Modelrotterne blev tilfældigt opdelt i modelgrupper: model plusakteosidhøjdosisgruppe, model plusakteosidmedium-dosis gruppe, model plusakteosidlavdosisgruppe, ti rotter i hver gruppe; yderligere ti normale rotter var som kontrolgruppe.

Administrationsmetode

En uge efter modellering,akteosidhøj-, mellem- og lavdosisgrupper fik 60, 30, 15 mg·(kg·d)^-1ved gavage hhv. Modelgruppen og kontrolgruppen blev sat et lige stort volumen af ​​normalt saltvand en gang om dagen i fire uger, vejet en gang om ugen og justeret doseringen efter kropsvægten.

Prøveindsamling og behandling

• Materiale og prøveforberedelse: 24 timer efter sidste administration, vej de fastende rotter og afliv rotterne ved cervikal dislokation. Åbn straks den nederste del af maven, pil vævene omkring prostata af, frigør prostata, og tag en del af prostata til brug i et isbad. Vævshomogenisator homogeniseret, fremstillet prostata-enkeltcellesuspension og farvet med propidiumiodid en-trinsmetode [4]; en anden del af prostatavæv blev fikseret i 25 g·L^-1glutaraldehyd til fremstilling af ultratynde snit.

• Forbered en enkelt cellesuspension: Fjern rotteprostata helt under aseptiske forhold og flyt den over i en petriskål, vask blodet og blodpropperne på overfladen af ​​prostatavævet med PBS, og fjern det omgivende fedt, overskydende fibre og celle membraner. Fra den samme rotteprostata blev frisk prostatavæv med størrelsen omkring {{0}},5 cm3 taget og skåret i stykker for at fremstille en prostatacellesuspension [5]. Placer prostatavævsblokken i en petriskål, og tilsæt en lille mængde PBS; brug oftalmologisk saks til at skære vævet i et isbad, kværn homogenisatoren til en suspension, tilsæt 10 ml PBS, pipetter vævshomogenatet, og brug 0,074 mm porestørrelse nylonnet blev filtreret ind i reagensglasset, centrifugeret ved {{7} } r min^-1i 3 min, og bundfaldet blev vasket tre gange med PBS, hver gang ved 500 r. min.^-1kortvarig lavhastighedscentrifugering for at fjerne cellerester, til 0.037 mm porestørrelse nylonnetfilter for at fjerne celleklumper. Tæl cellerne og juster cellekoncentrationen til 2×109 celler·L^-1. Farv med 1 mL PI-farvningsopløsning, beskyt mod lys ved 4 grader i 10 min.

• Klargøring af ultratynde snit: For ultratynde vævssnitforberedelse, se litteratur [6].

• 
  

Resultater og analyse

Effekten afakteosidom apoptose af rotteprostata

Figur 1 viser toppen afapoptosepåvist ved flowcytometri, som viser detakteosidhar en pro-apoptotisk effekt. Den statistiske analyse af cellenapoptoseresultaterne viste, at rottecellenapoptoseraten var signifikant øget (24,7±1,85) procent og (16,1±1,04) procent efter behandling med høje, mellemstore og lave doser afakteosid. , (14,5±0,68) procent , og normalgruppen (1,1±0.{{10}}6) procent , modelgruppe (9,5±0,5) procent , positiv gruppe (9,83±0,76) Forskellen i procentsammenligning er signifikant (P<0.01), indicating="" that="" aktidine="" can="" induce="" cell="">apoptose, er effekten stærkere end virkningen af ​​det positive kontrollægemiddel Qianliekang (figur 2).

Effekten afakteosidpå ultrastrukturen af ​​prostatahyperplasiceller.

Elektronmikroskopi-observationer viser, at den normale rotteprostata har fuldstændige kerner, tydeligvis nukleoler og ensartet nuklear kromatinfordeling; det ru endoplasmatiske retikulum har samme størrelse, er pænt arrangeret og har ingen vakuolation. Der er ingen fingerlignende mikrovilli på overfladen af ​​epitelet, ingen hævelse af mitokondrier og få sekreter i hulrummet. Kernerne af prostataceller i modelgruppen blev deformeret og krympet, og cytoplasmaet var rigeligt. Det ru endoplasmatiske retikulum blev udvidet i en cystelignende form, og cysten blev fyldt med proteinpartikler med høj densitet. Mitokondrierne var let opsvulmede (der var også vakuoler), Der er sekret med middel tæthed i hulrummet, og der blev fundet tætte runde sekretgranulat i nogle celler. Hos rotter behandlet medakteosid, var kernen intakt sammenlignet med modelgruppen. Kernen blev koncentreret, kernedensiteten blev øget, heterochromatin akkumuleret, cytoplasmaet havde vakuoler, og de ru endoplasmatiske retikulumvakuoler blev reduceret. Den lave dosisakteosidgruppen havde let rynkede kerner Krympning, uregelmæssig, rigere cytoplasma og reduceret ru endoplasmatisk retikulum (figur 3).

Diskussion

Apoptoseer en proces med programmeret celledød i flercellede organismer, der regulerer udviklingen af ​​kroppen og opretholder stabiliteten i det indre miljø, og genetiske koder bestemmer det.

Apoptotiske celler har deres unikke morfologiske og biologiske egenskaber: nuklear kromatinsvind, DNA omfattende nedbrydning og fragmentering, fuldskala krympning af celler, krympning af cellemembraner og ydre fremspring, der dækker organeller (såsom mitokondrier og ribosomer), og kernedannelsen af ​​karakteristiske fragmenter Apoptotiske legemer, apoptotiske celler bevarer ikke kun en komplet cellemembranstruktur og funktion, men har også en komplet struktur af organeller, som er forskellig fra cellenekrose.

Cellens molekylære mekanismeapoptoseer indtil videre ikke fuldt belyst. Undersøgelser [7] har vist, at der er mange gener involveret i cellens genreguleringapoptose.

Apoptoseer processen medgodartetprostatahyperplasisom i øjeblikket tiltrækker sig mere opmærksomhed. Det bestemmes af genkodning og gør det muligt for celler at kontrollere celledød ved at reagere på specifikke signaler [1]. Efter at prostata udvikler sig til voksen størrelse, opretholdes proliferationshastigheden af ​​prostataceller på 1 procent til 2 procent gennem balancen mellemapoptosesats. Ødelæggelsen af ​​denne balance er altid blevet betragtet som årsagen tilgodartetprostatahyperplasi[8]. Under normale forhold er niveauet af østrogen og androgen og regelmæssig cirkulation i prostata en slags selvbalancetilstand, der eksisterer i spredningsprocessen ogapoptose. Når spredningen ogapoptoseer ude af balance, vil det få kirtlerne til at vokse og udvide sig yderligere, primært på grund af udvidelsen af ​​epitelcellerummet [9]. Afbrydelsen af ​​denne balance kan skyldes ændringer i androgenniveauer eller -funktioner; det kan også skyldes ethvert respons produceret af AR-stimulering af DHT eller ændringer i DHT-medierede vækstfaktorniveauer [2]. I denne undersøgelse påviste FCM celleapoptoseog fandt ud af, atapoptosefrekvens af prostataceller hos rotter, der får høje doser afakteosidsteg markant. Elektronmikroskopiresultater viste, at kernerne af prostataceller i modelgruppen var deformeret, det ru endoplasmatiske retikulum var stærkt udvidet i en cystelignende form, og cysten blev fyldt med proteinpartikler med høj densitet, og der blev fundet vakuolation. Mitokondrierne var let hævede, og relaterede undersøgelser[ 10-11 ] Rapporten er konsistent.

Efterakteosidintervention var graden af ​​prostatahyperplasi hos rotter lavere. Højdosisgruppen viste også tidlige tegn påapoptose: kernen af ​​prostataceller forblev intakt, og endoplasmatiske retikulumvakuoler var signifikant lavere. Kondensation af kerner, øget nuklear tæthed, akkumulering af heterochromatin, svarende til karakteriseringen af ​​prostatavævsceller hos rotter efter kastration [12-13]. Det viser detakteosidfracistanchekan inducere celleapoptosehos rotter med prostatahyperplasi, regulere og genoprette balancen i prostatacellenapoptoseog proliferation og spiller en rolle ved inhibering af prostatacelleproliferation. Resultaterne af denne undersøgelse og tidligere undersøgelser [14] indikerer, at den hæmmende effekt afakteosid, en kemisk bestanddel afCistanchetubulosa, på prostatahyperplasi kan være relateret til dets fremme af celleapoptose, reduktion af AR og TGF-UR1 overekspression. Den detaljerede virkningsmekanisme mangler stadig at blive undersøgt yderligere.

Referencer:

Kilden er fra forfatterne: Sun Weidong1, Chen fei², Sun yun² (1. Yangzhou Hospital of Traditional Chinese Medicine, Yangzhou 225009, Jiangsu; 2. School of Medicine, Yangzhou University, Yangzhou 225001, Jiangsu)