Urinmetabolomics afslører uregelmæssig restitution efter maksimal anstrengelse hos kvindelige ME/CFS-patienter, del 3

Hvorfor vil vi være trætte? Hvordan kan vi løse træthedsproblemerne?

【Kontakt】 E-mail: george.deng@wecistanche.com / WhatsApp:008613632399501/Wechat:13632399501

3. Diskussion

Det er første gang, at urinmetabolomet hos ME/CFS-patienter er blevet karakteriseret før og efter en træningsudfordring, når ME/CFS-patienter oplever PEM. Mange af disse metabolitter er aldrig før blevet målt hos ME/CFS-patienter, da tidligere urinmetabolomiske undersøgelser i ME/CFS har været begrænset til mindre end 50 metabolitter, og den nuværende undersøgelse målte 1403. Desuden er brugen af ​​stillesiddende sunde kontroller til at tage højde for fysiske aktivitetsniveauer, som kan påvirke baseline- og metabolitniveauer efter træning, er en vigtig fordel ved det nuværende studiedesign, som ikke er blevet brugt i tidligere undersøgelser. Vores resultater viste udbredte stigninger i niveauerne af metabolitter i urinen hos kontrollerne 24 timer efter træning, som ikke blev set hos ME/CFS-patienter, hvor 110 af disse forbindelser havde en signifikant interaktion mellem sygdomsstatus (ME/CFS eller kontrol). ) og tid (basislinje vs. efter træning) (Supplerende figur S2). Ud over talrige analyser af urinmetabolitniveauer gav korrelerende metabolitniveauer i urin og plasma yderligere tegn på metabolisk dysregulering hos ME/CFS-patienter efter træning. Denne analyse gav yderligere bevis for patofysiologiske ændringer i flere underveje samt evidens for forskelle i yderligere underveje, der ikke havde mange signifikante forskelle mellem ME/CFS-patienterne og kontrollerne, når man så på urinmetabolitniveauer isoleret.

Cistanche kan fungere som en anti-trætheds- og udholdenhedsforstærker, og eksperimentelle undersøgelser har vist, at afkog af Cistanche tubulosa effektivt kunne beskytte leverhepatocytter og endotelceller beskadiget i vægtbærende svømmemus, opregulere ekspressionen af ​​NOS3 og fremme hepatisk glykogen syntese og udøver således anti-træthedseffektivitet. Phenylethanoid-glycosid-rigt Cistanche tubulosa-ekstrakt kunne signifikant reducere serum-kreatinkinase, lactatdehydrogenase og lactatniveauer og øge hæmoglobin- (HB) og glukoseniveauerne i ICR-mus, og dette kunne spille en anti-træthedsrolle ved at mindske muskelskaden og forsinkelse af mælkesyreberigelsen til energilagring i mus. Compound Cistanche Tubulosa-tabletter forlængede den vægtbærende svømmetid betydeligt, øgede leverglykogenreserven og sænkede serumurinstofniveauet efter træning hos mus, hvilket viste dens anti-træthedseffekt. Afkog af Cistanchis kan forbedre udholdenheden og fremskynde elimineringen af ​​træthed hos motionsmus og kan også reducere forhøjelsen af ​​serumkreatinkinase efter belastningsøvelser og holde ultrastrukturen af ​​skeletmuskulaturen hos mus normal efter træning, hvilket indikerer, at det har virkningerne for at øge fysisk styrke og anti-træthed. Cistanchis forlængede også signifikant overlevelsestiden for nitritforgiftede mus og forbedrede tolerancen over for hypoxi og træthed.

Klik på at føle sig træt hele tiden

3.1. Sammenligning med tidligere urinmetabolomiske undersøgelser hos ME/CFS-patienter

Samlet set stemmer vores resultater ikke overens med de få tidligere undersøgelser, der måler urinmetabolitter hos ME/CFS-patienter sammenlignet med kontrolpersoner uden ME/CFS. For bedre at sammenligne vores resultater med tidligere undersøgelser, som målte færre metabolitter, sammenlignede vi resultaterne ved baseline for p < 0.05 i LMM med de tidligere undersøgelser. Den eneste forbindelse, der viste sig at være signifikant i en anden undersøgelse og vores, var alanin, selvom den tidligere undersøgelse fandt, at alanin var lavere hos kvindelige patienter end hos kontroller (BH-juster p-værdi < 0.05) og i vores undersøgelse var den gennemsnitlige normaliserede koncentration højere hos ME/CFS-patienterne end hos kontrollerne [20]. Imidlertid fandt flere af undersøgelserne forskelle ved baseline i forbindelser, som vi fandt ændrede sig forskelligt hos ME/CFS-patienter og kontroller under træningsrestitution, herunder phenylalanin (lavere hos ME/CFS-patienter [23,24]) og valin (lavere i ME/CFS-patienter [20]). Både phenylalanin og valin var også signifikant øget i de stillesiddende kontroller efter træning i den aktuelle undersøgelse, så det er muligt, at kontrollerne i andre undersøgelser var mere aktive og allerede havde højere niveauer af urin-phenylalanin. Ingen andre undersøgelser rekrutterede specifikt stillesiddende ikke-ME/CFS-personer, selvom en undersøgelse søgte at matche "generel livsstil" [23]. Armstrong et al. så på Pearsons korrelationer mellem urin- og plasmametabolitter hos ME/CFS-patienter og kontroller ved baseline, og fandt forskelle i acetat, laktat og phenylalanin med en tærskelværdi på |R| > 0,4 ​​i begge grupper [20]. Acetat er for lille til at blive påvist i vores assay, og vi påviste ikke forskelle i plasma- og urinkorrelationer i laktat eller phenylalanin.

McGregor og kolleger undersøgte også ændringer i urin- og plasmametabolomerne hos ME/CFS-patienter, der oplever PEM [19]. De brugte en undersøgelse til at adskille ME/CFS-patienter, der i øjeblikket oplever PEM i de sidste syv dage og opdagede, at otte ud af tredive målte urinmetabolitter havde signifikant lavere koncentrationer i ME/CFS-gruppen sammenlignet med kontrollerne. Af disse havde kun serin signifikante forskelle i vores analyser; det steg efter træning i kontrolgruppen (Supplerende datafil S2—LMM-resultater). Niveauer af to urinmetabolitter, acetat og methylhistidin, var også signifikant forskellige i PEM vs. ingen PEM-gruppen [19]. Niveauer af methylhistidinerne analyseret i denne undersøgelse var ikke signifikant forskellige i LMM-analysen, men vi fandt forskelle i plasma- og urinkorrelationerne af 1-methylhistidin og N-acetyl-3-methylhistidin (figur 9). McGregor et al. fandt også associationer af syv-dages PEM-score med flere metabolitter i plasma og urin [19].

3.2. Stigningen efter træning i urinmetabolitniveauer i stillesiddende kontroller er i overensstemmelse med tidligere undersøgelser

Urinmetabolomet hos kvinder 24 timer efter træning er ikke blevet velkarakteriseret. Så vidt vi ved, har ingen undersøgelser målt urinmetabolomet ved baseline sammenlignet med 24 timer efter træning hos kvinder. En undersøgelse målte 32 metabolitter i urin før træning og 24 timer efter træning hos mænd, hvor ni sammenlignede ni konkurrerende cyklister med otte raske, men utrænede mænd på samme alder (50-60 år) [48]. Mens deres undersøgelse fokuserede på at sammenligne atleterne med de utrænede forsøgspersoner, så de en høj stigning efter træning (mere signifikant end to gange) hos kontrolpersonerne i lactat-, acetat- og hypoxanthinniveauer. Acetat blev ikke målt i vores undersøgelse, og hverken lactat eller hypoxanthin var forskellige fra baseline til post-motion i vores kvindelige kontrolgruppe. Mukherjee et al. fandt signifikante forskelle mellem atlet- og kontrolgrupperne i otte af de målte metabolitter forbundet med en række biokemiske veje [48]. Derfor er en styrke ved den nuværende undersøgelse valget af stillesiddende sunde kontroller i modsætning til mere aktive individer, som kan have et ændret urinmetabolom på grund af regelmæssig motion.

Mens der er mangel på publiceret litteratur om urinmetabolomet 24 timer efter træning, er der adskillige undersøgelser, der måler urinmetabolitter hos både mænd og kvinder på tidligere tidspunkter efter træning (gennemgået i [49]). Et af de fund, der var konsistent mellem undersøgelserne, er, at koncentrationen af ​​de fleste lipider stiger i biovæsker efter træning, herunder i urin. Især acylcarnitin-koncentrationer har vist sig at stige i blod og urin som reaktion på træning. Dette er i overensstemmelse med resultaterne af vores undersøgelse, hvor adskillige acylcarnitinforbindelser blev signifikant øget efter træning i kontrollernes urin (figur 7A).

Den største undersøgelse, som omfattede kvinder (i alt 255 forsøgspersoner, 107 kvinder) fandt også omfattende metaboliske ændringer i urinen efter træning, med 37 ud af 47 målte metabolitter signifikant ændret efter FDR-korrektion, og 33 af dem var øget efter træning [50] . Dette er i overensstemmelse med vores opdagelse af storskala metaboliske ændringer efter træning i urinen hos kontrolpersoner, hvor størstedelen af ​​de forbindelser, der blev ændret, viste sig at have øgede koncentrationer. Denne undersøgelse afsluttede også en kønsstratificeret sammenlignende analyse, men fandt kun to metabolitter med signifikant forskellige forhold efter træning/baseline hos kvinder og mænd.

I Schranner et al. gennemgang, er resultaterne for aminosyrer ikke så konsistente som for lipider, som generelt øger efter træning [49]. Nogle resultater i urinen var dog konsistente på tværs af mindst to undersøgelser (selvom alle tidspunkter efter træning er kombineret), herunder at følgende forbindelser steg i urinen efter træning: alanin, O-acetyl-homoserin, 5- hydroxyindolpyruvat, xanthurenat, L-metanephrin, N-acetylvanilalanin og N-(carboxyethyl) arginin. Følgende forbindelser viste sig at være nedsat i urin efter træning i mindst to undersøgelser: glycin, histidin, trimethylamin n-oxid. Ved at sammenligne disse resultater med vores undersøgelse var de fleste af metabolitterne enten ikke signifikant forskellige før og efter træning eller blev ikke målt i vores undersøgelse. Vi fandt dog også en signifikant stigning i alaninniveauer i kontrollerne, hvilket er i overensstemmelse med de gennemgåede studier. I vores undersøgelse var glycinniveauer også øget efter træning i kontroller i modsætning til faldende. Imidlertid har Kistner et al. undersøgelse, som omfattede mange kvinder, fandt også, at glycinniveauet var signifikant øget efter træning [50].

3.3. Forskelle mellem stillesiddende kontroller og ME/CFS-patienter i Lipid Superpathway

Mange lipidsubpathways var signifikant forskellige i urinen hos patienterne og kontrollerne i denne undersøgelse, herunder acylcarnitin fedtsyremetabolisme. Acylcarnitinmetabolitter var øget efter træning i urinen hos raske kontroller, og ændringerne induceret af træning var signifikant forskellige mellem kontrollerne og ME/CFS-patienter (figur 3, 7 og S4). Selvom deoxycarnitin ikke er en acylcarnitin, korrelerede deoxycarnitin i carnitinmetabolismens lipidsubpathway forskelligt mellem plasma og urin hos ME/CFS-patienterne sammenlignet med kontroller (figur 9). Acylcarnitiner er meget vigtige i energimetabolismen, da de er nødvendige for at transportere fedtsyrer ind i mitokondrierne for -oxidation. Langkædet fedtsyreoxidation er den primære energimetabolisme under aerob træning. Forstyrret acylcarnitin-metabolisme under træning kan bidrage til træningsintolerance og PEM hos ME/CFS-patienter. I en anden undersøgelse, der kun kiggede på forsøgspersoner ved baseline, og som ikke specifikt rekrutterede stillesiddende kontroller, viste det sig, at acylcarnitin-subpathwayen var signifikant forskellig hos ME/CFS-patienter i forhold til kontroller, hvor fem ud af otte forbindelser viste sig at have en lavere koncentration hos patienterne [11]. Når kun baseline-personer blev analyseret, indikerede specifikke målinger af acylcarnitin i serum, at forbindelsen var lavere hos ME/CFS-patienter end kontrollerne i én rapport [51], men der blev ikke set forskelle i urin- eller plasmaniveauer i en anden undersøgelse [52]. I plasmaet fra den større kohorte, hvoraf emnerne i den aktuelle undersøgelse er en undergruppe, blev den kemiske carnitin-klynge også signifikant ændret i kvindelige stillesiddende kontroller under restitution (defineret som forskellen mellem 24 timer efter træning og 15 minutter efter træning). ) med størstedelen af ​​forbindelserne stigende efter træning [25]. Den kemiske carnitin-klynge viste sig ikke at være signifikant ændret under træningsrestitution hos ME/CFS-patienter. Mens denne klynge omfatter mere end blot acylcarnitiner, er acylcarnitiner medlemmer og bidrager til dens betydning i kemisk lighedsberigelsesanalyse i den aktuelle undersøgelse også (Supplerende figur S4). Det er også blevet vist ex vivo, at palmitoylcarnitin, som øges i muskler forbigående efter træning, kan fungere som et anstrengelsessignal fra muskel til en undergruppe af neuroner [53].

Acylglycin-fedtsyremetabolitter er de eneste forbindelser, der blev fundet i urin ved signifikant forskellige koncentrationer i ME/CFS vs. kontroller på et enkelt tidspunkt (24 timer efter træning) og en anden acylglycinforbindelse, 3-hydroxybutyroylglycin , havde en signifikant negativ korrelation hos ME/CFS-patienterne ved korrelation af U3/U1 med P3/P1 (figur 5 og 9). Derudover ændrede cis-3,4-methylenheptanoylglycin sig anderledes under træningsrestitution hos ME/CFS-patienter kontra kontroller (LMM, Supplerende Figur S2). Mens acylglycin-metabolisme ikke er en af ​​de underveje, der var signifikant øget efter træning i kontrollerne alene, var den signifikant forskellig hos ME/CFS-patienter i forhold til kontroller både på tidspunktet 24 timer efter træning og ved analyse af forskellen i forholdet efter træning/baseline (figur 3). Urinudskillelse af særlige acylglyciner er også ændret af lidelser forbundet med fedtsyreoxidation i mitokondrierne, herunder mellemkædet acyl-coenzym A (CoA) dehydrogenase (MCAD) mangel [54]. Vores gruppe har observeret, at fedtsyreoxidation adskiller sig i immunceller fra ME/CFS-patienter vs. kontroller [55].

3.4. Forskelle mellem stillesiddende kontroller og ME/CFS-patienter i Aminosyre Superpathway

Vi fandt også mange forskelle i urin i aminosyrer hos ME/CFS-patienter og kontroller efter træning. To af disse veje skilte sig ud, fordi de havde signifikante ændringer i ME/CFS-patienterne vs. kontroller i alle vores analyser, inklusive KEGG-vejanalysen, og diskuteres yderligere nedenfor.

Urinstofcyklussen i leveren er en vigtig del af træningsmetabolismen, fordi den er nødvendig for at fjerne høje niveauer af ammoniak, der produceres under træning [56,57]. Germain og kolleger fandt også, at urinstofcyklussen og ammoniakgenanvendelses-SMPDB-vejene var signifikant ændret i plasmaet mellem ME/CFS kvindelige patienter og kontroller i en pathway-analyse, når man sammenlignede forskellen mellem metabolitniveauer 24 timer efter CPET (P3) og 15 minutter efter CPET (P2) [25]. Ammoniakopbygning har tidligere været forbundet med neurotoksicitet og træningsinduceret træthed [56,57]. Dysreguleringen af ​​urinstofcyklussen i urin- og plasmametabolomerne efter træning hos ME/CFS-patienter kan forårsage opbygning af ammoniak, men de 1403 forbindelser målt med Metabolon® i urinen inkluderede ikke ammoniak, fordi det er en flygtig forbindelse og også mindre end detektionsgrænsen for Metabolon®s platform.

Cystein, methionin, SAM og taurin er vigtige aminosyrer, da de er de eneste, der indeholder svovl, og cystein er unik i sin evne til at danne disulfidbindinger. Cystein kan også omdannes til glutathion og taurin. Cystein og methionin spiller adskillige roller i cellulær metabolisme, men de er også vigtige byggesten i proteiner [37]. På grund af sin thiolgruppe er cystein involveret i at katalysere mange enzymatiske reaktioner og opretholde redox-homeostase. Ændringer i cysteinmetabolismen forekommer i mange neurodegenerative lidelser, herunder Alzheimers sygdom, Huntingtons sygdom og Parkinsons sygdom [58]. Mens cystein-, methionin-, SAM- og taurinmetabolismen viste mange forskelle mellem patienterne og kontrollerne i vores urinmetabolomanalyser, afslørede urin- og plasmakorrelationerne yderligere forbindelser med signifikante forskelle mellem ME/CFS-patienterne og kontrollerne, herunder i cystein, hvilket er produceret, når to cysteiner oxideres for at danne en disulfidbinding, og cystathionin, som er et mellemprodukt i cysteinproduktionen i methionincyklussen [37].

3.5. Begrænsninger

Vores undersøgelse har flere vigtige begrænsninger. For det første var forsøgspersonernes kost ikke kontrolleret, og kostens indtagelse af metabolitter kan påvirke deres udskillelse i urinen. For det andet anerkender vi, at manglen på BMI-matchning ikke er ideel og er en begrænsning af denne undersøgelse. Vores større kohorte af ME/CFS-patienter og raske stillesiddende kontroller er BMI-matchet, og hvis dette pilotstudie udvides, vil dette derfor ikke være et problem i fremtiden. For det tredje er vores resultater begrænset til kvindelige ME/CFS-patienter. Selvom det er meget vigtigt at studere begge køn i ME/CFS og et stigende antal kønsforskelle i patofysiologi bliver opdaget [25,59,60], valgte vi at fokusere vores pilotstudie på kvinder på grund af den højere sygdomsbyrde ved ME /CFS hos kvinder (60-65% kvinder) [2]. Derudover, fordi vi kun fangede urinmetabolomet på to tidspunkter, baseline og 24 timer efter træning, kan vi ikke sige, om ME/CFS-patienterne har ændret udskillelsesniveauer af nogle af disse metabolitter på enten et tidligere eller senere tidspunkt. punkt end kontrollerne. Disse stigninger i udskillelsesprodukter kan forekomme hos patienter, men med en større forsinkelse, svarende til hvordan ME/CFS-patienterne viser en forsinket generel genopretning til træning. Det er dog også muligt, at denne mangel på ændret metabolisk udskillelse er en del af en generel mangel på en sund metabolisk reaktion på træning.

4. Materialer og metoder

4.1. Studiefag

Otte raske stillesiddende kontroller og ti ME/CFS-patienter blev inkluderet i denne undersøgelse. ME/CFS-patienter blev diagnosticeret med de canadiske konsensuskriterier [3]. De 18 forsøgspersoner inkluderet i denne undersøgelse var en del af en større kohorte på i alt 173 deltagere (ClinicalTrials.gov Identifier: NCT04026425) [61]. Til denne pilotundersøgelse var alle inkluderede forsøgspersoner kvinder. Forsøgspersoner blev rekrutteret med følgende kriterier. Alle deltagere skal være mellem 18-70 år. Forsøgspersoner blev udelukket fra begge grupper, hvis de var ryger, gravide eller ammende, var diabetikere, indtog for store mængder alkohol eller havde en ortopædisk begrænsning, der forhindrede dem i at udføre CPET. Diagnoser af skizofreni, svær depressiv lidelse, bipolar lidelse eller en angstlidelse var også eksklusionskriterier i begge grupper. Derudover blev raske stillesiddende kontroller udelukket, hvis de blev diagnosticeret med nogen autoimmune lidelser. Nyrefunktionen var normal hos alle forsøgspersonerne i denne undersøgelse, som vurderet ved følgende Quest Diagnostics standard laboratorieblodprøver: serumkreatinin, blodurinstofnitrogen og estimeret glomerulær filtrationshastighed (eGFR).

Sytten forsøgspersoner udførte træningstesten på Ithaca College i Ithaca, New York, og et forsøgsperson udførte træningstesten på ID Med i Torrance, Californien. Alle deltagere blev bedt om at stoppe kosttilskud inklusive probiotika i to uger før træningstest. Deltagerne blev bedt om at stoppe smerte og stimulerende medicin i to dage før træningstesten. Alle patienter gav skriftligt informeret samtykke, og alle protokoller blev godkendt af Ithaca College IRB #1017-12Dx2. Alle deltagere gennemførte Bell Disability Scale [26], Short Form-36 sundhedsundersøgelse [62] og tilpassede spørgeskemaer. ME/CFS-patienterne gennemførte desuden den multidimensionelle træthedsopgørelse [63].

4.2. Kardiopulmonal træningstest og urinprøvetagning

CPET blev udført på et stationært cyklusergometer med følgende protokol: 3 min hvile efterfulgt af kontinuerlig cykling, hvor den trinvise arbejdsbelastning øges med 15 watt pr. minut af træning indtil frivillig udmattelse (ca. 8-10 min). Respiratorisk udvekslingsforhold (RER), som er hastigheden af ​​kuldioxidproduktion divideret med iltforbruget, blev målt for at sikre, at deltagerne udførte testen med tilstrækkelig indsats (RER > 1,1 angiver maksimal indsats).

Alle urinprøver blev opsamlet om morgenen: (1) 15-20 minutter før CPET og (2) 24 timer senere. Urin blev opsamlet midtstrøms i sterile urinopsamlere, alikvoteret, centrifugeret ved 10,000× g i 10 minutter for at fjerne cellerester og opbevaret ved -80 ◦C. Urinprøver gennemgik én fryse/tø-cyklus til yderligere alikvotering, og alikvoterne blev sendt natten over til Metabolon® på tøris.

4.3. Metabolomisk analyse

Metabolitter blev målt ved hjælp af Precision Metabolomics™ væskekromatografi-tandem massespektrometri (LC-MS/MS) global metabolomics platform hos Metabolon®. Detaljerede metoder er blevet beskrevet tidligere [64]. Kort fortalt blev prøver ekstraheret i methanol (5:1 methanol: prøve) og derefter inddampet. Metabolitter blev påvist i hver prøve ved hjælp af fire forskellige LC-MS/MS-platforme, der var optimeret til hydrofile og hydrofobe forbindelser og ved hjælp af både positiv og negativ ionisering. Al kromatografi brugte en Waters Acquity ultra-høj ydeevne (UP)LC og en 5 µL injektionsvolumen (med prøver rekonstitueret i passende opløsningsmidler til hver platform). Al massespektrometri blev udført med ThermoScientific Q-Exactive højopløsnings/nøjagtige massespektrometre med opvarmede elektrospray-ioniseringskilder (HESI-II) og Orbitrap-masseanalysatorer drevet ved 35,000 masseopløsning med scanningsområde 70-1000 m/ z. Metabolon® proprietær software blev brugt til at matche eksperimentelle prøver med et referencebibliotek af Tier 1-identifikationsstandarder som defineret af Metabolomics Standards Initiative, og området under kurven blev brugt til peak-kvantificering. Værdierne er normaliseret med hensyn til råarealtællinger, og alle prøver blev kørt i én batch, så ingen batchkorrektion var nødvendig. De ukendte forbindelser har ikke en standard, og delvist karakteriserede molekyler er dem, der ikke er blevet officielt bekræftet baseret på en standard, eller som der ikke findes en standard for, men Metabolon® er rimelig sikker på sin identitet.

4.4. Databehandling

Rådata blev normaliseret ved osmolalitet for hver prøve, og dataene for hver metabolit var mediancentreret til 1 (rådata inklusive osmolalitet er tilgængelige i Supplerende fil S1). Manglende værdier blev imputeret med minimumsværdien, bortset fra lægemidler, der blev imputeret som 0. Data blev log10 transformeret med en variansstabiliserende transformation (MetaboanalystR) [65,66]. I alt 1403 metabolitter blev oprindeligt målt. Metabolitter blev filtreret efter den modificerede 80 %-regel: en forbindelse blev inkluderet, hvis den blev påvist i mindst 80 % af prøverne i enten ME/CFS- eller kontrolgrupperne [27]. Samlet set opfyldte 1154 metabolitter kriterierne og blev inkluderet i efterfølgende analyser. Den eneste analyse udført uden filtrering var på korrelationerne med plasmametabolitter. Post-motion/baseline-forholdet for hver metabolit blev beregnet i log base 10 som post-motion-værdien minus baseline-værdien for hvert individ. For at plotte vulkanplottet blev de gennemsnitlige log-fold-ændringer (ME/CFS-patienter vs. kontroller) konverteret til log-base 2 under anvendelse af ændringen af ​​baseformlen.

4.5. Dataanalyse og statistik

Univariat statistisk analyse for hver metabolit blev udført ved hjælp af en lineær blandet model med faste effekter af sygdomsstatus, tidspunkt, alder og BMI og en tilfældig effekt af individet (smarteste [67] og middel [68] R-pakker). Benjamini-Hochberg (BH) metoden blev brugt til at korrigere for den falske opdagelsesrate, med q < 0.1 brugt som tærskel for signifikans. EnhancedVolcano R-pakken blev brugt til vulkanplot [69].

ChemRICH i R blev brugt til at udføre den ikke-overlappende pathway-analyse med de Metabolon®-definerede subpathways og pathway-rækkefølgen [29]. ChemRICH-webværktøjet blev brugt til at udføre den kemiske lighedsklyngeanalyse [30]. Til den analyse var det kun forbindelser, der havde en kendt SMILES-kode, der kunne inkluderes, for i alt 516 forbindelser. For begge ChemRICH-analyser blev berigelsesstatistikken udført ved hjælp af Kolmogorov-Smirnov-testen, som ikke bruger en p-værdi signifikans cutoff, men snarere sammenligner sandsynlighedsfordelingen med en nulhypotesesandsynlighedsfordeling [70]. For Metabolon®-undervejene blev q < 0.05 valgt som tærsklen for signifikans, og q < 0,15 blev valgt for de kemiske klynger (BH FDR-korrektion). For begge havde alle klynger under de valgte q-tærskler også p < 0,05.

Baneberigelse og topologianalyse blev udført ved hjælp af Metaboanalyst 5.0 webværktøjet [65], for både KEGG og SMPDB humane referencemetabolomer med følgende parametre valgt: en global test for statistiktesten og relativ centralitet mellem hinanden som noden vigtighed. Forbindelser blev inkluderet i denne analyse, hvis HMDB ID'et leveret af Metabolon® matchede HMDB ID'et i Metaboanalyst. For duplikatforbindelser for ét HMDB ID var kun den første inkluderet. Dette resulterede i 453 inkluderede forbindelser.

Grupperingen af ​​forsøgspersonerne ved hjælp af de fire forbindelser, der var signifikant forskellige mellem patienterne og kontrollerne efter træning, blev udført ved hjælp af hierarkisk gruppering, med den euklidiske afstand som afstandsmetrikken, og metoden "Ward.D2" (varmekort R-pakke [71) ]).

Pearson-korrelationer mellem urin og plasma for 727 metabolitter målt i begge biovæsker blev udført i R (hmisc-pakke). p-værdier blev beregnet for hver korrelation ved hjælp af en t-test med nulhypotesen, at korrelationskoefficienten er lig med 0, efterfulgt af BH FDR-korrektion med q < 0.15 som tærsklen for signifikans. For figur 8 blev forbindelser screenet for at fjerne dem, der havde ekstreme outliers ved hjælp af den modificerede z-score-metode, som beregner en z-score ved hjælp af median og median absolut afvigelse (outliers R-pakke, z-tærskel=6).

Medmindre andet er angivet, blev alle datavisualiseringer udført ved hjælp af ggplot2 R-pakken. BH FDR-korrektion blev valgt for alle analyser i stedet for den mere stringente Benjamini og Yekutieli FDR-korrektion, fordi et ekstremt lille antal forbindelser blev fundet at være kolineære (0.75 % af målene havde en absolut værdi Pearsons korrelationskoefficient > { {3}}.7).

5. Konklusioner

Samlet set var der signifikante forskelle i urinmetabolomet i de raske stillesiddende kontroller og ME/CFS-patienterne som svar på en CPET-udfordring i en lang række metaboliske super- og subpathways, der spænder over aminosyrer, lipider, kulhydrater, nukleotider, xenobiotika og ukendte. Disse veje er involveret i et væld af fysiologiske funktioner, herunder, men ikke begrænset til, energimetabolisme. Dette indikerer, at ME/CFS-patienter har en generel metabolisk dysregulering, der er en del af deres træningsintolerance og PEM, hvor ændret metabolisk udskillelse er en medvirkende faktor. Vores data tyder på, at metabolismen af ​​stillesiddende individer, der ikke har ME/CFS, gennemgår store ændringer, der gør det muligt for dem at komme sig efter anstrengelse, mens ME/CFS-patienter undlader at foretage lignende adaptive reaktioner. Fremtidigt arbejde vil omfatte udvidelse af denne undersøgelse til en meget større kohorte, der inkluderer begge køn for at validere disse resultater, undersøge kønsforskelle i urinmetabolomet og undersøge, om der er mere subtile forskelle i urinmetabolitter hos ME/CFS-patienter ved baseline, som potentielt kan bidrage til en diagnostisk test for sygdommen i fremtiden.

Forfatterbidrag:Konceptualisering, AG, KAG og MRH; metodologi, AG, KAG, YVH og MRH; formel analyse, KAG, AG og YVH; undersøgelse, KAG, AG og YVH; skrivning - originalt udkast til forberedelse, KAG, AG og MRH; skrivning – gennemgang og redigering, alle forfattere; visualisering, KAG og AG; projektadministration, MRH; finansiering erhvervelse, MRH Alle forfattere har læst og accepteret den offentliggjorte version af manuskriptet.

Finansiering:Denne forskning blev støttet af National Institute of Neurological Disorders and Stroke (NINDS), NIH (U54NS105541) og Amar Foundation. National Center for Advancing Translational Sciences af NIH ydede finansiering til Weill Cornell Medicine Clinical and Translational Science Center (CTSC) til at vedligeholde REDCap-databasen gennem UL1 TR 002384.

Udtalelse fra det institutionelle revisionsudvalg:Undersøgelsen blev udført i overensstemmelse med retningslinjerne i Helsinki-erklæringen og godkendt af Ithaca College Institutional Review Board, Ithaca, New York, USA (protokol 1017-12Dx2) og Weill Cornell Medical College Institutional Review Board ( protokol 1708018518).

Erklæring om informeret samtykke:Informeret samtykke blev opnået fra alle forsøgspersoner involveret i undersøgelsen.

Erklæring om datatilgængelighed:Alle metabolitdata for hvert emne er tilgængelige i de medfølgende supplerende datafiler.

Anerkendelser:Carl Franconi administrerede databasen og biobanken på Cornell University. Blodprøver blev fraktioneret af David Wang ved EVMED Research med støtte fra Workwell Foundation og af Ivan Falsztyn, Carl Franconi, Ludovic Giloteaux, Madeline McCanne, Jineet Patel, Adam O'Neal, Alexandra Mandarano, Jessica Maya, Shannon Appelquist ved Cornell University. Vi takker følgende personer, som deltog i screening af deltagere, udførelse af træningstest og/eller indsamling af blod og urin: Betsy Keller, John Chia, Jared Stevens, Tiffany Ong og Maria Russell.

Interessekonflikt:Forfatterne erklærer ingen interessekonflikt. Finansierne havde ingen rolle i udformningen af ​​undersøgelsen; i indsamling, analyser eller fortolkning af data; i skrivningen af ​​manuskriptet; eller i beslutningen om at offentliggøre resultaterne.

Referencer

1. Jason, LA; Mirin, AA Opdatering af National Academy of Medicine ME/CFS-prævalens og økonomiske virkningstal for at tage højde for befolkningsvækst og inflation. Træthed Biomed. Sundhedsadfærd. 2021, 9, 9-13. [CrossRef]

2. Valdez, AR; Hancock, EE; Adebayo, S.; Kiernicki, DJ; Proskauer, D.; Attewell, JR; Bateman, L.; DeMaria, A., Jr.; Lapp, CW; Rowe, PC; et al. Estimering af prævalens, demografi og omkostninger ved ME/CFS ved hjælp af medicinske krav i stor skala og maskinlæring. Foran. Pædiatr. 2018, 6, 412. [CrossRef] [PubMed]

3. Carruthers, BM; Jain, AK; De Meirleir, KL; Peterson, DL; Klimas, NG; Lerner, AM; Bested, AC; Flor-Henry, P.; Joshi, P.; Powles, AP; et al. Myalgisk encephalomyelitis/kronisk træthedssyndrom: definition af klinisk arbejdstilfælde, diagnostiske og behandlingsprotokoller. J. Chronic Fatigue Syndr. 2003, 11, 7-115. [CrossRef]

4. Chu, L.; Valencia, IJ; Garvert, DW; Montoya, JG Deconstructing post-exertional utilpashed i myalgisk encephalomyelitis/kronisk træthedssyndrom: En patientcentreret, tværsnitsundersøgelse. PLoS ONE 2018, 13, e0197811. [CrossRef]

5. Stussman, B.; Williams, A.; Snow, J.; Gavin, A.; Scott, R.; Nath, A.; Walitt, B. Karakterisering af post-anstrengelsesbesvær hos patienter med myalgisk encephalomyelitis/kronisk træthedssyndrom. Foran. Neurol. 2020, 11, 1025. [CrossRef]

6. Stevens, S.; Snell, C.; Stevens, J.; Keller, B.; VanNess, JM Kardiopulmonal træningstestmetode til vurdering af anstrengelsesintolerance ved myalgisk encephalomyelitis/kronisk træthedssyndrom. Foran. Pædiatr. 2018, 6, 242. [CrossRef]

7. Vanness, JM; Snell, CR; Stevens, SR Nedsat kardiopulmonal kapacitet under post-anstrengelsesbesvær. J. Chronic Fatigue Syndr. 2007, 14, 77-85. [CrossRef]

8. Keller, BA; Pryor, JL; Giloteaux, L. Manglende evne hos patienter med myalgisk encephalomyelitis/kronisk træthedssyndrom til at reproducere VO(2)-peak indikerer funktionsnedsættelse. J. Transl. Med. 2014, 12, 104. [CrossRef]

9. Missailidis, D.; Annesley, SJ; Fisher, PR Patologiske mekanismer, der ligger til grund for myalgisk encephalomyelitis/kronisk træthedssyndrom. Diagnostics 2019, 9, 80. [CrossRef]

10. Huth, TK; Eaton-Fitch, N.; Staines, D.; Marshall-Gradisnik, S. En systematisk gennemgang af metabolomisk dysregulering ved kronisk træthedssyndrom/myalgisk encephalomyelitis/systemisk anstrengelsesintolerance (CFS/ME/SEID). J. Transl. Med. 2020, 18, 198. [CrossRef]

11. Germain, A.; Barupal, DK; Levine, SM; Hanson, MR Comprehensive Circulatory Metabolomics in ME/CFS afslører forstyrret metabolisme af acyllipider og steroider. Metabolitter 2020, 10, 34. [CrossRef]

12. Germain, A.; Ruppert, D.; Levine, SM; Hanson, MR Metabolisk profilering af en myalgisk encephalomyelitis/kronisk træthedssyndrom opdagelseskohorte afslører forstyrrelser i fedtsyre- og lipidmetabolisme. Mol. Biosyst. 2017, 13, 371-379. [CrossRef]

13. Germain, A.; Ruppert, D.; Levine, SM; Hanson, MR Prospektive biomarkører fra plasmametabolomics af myalgisk encephalomyelitis/kronisk træthedssyndrom implicerer Redox-ubalance i sygdomssymptomatologi. Metabolitter 2018, 8, 90. [CrossRef]

14. Yamano, E.; Sugimoto, M.; Hirayama, A.; Kume, S.; Yamato, M.; Jin, G.; Tajima, S.; Goda, N.; Iwai, K.; Fukuda, S.; et al. Indeksmarkører for kronisk træthedssyndrom med dysfunktion af TCA og urinstofcyklusser. Sci. Rep. 2016, 6, 34990. [CrossRef]

15. Armstrong, CW; McGregor, NR; Sheedy, JR; Buttfield, I.; Butt, HL; Gooley, PR NMR metabolisk profilering af serum identificerer aminosyreforstyrrelser i kronisk træthedssyndrom. Clin. Chim. Acta 2012, 413, 1525-1531. [CrossRef]

16. Armstrong, CW; McGregor, NR; Lewis, DP; Butt, HL; Gooley, PR Sammenslutningen af ​​fækal mikrobiota og fækal, blodserum og urinmetabolitter i myalgisk encephalomyelitis/kronisk træthedssyndrom. Metabolomics 2016, 13, 8. [CrossRef]

17. Hoel, F.; Hoel, A.; Pettersen, IK; Rekeland, IG; Risa, K.; Alme, K.; Sorland, K.; Fossa, A.; Lien, K.; Herder, I.; et al. Et kort over metaboliske fænotyper hos patienter med myalgisk encephalomyelitis/kronisk træthedssyndrom. JCI Insight 2021, 6, e149217. [CrossRef]

18. Nagy-Szakal, D.; Barupal, DK; Lee, B.; Che, X.; Williams, BL; Kahn, EJR; Ukaigwe, JE; Bateman, L.; Klimas, NG; Komaroff, AL; et al. Indsigt i myalgisk encephalomyelitis/kronisk træthedssyndrom fænotype gennem omfattende metabolomics. Sci. Rep. 2018, 8, 10056. [CrossRef]

19. McGregor, NR; Armstrong, CW; Lewis, DP; Gooley, PR Post-anstrengelsesbesvær er forbundet med hypermetabolisme, hypoacetylering og purinmetabolisme-deregulering i ME/CFS-tilfælde. Diagnostics 2019, 9, 70. [CrossRef]

20. Armstrong, CW; McGregor, NR; Lewis, DP; Butt, HL; Gooley, PR Metabolisk profilering afslører unormalt energimetabolisme og oxidative stressveje hos patienter med kronisk træthedssyndrom. Metabolomics 2015, 11, 1626-1639. [CrossRef]

21. Fluge, O.; Mella, O.; Bruland, O.; Risa, K.; Dyrstad, SE; Alme, K.; Rekeland, IG; Sapkota, D.; Rosland, GV; Fossa, A.; et al. Metabolisk profilering indikerer nedsat pyruvatdehydrogenasefunktion ved myalgisk encefalopati/kronisk træthedssyndrom. JCI Insight 2016, 1, e89376. [CrossRef] [PubMed]

22. Naviaux, RK; Naviaux, JC; Li, K.; Bright, AT; Alaynick, WA; Wang, L.; Baxter, A.; Nathan, N.; Anderson, W.; Gordon, E. Metaboliske træk ved kronisk træthedssyndrom. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2016, 113, E5472–E5480. [CrossRef] [PubMed]

23. Jones, MG; Cooper, E.; Amjad, S.; Goodwin, CS; Barron, JL; Chalmers, RA Urin- og plasmaorganiske syrer og aminosyrer ved kronisk træthedssyndrom. Clin. Chim. Acta 2005, 361, 150-158. [CrossRef] [PubMed]

24. Niblett, SH; King, KE; Dunstan, RH; Clifton-Bligh, P.; Hoskin, LA; Roberts, TK; Fulcher, GR; McGregor, NR; Dunsmore, JC; Butt, HL; et al. Hæmatologiske og urinudskillelsesanomalier hos patienter med kronisk træthedssyndrom. Exp. Biol. Med. 2007, 232, 1041-1049. [CrossRef] [PubMed]

25. Germain, A.; Giloteaux, L.; Moore, GE; Levine, SM; Chia, JK; Keller, BA; Stevens, J.; Franconi, CJ; Mao, X.; Shungu, DC; et al. Plasma metabolomics afslører forstyrret respons og restitution efter maksimal træning i myalgisk encephalomyelitis/kronisk træthedssyndrom. JCI Insight 2022, 7, e157621. [CrossRef]

26. Bell, DS The Doctor's Guide to Chronic Fatigue Syndrome. At forstå, behandle og leve med CFIDS; Addison-Wesley Publishing Company: Reading, MA, USA, 1994.

27. Yang, J.; Zhao, X.; Lu, X.; Lin, X.; Xu, G. En dataforbehandlingsstrategi for metabolomics for at reducere maskeringseffekten i dataanalyse. Foran. Mol. Biosci. 2015, 2, 4. [CrossRef]

28. Benjamini, Y.; Hochberg, Y. Kontrol af den falske opdagelsesrate: En praktisk og kraftfuld tilgang til flere tests. JR Stat. Soc. Ser. B 1995, 57, 289-300. [CrossRef]

29. Barupal, DK; Fan, S.; Fiehn, O. Integration af bioinformatiske tilgange til en omfattende fortolkning af metabolomiske datasæt. Curr. Opin. Biotechnol. 2018, 54, 1-9. [CrossRef]

30. Barupal, DK; Fiehn, O. Chemical Similarity Enrichment Analysis (ChemRICH) som et alternativ til biokemisk pathway mapping for metabolomiske datasæt. Sci. Rep. 2017, 7, 14567. [CrossRef]

31. Goeman, JJ; van de Geer, SA; de Kort, F.; van Houwelingen, HC En global test for grupper af gener: Test af sammenhæng med et klinisk resultat. Bioinformatik 2004, 20, 93-99. [CrossRef]

32. Rosato, A.; Tenori, L.; Cascante, M.; De Atauri Carulla, PR; Martins Dos Santos, VAP; Saccenti, E. Fra korrelation til årsagssammenhæng: Analyse af metabolomiske data ved hjælp af systembiologiske tilgange. Metabolomics 2018, 14, 37. [CrossRef]

33. Cardounel, AJ; Cui, H.; Samouilov, A.; Johnson, W.; Kearns, P.; Tsai, AL; Berka, V.; Zweier, JL Beviser for den patofysiologiske rolle af endogene methylargininer i reguleringen af ​​endothelial NO-produktion og vaskulær funktion. J. Biol. Chem. 2007, 282, 879-887. [CrossRef]

34. Chandrasekharan, UM; Wang, Z.; Wu, Y.; Wilson Tang, WH; Hazen, SL; Wang, S.; Elaine Husni, M. Forhøjede niveauer af plasmasymmetrisk dimethylarginin og øget arginaseaktivitet som potentielle indikatorer for kardiovaskulær komorbiditet ved reumatoid arthritis. Arthritis Res. Ther. 2018, 20, 123. [CrossRef]

35. Siroen, MP; Teerlink, T.; Nijveldt, RJ; Prins, HA; Richir, MC; van Leeuwen, PA Den kliniske betydning af asymmetrisk dimethylarginin. Annu. Rev. Nutr. 2006, 26, 203-228. [CrossRef]

36. Bertinat, R.; Villalobos-Labra, R.; Hofmann, L.; Blauensteiner, J.; Sepulveda, N.; Westermeier, F. Nedsat NO-produktion i endotelceller udsat for plasma fra ME/CFS-patienter. Vasc. Pharmacol. 2022, 143, 106953. [CrossRef]

37. Brosnan, JT; Brosnan, ME De svovlholdige aminosyrer: En oversigt. J. Nutr. 2006, 136, 1636S–1640S. [CrossRef]

38. Fernández-García, JC; Martínez-Sánchez, MA; Bernal-López, MR; Muñoz-Garach, A.; Martínez-González, MA; Fitó, M.; Salas-Salvadó, J.; Tinahones, FJ; Ramos-Molina, B. Effekt af et livsstilsinterventionsprogram med energibegrænset middelhavsdiæt og motion på serumpolyaminmetabolomet hos personer med høj risiko for hjertekarsygdomme: Et randomiseret klinisk forsøg. Er. J. Clin. Nutr. 2020, 111, 975-982. [CrossRef]

39. Wang, W.; Zhang, H.; Xue, G.; Zhang, L.; Zhang, W.; Wang, L.; Lu, F.; Li, H.; Bai, S.; Lin, Y.; et al. Motionstræning bevarer iskæmisk prækonditionering i gamle rottehjerter ved at genoprette myokardiepolyaminpuljen. Oxid. Med. Celle. Longev. 2014, 2014, 457429. [CrossRef]

40. Blomstrand, E.; Eliasson, J.; Karlsson, HK; Kohnke, R. Forgrenede aminosyrer aktiverer nøgleenzymer i proteinsyntese efter fysisk træning. J. Nutr. 2006, 136, 269S–273S. [CrossRef]

41. Newsholme, P.; Stenson, L.; Sulvucci, M.; Sumayao, R.; Krause, M. 1.02-Aminosyremetabolisme. I Comprehensive Biotechnology, 2. udg.; Moo-Young, M., red.; Academic Press: Burlington, ON, Canada, 2011; s. 3–14. [CrossRef]

42. Li, S.; Gao, D.; Jiang, Y. Funktion, påvisning og ændring af acylcarnitinmetabolisme i hepatocellulært karcinom. Metabolitter 2019, 9, 36. [CrossRef]

43. Braun, TP; Marks, DL Reguleringen af ​​muskelmasse med endogene glukokortikoider. Foran. Physiol. 2015, 6, 12. [CrossRef] [PubMed]

44. Furman, BL Mineralokortikoider. I xPharm: The Comprehensive Pharmacology Reference; Enna, SJ, Bylund, DB, red.; Elsevier: New York, NY, USA, 2007; s. 1. [CrossRef]

45. Kavyani, B.; Lidbury, BA; Schloeffel, R.; Fisher, PR; Missailidis, D.; Annesley, SJ; Dehhaghi, M.; Heng, B.; Guillemin, GJ Kunne kynurenin-vejen være den vigtigste manglende brik i Myalgisk Encephalomyelitis/Kronisk Træthedssyndrom (ME/CFS) komplekse puslespil? Celle. Mol. Life Sci. 2022, 79, 412. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Kossman, DA; Williams, NI; Domchek, SM; Kurzer, MS; Stopfer, JE; Schmitz, KH Motion sænker østrogen- og progesteronniveauet hos præmenopausale kvinder med høj risiko for brystkræft. J. Appl. Physiol. 2011, 111, 1687-1693. [CrossRef] [PubMed]

47. De Souza, MJ; Van Heest, J.; Demers, LM; Lasley, BL Lutealfasemangel hos rekreative løbere: beviser for en hypometabolisk tilstand. J. Clin. Endokrinol. Metab. 2003, 88, 337-346. [CrossRef]

48. Mukherjee, K.; Edgett, BA; Burrows, HW; Castro, C.; Griffin, JL; Schwertani, AG; Gurd, BJ; Funk, CD Transkriptomik af fuldblod og urinmetabolomik for at definere adaptive biokemiske veje for højintensiv træning hos 50-60-årige mestre atleter. PLoS ONE 2014, 9, e92031. [CrossRef]

49. Schranner, D.; Kastenmuller, G.; Schonfelder, M.; Romisch-Margl, W.; Wackerhage, H. Ændringer i metabolitkoncentrationen hos mennesker efter et anfald af træning: En systematisk gennemgang af træningsmetabolomiske undersøgelser. Sports Med. Åbent 2020, 6, 11. [CrossRef]

50. Kistner, S.; Rist, MJ; Doring, M.; Dorr, C.; Neumann, R.; Hartel, S.; Bub, A. En NMR-baseret tilgang til identifikation af urinmetabolitter associeret med akut fysisk træning og kardiorespiratorisk fitness hos raske mennesker-resultater af KarMeN-undersøgelsen. Metabolitter 2020, 10, 212. [CrossRef]

51. Kuratsune, H.; Yamaguti, K.; Takahashi, M.; Misaki, H.; Tagawa, S.; Kitani, T. Acylcarnitin-mangel ved kronisk træthedssyndrom. Clin. Inficere. Dis. 1994, 18 (Suppl. 1), S62-S67. [CrossRef]

52. Jones, MG; Goodwin, CS; Amjad, S.; Chalmers, RA Plasma og urincarnitin og acylcarnitiner ved kronisk træthedssyndrom. Clin. Chim. Acta 2005, 360, 173-177. [CrossRef]

53. Zhang, J.; Lys, AR; Hoppel, CL; Campbell, C.; Chandler, CJ; Burnett, DJ; Souza, EC; Casazza, GA; Hughen, RW; Keim, NL; et al. Acylcarnitiner som markører for træningsassocieret brændstoffordeling, xenometabolisme og potentielle signaler til muskelafferente neuroner. Exp. Physiol. 2017, 102, 48-69. [CrossRef]

54. Costa, CG; Guerand, WS; Struys, EA; Holwerda, U.; ten Brink, HJ; Tavares de Almeida, I.; Duran, M.; Jakobs, C. Kvantitativ analyse af urinacylglyciner til diagnosticering af beta-oxidationsdefekter ved brug af GC-NCI-MS. J. Pharm. Biomed. Anal. 2000, 21, 1215-1224. [CrossRef]

55. Maya, J.; Leddy, SM; Gottschalk, CG; Peterson, DL; Hanson, MR Ændret fedtsyreoxidation i lymfocytpopulationer af myalgisk encephalomyelitis/kronisk træthedssyndrom. Int. J. Mol. Sci. 2023, 24, 2010. [CrossRef]

56. Wilkinson, DJ; Smeeton, NJ; Watt, PW Ammoniak metabolisme, hjernen og træthed; gense linket. Prog. Neurobiol. 2010, 91, 200-219. [CrossRef]

57. Chen, S.; Minegishi, Y.; Hasumura, T.; Shimotoyodome, A.; Ota, N. Inddragelse af ammoniakmetabolisme i forbedring af udholdenhedspræstation af tekatechiner i mus. Sci. Rep. 2020, 10, 6065. [CrossRef]

58. Paul, BD; Sbodio, JI; Snyder, SH Cysteinmetabolisme i Neuronal Redox-homeostase. Trends Pharmacol. Sci. 2018, 39, 513-524. [CrossRef]

59. Nkiliza, A.; Parks, M.; Cseresznye, A.; Oberlin, S.; Evans, JE; Darcey, T.; Aenlle, K.; Niedospial, D.; Mullan, M.; Crawford, F.; et al. Kønsspecifikke plasmalipidprofiler af ME/CFS-patienter og deres sammenhæng med smerte, træthed og kognitive symptomer. J. Transl. Med. 2021, 19, 370. [CrossRef]

60. O'Neal, AJ; Glas, KA; Emig, CJ; Vitug, AA; Henry, SJ; Shungu, DC; Mao, X.; Levine, SM; Hanson, MR-undersøgelse af anti-patogen antistofniveauer i myalgisk encephalomyelitis/kronisk træthedssyndrom. Proteomes 2022, 10, 21. [CrossRef]

61. Analyse af post-anstrengelsesbesvær ved brug af en to-dages CPET hos mennesker med ME/CFS.

62. Ware, JE, Jr.; Sherbourne, CD The MOS 36-item shortform health survey (SF-36). I. Begrebsramme og varevalg. Med. Care 1992, 30, 473-483. [CrossRef]

63. Smets, EM; Garssen, B.; Bonke, B.; De Haes, JC Multidimensional Fatigue Inventory (MFI) psykometriske kvaliteter af et instrument til at vurdere træthed. J. Psychosom. Res. 1995, 39, 315-325. [CrossRef]

64. Ford, L.; Kennedy, AD; Goodman, KD; Pappan, KL; Evans, AM; Miller, LAD; Wulff, JE; Wiggs, BR; Lennon, JJ; Elsea, S.; et al. Præcision af en klinisk metabolomisk profileringsplatform til brug ved identifikation af medfødte metabolismefejl. J. Appl. Lab. Med. 2020, 5, 342-356. [CrossRef]

65. Pang, Z.; Chong, J.; Zhou, G.; de Lima Morais, DA; Chang, L.; Barrette, M.; Gauthier, C.; Jacques, PE; Li, S.; Xia, J. MetaboAnalyst 5.0: Indsnævring af kløften mellem rå spektre og funktionel indsigt. Nucleic Acids Res. 2021, 49, W388–W396. [CrossRef] [PubMed]

66. Durbin, BP; Hardin, JS; Hawkins, DM; Rocke, DM En variansstabiliserende transformation for gen-ekspression mikroarray-data. Bioinformatik 2002, 18 (Suppl. 1), S105–S110. [CrossRef] [PubMed]

67. Kuznetsova, A.; Brockhoff, PB; Christensen, RHB lmerTestpakke: Tests i lineære blandede effektmodeller. J. Stat. Softw. 2017, 82, 1-26. [CrossRef]

68. Lenth, R. Emmeans: Estimated Marginal Means, aka Least-Squares Means, 1.8.2; R Pakke. 2022.

69. Blighe, K.; Rana, S.; Lewis, M. EnhancedVolcano: Udgivelsesklare vulkanplot med forbedret farvelægning og mærkning, version 1.16.0; R Pakke. 2022.

70. Smirnov, NV Om estimering af uoverensstemmelsen mellem empiriske fordelingskurver for to uafhængige prøver. Tyr. Matematik. Univ. Moskva 1939, 2, 3–14.

71. Kolde, R. Pheatmap: Pretty Heatmaps, 1.0.12; R Pakke. 2019.

Ansvarsfraskrivelse/Udgiverens note:Udtalelserne, meningerne og dataene i alle publikationer er udelukkende de enkelte forfatter(e) og bidragyder(e) og ikke fra MDPI og/eller redaktør(erne). MDPI og/eller redaktørerne fraskriver sig ansvaret for enhver skade på personer eller ejendom som følge af ideer, metoder, instruktioner eller produkter, der henvises til i indholdet.

【Kontakt】 E-mail: george.deng@wecistanche.com / WhatsApp:008613632399501/Wechat:13632399501