Overførsel af klassisk svinepestvirus hos samboende smågrise med forskellige immunstatus efter svækket levende vaccine

Enkel oversigt:

Klassisk svinepest er et meget farligt patogen, der rammer tamsvin. Vaccination med den modificerede levende vaccine er afgørende for at forebygge og kontrollere klassisk svinepest. Imidlertid kan mange faktorer, såsom moderligt afledte antistoffer via råmælk, interferere med levende vaccines effektivitet, hvilket fører til ufuldstændig beskyttelse i kommercielle besætninger. I denne undersøgelse undersøgte vi overførslen af ​​klassisk svinepestvirus i forsøgsgrise med forskellige immunstatus efter vaccination. En patogenfri patogenfri pattegrise inficeret med klassisk svinepestvirus fungerede som viral donor og primær angriber og levede sammen med pattegrise med moderligt afledte antistoffer, der havde eller ikke var blevet vaccineret. Ifølge resultaterne var de fleste af pattegrise med moderligt afledte antistoffer, der blev vaccineret, fuldt beskyttet mod kontaktoverførsel fra den virale donor og blokeret viral transmission til tredjepart (disse pattegrise, der sekundært blev eksponeret gennem samliv). Cellemedieret immunitet, repræsenteret ved specifikke interferon- -udskillende celler, fungerede som nøglen til viral clearance og genopretning. Derimod havde de uvaccinerede smågrise med lave niveauer af moderligt afledte antistoffer accelereret klassisk svinepestvirusinfektion efter virusinvasionen. Som konklusion inducerer vaccination stadig solid immunitet i kommercielle besætninger under moderlig afledt antistofinterferens og kan blokere viral transmission i besætninger.

cistanche planteforøgende immunsystem

Abstrakt:

Klassisk svinepest (CSF) er en systemisk hæmoragisk sygdom, der rammer tamsvin og vildsvin. Den modificerede levende vaccine (MLV) inducerer hurtig og solid beskyttelse mod CSF-virus (CSFV) infektion. Maternelt afledte antistoffer (MDA'er) via råmælk kan interferere med MLV's effektivitet, hvilket fører til ufuldstændig beskyttelse mod CSFV-infektion hos grise. Denne undersøgelse undersøgte CSFV-transmission blandt eksperimentelle smågrise med forskellige post-MLV-immunstatusser. Nitten pattegrise, 18 med MDA'er og 1 specifik patogenfri pattegrise inficeret med CSFV, der fungerede som CSFV-donor, levede sammen med smågrise, der havde eller ikke havde fået MLV. Fem sjettedele af pattegrise med MDA'er, der havde fået en dosis MLV, var fuldt beskyttet mod kontakttransmission fra CSFV-donoren og transmitterede ikke CSFV til de smågrise, der blev sekundært eksponeret gennem samliv. Cellemedieret immunitet, repræsenteret af de anti-CSFV-specifikke interferon- -udskillende celler, var nøglen til viral clearance og restitution. Efter samliv med en CSFV-donor udviste de uvaccinerede smågrise med lave MDA-niveauer CSFV-infektion og spredte CSFV til andre smågrise gennem kontakt; dem med høje MDA-niveauer kom sig, men fungerede som asymptomatiske bærere. Som konklusion inducerer MLV stadig solid immunitet i kommercielle besætninger under MDA-interferens og blokerer CSFV-transmission i disse besætninger.

Nøgleord:

klassisk svinepest; modificeret levende vaccine; moderligt afledt antistof; smitte

1. Introduktion

Klassisk svinepest (CSF) er en grænseoverskridende, meget smitsom, hæmoragisk sygdom, der rammer tamsvin og vildsvin og er forårsaget af den klassiske svinepestvirus (CSFV) [1,2]. CSF er en anmeldelsespligtig sygdom af Verdensorganisationen for Dyresundhed (WOAH), og CSF er stadig en endemisk sygdom i Asien, Sydamerika, Mellemamerika og Caribien. Kun nordamerikanske, oceaniske og vesteuropæiske lande har med succes udryddet CSF [3-6].

CSFV er et indkapslet enkelt-stamme RNA-virus afPestivirusslægten af ​​Flaviviridae-familien, der også omfatter den bovine virale diarrévirus og grænsesygdomsvirus [1,2]. Det virale genom indeholder cirka 12,3 kb og koder for 3898 aminosyrer af polyprotein, som senere bearbejdes til fire strukturelle (C, Erns, E1 og E2) og otte ikke-strukturelle (Npro, p7, NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A, og NS5B) proteiner af virale og cellulære proteaser [7]. Baseret på E2- eller NS5B-sekvenserne er CSFV klassificeret i tre genotyper med tre eller fire undertyper (1.1, 1.2, 1.3; 2.1, 2.2, 2.3; 3.1, 3.2, 3.3, 3.4) [8]. Afhængigt af CSFV-virulens og grisefaktorer, herunder alder, race, sundhedstilstand og immunstatus, kan CSFV-inficerede grise udvise enten akutte, subakutte eller kroniske kliniske tegn [9-11]. Grise inficeret med højvirulens CSFV udviser akut feber og alvorlige hæmoragiske læsioner og udskiller høje virusmængder i deres afføring, spyt og sekreter i løbet af deres korte overlevelsesdage. I modsætning hertil viser grise inficeret med moderat virulens og lavvirulens CSFV subakutte og kroniske kliniske tegn og mildere læsioner og udskiller moderat-lave niveauer af CSFV i deres afføring, spyt og sekreter i løbet af deres relativt længere overlevelsesdage [12,13 ]. I marken kan primært inficerede grise spille en fremtrædende rolle i den sekundære overførsel af CSFV til andre grise med variabel immunitet over for CSFV. Overførbarheden af ​​moderat virulens og højvirulens CSFV er højere end for lavvirulens CSFV [12,13].

Vaccination er afgørende for forebyggelse og kontrol af CSF i endemiske lande. Den modificerede levende vaccine (MLV) er en højeffektiv, sikker og overkommelig vaccine, der er den mest udbredte blandt kommercielle besætninger. MLV kan hurtigt inducere immunitet for at give delvis beskyttelse 3 dage efter vaccination og fuldstændig beskyttelse 5 dage efter vaccination [14-16]. Imidlertid kan mange faktorer, herunder vaccinekvalitetsgrises sundhedsstatus og niveauet af maternalt afledte antistoffer (MDA), reducere MLV's effektivitet, hvilket fører til ufuldstændig beskyttelse af vaccinerede grise [14-16]. I CSF-endemiske besætninger afhænger tidspunktet for MLV-vaccination af grisenes MDA-niveauer; høje niveauer af MDA'er interfererer med MLV's effekt, og lave MDA-niveauer øger pattegrises risiko for infektion [17,18]. Derfor skal formuleringerne af MLV-vaccinationsprogrammer i besætninger baseres på fald i niveauerne af MDA'er. Et regelmæssigt implementeret vaccinationsprogram mod CSF i Taiwan involverer vaccination af drægtige søer for at give MDA'er gennem deres råmælk til nyfødte og derefter administrere den første dosis MLV til pattegrise ved 3-12 ugers alderen. Ifølge overvågning i Taiwan er de gennemsnitlige titere af anti-CSFV-neutraliserende antistoffer (NA'er) af MDA'er i pattegrise på tidspunktet for deres første MLV-vaccination højere end 1:32 [19], hvilket kan forringe MLV's effektivitet og resultere i forskellige immunstatus i besætninger. Denne undersøgelse beskriver et dyreforsøg for at undersøge MLV's evne til at beskytte smågrise med varierende niveauer af MDA'er efter samliv med en CSFV-inficeret pattegrise, der fungerede som en CSFV-donor (dvs. den 'primære invader').

2. Materialer og metoder

2.1. Celler og virus

Porcine-circovirus-type-1-fri svinenyre-15 (PK-15) celler blev dyrket i minimum essentielt medium (Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA) med 5 % føtalt bovint serum (FBS) og inkuberet ved 37 ◦C i 5 % CO2. PK-15-cellerne understøttede CSFV-formering, inklusive Lapinized Philippines Coronel (LPC)-vaccinestammen af ​​genotype 1.1 og TD/96-stammen af ​​genotype 2.1. Virustitrene for LPC- og TD/96-stammerne var henholdsvis 107,71 og 105,87 vævskulturinfektiøs dosis 50 % (TCID50).

2.2. Eksperimentelt design

I alt {{0}}ugegamle smågrise bestående af 1 specifik patogenfri (SPF) gris uden anti-CSFV NA'er (Gruppe 1) og 18 raske smågrise (Gruppe 2-5) fra LPC-vaccineret søer fra en CSFV-fri besætning (figur 1) blev brugt i forsøget. De 18 raske pattegrise blev tilfældigt opdelt i fire grupper (gruppe 2-5); middelværdierne af anti-LPC NA-titeren (log2) blandt gruppe 2-5 var henholdsvis 3,7 ± 2,2, 3,7 ± 2,3, 4,3 ± 2,2 og 4,3 ± 1,3 log2-fold og var ikke signifikant forskellige ved 0 dage efter eksperiment (DPE). SPF-grislingen (Gruppe 1) blev podet ironisk ved at bruge 5 × 105 TCID50 TD/96-stammen ved 7 DPE og tjente som den primære invaderende eller CSFV-donor, når den boede i værelse 12 med gruppe 2 og 3 (figur 1). For at teste, om MDA'erne reducerede effektiviteten af ​​MLV, blev gruppe 2 (n=6) vaccineret med en enkelt dosis LPC-vaccine (over 1 × 104 TCID50/dosis) ved 0 DPE. For at teste MDA-beskyttelsesevnen blev gruppe 3 (kontrollen for gruppe 2; n=3) ikke vaccineret med LPC-vaccinen, og disse smågrise udviste således MDA-henfald efter 7 dage efter første kontakt med den primære angriber. Gruppe 1 (primær angriber) boede sammen med gruppe 2 og 3 i 10 dage (fra 7 til 17 DPE). Gruppe 2 blev derefter overført til værelse 2 for at tjene som sekundære angribere gennem samliv med gruppe 4 (n=6) fra 17 til 36 DPE. Gruppe 3 blev overført til værelse 4 for at bo sammen med gruppe 5 (n=3). Gruppe 4 og 5 var således smågrise med 17 dages MDA-henfald efter første kontakt med de sekundære angribere. Institutional Animal Care and Use Committee under Animal Health Research Institute godkendte dette dyreforsøg (godkendelsesnummer A09007).

Figur 1. Eksperimentelt design.

Dyrene blev overvåget dagligt for kliniske tegn, og hver parameter blev scoret fra 0 til 3, hvilket repræsenterede normal til svær, ifølge Mittelholzers metode [19]. Rektal temperatur blev målt, og blod-, spyt- og fæcesprøver blev indsamlet to gange om ugen indtil 35 DPE. Prøver blev analyseret for CSFV-belastninger og anti-CSFV-antistoffer. En obduktion blev udført ved 18 DPE for gruppe 1, ved 36 DPE for gruppe 2 og 3 og ved 39 DPE for gruppe 4 og 5. Miljøprøverne (dvs. podninger fra hegnet, afføring på gulvet, fodertruget, og drikkefontænen) blev også analyseret for CSFV.

2.3. Kvantitativ omvendt transkription i realtid polymerasekædereaktion (QRRT-PCR) af CSFV

Prøvernes virale RNA'er blev ekstraheret af QIAamp® Viral RNA Mini Kit (QIAGEN, Hilden, Tyskland) og blev påvist gennem kvantitativ revers transkriptionspolymerasekædereaktion (QRRT-PCR) [20]. QRRT-PCR blev brugt til at detektere de forskellige genotyper og kvantitativt analysere CSFV-belastningerne af prøverne.

cistanche fordele for mænd styrker immunsystemet

Klik her for at se produkter fra Cistanche Enhance Immunity

【Spørg om mere】 E-mail:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

2.4. Anti-CSFV NA'er

Opvarmning af pattegrisens sera til 56 ◦C inaktiveret komplement muliggjorde påvisning af anti-LPC og TD/96 NA'er. Kort sagt, 2-fold serielt fortyndede serumprøver, begyndende ved 1:4, blev blandet med lige store volumener af 100 TCID50 af LPC- eller TD/96-stammen. Blandingerne blev inkuberet ved 37 ◦C i 1 time og efterfølgende overført til PK-15-celler i 96-brøndsplader. Efter inkubation i 3 dage blev cellerne fikseret og farvet for at påvise tilstedeværelsen af ​​CSFV-antigen gennem indirekte fluorescensassay. Antistoffets neutraliserende titer er log2 for antistoffets fortyndingsfaktor (reciprok af fortynding), når 50 % af brøndene er beskyttet mod infektion.

2.5. CSFV-specifikt interferon (IFN)- -Secernerende celler

For at evaluere den anti-CSFV-cellemedierede immunitet (CMI) af smågrisene blev der udført en ex vivo CSFV-specifik IFN-responstest af de perifere mononukleære blodceller (PBMC'er). PBMC'erne fra det EDTA-antikoagulerede blod blev udsat for centrifugering ved 400× g ved at bruge Histopaque-1077 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA). PBMC'erne blev suspenderet i RPMI 1640 medium (Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA) indeholdende 10% (vol/vol) varmeinaktiveret FBS, 100 enheder/ml penicillin G, 100 µg/ml strep tomycin og 0,25 µg mL amphotericin B. Antallet af CSFV-specifikke IFN- --udskillende PBMC'er blev påvist gennem porcin IFN-enkeltfarvet enzymatisk ELISPOT-assay (CTL, Shaker Heights, OH, USA). I 96-brøndsplader blev PBMC'er ved 5 × 106 celler/ml ved 100 µL pr. brønd med porcint IFN-indfangningsantistof allokeret til den falske gruppe (podet med RPMI 1640-medium), TD/96-gruppen (inficeret med 0,1 MOI), og ConA-gruppen (suppleret med 5 µg/ml concanavalin A; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), der tjener som den positive kontrol. Dupleks-stimuleringer blev anvendt hver gang. Efter 48 timers stimulering blev brøndene vasket, det IFN- -detekterede antistof blev bundet, og substratet blev podet. Pletterne i hver brønd blev screenet og analyseret under anvendelse af CTL-analysatoren.

2.6. Immunhistokemi

Det lymfoide væv blev undersøgt gennem immunhistokemisk assay ved at bruge Super Sensitive Polymer HRP IHC-detektionssystem (BioGenex, Haag, Holland) og det 1C7A1 monoklonale antistof mod genotype 2.1 CSFV-stammerne [21]. Udviklingen af ​​en brun farve indikerer tilstedeværelsen af ​​CSFV.

2.7. Statistikker

En variansanalyse og Duncans multiple range-test blev brugt til at bestemme de statistisk signifikante forskelle mellem grupper. Dataanalyse blev udført ved hjælp af SAS (SAS Institute, Cary, NC, USA). En p-værdi på mindre end 0.05 indikerede statistisk signifikans.

3. Resultater

3.1. Kliniske tegn

Alle smågrise var raske før forsøget (tabel 1). Gruppe 1 pattegrise var CSFV-donoren (primær angriber) og blev inokuleret med TD/96-stammen. De feber- og CSFV-associerede kliniske tegn i gruppe 1 blev påvist ved henholdsvis 12 DPE og 13 DPE, med kontinuerligt stigende score fra 13-18 DPE, der toppede med en score på 20 ved 18 DPE. For pattegrise i gruppe 2 og 3, som levede sammen med CSFV-donoren, var gruppe 2, som bestod af pattegrise med MDA'er, der var blevet vaccineret med LPC-vaccinen, raske og udviste ingen feber eller nogen CSFV-associerede kliniske tegn under forsøget . De i gruppe 3, som omfattede pattegrise med MDA'er, der ikke havde gennemgået LPC-vaccination, udviste dog feber ved 23 DPE (16 dage efter første kontakt, DP1C), og antallet af febrile grise steg fra 23-36 DPE. Feberen var korreleret med CSFV-associerede kliniske tegn, der manifesterede sig ved 24 DPE (17 DP1C). Selvom en pattegrise (8138) viste milde kliniske tegn (score under 5), forværredes de to andre pattegrise klinisk fra 24-36 DPE, med deres score på mellem 12 og 16. Gris 8136 i gruppe 3 døde ved 29 DPE. Gruppe 4-grise, der var i kontakt (samboende) med grise fra gruppe 2, var også raske og havde ikke feber eller CSFV-associerede kliniske tegn i forsøgsperioden. Gruppe 5-grisene, der var i kontakt med dem i gruppe 3, udviste feber ved 27 DPE (10 dage efter anden kontakt, DP2C) og CSFV-associerede kliniske tegn ved 30 DPE (13 DP2C). Antallet af febergrise og de kliniske score i gruppe 5 steg over tid; scoren ved 39 DPE var 21 ± 1,4, varierende mellem 19 og 22.

Tabel 1. Procentdel af febrile smågrise i hver gruppe i forsøgsperioden.

Ifølge de kliniske parametre kunne tilstedeværelsen af ​​kun MDA'er (Gruppe 3) ikke beskytte pattegrise mod kontakttransmission induceret af den primære angriber (Gruppe 1). En enkelt dosis af LPC-vaccinen ud over MDA'er (Gruppe 2; dvs. den udbredte praksis) tilbød beskyttelse mod kontakttransmission induceret af den primære angriber (Gruppe 1; Tabel 1). Den udbredte vaccinationspraksis gavnede også de sekundært invaderede smågrise (dvs. gruppe 4, som kun havde MDA'er, men var fri for feber og kliniske tegn). Klinisk rekapitulerede situationen i gruppe 5 (grise med kontakttransmission induceret af de sekundære angribere) situationen i gruppe 3 (kontakttransmission induceret af den primære angriber).

3.2. CSFV Viremia

CSFV TD/96-stammen blev ikke påvist i blodet fra nogen af ​​smågrisene før eksperimentet (figur 2A og 3A). Efter TD/96-podning blev TD/96-viræmi i gruppe 1-grislingen først påvist ved 10 DPE (3 dage efter inokulering, POI) og kontinuerligt påvist indtil 17 DPE. CSFV-belastningerne steg fra 101,2 TCID50/mL ved 10 DPE til 106,4 TCID50/mL ved 17 DPE. I gruppe 2, bestående af smågrise med LPC-vaccination, som havde levet sammen med den primære angriber, blev der kun påvist TD/96-viræmi hos én pattegrise (8134) fra 21-35 DPE. CSFV-belastningerne i blodet af Pattegris 8134 toppede (104,9 TCID50/mL) ved 24 DPE og faldt efterfølgende til 101,7 TCID50/mL ved 35 DPE. I gruppe 3, bestående af smågrise uden LPC-vaccination, som havde levet sammen med den primære angriber, blev TD/96-viræmi først påvist hos 66,7 % (2/3) af smågrisene ved 21 DPE (14 DP1C), og alle var positive med 24 DPE. Piglet 8138 var dog negativ for TD/96-viræmi fra 28-35 DPI (figur 2A). I gruppe 4, bestående af pattegrise, der levede sammen med gruppe 2 i stue 2, blev TD/96-viræmi ikke påvist i forsøgsperioden. Alle smågrise i gruppe 5, som omfattede de smågrise, der havde været i kontakt med gruppe 3, var positive for TD/96-viræmi fra 31-35 DPE. CSFV-belastningerne varierede mellem 105,1 og 106,7 TCID50/mL ved 35 DPE (figur 3A). I gruppe 2 og 3 forsinkede tilstedeværelsen af ​​MDA'er den første påvisning af viræmi indtil 10 DP1C (dvs. pattegrise forblev asymptomatiske indtil 17 DPE; tabel 1) med den primære angriber sammenlignet med dag 3 POI i gruppe 1 i den akutte fase. Den yderligere enkeltdosis af LPC-vaccinen (gruppe 2) reducerede procentdelen af ​​viremiske grise med 83 % (figur 2A). Tilsvarende reducerede den ekstra enkeltdosis af LPC-vaccinen virusbelastningen i blodet fra 28-35 DPE (figur 3A). LPC-vaccinationen af ​​gruppe 2 gavnede også de gruppe 4-grise, som de efterfølgende levede sammen med (sekundært invaderede), på trods af at en af ​​gruppe 2-grisene havde forbigående viræmi (figur 2A) og spyt (figur 2B) og fækal udskillelse (figur 2C) af TD /96. Denne ændring i den viremiske status korrelerede med den, der blev bestemt på basis af de kliniske parametre (afsnit 3.2), selvom laboratoriepåvisningen var mere følsom.

Figur 2. Antal (procent) af pattegrise positive for TD/96 som påvist gennem QRRT-PCR [20] af (A) blod, (B) spyt og (C) afføring fra pattegrise i hver gruppe i forsøgsperioden. Gruppe 1 pattegrise blev ironisk nok inokuleret med TD/96 ved 7 DPE og tjente som CSFV donor (dvs. primær invader) for gruppe 2 og 3. Grisene i gruppe 2, der gennemgik LPC-vaccination ved 0 DPE, og dem i gruppe 3, der ikke gennemgået LPC-vaccination sammen med gruppe 1-grisen fra 7-17 DPE. Smågrisene i gruppe 4 og 5 levede sammen med dem i gruppe 2 og 3 (dvs. sekundære angribere), henholdsvis fra 17-36 DPE.

Figur 3. CSFV-belastninger er til stede i (A) blod, (B) spyt og (C) fæces fra smågrisene i hver gruppe.

3.3. CSFV-udskillelse i spyt

CSFV TD/96-stammen blev ikke påvist i spyt fra nogen af ​​smågrisene før eksperimentet (figur 2B og 3B). Spyttet fra gruppe 1-grislingen var først positivt for TD/96 ved 14 DPE (7 DP1C), hvilket fortsatte indtil 17 DPE. CSFV-belastningerne steg fra 105,8 TCID50/mL ved 14 DPE til 107,6 TCID50/mL ved 17 DPE. Navnlig i gruppe 2-grise, der var blevet vaccineret med LPC og havde levet sammen med CSFV-donoren, blev TD/96 først påvist i 66,7 % (4/6) af spytprøverne ved 14 DPE (7 DP1C), som blev negative derefter. Senere afsmittede en anden pattegrise (1/6, pattegrise 8134 med TD/96-viræmi; figur 2A), TD/96 i sit spyt fra 21-24 DPE ved 101,2 og 102,7 TCID50/mL, et lavere niveau end de førnævnte smågrise. . I gruppe 3 med de smågrise med kun MDA'er og uden LPC-vaccination, der havde levet sammen med CSFV-donoren, blev TD/96 initialt påvist i 66,7 % (2/3) af spytprøverne ved 21 DPE, og alle spytprøver var positive pr. 24 DPE. I gruppe 4, der omfattede de smågrise, der levede sammen med dem i gruppe 2, blev TD/96 ikke påvist i spytprøverne under forsøget, hvorimod i gruppe 5, der omfattede de smågrise, der levede sammen med dem i gruppe 3, var alle spytprøver positive for TD/96 fra 24–35 DPE. CSFV-belastningerne steg over tid og varierede fra 105,9 til 107,3 ​​TCID50/mL med 35 DPE. I alt fire sjettedele af smågrisene i gruppe 2 (med enkeltdosis LPC-vaccination) havde TD/96-positivt spyt ved 14 DPE før viræmi. CSFV blev påvist tidligere hos smågrise i gruppe 2, der havde været i kontakt med gruppe 1-grisene under dens TD/96-udsætning. En pattegrise (Piglet 8134) i gruppe 2 udviste senere forbigående udskillelse fra 21-24 DPE, hvilket er mere sandsynligt repræsentativt for CSFV's replikation i spytkirtlerne efter viræmi. Ifølge sammenligningen mellem gruppe 2 og 3 reducerede LPC-vaccinationen CSFV-udskillelsen.

3.4. CSFV udskillelse i afføring

CSFV TD/96-stammen blev ikke påvist i fæces fra nogen af ​​smågrisene før eksperimentet (figur 2C og 3C). Afføringen fra gruppe 1-grisen var TD/96-positiv først ved 14 DPE (7 DPIC), hvilket fortsatte indtil 17 DPE. CSFV-belastningerne steg fra 105,1 TCID50/g ved 14 DPE til 108,8 TCID50/mL ved 17 DPE. I gruppe 2, omfattende smågrise med LPC-vaccination, som levede sammen med gruppe 1 CSFV-donor, blev kun pattegrise 8134 forbigående udstødt ved 24 DPE (17 DPIC), mens alle de andre pattegrise i gruppe 2 var negative. I gruppe 3, bestående af pattegrise uden LPC-vaccination, der levede sammen med CSFV-donoren, var to tredjedele af pattegrise (alle undtagen Grisling 8138) positive mellem 21 (14 DP1C) og 35 DPE, i løbet af hvilket tidsrum CSFV-belastningerne steg fra 105,1 TCID50/g ved 21 DPE til 107,5 TCID50/mL ved 31 DPE. De fækale prøver af Pattegris 8138 med forbigående TD/96-viræmi var dog ikke positive for TD/96. I gruppe 4, bestående af de smågrise, der levede sammen med dem i gruppe 2, var alle fækale prøver negative for TD/96 i forsøgsperioden. I gruppe 5, som omfattede pattegrise, der levede sammen med gruppe 3, steg antallet af TD/96-positive fækale prøver over tid fra 24-35 DPE, og belastningerne varierede fra 105,7 til 107,2 TCID50/g ved 35 DPE . I gruppe 5 fandt den første påvisning sted ved 24 DPE (7 DP2C), hvilket svarede til den i gruppe 1 (14 DPE), og den overordnede profil svarede til viræmiens (figur 2A), hvilket tyder på, at CSFV replikerede lokalt efter viræmi . Som beskrevet i afsnit 3.3 og 3.4 var fæces og spyt de primære vehikler til CSFV-kontakttransmission.

cistanche tubulosa-forbedrer immunsystemet

3.5. CSFV-belastninger i væv opnået gennem obduktion

Væv fra gruppe 1 CSFV-donorgrisene og pattegrise i gruppe 3 og 5, som den levede sammen med, var TD/96-positive (tabel 2). TD/96-belastningerne i vævene fra gruppe 1-grislingen varierede mellem 103,76 og 109,37 TCID50/g. I gruppe 5, omfattende de smågrise, der var i kontakt med dem i gruppe 3, blev TD/96 påvist i alle smågrise og fordelt på alle væv med højere belastninger i de hæmatolymphoide organer (mandler, lymfeknuder og milt) og disse organer med en mere rigelig blodforsyning (lever, lunger, hjerte og nyrer), som vist i figur 2A, C. De højeste TD/96-belastninger var i lymfevævet (over 109,0 TCID50/g). I modsætning hertil var det ikke-hæmatolymphoide væv fra de sammenboende pattegrise i gruppe 2 og 4, bortset fra pattegrise 8134 i gruppe 2, som havde forbigående TD/96-viræmi, kun lavt niveau TD/96-positive i blodet, mandlerne, lyskelymfeknuderne , og submaxillære lymfeknuder, med disse niveauer mellem 101,65 og 103,78 TCID50/g. I gruppe 3, omfattende smågrise uden LPC-vaccination, som havde været i kontakt med gruppe 1 CSFV-donor, blev TD/96 påvist i alt væv fra to af de tre pattegrise (undtagen pattegrise 8138). Pattegris 8138 fra gruppe 3, som havde forbigående TD/96-viræmi, havde TD/96 i mandlerne, submaxillære lymfeknuder og bronchial-lymfeknuder, selvom virusbelastningen var lavere end gennemsnittet og varierede mellem 103,08 og 104,69 TCID50/ml.

Tabel 2. CSFV-belastninger påvist i forskellige væv fra pattegrise gennem CSFV QRRT-PCR

3.6. CSFV i forsøgsmiljøet

Hegnet, afføring på gulvet, fodertrug og drikkefontæne i hvert forsøgsrum blev testet for TD/96 gennem QRRT-PCR (tabel 3). TD/96 blev detekteret ved 14 og 17 DPE i afføringen på gulvet i værelse 12, hvor gruppe 1 CSFV-donoren boede sammen med pattegrise i gruppe 2 og 3. Hegnet, fodertrug og drikkefontæne testede alle negative. Prøverne fra værelse 2, hvor gruppe 2 og 4 boede sammen, var alle negative fra 21-35 DPE. TD/96 blev først detekteret i afføringen på gulvet i værelse 4 (gruppe 3 og 5) ved 24 DPE. Efterfølgende blev TD/96 detekteret på hegnet, fodertrug og drikkefontæne i rum 4 fra 28-35 DPE. Disse resultater indikerer, at fæces (som potentielt kunne være til stede i alle typer miljøprøver) og spyt (som højst sandsynligt ville være til stede i fodertruget og drikkevandsprøverne) var de primære midler til kontaktoverførsel. Den forbigående virale udskillelse af gruppe 2-grisene (figur 2 og 3) blev ikke indført i rum 2, hvor de levede sammen med smågrisene i gruppe 4.

Tabel 3. CSFV-belastninger af miljøprøver fra forsøgsrummene.

3.7. CSFV-specifikke IFN- -Secernering af PBMC'er

CSFV-specifikke IFN- --udskillende celler blev undersøgt i PBMC'erne for smågrisene i gruppe 2 til 5 mellem 7 og 35 DPE (figur 4). I gruppe 2-grisene var antallet af IFN- --udskillende celler, skønt med en frekvens på mindre end 0.1 % af PBMC'erne, signifikant højere end i gruppe 3, 4 og 5 mellem 7 og 35 DPE. Antallet af IFN- -udskillende celler i Pattegris 8134 i gruppe 2, som havde forbigående TD/96-viræmi inden for en lignende tidsramme (Figur 2A), korrelerede med de signifikant lavere tal på 56 (21 DPE) og 62 (28) DPE; gruppegennemsnit større end eller lig med 116); disse tal nåede dog gruppegennemsnittet med 35 DPE. Antallet af CSFV-specifikke IFN- -udskillende celler i gruppe 3, 4 og 5 var ikke signifikant forskellige.

Figur 4. CSFV-specifikke IFN- --udskillende celler blev undersøgt i PBMC'erne for smågrise i gruppe 2 til 5 mellem 7 og 35 DPE. Smågrisene i gruppe 2 med LPC-vaccination ved 0 DPE og de i gruppe 3 uden LPC-vaccination levede sammen med gruppe 1 CSFV-donorgrisene fra 7 til 17 DPE. Smågrisene i gruppe 4 og 5 levede sammen med dem i henholdsvis gruppe 2 og 3, fra 17 til 35 DPE. Værdier med forskellige hævede bogstaver, a og b, angiver en statistisk signifikant forskel (p < 0.05) fra hinanden. Der er ingen væsentlige forskelle mellem værdier, der indeholder det samme bogstav

3.8. Anti-CSFV NA'er

Anti-CSFV NA'erne i pattegriseseraene blev genereret som reaktion på enten LPC-stammen (figur 5A) eller TD/96-stammen (figur 5B). Anti-CSFV NA'er blev ikke påvist i gruppe 1 CSFV-donoren mellem 7 og 17 DPE. Sera fra pattegrise i gruppe 2 til 5 ved {{10}} DPE udviste titere på mellem 5 og 7 log2 (mellem 32- og 128-fold). Efter at gruppe 2-grisene var vaccineret med LPC-vaccinen og levet sammen med CSFV-donoren, faldt den gennemsnitlige titer ikke mellem 0 og 28 DPE. På grund af stigningen i anti-LPC NA'er i Piglet 8134 fra 31-35 DPE, steg den gennemsnitlige titer for gruppe 2 signifikant. I gruppe 3-grise uden LPC-vaccination, der levede sammen med CSFV-donoren, faldt den gennemsnitlige titer gradvist mellem 0 og 28 DPE. Da titeren af ​​Pattegris 8138 gradvist steg mellem 21 og 35 DPE, steg den gennemsnitlige titer for gruppe 3 omvendt mellem 31 og 35 DPE. De gennemsnitlige titere for gruppe 4 og 5 faldt over tid. Generelt var anti-TD/96 NA-profilen for hver gruppe parallel med anti-LPC NA-profilerne, selvom anti-TD/96 NA-gennemsnittet var mellem 1,3 og 3,7 log2 (omtrent 2-12- gange; Figur 5B), som var lavere end anti-LPC NA-gennemsnittet.

Figur 5. Anti-LPC (A) eller TD/96 (B) NA'erne i sera fra pattegrise i hver gruppe under forsøgsperioden. Gruppe 1 pattegrise blev ironisk inokuleret med TD/96 ved 7 DPE og tjente som CSFV-donor (dvs. primær invaderer), der efterfølgende levede sammen med smågrisene i gruppe 2 og 3 fra 7 til 17 DPE. Gruppe 2-grisene blev LPC-vaccineret ved 0 DPE, og gruppe 3-grisene blev ikke vaccineret med LPC. Smågrisene i gruppe 4 og 5 levede sammen med dem i henholdsvis gruppe 2 og 3, fra 17 til 35 DPE.

Den estimerede halveringstid af MDA'er afledt af antistoftiterne fra gruppe 4-grise overført gennem råmælken fra LPC-vaccinerede søer var 10,7 dage (figur 5A). Denne vurdering understøttes af negativ feber og kliniske tegn (tabel 1), den negative viræmi, spyt og fækal virusbelastning (figur 2 og 3) og væv (tabel 2; se afsnit 3.9) og miljøprøver (tabel 3) ) af gruppe 4-grisene, som indikerede, at de ikke var blevet inficeret med TD/96-virussen i forsøgsperioden.

3.9. Immunhistokemi påvisning af CSFV-antigensignaler i obduktionsvævsprøver

Signalerne fra CSFV TD/96 blev detekteret i lymfoide væv fra gruppe 1 CSFV-donoren (figur 6I), fra en pattegrise i gruppe 2 (Piglet 8134, som havde CSFV-belastninger i blodet, der var på det højeste niveau på 104,9 TCID50 /ml ved 24 DPE, og det faldt efterfølgende til 101,7 TCID50/ml ved 35 DPE), for tre smågrise i gruppe 3 og af tre smågrise i gruppe 5. Gruppe 4-grisene var ikke positive for TD/96 (figur 6J). De stærke CSFV TD/96-signaler var bredt fordelt i tonsiller, milte og lymfeknuder hos pattegrise i gruppe 1, 3 (undtagen pattegrise 8138) og 5. For pattegrise 8134 (gruppe 2) med forbigående TD/96-viræmi , spredte TD/96-positive signaler var for det meste lokaliseret i de parenkymale områder af mandlerne, medulla i lyskelymfeknuderne og submaxillære lymfeknuder (figur 6A-D), hvilket er i overensstemmelse med resultaterne af virusbelastningen kvantificering af disse væv (tabel 2). Morfologien og fordelingen af ​​de TD/96-positive celler var stærkt makrofagiske. I Pattegris 8138 (Gruppe 3) med forbigående TD/96-viræmi svarede antallet og fordelingen af ​​de TD/96--positive signaler (Figur 6E-H) til dem i Piglet 8134.

Figur 6. CSFV-antigener i de lymfoide væv blev markeret af det 1C7A1 monoklonale antistof. En lymfeknude (A, B) og tonsil (C, D) fra Piglet 8134 (Gruppe 2), som havde forbigående TD/96-viræmi, præsenterer det brune TD/96-positive signal. En lymfeknude (E, F) og tonsil (G, H) fra Piglet 8138 (Gruppe 3), som havde forbigående TD/96-viræmi, præsenterer det brune TD/96-positive signal. En lymfeknude (I) fra Grisling 8150 (Gruppe 1) viser et diffust brunt TD/96-positivt signal i paracortex. En lymfeknude (J) af pattegris 8146 (gruppe 4) var negativ for TD/96

I Pattegris 8134 (Gruppe 2) og Pattegris 8138 (Gruppe 3), begge med forbigående lavniveauviræmi (Figur 2A og 3A; Tabel 2), var CSFV-antigener stadig påviselige i vævsmakrofagerne i mandlerne (Figur 6A-H) , hvilket igen viste, at mandlerne er et ideelt væv til CSFV-diagnose.

4. Diskussion

Vaccination er afgørende for CSF-forebyggelse og kontrol i CSF-endemiske områder. En udbredt praksis er at forsyne nyfødte med MDA'er gennem colostrum fra vaccinerede søer og derefter at administrere en enkelt dosis MLV (såsom LPC), når pattegrise er i alderen 3 til 6 uger; denne procedure blev anvendt for gruppe 2 i den foreliggende undersøgelse (figur 1). Mange faktorer, herunder vaccinekvalitet, vaccinationsprogramprocedurer (f.eks. tidsplaner, typer og ruter), og grises MDA-niveauer og sundhedsstatus (inklusive individuel variation), kan påvirke effektiviteten af ​​CSFV-vaccination, hvilket reducerer beskyttelsen mod infektion [14– 16]. I denne undersøgelse havde smågrisene i gruppe 2 og 3 høje MDA-niveauer ved 1:32-128- gange ved 7 DPE (figur 5A; dvs. 0 DP1C med gruppe 1 CSFV-donoren; Figur 1), forsinkede MDA'erne infektionens fremskridt, som vist ved den sene fremkomst af viræmien ved 10 DP1C (Gruppe 2 og 3; Figur 2A). Dette medførte, at pattegrise var asymptomatiske (tabel 1), selvom nogle af pattegrise stadig udskiller virus i deres spyt og afføring (figur 2B, C). Disse lejlighedsvise virale udskillelser i gruppe 2 repræsenterede individuelle variationer i gruppens helbredsstatus eller immunrespons analyseret i denne undersøgelse. MDA'er alene kan kun tilbyde delvis beskyttelse, før viral replikation forekommer i blodet og vævet. Anti-CSFV TD/96 NA-niveauet blev ikke positivt konverteret efter LPC-vaccination (figur 5B), selv efter at smågrisene levede sammen med den primære angriber i gruppe 1. Dette skete sandsynligvis, fordi MDA-niveauet faktisk interfererede med MLV's effektivitet og på grund af den immunsuppressive natur af den invaderende CSFV TD/96.

cistanche tubulosa-forbedrer immunsystemet

Titerne for anti-CSFV NA'erne og CMI repræsenteret ved antallet af CSFV-specifikke IFN- --udskillende celler er tæt forbundet med beskyttelsen af ​​grise mod CSFV-infektion [17,22-24]. Pattegris 8134 (Gruppe 2), med lave anti-CSFV NA-niveauer og lavt antal CSFV-specifikke IFN{10}}udskillende celler efter MLV-podning (figur 4 og 5), udviste forbigående CSFV-viræmi og udskillelse efter kontakt med CSFV donor (figur 2 og 3). Derimod var de andre pattegrise i gruppe 2, med lave anti-CSFV-NA'er, men relativt høje CSFV-specifikke IFN- --udskillende celler efter MLV-podning, ikke inficeret med CSFV, selv efter at have været sammen med CSFV-donoren i 10 dage . Skønt Pattegris 8138 (Gruppe 3) havde en høj anti-LPC NA-titer (over 128-fold) uden MLV-vaccination og med minimal CSFV-specifikke IFN- --udskillende celler, udviste den også forbigående CSFV viræmi efter at have været sammen med TD/96-donoren, men var CSFV-fri ved udgangen af ​​forsøgsperioden. De andre smågrise i gruppe 3, med lave anti-LPC NA-niveauer (lavere end 64-fold) og uden MLV-vaccination, udviste alvorlige CSFV-associerede kliniske tegn, læsioner og høje CSFV-vævsbelastninger, hvilket resulterede i dødsfald. En sammenligning af resultaterne af gruppe 2 og 3, som havde lignende anti-CSFV-titere og -profiler (figur 5), indikerer, at CMI er nøglefaktoren i viral clearance og genopretning. Gruppe 2-grisene havde mere CMI (Figur 4), hvilket er i overensstemmelse med de frie kliniske scores (Tabel 1) og alle de testede parametre (Figur 2, Figur 3 og Figur 6).

Navnlig i gruppe 2 og de andre grupper steg CMI-niveauerne ikke markant (og kun med en frekvens lavere end 0,1 % af PBMC'erne) gennem hele forsøgsperioden (figur 4), på trods af pattegrisenes konstant eksponering for viral udskillelse af gruppe 1 CSFV-donoren og gruppe 3-grise fra 7-17 DPE (figur 2 og 3). De lave frekvenser af IFN{10}}udskillende celler afspejler sandsynligvis følgende: (1) CSFV's immunsuppressive karakter, (2) MDA-interferens og (3) den tekniske begrænsning af den analyse, vi udførte. Derfor er det afgørende for at forbedre besætningernes immunitet at bestemme et passende vindue, hvor MDA-niveauet er tilstrækkeligt lavt til at undgå interferens og alligevel tilstrækkeligt højt til at give initial beskyttelse og forbedre anti-CSFV CMI.

For gruppe 2-grise behandlet med den udbredte vaccinationsprocedure forekom lejlighedsvis udskillelse af CSFV i spyt og fæces i en kort periode (Figur 2) ved lave CSFV-belastninger (Figur 3); således blokerede pattegrise i gruppe 4 (kun med MDA'er) CSFV-overførsel til gruppe 4, som indikeret af de CSFV-negative resultater af miljøprøverne indsamlet fra værelse 2 (tabel 3), manglen på feber og kliniske tegn (tabel 1) ), og fraværet af spyt og fækal udskillelse og viræmi (figur 2 og 3) under samliv. Imidlertid kunne de asymptomatiske CSFV-bærere i gruppe 2 have været et uopdagelig ansvar i marken.

Immunrespons kan hurtigt og støt induceres hos SPF-grise, der er vaccineret med MLV. De cellulære og humorale immunresponser af MLV-vaccinerede smågrise afsløres tidligst henholdsvis 5 og 12 dage efter vaccination [14-16,22]. Når MLV'en anvendes i kommercielle besætninger, reducerer MDA'erne MLV'ens effektivitet. I denne undersøgelse steg CMI for gruppe 2-grise med betydelige MDA-niveauer hurtigt ved 0 DP1C (7 DPE; figur 4; dvs. meget hurtigere end hos SPF-grise uden MDA'er), selvom hverken antistoffet eller CMI'et profilerne ændrede sig dramatisk (figur 4 og 5). En sådan hurtig stigning ved 7 DPE (figur 4) efter LPC-vaccination antyder, at råmælken kan give andre immunologiske komponenter ud over MDA'er, der inducerer et anamnestisk-lignende respons.

Anti-CSFV NA'er bruges almindeligvis til at evaluere vaccinens effektivitet og til at undersøge for CSFV-infektion i besætninger. Ifølge CSFV-stammen er titeren af ​​anti-CSFV NA'erne mod homologe stammer (f.eks. LPC af genotype 1.1) højere end for heterogene stammer (f.eks. TD/96 af genotype 2.1) og i denne undersøgelse, var log2 1.3 til 3.7 (Figur 5A) højere end den mod TD/96-stammen (Figur 5B) [14]. En lignende NA-titerforskel blev også observeret i forskellige stammer af porcine reproduktive og respiratoriske syndromvirus (PRRSV) og SARS-CoV-2 [25,26]. Da MDA'er er en vital interferensfaktor for MLV-effektivitet, er den optimale vaccinationsplan for MLV-podning i smågrise, når MDA'erne for smågrise er lavere end 1:32-fold af anti-LPC NA-titeren. Derfor var den optimale MLV-vaccinationstid i nærværende undersøgelse ved 28 DPE, hvilket er i overensstemmelse med vores estimering, at halveringstiden for MDA'erne var 10,7 dage (Gruppe 2; Figur 5A) og svarer til analyseresultaterne af anti- LPC NA-titere for gruppe 4 og 5. Paradoksalt nok betragtes 32--fold niveauet af anti-CSFV NA-titeren (ca. svarende til 1:128-fold af anti-LPC NA'er) som det beskyttende indeks for CSFV-infektion [17]. De fleste af pattegrise i gruppe 4 og 5 havde mindre end 1:32-fold anti-TD/96 NA-titre fra 7 DPE og fremefter. Vinduesperioden, hvor MDA-niveauer er passende lave til ikke at interferere med MLV-vaccination, men tilstrækkelig høje til at være beskyttende, er snæver, hvorimod vinduet for risikoen for CSFV-infektion er bredt. Den passende periode for MLV-vaccination kan kun forlænges, hvis MLV'en er produceret fra homologe stammer, som normalt ikke er tilgængelige i de fleste CSFV-endemiske områder.

Besætningsimmunitet korrelerer negativt med patogenspredning i forebyggelse og kontrol af sygdomme. Øget besætningsimmunitet kan reducere både modtageligheden for infektion og omfanget af patogenudskillelsen i besætningen [27,28]. Vaccination bruges almindeligvis som et direkte og hurtigt værktøj til at øge flokimmuniteten. Forbedring af besætningsimmunitetsdækning gennem vaccineimmunisering for at reducere patogenspredning har vist sig at være effektiv til bekæmpelse af PRRSV, porcint circovirus type 2, CSFV, pseudorabies-virus og SARS-CoV-2 [29-36]. I CSFV-undersøgelser reducerede administrationen af ​​både MLV- og E2-underenhedsvacciner også CSFV-transmission i besætninger [14-16,22,32]. Selv om nogle få MLV-vaccinerede pattegrise udviste forbigående CSFV-viræmi og udskillelse (gruppe 2 og 3; figur 2 og 3), gav MLV-podning i denne undersøgelse ikke kun fuldstændig beskyttelse til de vaccinerede grise, men sikrede også, at TD/96-stammen blev ikke overført fra den primære angriber (gruppe 1) til den sekundært invaderede gruppe (gruppe 4). I modsætning hertil spredte TD/96 sig fra gruppe 1 CSFV-donor til gruppe 3 (uden MLV-vaccination) og over til gruppe 5, hvilket viser, at MLV-vaccination mod CSFV kan blokere CSFV-transmission og dermed øge sandsynligheden for CSFV-udryddelse ved at reducere værdien af det grundlæggende reproduktionsnummer (R0) for patogenet [28]. Der kræves mere omfattende vaccinedækning for at udrydde sygdomme med høj-R0 patogener. R0 for CSFV er forbundet med stammevirulensen og CSFV-podningsdosis. R0-patogenniveauerne for moderat inokulations- og højpodningsdoser af en moderat virulent stamme og lav-inokulationsdosis af en meget virulent stamme er væsentligt højere end for en høj-inokulationsdosis af en lavvirulens stamme [13]. Disse resultater indikerer, at der kræves mere besætningsimmunitetsdækning i CSF-endemiske områder med moderate eller meget virulente CSFV-stammer.

Monocyt-makrofage afstamningsceller er CSFV-tropismeceller, der spiller en rolle i CSFV-transmission [37-39]. I nærværende undersøgelse var de smågrise, der kom sig, raske og asymptomatiske; CSFV kan imidlertid vedvarende inficere og gemme sig i lymfoidt væv (figur 6), og dermed undgå immunclearance; dette understøtter også brugen af ​​lymfoidt væv som ideelle prøver til diagnose. Vedvarende viral infektion er også blevet observeret med CSFV, human immundefektvirus type 1 og respiratorisk syncytialvirus [40-42]. CSFV har kapacitet til at ændre ekspressionen af ​​cytokiner, cytokinreceptorer, kemokiner, interferoner og toll-lignende receptorer i makrofager, hvilket afspejler dens immunsuppressive natur og den næsten inaktivitet af antistoffet (figur 5) og CMI (figur 4) profilerne af forsøgsgrise, på trods af deres kontinuerlige eksponering for CSFV-udskillelse i spyt og afføring hos de primære (Gruppe 1) og sekundære (Gruppe 3) angribere. Immunreguleringen af ​​grise efter CSFV-infektion involverede stigninger i proinflammatoriske (IL-1, IL-6, IL-8 og MCF) og antivirale faktorer (IFN- og ) [43]. Imidlertid forbliver de udviklede mekanismer og vedvarende infektion af CSFV uklare.

cistanche fordele for mænd styrker immunsystemet

5. Konklusioner

MDA'er efterfulgt af MLV-vaccination kan inducere tilstrækkelig immunitet, især CMI, hvilket muliggør viral clearance og restitution. Selvom nogle få MLV-vaccinerede pattegrise havde forbigående lav-niveau viræmi og viral udskillelse i deres spyt og fæces, kunne CSFV-overførsel til tredjeparten (Gruppe 4) blokeres gennem MLV-vaccination og dermed reducere R0 af CSFV og øger muligheden for udryddelse af CSF.

Referencer

1. WOAH. Kapitel 15.2: Infektion med klassisk svinepestvirus. I terrestriske dyrs sundhedskodeks; WOAH: Paris, Frankrig, 2022.

2. Ganges, L.; Crooke, HR; Bohórquez, JA; Postel, A.; Sakoda, Y.; Becher, P.; Ruggli, N. Klassisk svinepestvirus: fortid, nutid og fremtid. Virus Res. 2020, 289, 198151. [CrossRef] [PubMed]

3. WOAH (World Animal Health Information System). Klassisk svinepest: Officiel sygdomsstatus. Tilgængelig online: www.woah. org/da/disease/classical-swine-fever/#ui-id-2 (åbnet den 1. september 2022).

4. Sawai, K.; Nishi, T.; Fukai, K.; Kato, T.; Hayama, Y.; Yamamoto, T. Fylogenetisk og fylodynamisk analyse af et klassisk svinepestvirusudbrud i Japan (2018-2020). Transbound. Emerg. Dis. 2022, 69, 1529-1538. [CrossRef] [PubMed]

5. De Oliveira, LG; Gatto, IRH; Mechler-Dreibi, ML; Almeida, HMS; Sonálio, K.; Storino, GY Præstationer og udfordringer ved udryddelse af klassisk svinepest i Brasilien. Virus 2022, 12, 1327. [CrossRef] [PubMed]

6. Zhu, X.; Liu, M.; Wu, X.; Ma, W.; Zhao, X. Fylogenetisk analyse af isolater af klassisk svinepestvirus fra Kina. Arch. Virol. 2021, 166, 2255-2261. [CrossRef] [PubMed]

7. Lindenbach, BD; Thiel, HJ; Rice, CM Flaviviridae: Vira og deres replikation. In Fields Virology, 5. udg.; Knipe, DM, Howley, PM, Griffin, DE, red.; Lippincott Williams & Wilkins: Philadelphia, PA, USA, 2007; s. 1101-1152.

8. Paton, DJ; McGoldrick, A.; Greiser-Wilke, I.; Parchariyanon, S.; Sang, JY; Liou, PP; Stadejek, T.; Lowings, JP; Bjorklund, H.; Belak, S. Genetisk typning af klassisk svinepestvirus. Dyrlæge. Microbiol. 2000, 73, 137-157. [CrossRef] [PubMed]

9. Depner, KR; Hinrichs, U.; Bickhardt, K.; Greiser-Wilke, I.; Pohlenz, J.; Moennig, V.; Liess, B. Indflydelse af racerelaterede faktorer på forløbet af klassisk svinepestvirusinfektion. Dyrlæge. Rec. 1997, 140, 506-507. [CrossRef]

10. Floegel-Niesmann, G.; Bunzenthal, C.; Fischer, S.; Moennig, V. Virulens af nyere og tidligere klassiske svinepestvirusisolater vurderet ud fra deres kliniske og patologiske tegn. J. Vet. Med. Ser. B 2003, 50, 214-220. [CrossRef]

11. Mønnig, V.; Floegel-Niesmann, G.; Greiser-Wilke, I. Kliniske tegn og epidemiologi af klassisk svinepest: En gennemgang af ny viden. Dyrlæge. J. 2003, 165, 11-20. [CrossRef]

12. Durand, B.; Davila, S.; Cariolet, R.; Mespléde, A.; Le Potier, MF Sammenligning af viræmi- og klinisk-baserede estimater af overførsel af klassisk svinepestvirus inden for og mellem stien fra tre transmissionsforsøg. Dyrlæge. Microbiol. 2009, 135, 196-204. [CrossRef]

13. Weesendorp, E.; Backer, J.; Stegeman, A.; Loeffen, W. Effekt af stamme og podningsdosis af klassisk svinepestvirus på transmission i stien. Dyrlæge. Res. 2009, 40, 59. [CrossRef]

14. Huang, YL; Deng, MC; Wang, FI; Huang, CC; Chang, CY Udfordringerne ved bekæmpelse af klassisk svinepest: Modificeret liv og E2-underenhedsvacciner. Virus Res. 2014, 179, 1-11. [CrossRef] [PubMed]

15. Suradhat, S.; Damrongwatanapokin, S.; Thanawongnuwech, R. Faktorer kritiske for vellykket vaccination mod klassisk svinepest i endemiske områder. Dyrlæge. Microbiol. 2007, 119, 1-9. [CrossRef] [PubMed]

16. Van Oirschot, JT Vaccinologi af klassisk svinepest: Fra laboratorium til felt. Dyrlæge. Microbiol. 2003, 96, 367-384. [CrossRef]

17. Terpstra, C.; Wensvoort, G. Den beskyttende værdi af vaccine-inducerede neutraliserende antistoftitre i svinepest. Dyrlæge. Microbiol. 1988, 16, 123-128. [CrossRef]

18. Vandeputte, J.; Også HL; Ng, FK; Chen, C.; Chai, KK; Liao, GA Adsorption af colostral-antistoffer mod klassisk svinepest, persistens af maternelle antistoffer og effekt på respons på vaccination hos smågrise. Er. J. Vet. Res. 2001, 62, 1805-1811. [CrossRef] [PubMed]

19. Ma, WJ; Chen, QL; Chang, CC Undersøgelse af antistofydelse og tilstedeværelse af viralt RNA før og efter vaccination af klassisk svinepest-vaccinestamme i taiwanesiske svinefarme. Taiwan dyrlæge. J. 2010, 36, 45-54.

20. Mittelholzer1, C.; Moser, C.; Tratschin, JD; Hofmann, MA Analyse af klassisk svinepestvirusreplikationskinetik tillader differentiering af meget virulente fra avirulente stammer. Dyrlæge. Microbiol. 2000, 74, 293-308. [CrossRef]

21. Huang, YL; Pang, VF; Pan, CH; Chen, TH; Jong, MH; Huang, TS; Jeng, CR Udvikling af en revers transkriptionsmultiplex real-time PCR til påvisning og genotypebestemmelse af klassisk svinepestvirus. J. Virol. Metoder 2009, 160, 111-118. [CrossRef]

22. Huang, YL; Meyer, D.; Postel, A.; Tsai, KJ; Liu, HM; Yang, CH; Huang, YC; Berkley, N.; Deng, MC; Wang, FI; et al. Identifikation af en fælles konformationsepitop på glycoprotein E2 af klassisk svinepestvirus og grænsesygdomsvirus. Virus 2021, 13, 1655. [CrossRef]

23. Graham, SP; Everett, HE; Haines, FJ; Johns, HL; Sosan, OA; Salguero, FJ; Clifford, DJ; Steinbach, F.; Drew, TW; Crooke, H. Udfordring af grise med klassisk svinepestvirus efter C-stammevaccination afslører bemærkelsesværdig hurtig beskyttelse og indsigt i tidlig immunitet. PLoS ONE 2012, 7, e29310. [CrossRef]

24. Graham, SP; Haines, FJ; Johns, HL; Sosan, O.; Rocca, SAL; Lampe, B.; Rumenapf, T.; Everett, H.; Crooke, H. Karakterisering af vaccine-inducerede, bredt krydsreaktive IFN-secernerende T-celleresponser, der korrelerer med hurtig beskyttelse mod klassisk svinepestvirus. Vaccine 2012, 30, 2742-2748. [CrossRef] [PubMed]

25. Suradhat, S.; Intrakamhaeng, M.; Damrongwatanapokin, S. Korrelationen af ​​virusspecifik interferon-gamma-produktion og beskyttelse mod klassisk svinepestvirusinfektion. Dyrlæge. Immunol. Immunopathol. 2001, 83, 177-189. [CrossRef] [PubMed]

26. Planas, D.; Veyer, D.; Baidaliuk, A.; Staropoli, I.; Guivel-Benhassine, F.; Rajah, MM; Planchais, C.; Porrot, F.; Robillard, N.; Puech, J.; et al. Reduceret følsomhed af SARS-CoV-2 variant delta over for antistofneutralisering. Nature 2021, 596, 276-280. [CrossRef]

27. Zhang, C.; Hu, J. Porcine reproduktive og respiratoriske syndromvirusvacciner: Nuværende status og strategier til en universel vaccine. Transbound. Emerg. Dis. 2014, 61, 109-120.

28. Andre, FE; Booy, R.; Bock, HL; Clemens, J.; Datta, SK; John, TJ; Lee, BW; Lolekha, S.; Peltola, H.; Ruff, TA; et al. Vaccination reducerer i høj grad sygdom, handicap, død og ulighed på verdensplan. Tyr. Verdenssundhedsorgan. 2008, 86, 140-146. [CrossRef] [PubMed]

29. Rose, N.; Andraud, M. Brugen af ​​vacciner til at kontrollere patogenspredning i svinepopulationer. Porcine Health Manag. 2017, 3, 8. [CrossRef] [PubMed]

30. Andraud, M.; Grasland, B.; Durand, B.; Cariolet, R.; Jestin, A.; Madec, F.; Rose, N. Kvantificering af porcint circovirus type 2 (PCV-2) inden for og mellem sti-transmission hos grise. Dyrlæge. Res. 2008, 39, 43. [CrossRef]

31. Rose, N.; Andraud, M.; Bigault, L.; Jestin, A.; Grasland, B. En kommerciel PCV2-baseret vaccine reducerer PCV2b-transmission signifikant under eksperimentelle forhold. Vaccine 2016, 34, 3738-3745. [CrossRef]

32. Rose, N.; Renson, P.; Andraud, M.; Paboeuf, F.; Le Potier, MF; Bourry, O. Porcint reproduktivt og respiratorisk syndromvirus (PRRSv) modificeret levende vaccine reducerer virustransmission under eksperimentelle forhold. Vaccine 2015, 33, 2493-2499. [CrossRef]

33. Bouma, A.; De Smit, AJ; De Jong, MCM; De Kluijver, EP; Moormann, RJM Bestemmelse af begyndelsen af ​​besætningsimmuniteten induceret af E2-underenhedsvaccinen mod klassisk svinepestvirus. Vaccine 2000, 18, 1374-1381. [CrossRef]

34. De Smit, AJ; Bouma, A.; Van Gennip, HGP; De Kluijver, EP; Moormann, RJM Kimæriske (markør) C-stamme vira inducerer klinisk beskyttelse mod virulent klassisk svinepestvirus (CSFV) og reducerer overførslen af ​​CSFV mellem vaccinerede grise. Vaccine 2001, 19, 1467-1476. [CrossRef] [PubMed]

35. Van Nes, A.; Stegeman, JA; De Jong, MCM; Loeffen, WLA; Kimman, TG; Verheijden, JHM Ingen større udbrud af pseudorabies-virus i velimmuniserede sobesætninger. Vaccine 1996, 14, 1042-1044. [CrossRef] [PubMed]

36. Shrestha, NK; Burke, PC; Nowacki, AS; Terpeluk, P.; Gordon, SM Nødvendigheden af ​​vaccination mod coronavirus sygdom 2019 (COVID-19) hos personer, der allerede har haft COVID-19. Clin. Inficere. Dis. 2022, 75, e662–e671. [CrossRef] [PubMed]

37. Gómez-Villamandos, JC; Ruiz-Villamor, E.; Bautista, MJ; Sánchez, CP; Sánchez-Cordón, PJ; Salguero, FJ; Jover, A. Morfologiske og immunhistokemiske ændringer i miltmakrofager hos grise inficeret med klassisk svinepest. J. Comp. Pathol. 2001, 125, 98-109. [CrossRef]

38. Sánchez-Cordón, PJ; Romanini, S.; Salguero, FJ; Ruiz-Villamor, E.; Carrasco, L.; Gómez-Villamandos, JC En histopatologisk, immunhistokemisk og ultrastrukturel undersøgelse af tarmen hos grise podet med klassisk svinepestvirus. Dyrlæge. Pathol. 2003, 40, 254-262. [CrossRef]

39. Sah, V.; Kumar, A.; Dhar, P.; Upmanyu, V.; Tiwari, AK; Wani, SA; Sahu, AR; Kumar, A.; Badasara, SK; Pandey, A.; et al. Signatur for genom-dækkende genekspression i klassisk svinepestvirus-inficerede makrofager og PBMC'er fra oprindelige vis-a-vis krydsningssvin. Gene 2020, 731, 144356. [CrossRef]

40. Coronado, L.; Bohórquez, JA; Muñoz-González, S.; Perez, LJ; Rosell, R.; Fonseca, O.; Delgado, L.; Perera, CL; Frías, MT; Ganges, L. Undersøgelse af kroniske og vedvarende klassiske svinepestinfektioner under feltforhold og deres indvirkning på vaccinens effektivitet. BMC dyrlæge. Res. 2019, 15, 247. [CrossRef]

41. Rivera-Toledo, E.; Gómez, B. Respiratorisk syncytial viruspersistens i makrofager ændrer profilen af ​​cellulær genekspression. Virus 2012, 4, 3270-3280. [CrossRef]

42. Kruize, Z.; Kootstra, NA Makrofagernes rolle i HIV-1 persistens og patogenese. Foran. Microbiol. 2019, 10, 2828. [CrossRef]

43. Borca, MV; Gudmundsdottir, I.; Fernandez-Sainz, IJ; Holinka, LG; Risatti, GR Mønstre for cellulær genekspression i svinemakrofager inficeret med meget virulent klassisk svinepestvirusstamme Brescia. Virus Res. 2008, 138, 89-96. [CrossRef]