Toksikologiske undersøgelser af sikkerheden ved Cistanche Deserticola-ekstrakt

Abstrakt:

Formål At evaluere den generelle toksicitet oggenetisk toksicitet af Cistanche deserticola ekstraktog give grundlag forudvikling af yderligere funktionsstudier. Metoder Anakut oral toksicitetstestog en gentagen dosis90-dag oral toksicitettest i rotter blev udført for at observere den generelle toksicitet afCistanche deserticola ekstrakt. Tre mutagenicitetsassays, herunder en bakteriel omvendt mutationstest (Ames-test), en museknoglemarvspolykromatisk erytrocyt og en in vitro pattedyrs kromosomafvigelsestest blev udført for at evaluere den genetiske toksicitet af Cistanche deserticola-ekstrakt. Alle testmetoder blev udført i overensstemmelse med de nationale standarder. De eksperimentelle data blev statistisk behandlet ved hjælp af enten χ{{0}}-testen eller variansanalyse. Testniveauet på var 0,05.

Resultater Denakut peroral median dødelig dosis(LD50) afCistanche deserticola ekstrakthos både hun- og hanmus var over 10g/kg. Resultaterne af Ames-testen viste, at Cistanche deserticola-ekstrakt ikke forårsagede nogen stigning i rygmutationskolonier af alle de testede stammer, og der var et negativt resultat. Resultaterne af museknoglemarvspolykromatisk erytrocyt viste, at der ikke var nogen statistisk signifikant forskel (χ2=3. 036, 1.755, alle P > 0.05) i mikronukleushastigheder i hun- og hanmus mellem dosisgrupperne og opløsningsmidlet kontrolgruppen, og der var et negativt resultat. Resultaterne af in vitro pattedyrs kromosomafvigelsestest viste, at der med eller uden metabolisk aktiveringssystem var statistisk signifikante forskelle (χ2=13. 244,9.955, alle P<0. 05) in chromosome aberration rate of Chinese hamster lung (CHL) cell between the positive control groups and the solvent control groups, and there were no statistically significant differences (χ 2 = 0. 436,1. 008, all P>0. 05) i kromosomafvigelse cellehastighed mellem dosisgrupperne af Cistanche deserticolaextract og opløsningsmiddelkontrolgrupperne, og der var et negativt resultat. I perioden med den gentagne dosis 90-dages oral toksicitetstest hos rotter var dyrs aktiviteter, foderforbrug og vandforbrug normale. Ingen tydelig adfærdsændring og forgiftningsmanifestationer blev observeret, og ingen død blev observeret. Sammenlignet med kontrolgruppen blev der ikke observeret nogen åbenlys abnormitet i kropsmasse, fødevareforbrug, hæmatologiske og biokemiske indekser, organvægt og relativ organvægt af rotter i hver dosisgruppe. Der blev ikke fundet nogen åbenlys patologisk unormal ændring i den histopatologiske undersøgelse. Konklusion Under de nuværende eksperimentelle forhold har Cistanche deserticola-ekstrakt ingen generel toksicitet og genetisk toksicitet, og yderligere funktionelle undersøgelser kunne udføres.

Nøgleord:Sikkerhedsevaluering;Cistanche deserticola ekstrakt; Akut toksicitet; genetisk toksicitet; Generel toksicitet

NATURLIG CISTANCHE RÅMATERIALE TIL SALG

Fytokemikalier er en klasse af bioaktive stoffer med lav molekylvægt, der indeholder forskellige sundhedsfunktioner ud over essentielle næringsstoffer i planter [1]. I de senere år, med den kontinuerlige udvikling af ernæringsvidenskab, er de gavnlige virkninger af forskellige fytokemikalier på den menneskelige krop, såsom anti-træthed, sænkning af blodlipider og forbedring af immunitet, løbende blevet opdaget. Cistanche deserticola, også kendt som jordånd, cistanche og dag, er almindeligvis kendt som "ørkenginseng" [2]. I mit land er der 6 arter og 1 variant, nemlig Cistanche deserticola, Cistanche alsa, Cistanche tubulosa, Cistanche sinensis, Cistanche lanzhouensis, Cistanche ambigua og variant Cistanche salsavar [3]. Cistanche deserticola vokser hovedsageligt i saltvand-alkali-land, sandet land og ørkenmiljøer. I mit land er det hovedsageligt fordelt i den autonome region Indre Mongoliet, Gansu-provinsen og Shaanxi-provinsen. Dens ekstrakt har sundhedsmæssige fordele, såsom at fugte tarmene, forbedre cellulær immunitet og beskytte leveren [4-7]. I øjeblikket er der få dyretoksicitetsundersøgelser af Cistanche deserticola-ekstrakt. Denne undersøgelse evaluerede systematisk dens akutte toksicitet, generelle toksicitet og genetiske toksicitet for at vurdere dens sikkerhed og lægge grundlaget for yderligere dybdegående forskning i fremtiden.

1 Materialer og metoder

1. 1 Materiale

1. 1. 1 Teststof

Cistanche deserticola-ekstrakt er et pulveriseret fast stof, produceret og leveret af Inner Mongolia Yuhangren High-tech Industry Co., Ltd., batchnummer: 211101. Det anbefalede indtag er 0,72 g/d, som omregnes til et dagligt anbefalet forbrug på 12 mg/kg·bw.

1. 1. 2 Forsøgsdyr

Sunde voksenspecifikke patogenfrie (SPF)-grad Sprague-Dawley (SD) rotter blev købt fra Hunan Slake Jingda Experimental Animal Co., Ltd., med et dyreproduktionslicensnummer på SCXK (Xiang) 2019-0014. De blev holdt i barriere-grade dyrerum af Hunan Occupational Disease Prevention and Control Institute, med en temperatur på 21~24 grader og en luftfugtighed på 45%~68%. Licensnummeret til forsøgsdyrsbrug er SYXK (Xiang) 2017-0001.

1. 1. 3 Bakterier

Histidin-mangel Salmonella typhimurium. Stammerne er TA97, TA98, TA100 og TA102, alle leveret af MOLTOX, USA, og identificeret af vores laboratorium som opfylder kravene.

1. 1. 4 celler Kinesisk hamsterlunge (CHL) cellelinje, købt fra Cell Bank of the Chinese Academy of Sciences (Shanghai, Kina).

1. 2 Metoder

1. 2. 1 Akut oral toksicitetstest

Denne test anvendte grænsemetoden. 20 SD-rotter med en kropsvægt på 185. 80 ~ 220. 00g blev udvalgt, halvt hun og halvt han, og fastede i 16 timer. Opstil en dosisgruppe på 10,00g/kg·lgv, tag 50,04 g af testprøven, og tilsæt rent vand til 75,00 ml for at forberede en testopløsning med en koncentration på 666,70 mg/ml. Testopløsningen blev indgivet oralt i en dosis på 15,00ml/kg·lgv. Observationsperioden var 14 dage, og forgiftningssymptomer og dyrenes død blev registreret dagligt. Dyrene blev vejet ved begyndelsen af ​​forsøget, på den 7. dag efter indgivelse og ved afslutningen af ​​forsøget. Efter observationsperioden blev rotterne aflivet ved CO2-bedøvelse, og den grove anatomiske undersøgelse af dyrene blev afsluttet.

1.2.2 Ames-test

Opstil 5 doser på 50, 158, 500, 1580 og 5000 ug/skål, og opsæt en positiv mutationskontrolgruppe og en opløsningsmiddelkontrolgruppe. De positive stoffer er natriumazid, 2-aminofluoren, 1, 8-dihydroxyanthraquinon og dichlorthiazid, og opløsningsmidlet er rent vand. Tre parallelle skåle blev sat op for hver dosisgruppe i denne test. Testen blev udført i to systemer med S9 (levermikrosomalt enzym) og uden S9, og cellerne blev dyrket i en 37 graders konstant temperaturinkubator i 48 timer efter administration.

1.2.3 Muse knoglemarv polykromatisk erytrocyt mikronucleus test

Kunming-mus, 25 hunner og 25 hanner, med en kropsvægt på 29,3~35.0g. Testen opstillede tre dosisgrupper på 2,5, 5.0 og 10,0g/kg·lgv, en positiv kontrolgruppe og en opløsningsmiddelkontrolgruppe. Det positive stof var cyclophosphamid (CP; producent: Baxter; batchnummer: OH397A), og dosis var 40 mg/kg·lgv. Opløsningsmiddelkontrolgruppen og dosisgruppen fik 40 ml/kg·lgv, og den positive kontrolgruppe fik 20 ml/kg·lgv. Administrationsmetoden var at administrere lægemidlet to gange inden for 30 timer, og den sidste administration blev udført 24 timer efter den første administration. Dyrene blev dræbt 6 timer efter afslutningen af ​​administrationen, brystbensknoglemarven blev taget til fremstilling, og antallet af celler indeholdende mikrokerner blev talt under et mikroskop (producent: Olympus, model: CX23).

1.2.4 In vitro kromosomafvigelsestest af pattedyrceller

Testen oprettede en opløsningsmiddelkontrolgruppe (rent vand), 250, 500 og 1000 ug/ml dosisgrupper og en positiv kontrolgruppe. De positive kontroller var 20 ug/ml methylmethansulfonat (MMS) (producent: West Asia Reagent, batchnummer: 20200109) (uden metabolisk aktiveringssystem) og 10 ug/ml cyclophosphamid (producent: Baxter, batchnummer:

OH397A) (med metabolisk aktiveringssystem). Efter at have bekræftet, at cellerne ikke er forurenede, justeres cellekoncentrationen til 5 × 10

5/ml, tilsæt 2.00ml cellesuspension til hver flaske, tilsæt derefter 3.00ml Dulbeccos modificerede ørnemedium (DMED) (producent: Zhejiang Jinuo Biomedical Technology Co., Ltd. , batchnummer: 22112501), og anbring i inkubatoren i ca. 24 timer. Efter at dyrkningsmediet i flasken er suget ud, tilsættes 4,95 ml DMEM komplet medium (uden metabolisk aktiveringssystem) eller 4,45 ml DMEM komplet medium og 0,50 ml S9 blandet opløsning (med metabolisk aktiveringssystem) til hver flaske, og til sidst tilsæt 50 ul af den forberedte testprøve eller kontrolprøve, og anbring kulturflasken i inkubatoren (producent: Shanghai Lishen Scientific Instrument Co., Ltd., model: HF160W) i 4 timers eksponering for giften. Efter infektionen skal du kassere dyrkningsmediet, vaske cellerne tre gange med Hanks balancerede saltopløsning (HBSS) (producent: Zhejiang Jinuo Biomedical Technology Co., Ltd., batchnummer: 2109220213), og derefter tilføje 5.{{19} }ml DMEM komplet dyrkningsmedium til hver flaske, dyrk i 24 timer og høst cellerne.

4 timer før høst, tilsæt 50 ul 100 mg/ml colchicin til hver flaske, inkuber i 4 timer, fordøj med 0,25 % trypsinopløsning (producent: Zhejiang Jinuo Biopharmaceutical Technology Co., Ltd., batchnummer: 22071201), centrifuger og høst cellerne, klargør objektglas i henhold til rutinemetoden, klargør et objektglas pr. flaske og farv med 10 % Giemsa-farvning [producent: China Pharmaceutical (Group) Shanghai Chemical Reagent Company, batchnummer: 20220114].

Under en olienedsænkningslinse (producent: Olympus, model: CX23) blev 100 metafaser analyseret i hver gruppe, antallet af afvigende celler, aberrationstype og koordinater for det afvigende synsfelt blev observeret og registreret, og kromosomafvigelseshastigheden var beregnet.

1.2.5 90-dages oral toksicitetstest i rotter

120 SD-rotter, 4 uger gamle, halv hun og halv han, med en kropsvægt på 75.5-97,0 g i begyndelsen af ​​testen for hunrotter og 80.{{6} },8 g til hanrotter. Forsøget opstillede tre dosisgrupper på 600, 1.200 og 3.600 mg/(kg·bw·d) og en positiv kontrolgruppe med 10 hun- og handyr i hver gruppe. Derudover var der en midtvejskontrolsatellitgruppe, en restitutionsperiodekontrolsatellitgruppe, en midtvejshøjdosissatellitgruppe og en højdosissatellitgruppe med restitutionsperiode med 5 hun- og hanmus i hver gruppe. Doseringen af ​​lav-, mellem- og højdosisgrupper svarede til henholdsvis 50, 100 og 300 gange det anbefalede humane indtag. Testopløsningen blev frisk fremstillet hver dag, og sonde-volumenet var 10 ml/(kg·bw·d). Dyrene blev observeret hver dag under forsøget, og deres generelle tilstand blev registreret. Ved afslutningen af ​​forsøget blev blod opsamlet efter faste i 16 timer, og blodrutine og blodbiokemi blev målt, og der blev observeret grove organlæsioner og histopatologiske undersøgelser.

1.3 Statistisk analyse

IBM SPSS Statistics 20.0 statistisk software blev brugt til at analysere dataene. Pattedyrets erytrocyt-mikronkernetest blev statistisk analyseret under anvendelse af Poisson-fordelings- og variansanalyse. In vitro pattedyrcelle-kromosomafvigelsestest blev statistisk analyseret under anvendelse af χ2-testen. 90-dages oral toksicitetstesten blev statistisk analyseret ved hjælp af envejsvariansanalyse og (eller) t-test. P<0.05 was considered statistically significant, and the test level was α = 0.05.