Toksikologisk evaluering og beskyttende virkninger af ethanolisk bladekstrakt af Cassia Spectabilis DC på lever- og nyrefunktion af Plasmodium Berghei-inficerede mus
Oct 30, 2023
1. Introduktion
Den dag i dag er problemet medPlasmodiumparasitresistens over for eksisterende antimalariamidler er stadig et stort problem for udryddelse af malaria [1-3]. derfor forskes der fortsat i opdagelsen af nye kilder til malariamedicin, hvoraf den ene er fra lægeplanter [4].In vivoogin vitromodeller har længe været brugt i antimalariatest. I sidste halvdel af det 20. århundrede,Plasmodium bergheiellerPlasmodium yoeliiblev brugt til at inficere gnavere. I mellemtidenP. bergheiblev den mest almindeligt anvendte art til undersøgelse på leverstadiet, især dannelsen af hypnozoit til at undersøge malariatilbagefald [5-7].
KLIK HER FOR AT FÅ URTEFORMULERING AF CISTANCHE TIL NYRE
En af de traditionelle planter i Indonesien, Cassia spectabilis DC af Caesalpiniaceae-familien, er blevet bevist eksperimentelt in vitro mod P. falciparum og til behandling af malaria in vivo mod P. berghei [8, 9], hvilket indikerer, at C. spectabilis DC-planten er meget potentiale til at blive videreudviklet som en kandidat til malariamedicin. Tidligere arbejder rapporterede, at en in vivo-test på 90% ethanolekstrakt af C. spectabilis DC-blad mod P. berghei ANKA i BALB/c-mus viste, at en ED50-værdi var 131,5 mg/kg lgv [9], og den er kategoriseret som meget god antimalariaaktivitet [10].
Ydermere er ekstrakten, fraktionerne, underfraktionerne og de isolerede forbindelser af C. spectabilis DC blevet testet in vitro for deres antimalaria-aktiviteter. *Den aktive forbindelse af denne plante er med succes blevet identificeret som en forbindelse, der er identisk med (–){0}}hydroxycassin, og dens in vitro antimalariaaktivitetstest viste en meget lav IC50 på 0,016 ug/mL [ 11], som er klassificeret som en meget stærk antimalariaaktivitet [12].
Forskningen i denne plante om at overvinde malariaresistens er blevet videreført ved at undersøge sikkerheden og virkningerne af at forbedre C. spectabilis DC-bladekstrakt på lever- og nyrefunktionerne hos P. berghei ANKA-inficerede mus. Forskningsundersøgelser af virkningen af lægeplanter, der har antimalariaaktivitet på lever- og nyrefunktioner hos mus inficeret med parasitter, er blevet udført i vid udstrækning [13-16], såvel som akutte og subakutte toksicitetstests [17-20]. Leveren spiller en vigtig rolle i reguleringen af fysiologiske processer. er et organ involveret i flere vitale funktioner såsom stofskifte, sekretion og opbevaring. Derudover har leveren en vigtig rolle i afgiftningen og udskillelsen af endogene og eksogene forbindelser [21-24].
Malarial infektion begynder, når sporozoitter er inficeret af malaria parasit-inficerede hun Anopheles myggestik. Under blodfodring injicerer den inficerede kvindelige Anopheles sporozoitstadiet af parasitten [25, 26]. Efter omkring en times rejse i den menneskelige krop kommer sporozoitter derefter ind i leveren, angriber hepatocytter og starter den aseksuelle cyklus af exoerythrocytisk skizogoni. Inde i levercellerne formerer parasitterne sig aseksuelt, indtil de når moden schizont, og til sidst producerer og kommer et stort antal merozoitter i blodbanen efter at have inficeret hepatocytter. *e inficerede hepatocytter, der forårsager leverskade på grund af ruptur af inficerede hepatocytter og merozoitter kommer ind i blodbanen og starter den erytrocytiske cyklus i de røde blodlegemer [27, 28]. Skader, der opstår i levercellerne, kan øge de enzymer, der virker på leverfunktionen, især transaminase-enzym, og morfologiske ændringer i leverens udseende [29, 30], såsom hepatomegali. Hepatosplenomegali er et almindeligt træk ved malariainfektion hos mennesker [31] og mus [32] forårsaget af kronisk eksponering for malariaparasitter. Dog ingen forstørrelse af nyren ved malariainfektion.
Leverdysfunktionen kan påvises ved hepatocellulær transaminering af plasmaglutamin-oxaloeddikesyretransaminase (SGOT) og plasmaglutamin-pyrodruesyretransaminase (SGPT) frigivet i plasma, eller ved histologisk undersøgelse af vævet [33]. Den mest almindelige skade er aktivering af apoptotisk celledød eller hepatocytnekrose [34-36]. Klinisk signifikant nyrepåvirkning er forbundet med infektion med P. falciparum og P. malariae. *e infektion af P. falciparum producerer akutte manifestationer, der spænder fra asymptomatiske, op til urinvejslidelser og milde elektrolytforstyrrelser for akut nyresvigt (ARF) eller akut nyreskade (AKI), der kræver dialysestøtte [27, 37]. *e tilfælde af AKI i komplikationen af malaria er kendt for at bidrage til en høj dødelighed, hvilket er omkring 75% af tilfældene. *e histologiske undersøgelser tyder på tilstedeværelsen af glomerulonefritis, akut tubulær nekrose og interstitiel nefritis som den vigtigste hæmodynamiske faktor i malaria-associeret AKI [38]. Generelt kan graden af nyredysfunktion påvises ved tilstedeværelsen af tilstrækkelige mængder protein i urinen og en stigning i plasmaurinstof-, kreatinin- og plasmaelektrolytniveauer [39].
*e toksicitet af 90 % ethanolekstrakt af C. spectabilis DC (EECS) blade i BALB/c mus, efterfulgt af enzymundersøgelser, kan påvirke histopatologi og lever- og nyrefunktioner efter EECS-administration.
2. Materialer og metoder
2.1. Plantemateriale og forberedelse af EECS. *e C. spectabilis
DC-blade blev købt og bestemt i LIPI (Indonesia Research Centre), Botanisk Have, Purwodadi, East Java, Indonesien (B-160/IPH.06/KS.02/III/ 2019). *e prøve blev deponeret som herbariet i Institut for Farmakognosi og Fytokemi, Det Farmaceutiske Fakultet, Universitas Airlangga. *e blade blev skyllet grundigt med postevand for at fjerne fremmede kontaminanter, tørret ved 45 grader og malet til pulver med en kværn. *e ekstraktion blev udført ved at macerere pulverplantematerialerne (500 g) i en kolbe indeholdende 2.500 ml 90% ethanol (ved 25-30 grader) i 3 × 24 timer. *e ekstraktionsopløsningsmidlet blev fraskilt, filtreret gennem filterpapir og inddampet under reduceret tryk ved rotationsfordampning. *Et ethanolekstraktudbytte af 1000 g tørret vægt af C. spectabilis DC bladpulver var 10,20 % (vægt/vægt) og blev anvendt i dette eksperiment.
2.2. Dyr.
BALB/c-hanmus i alderen 6-8 uger, vægt 25-30 g, blev brugt i undersøgelsen. Alle mus blev hentet fra Farma Veterinary Center, Generaldirektoratet for Husdyr- og Dyresundhedsministeriet for Landbrug, Surabaya, East Java, Indonesien. *e dyr blev anbragt under standardbetingelser og fodret med en stamdiæt og vand ad libitum. *en godkendelse af undersøgelsesprotokollen blev opnået fra den etiske komité for dyreforskning, Universitas Air langga, Indonesien, nummer 2.KE.181.10.2018.
2.3. Akut toksicitetstest.
EECS blev vægtet og resuspenderet med 0,5 % natriumcarboxymethylcellulose (Na CMC) for at opnå de ønskede doser. BALB/c-mus blev fastet i 24 timer, før de blev fodret med ekstraktet. *e dyr blev opdelt i tre grupper, hver gruppe indeholdt fem mus. *e doser for hver gruppe var 1.250; 2.500; og 5,000 mg/kg lgv. Den generelle adfærd for hver mus blev observeret kontinuerligt i en time efter hver dosis, intermitterende hver fjerde time og derefter over en periode på 24 timer [40-42].
2.4. Subakut toksicitetstest.
I den subakutte toksicitetstest blev mus grupperet i tre grupper, og hver gruppe blev behandlet med EECS på én gang, fem gange og ti gange med 150 mg/kg BW daglig oral dosis i 28 dage; den normale kontrolgruppe fik kun mad og drikke ad libitum [43]. *e dyr blev observeret i 28 dage for tegn på toksicitet. Ved slutningen af observationsperioden blev alle dyr aflivet under etherbedøvelse, og vitale organer såsom lever og nyrer blev fjernet fra alle dyr til grove og histopatologiske undersøgelser.
2.5. Gnaverens parasit.
Klorokinfølsomheden af Plasmodium berghei ANKA blev opnået fra Institute of Biomolecular Eijkman, Jakarta, Indonesien, og vedligeholdt ved seriel passage, der blev brugt i denne undersøgelse.
2.6. Effekt af EECS på plasmaniveauet af SGOT og SGPT.
*eksperimentet var en undertrykkende test baseret på Peters [44]. *er undertrykkende test blev udført før evalueringen af EECS på plasmaniveauet af SGOT og SGPT. *e dyr blev inficeret med P. berghei ANKA og opdelt i fem grupper af A, B, C, D og E. *e dyr blev behandlet kort efter infektion på dag 0 (D0) og fortsatte dagligt i tre dage (D1-D3). Gruppe A som negativ kontrol modtog 0,5 % Na CMC oralt. Gruppe B og C som de behandlede grupper fik EECS i en enkelt oral dosis på henholdsvis 150 og 200 mg/kg lgv. Gruppe D var en positiv kontrol givet chloroquin i en enkelt oral dosis på 100 mg/kg lgv. Desuden var gruppe E som en sund kontrol ikke inficeret med parasitter og fik kun mad og drikke ad libitum. På den fjerde dag (D4) blev blodudstrygningerne fra hver mus fremstillet og undersøgt mikroskopisk. Endvidere blev plasma opsamlet før måling af SGOT- og SGPT-niveauer.
2.7. Effekt af EECS på histopatologi af lever og nyre.
Ved afslutningen af observationsperioden blev alle dyr aflivet under etherbedøvelse forud for fjernelse af lever og nyrer. Efter vejning af organerne blev vævene derefter fikseret i 10 % formaldehydopløsning og yderligere bearbejdet til hæmatoxylin-eosin (H&E) farvning. *E histopatologisk observation blev udført for at finde ud af den toksikologiske effekt af EECS på de degenerative og nekrotiske celler i vævene. *e skader blev graderet baseret på Gibson-Corley et al. [45].
2.8. Statistisk analyse.
*e data blev repræsenteret som middel ± standardafvigelse (SD). Envejsvariansanalyse (ANOVA) blev brugt til at sammenligne de normalfordelte data blandt behandlingerne, efterfulgt af en post hoc multiple sammenligningstest, når en anden signifikans blev opnået. Når dataene ikke blev distribueret normalt, blev Kruskal-Wallis og Mann-Whitney U-testen brugt til at vurdere forskellene mellem behandlinger.
Supportive Service Of Wecistanche - Den største cistanche-eksportør i Kina:
E-mail:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/Tlf:+86 15292862950
Shop for flere specifikationer detaljer:
https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop
