Trombomodulin er opreguleret i nyrerne hos kvinder med præeklampsi
Mar 22, 2022
Endotelglykoproteinet thrombomodulin regulerer koagulation, vaskulær inflammation og apoptose. I dennyre, beskytter trombomodulin den glomerulære filtrationsbarriere ved at fremkalde krydstale mellem det glomerulære endotel og podocytter. Adskillige glomerulære patologier er karakteriseret ved et tab af glomerulær trombomodulin. Hos kvinder med præeklampsi øges serumniveauet af opløseligt trombomodulin, hvilket muligvis afspejler et tab fra det glomerulære endotel. Vi satte os for at undersøge, om trombomodulin-ekspression er nedsat i nyrerne hos kvinder med præeklampsi og rotter udsat for en angiogenese-hæmmer. Thrombomodulin-ekspression blev undersøgt ved hjælp af immunhistokemi og qPCR inyreobduktionsvæv indsamlet fra 11 præeklamptiske kvinder, 22 gravide kontroller og 11 hypertensive ikke-gravide kvinder. Yderligere,nyrerfra rotter behandlet med stigende doser af sunitinib eller sunitinib i kombination med endotelinreceptorantagonister blev undersøgt. Glomerulære thrombomodulin-proteinniveauer blev øget inyreraf kvinder med præeklampsi. Parallelt hermed blev glomerulært trombomodulin opreguleret på en dosisafhængig måde hos rotter udsat for sunitinib, og opreguleringen af glomerulær trombomodulin gik forud for indtræden af histopatologiske ændringer. Selektiv ETAR-blokade, men ikke dobbelt ETA/BR-blokade, normaliserede den sunitinib-inducerede stigning i thrombomodulin-ekspression og albuminuri. Vi foreslår, at glomerulær trombomodulin-ekspression øges på et tidligt stadium afnyreskadeinduceret af antiangiogene tilstande. Opreguleringen af dette nefroprotektive protein i glomerulære endotelceller kan tjene som en mekanisme til at beskytte den glomerulære filtrationsbarriere i præeklampsi.
Nøgleord;nyresvigt; nyre; nyreskade; Renal dysfunktion; nyrevæv; nyre
CISTANCHE VIL FORBEDRE NYRE/NYRESVIGT
Præeklampsi rammer 3-5 procent af gravide kvinder og er en vigtig årsag til morbiditet og mortalitet hos mødre og nyfødte1. Præeklampsi er karakteriseret ved placenta dysfunktion og placenta produktion af adskillige antiangiogene og pro-inflammatoriske faktorer (f.eks. opløseligt Flt-1, opløseligt endoglin og TNF-alfa), som bidrager til systemisk endotel dysfunktion, en stigning i vaskulær modstand og komplikationer i flere organer2. Detnyreer hyppigt ramt hos kvinder med præeklampsi, med symptomer, der spænder fra mild proteinuri til nefrotisk proteinuri ognyresvigtpå senere stadier af sygdommen3. De patologiske ændringer inyreraf kvinder med præeklampsi er karakteriseret ved endoteliner, udslettelse af podocytfodprocessen og podocyttab4,5. Hvad der driver disse patologiske ændringer er ikke fuldt ud forstået.Renal dysfunktioni svangerskabsforgiftning er sandsynligvis forårsaget af en forstyrrelse af signalvejene involveret i opretholdelsen af den glomerulære filtrationsbarriere6. For eksempel fører øgede niveauer af den antiangiogene faktoropløselige Flt-1 til nedsat VEGF-signalering i glomerulus, hvilket resulterer i en forstyrrelse af den glomerulære filtrationsbarriere, proteinuri og glomerulær endoteliose7,8. I overensstemmelse hermed er lægemidler, der hæmmer angiogen signalering, såsom sunitinib, forbundet med uønskede virkninger, der efterligner præeklampsi.nyrefænotype 9. En anden vigtig mediator af hypertension ognyreskadeved præeklampsi og VEGF-hæmning er endotelinsystemet10. Endotelin er en potent vasokonstriktor produceret af endotelceller, som signalerer gennem endotelintypen
En receptor (ETAR) på vaskulære glatte muskelceller, hvilket resulterer i vasokonstriktion11. Omvendt resulterer endotelinsignalering gennem endotelin type B-receptoren (ETBR) i produktionen af nitrogenoxid og prostacyclin, som fremmer vasodilatation11,12. ETR-blokade, og især selektiv ETAR-antagonisme, reducerer effektivt blodtryk og proteinuri i gnavermodeller af præeklampsi og VEGF-hæmning13. Tilsvarende har vi for nylig demonstreret, at selektiv ETAR-blokade reddernyrefænotype af rotter udsat for VEGF-hæmning14. Thrombomodulin er et transmembrant glycoprotein, der primært udtrykkes af endotelceller og er en komponent i endoteloverfladen glycocalyx15. Trombomodulin opretholder vaskulær homeostase ved at regulere koagulation, inflammation og apoptose15,16. Hos kvinder med præeklampsi er der rapporteret øgede serumniveauer af opløseligt trombomodulin17, hvilket sandsynligvis afspejler øget spaltning af trombomodulin-ektodomænet fra endotelet18. Trombomodulin spiller en central rolle i opretholdelsen af den glomerulære fltrationsbarriere hos diabetiske mus: forstyrret trombomodulinsignalering fører til øget apoptose af glomerulære endotelceller og podocytter og øget glomerulær komplementaktivering, hvilket resulterer i forværret proteinuri og glomerulosklerose19,20. Trombomodulin har altså vigtige cytobeskyttende effekter på den glomerulære fltrationsbarriere, og forstyrrelse af trombomodulin-signalering kan være involveret inyre sygdomved præeklampsi. I denne undersøgelse undersøgte vi, om thrombomodulin-ekspression er nedsat inyreraf kvinder med præeklampsi og i en rottemodel for VEGF-hæmning. Desuden undersøgte vi endotelinsystemets rolle på renal trombomodulinekspression i denne rottemodel ved at bruge en selektiv ETAR-antagonist og en dobbelt ETA/BR-antagonist.
Metoder
Patientmateriale. Den renale obduktionskohorte anvendt i denne undersøgelse er blevet beskrevet før (se:21). Kort sagt blev der gennemført en landsdækkende søgning i det hollandske patologiregister (PALGA) for at indsamlenyrevævfra patienter, der var gravide og fik bekræftede tilfælde af præeklampsi. Derudover blev to kontrolgrupper inkluderet: (1) gravide kvinder uden en hypertensiv lidelse før eller under graviditeten og (2) unge ikke-gravide kvinder med en sygehistorie med kronisk hypertension. Patologidataene var forbundet med optegnelserne fra National Maternal Mortality Committee of the Dutch Society of Obstetrics. Præeklampsi blev defineret ud fra de diagnostiske kriterier fra International Society for the Study of Hypertension in Pregnancy (ISSHP)22. Paraffin-indlejretnyreprøver fra 11 kvinder med præeklampsi, 22 normotensive gravide kontroller og 11 ikke-gravide hypertensive kontroller var tilgængelige for denne undersøgelse. Alle obduktionsprøver blev kodet og derefter håndteret og analyseret anonymt i overensstemmelse med de hollandske nationale etiske retningslinjer (Code for Proper Secondary Use of Human Tissue, Dutch Federation of Medical Scientific Societies). Denne undersøgelse blev godkendt af Leiden University Medical Center Medical Ethics Committee (licensnummer P12.107).
CISTANCHE VIL FORBEDRE NYRE-/NYREFUNKTIONEN
Rotter. Forsøg blev udført i overensstemmelse med retningslinjerne fra Europa-Parlamentets direktiv 2010/63/EU og den hollandske lov om dyreforsøg efter at have opnået godkendelse fra Eras mus Medical Centers dyreetiske komité (licensnummer 118-16-01). Wistar Kyoto hanrotter (WKY, 280-300 g) blev opnået ved 10 ugers alderen. Dyrene blev anbragt i et forsøgsrum med en temperatur på 21-22 grader og en 12-h lys/mørke cyklus. Dyr havde adgang til standard laboratoriefoder og vand ad libitum. To forskellige eksperimenter blev brugt i denne undersøgelse, med detaljerede metoder og fænotypen af disse dyr offentliggjort tidligere14,23. Kort fortalt blev rotter behandlet med forskellige doser af sunitinib med eller uden ETR-antagonister i 8 dage. Aortablodtryk blev målt ved hjælp af radiotelemetri. Før og efter administration af behandlingen/behandlingerne blev rotter anbragt i metaboliske bure i 48 timer. Den første dag blev brugt til akklimatisering og den anden dag til indsamling af 24-h urinprøver. I den første undersøgelse blev rotter tilfældigt tildelt til at modtage en lav, mellem- eller høj dosis sunitinib (henholdsvis 7, 14 eller 26,7 mg/kg/dag po sunitinib-L-malat (Sutent, Pfizer) eller vehikel i 8 dage . Ved afslutningen af eksperimentet blev rotter aflivet med 60 mg/kg pentobarbital intraperitoneal og blodudblæsning via abdominal venepunktur23. I den anden undersøgelse fik rotter vehikel eller den mellemliggende dosis af sunitinib (14 mg/kg/dag po) alene eller i kombination med macitentan (dobbelt ETA/BR-antagonist, 100 mg/kg/dag po) eller sitaxentan (selektiv ETAR) antagonist, 30 eller 100 mg/kg/dag po). Ved afslutningen af eksperimentet blev rotter aflivet via Forane (isofluran) anæstesioverdosis og blodudblæsning via abdominal venepunktur14. I begge undersøgelser, efter eutanasi,nyrerblev hurtigt udskåret til efterfølgende analyser.
Renal histologi.Nyresnit blev blindt evalueret af en patolog for tilstedeværelse eller fravær af endothelcellehævelse, epitelcellehævelse, iskæmi og intra-epitelprotein. Til elektronmikroskopi blev to glomeruli undersøgt, tilstedeværelsen af glomerulære endoteliner og podocytmorfologi blev undersøgt. Histopatologiske fund hos mennesker og dyr udsat for forskellige koncentrationer af sunitinib er blevet publiceret før21,23.
Immunhistokemi.Nyresnit blev afparaffineret. Varmeinduceret antigenudvinding blev udført under anvendelse af citrat (anti-humant thrombomodulin antistof) eller Tris/EDTA (anti-rotte thrombomodulin og anti-ETAR antistoffer) buffere. Peroxidase blev blokeret i en hydrogenperoxidopløsning i 20 min.Nyreprøver blev inkuberet med et muse monoklonalt anti-humant thrombomodulin (1:200, Leica Biosystems, Danvers), et kanin monoklonalt anti-muse/rotte thrombomodulin (1:2000, Abcam) eller et kanin polyklonalt anti-ETAR (1:700, Invitrogen, Carlsbad) antistof i en time ved stuetemperatur. Bindingen af det primære antistof blev visualiseret med peroxidase-mærket anti-mus eller mærket anti-kanin polymer (Dako, Danmark) og diaminobenzidin som et kromogen.
Farvningsanalyse.Trombomodulin- og ETAR-farvning blev bedømt af to uafhængige observatører, der var blindet med hensyn til klinisk diagnose og behandling (CCLA og MB). Femogtyve tilfældigt udvalgte glomeruli pr. prøve blev bedømt ved anvendelse af en semikvantitativ skala som følger: 0, fraværende; 1,<10% glomerular="" staining;="" 2,="" 10–49%="" glomerular="" staining;="" 3,="" 50–90%="" of="" glomerular="" staining;="" and="" 4,="">90 procent af glomerulær farvning. Repræsentative eksempler på de forskellige scores er vist i supplerende figurer S1, S2, S3. Interobservatøroverensstemmelse var minimalt tilstrækkelig i alle scoringsforsøg (κ Større end eller lig med 0,5). Når observatører scorede glomeruli anderledes, opnåedes konsensus.
qPCR.Kvantitativ PCR blev udført for at kvantificere mRNA-ekspression af thrombomodulin og ET AR. RNA blev isoleret med TRIzol-reagens (Life Technologies, San Francisco, CA, USA). Syntese af cDNA blev udført med AMV revers transkriptase (Roche, Basel, Schweiz), og SYBR Green kvantitativ PCR blev udført i henhold til producentens protokol (Bio-Rad Laboratories Inc, Hercules, CA, USA). Primersekvenser er beskrevet i supplerende tabel S1. Ekspression blev målt ved den sammenlignende tærskelcyklusmetode og normaliseret til hypoxanthin-phosphoribosyltransferase-ekspression. En smeltekurveanalyse blev udført for at verificere applikationens specificitet.
CISTANCHE VIL FORBEDRE NYRE/NYRE DIALYSEN
Statistisk analyse.Interobservatørvariation blev bestemt ved anvendelse af kappa-statistikken. Normalt fordelte kontinuerlige data blev analyseret ved hjælp af en-vejs ANOVA efterfulgt af den mindst signifikante forskel post-hoc test for de planlagte parvise gruppe sammenligninger. For at analysere forskelle i glomerulær trombomodulin-ekspressionsscore mellem grupper i obduktionskohorten blev ordinær logistisk regression for klyngede data med generaliserede estimeringsligninger (GEE) brugt. Til at analysere formodede korrelationer mellem trombomodulinekspression og histopatologiske eller kliniske fund blev Pearsons korrelation brugt. Formerne af thrombomodulin- og ET AR-responskurverne over sunitinib-dosisområdet blev undersøgt ved hjælp af regressionslinjer. s<0.05 was="" considered="" statistically="" signifcant.="" unless="" stated="" otherwise,="" summary="" data="" in="" the="" figures="" are="" reported="" as="" the="">
Resultater Glomerulær trombomodulin er øget i nyrerne hos kvinder med præeklampsi. Trombomodulinfarvning blev analyseret i nyreprøver fra 11 kvinder med præeklampsi,22 normotensive gravide kontroller og 11 ikke-gravide hypertensive kontroller. De hypertensive kontroller var ældre end kvinder i de to andre undersøgelsesgrupper; sammenlignet med gravide kontroller havde præeklamtiske kvinder længere graviditet og højere blodtryk (Supplerende tabel S2). Uanset tilstedeværelsen af thrombomodulin i glomerulus, var thrombomodulin til stede i de peritubulære kapillærer i alle undersøgte prøver (Supplerende figur S1). I glomeruli syntes trombomodulinekspression at stamme fra den vaskulære pol (fig. 1A). I gennemsnit var glomerulær trombomodulinekspression højere hos præeklamptiske patienter sammenlignet med gravide og hypertensive kontroller (fig. 1); sammenlignet med præeklampsi havde kontroller lavere glomerulære trombomodulin-ekspressionsscore (gravide kontroller, OR: 3.0; 95 procent -CI: (1.1, 7.8), p.<0.05; and="" hypertensive="" controls,="" or:="" 6.1;="" 95%-ci:="" (1.6,="" 23.3),=""><0.01). in="" pre-eclampsia="" cases,="" glomerular="" thrombomodulin="" protein="" levels="" were="" inversely="" associated="" with="" the="" presence="" of="" glomerular="" endothelins="" (r:="" −0.71;=""><0.05). furthermore,="" in="" hypertensive="" controls,="" thrombomodulin="" levels="" were="" inversely="" associated="" with="" the="" glomerular="" tuf="" size="" (r:−0.79,=""><>
Glomerulær trombomodulinekspression hos rotter udsat for sunitinib.For bedre at forstå vores resultater inden for præeklampsinyrer,glomerulær trombomodulinfarvning blev undersøgt hos rotter, der blev udsat for stigende doser af VEGF-receptorhæmmeren sunitinib. Administration af sunitinib resulterede i en stigning i blodtryk og proteinuri på en dosisafhængig måde23. Rotter udsat for den lave dosis sunitinib havde ingen histopatologiske anomalier; endoteliner blev observeret inyreraf rotter udsat for de mellemliggende og høje doser af sunitinib; fibrinaflejringer blev kun set i de glomerulære kapillærer hos dyr udsat for en høj dosis sunitinib23. Ingen af de scorede glomeruli hos rotter var negative for trombomodulin. Glomerulært trombomodulinprotein var øget i nyrerne hos rotter, der blev udsat for de lave og mellemliggende doser af sunitinib (p < 0.05,="" fig.="" 2a),="" men="" ikke="" hos="" rotter,="" der="" blev="" udsat="" for="" den="" højeste="" dosis="" af="" sunitinib.="" til="" støtte="" for="" disse="" fund="" viste="" en="" regressionsmodel,="" at="" glomerulære="" thrombomodulin-proteinniveauer="" var="" ikke-lineært="" forbundet="" med="" sunitinib-dosis="" som="" en="" statistisk="" signifikant="" kvadratisk="" relation="" (fig.="" 2b,="" y="2.829" plus="" 0.="" 056x−0,002x2,=""><0.01). to="" study="" the="" factors="" that="" may="" induce="" upregulation="" of="" glomerular="" thrombomodulin,="" we="" next="" stained="" for="" the="" etar,="" which="" mediates="">nyreskadeinduceret af VEGF-hæmning. Hos rotter behandlet med lave og mellemliggende doser sunitinib, men ikke hos rotter behandlet med en høj dosis sunitinib, var glomerulær ETAR-farvning øget sammenlignet med kontrolrotter (p < {0}}.0="" 1,="" fig.="" 2c).="" parallelt="" med="" trombomodulinniveauer="" var="" glomerulære="" etar-niveauer="" kvadratisk="" forbundet="" med="" sunitinib-dosis="" (y="0.642" plus="" 0.087x−0.003x2,=""><0.001). without="" taking="" into="" account="" the="" different="" treatment="" groups,="" glomerular="" etar="" protein="" levels="" were="" directly="" correlated="" with="" glomerular="" thrombomodulin="" protein="" levels="" (r:="" 0.460,=""><>
Behandling med ETAR-blokkeren sitaxentan normaliserer trombomodulin-ekspression.For at undersøge, om trombomodulin-ekspression reguleres af endotelinsignalering, blev rotter udsat for den mellemliggende dosis af sunitinib behandlet med ETR-blokerende midler. Behandling med en selektiv ETAR-antagonist (sitaxentan) normaliserede blodtryk og albuminuri hos sunitinib-behandlede rotter14 (Supplerende figur S4). Omvendt resulterede behandling med en dobbelt ETA/BR-antagonist (macitentan) i normalisering af blodtrykket, men ikke i normalisering af sunitinib-induceret albuminuri14 (Supplerende figur S4).
Thrombomodulin-mRNA-ekspression var øget i nyrerne hos rotter udsat for sunitinib sammenlignet med kontroller (fig. 3A, s.<0.01). administration="" of="" sitaxentan,="" at="" both="" concentrations,="" on="" top="" of="" sunitinib="" normalized="" thrombomodulin="" mrna="" expression="" to="" control="" levels=""><0.01). however,="" the="" administration="" of="" macitentan="" did="" not="" affect="" thrombomodulin="" mrna="" levels.="" relative="" thrombomodulin="" mrna="" expression="" was="" directly="" associated="" with="" relative="" etar="" mrna="" expression="" in="" the="" control="" group="" (r:="" 0.936,=""><0.01). in="" animals="" exposed="" to="" sunitinib="" only,="" thrombomodulin="" mrna="" expression="" was="" directly="" associated="" with="" the="" amount="" of="" albuminuria="" (r:="" 0.876,=""><0.01). at="" the="" protein="" level,="" sunitinib="" exposure="" resulted="" in="" higher="" glomerular="" thrombomodulin="" expression="" as="" compared="" to="" controls="" (fig. 3b,=""><0.05). neither="" co-administration="" of="" sunitinib="" with="" sitaxentan="" or="" macitentan="" resulted="" in="" the="" normalization="" of="" the="" sunitinib-induced="" increase="" in="" glomerular="" thrombomodulin="" protein="">
Diskussion
Her viser vi, at det nefroprotektive protein thrombomodulin er øget inyreglomeruli hos kvinder med præeklampsi. Endvidere viser vi, at hos rotter, der er udsat for angiogenesehæmmeren sunitinib, opreguleres glomerulært trombomodulin på en dosisafhængig måde, og stigningen i glomerulær trombomodulin går forud for indtræden af histopatologiske manifestationer. Endelig viser vi, at blokering af ETAR normaliserer den sunitinib-inducerede opregulering af glomerulær trombomodulin. Vores resultater tyder på, at opreguleringen af glomerulær endotelial trombomodulin forekommer på et tidligt stadium af præeklamptisknyreskadeog tjener som en mekanisme til at beskytte den glomerulære fltrationsbarriere. Vores undersøgelse er den første til at rapportere øget glomerulær trombomodulin-ekspression i præeklampsi. Da vi tidligere fandt ud af, at i moderkagen hos kvinder med præeklampsi, er trombomodulin nedreguleret24, dvs.
øgede serumniveauer af opløseligt trombomodulin-ektodomæne hos præeklampsipatienter17 kan stamme fra det glomerulære endotel. Desuden fandt vi en omvendt sammenhæng mellem glomerulær trombomodulin-ekspression og tilstedeværelsen af glomerulære endoteliner, hvilket tyder på, at opreguleringen af trombomodulin tjener som en glomerulær beskyttelsesmekanisme. Denne opfattelse understøttes af prækliniske beviser hos diabetiske mus, hvor thrombomodulin kritisk bevarer glomerulær celleoverlevelse og undertrykker glomerulær komplementaktivering19,20. I modsætning til vores konstatering af, at en antiangiogene tilstand øger glomerulære trombomodulinniveauer, fandt en tidligere undersøgelse, at sFlt-1-behandling reducerede glomerulær trombomodulin-ekspression hos rotter med halvmåneglomerulonefritis25. Hara et al.25 undersøgte ikke effekten af sFlt-1 på glomerulær trombomodulin hos raske rotter. Derfor, selvom øgede niveauer af inflammatoriske faktorer også findes i præeklampsi, kan nedreguleringen af glomerulær trombomodulin i denne undersøgelse forklares af den højgradige glomerulære inflammation til stede i glomerulonefritis (proinflammatoriske cytokiner, komplementaktivering), som kraftigt undertrykker trombomodulin-ekspression26 .
For at belyse, om glomerulær trombomodulin er opreguleret ved præeklampsi som følge af systemisk VEGF-receptorhæmning, undersøgte vi trombomodulinekspression hos rotter, der blev udsat for sunitinib. Sunitinib øgede dosisafhængigt glomerulært trombomodulin ved lave og mellemliggende doser, men ikke ved den højeste dosis. Da histologiske ændringer ikke blev set i nyrerne hos rotter, der blev eksponeret for lavdosis sunitinib23, gik stigningen i glomerulær trombomodulin-ekspression forud for begyndelsen af glomerulær histopatologisk skade induceret af sunitinib. Hos rotter udsat for en mellemdosis af sunitinib blev det højeste ekspressionsniveau af glomerulær trombomodulin observeret, og dette var direkte forbundet med mængden af albuminuri. Den renale histopatologiske fænotype af vores humane præeklampsitilfælde var sammenlignelig med nyreskaden hos rotter behandlet med en mellemdosis sunitinib: endoteliner blev observeret i 6 ud af 11 præeklampsi
tilfælde og mikrotrombi blev observeret i 1 ud af 11 præeklampsi-tilfælde21, hvorimod i rottemodellen mellemdosisbehandlede rotter havde endoteliner, og de højeste dosisbehandlede rotter havde endoteliner kombineret med fibrinaflejringer23. Vi foreslår, at glomerulær trombomodulin-ekspression øges på et tidligt stadium af præeklampsi og angiogen hæmning, som en beskyttende mekanisme til at udligne antiangiogent stress til den glomerulære fltrationsbarriere. I modsætning hertil blev thrombomodulin-ekspression reduceret til kontrolniveauer i de højeste dosisbehandlede rotter. En nylig undersøgelse viste, at dimensionerne af det endoteliale glycocalyx-lag er reduceret hos kvinder med svær tidligt indsættende præeklampsi27. Derfor foreslår vi også, at hos de højdosis sunitinib-behandlede rotter påvirkes den endoteliale glycocalyx, hvilket fremkalder interaktion mellem trombomodulin og enzymer, og derved bidrager til den proteolytiske spaltning og tab af glomerulært trombomodulinprotein. I vores præeklampsi-tilfælde var de øgede glomerulære trombomodulinniveauer forbundet med mindre glomerulære endoteliner, en læsion direkte forårsaget af forstyrret glomerulær VEGF-signalering. In vitro undersøgelser har identificeret VEGF som en potent inducerende faktor for trombomodulinekspression i endotelceller28. Derfor kan opreguleringen af renalt thrombomodulin under antiangiogene tilstande såsom præeklampsi og angiogen hæmning virke kontraintuitiv. Interessant nok viste en undersøgelse, at VEGF er øget i glomeruli hos kvinder med præeklampsi29, hvilket sandsynligvis afspejler en glomerulær kompensatorisk mekanisme i et forsøg på at opveje den reducerede VEGF-biotilgængelighed. Således kan opreguleringen af thrombomodulin være forårsaget af en kompenserende stigning af glomerulær VEGF under systemiske antiangiogene betingelser. Endvidere kan endotelinsignalering være involveret i reguleringen af glomerulær trombomodulin. Plasma-endotelinniveauer er øget hos kvinder med præeklampsi30 og er forbundet med systemiske sFlt-1-niveauer31,32. I vores rottemodel resulterede både behandlinger med sitaxentan (ETAR-antagonist) og macitentan (dobbelt ETA/BR-antagonist) i normaliseringen af sunitinib-induceret hypertension hos vores rotter14. Imidlertid normaliserede kun behandling med sitaxentan (ETAR-antagonist) den sunitinib-inducerede opregulering af renalt thrombomodulin og nedsat albuminuri. Dette tyder på, at regulering af renal thrombomodulin-ekspression er uafhængig af hypertension-medieret endotelskade, hvilket også blev understøttet af manglen på øget thrombomodulin-ekspression hos vores hypertensive kontrolpatienter. Det mangler at blive undersøgt, om ETAR inducerer thrombomodulin-ekspression via systemiske effekter eller via signalering i glomerulære endotelceller specifikt. Interessant nok blev thrombomodulin-ekspression kun normaliseret på mRNA-niveau efter ETAR-blokade i sunitinib-behandlede rotter, men ikke på proteinniveau. Denne uoverensstemmelse kan forklares ved post-translationelle effekter, proteinets halveringstid og faktorer, der påvirker spaltningen af trombomodulin fra endotelet.
Trombomodulin har vigtige anti-inflammatoriske egenskaber, som omfatter inhibering af leukocytinfiltration ved at sekvestrere proinflammatoriske molekyler såsom Lewis y-antigenet og HMGB-133,34, sænke NF-KB-aktivitet35 og hæmme komplementaktivering20. Tidligere rapporterede vi, at i vores præeklampsitilfælde var glomerulær komplementaktivering øget sammenlignet med gravide og hypertensive kontroller36. Dette tyder på, at opreguleringen af glomerulært endothelial trombomodulin i præeklampsi fungerer som en anti-inflammatorisk og anti-komplementmekanisme. Ud over dets velkendte anti-inflammatoriske virkninger fandt en nylig undersøgelse, at thrombomodulin har proinflammatoriske egenskaber; trombomodulin binder leukocytintegrinerne LFA-1 og Mac1 og fremmer derved leukocytadhæsion til endotelet in vitro37. Stigningen i glomerulær trombomodulin kan derfor også direkte bidrage til glomerulær inflammation og beskadigelse. Vi må erkende begrænsningerne i vores undersøgelse. For det første døde kvinderne med præeklampsi, hos hvem vi undersøgte glomerulær trombomodulin-ekspression, alle på grund af følgerne af præeklampsi. Dette gør disse kvinder til en specifik undergruppe af præeklampsipatienter, og derfor er resultaterne af denne undersøgelse muligvis ikke anvendelige for alle kvinder, der udvikler præeklampsi. For det andet blev hanrotter behandlet med sunitinib brugt som model til at studere trombomodulinregulering under antiangiogene forhold. Desuden fører sunitinib til hæmning af forskellige receptortyrosinkinaser og er ikke en specifik hæmmer af VEGF. Det er klart, at denne model ikke fuldt ud efterligner præeklampsi, men behandling med sunitinib fører til hypertension og proteinuri23. Derfor var vi i stand til at bruge denne model til at studere trombomodulinregulering under antiangiogene forhold. På trods af begrænsningerne i vores undersøgelse fremlægger den interessant indsigt i mekanismerne for nyreskade i præeklampsi. Som konklusion øges renal trombomodulinekspression ved præeklampsi og i en sunitinib-induceret model for angiogen hæmning. Vi spekulerer i, at stigningen i glomerulære thrombomodulin-niveauer afspejler en reno-beskyttende mekanisme som reaktion på antiangiogent stress på den glomerulære fltrationsbarriere. Endvidere normaliserede behandling med en ETAR-antagonist renal trombomodulin-mRNA-ekspression samtidig med at reducere proteinuri hos sunitinib-behandlede rotter. Mere forskning er berettiget om trombomodulins rolle i den glomerulære fltrationsbarriere.
