RNA M6 A-læseren YTHDF2 kontrollerer NK-celle antitumor og antiviral immunitet del 2

YTHDF2 er nødvendig for den antivirale funktion af NK-celler

For at bestemme, om Ythdf2-mangel påvirker den antivirale aktivitet af NK-celler, injicerede vi 2,5 × 104 PFU af MCMV i Ythdf2WT-mus og Ythdf2ΔNK-mus.

Antiviral aktivitet og immunitet er uadskillelige og har et tæt forhold. Vira er meget små mikroorganismer, men de kan forårsage mange sygdomme og endda død i alvorlige tilfælde.

Antiviral aktivitet refererer til kroppens evne til at bekæmpe vira. Mennesker med høje niveauer af antiviral aktivitet kan fjerne vira hurtigere og mere effektivt modstå sygdommens begyndelse. Immunitet refererer til de defensive stoffer produceret af kroppen efter tilpasningsperioden, som kan fjerne skadelige stoffer fra kroppen.

At få nok søvn, spise en sund kost og motion er ekstremt vigtigt for at bevare et godt helbred. Disse faktorer kan forbedre menneskets immunitet og derved øge kroppens antivirale aktivitet. Især i denne tid med COVID-19-pandemien er det vigtigt at forblive sund.

Derudover har et stabilt humør også stor indflydelse på immuniteten. En optimistisk holdning kan få folk til at føle sig fysisk og mentalt godt tilpas, og dermed forbedre immuniteten og antiviral aktivitet. Tværtimod vil pessimistiske følelser reducere kroppens immunitet og gøre kroppen mere sårbar over for virusangreb.

Kort sagt hænger antiviral aktivitet og immunitet sammen, og vi bør være opmærksomme på at forbedre kroppens immunitet og antivirale aktivitet på forskellige måder for at sikre fysisk sundhed og en sund livsstil. Det kan ses, at vi skal forbedre hukommelsen, og Cistanche deserticola kan forbedre hukommelsen markant, fordi Cistanche deserticola har antioxidant-, anti-inflammatoriske og anti-aldringseffekter, som kan hjælpe med at reducere oxidation og inflammatoriske reaktioner i hjernen og derved beskytte nervesystemets sundhed. Derudover kan Cistanche deserticola også fremme væksten og reparationen af ​​nerveceller og dermed forbedre forbindelsen og funktionen af ​​neurale netværk. Disse effekter kan hjælpe med at forbedre hukommelsen, indlæringen og tænkehastigheden og kan også forhindre udviklingen af ​​kognitiv dysfunktion og neurodegenerative sygdomme.

Klik på kend kosttilskud for at øge hukommelsen

Resultaterne viste, at Ythdf2ΔNK-mus var mere modtagelige for MCMV-infektion, som vist ved signifikant vægttab og øgede virale titere i blodet, milten og leveren sammenlignet med Ythdf2WT-mus (fig. 3, A og B; og fig. S2, A og B) .

Vi observerede også en signifikant reduktion i procentdelen og det absolutte antal af totale NK-celler i milten og blodet fra Ythdf2ΔNK-mus sammenlignet med dem i Ythdf2WT-mus efter infektion (Fig. 3, C og D; og Fig. S2, C og D). Yderligere analyse viste, at NK-celler fra Ythdf2ΔNK-mus havde signifikant lavere ekspression af Ki67 end Ythdf2WT-mus (fig. 3, E-G).

Imidlertid var NK-cellelevedygtighed ens mellem Ythdf2WT-mus og Ythdf2ΔNK-mus, som vist ved annexin V-farvning (fig. S2 E). Disse data indikerer, at mangel på YTHDF2 i NK-celler resulterer i en defekt i celleproliferation snarere end celleoverlevelse under virusinfektion.

NK-celler hæmmer MCMV-infektion gennem de aktiverende receptorerLy49H og Ly49D, og ​​processen er karakteriseret ved perforin- eller IFN-medieret antiviral respons (Arase et al., 2002; Lee et al., 2009; Loh et al., 2005; Orr et al. al., 2010; Sumaria et al., 2009). Vi fandt, at Ythdf2ΔNK-mus havde signifikant reduceret Ly49H+ og Ly49D+ NK-celler i milten og blodet sammenlignet med Ythdf2WT-mus efter infektion (fig. 3, H-J; og fig. S2, F-K).

Yderligere analyse viste, at selvom kun Ly49D+Ly49H+-celler pr. procent viste en forskel i Ythdf2ΔNK-mus sammenlignet med den for Ythdf2WT-mus, viste det absolutte celleantal af Ly49D−Ly49H+ NK-celler, Ly49D+Ly49H−49H+-celler i Ly49D- og LyNK-cellerne, og Ly49D-LyNK-celler, milt og blod var alle signifikant faldet i Ythdf2ΔNK-mus sammenlignet med Ythdf2WT-mus efter infektion (fig. S2, L-W).

Vores data tyder på, at kontrol af MCMV-infektion med YTHDF2 primært synes at være medieret af Ly49D+Ly49H+ NK-celler. Granzym B- og IFN-produktionen af ​​NK-celler i Ythdf2ΔNK-mus var sammenlignelig med Ythdf2WT-mus (fig. S2, X og Y).

Vi fandt signifikant reduceret perforinproduktion af Ythdf2ΔNK mus sammenlignet med Ythdf2WT mus i både milt og blod 7 d efter infektion (fig. 3, K-M), hvilket indikerer, at YTHDF2 hovedsageligt påvirker sperforin-medieret antiviral aktivitet mod MCMV i NK-celler. Disse data tyder på, at YTHDF2 er kritisk for NK-celleudvidelse og effektorfunktion under MCMV-infektion.

YTHDF2 kontrollerer NK-celle-homeostase og terminal modning i en steady state

Ovenstående resultater, at Ythdf2-mangel i NK-celler forstærkede tumormetastaser og nedsat NK-cellekapacitet til at kontrollere MCMV-infektion, tilskyndede os til at undersøge, om YTHDF2 er påkrævet til NK-cellevedligeholdelse i en steady state.

Som vist i fig. 4A var frekvensen og det absolutte antal af NK-celler signifikant reduceret i det perifere blod, milt, lever og lunge, men ikke i knoglemarven (BM) af Ythdf2ΔNK-mus sammenlignet med Ythdf2WT-mus.

Der var dog ingen signifikante ændringer blandt almindelige lymfoide progenitor, præ-NK celle progenitor og raffineret NK celle progenitor (NKP) i BM (Fathman et al., 2011) mellem Ythdf2WT og Ythdf2ΔNK mus (fig. S3 A), hvilket indikerer, at YTHDF2 påvirker muligvis ikke NK-cellers tidlige udvikling i vores model. For at udforske de potentielle mekanismer, der er ansvarlige for faldet af NK-celler i Ythdf2ΔNK-mus, undersøgte vi celleproliferation, levedygtighed og handleevne af NK-celler efter Ythdf2-deletion i en steady state.

Procentdelen af ​​prolifererende NK-celler var sammenlignelig mellem Ythdf2WT- og Ythdf2ΔNK-mus, som det fremgår af Ki67-farvning (fig. S3 B). Levedygtigheden af ​​NK-celler var også ækvivalent mellem Ythdf2WT og Ythdf2ΔNK mus, som vist ved annexin V-farvning (fig. S3 C).

For at kontrollere, om YTHDF2 påvirker udgangen af ​​NK-celler fra BM til periferien, blev Ythdf2WT- og Ythdf2ΔNK-mus injiceret iv med et antiCD45-antistof for at markere immunceller og aflivet efter 2 minutter, og deres BM-celler blev analyseret. Dette gjorde det muligt for os at kvantificere antallet af NK-celler i de sinusformede versus parenkymale områder af BM, en indikator for NK-cellehandel fra BM til perifert blod under en steady state (Leong et al., 2015).

Resultaterne viste en signifikant reduktion i frekvensen af ​​CD45+ NK-celler i Ythdf2ΔNK-mus sammenlignet med Ythdf2WT-mus i sinusoiderne (fig. 4 B), hvilket indikerer, at Ythdf2-mangel hæmmer udgangen af ​​NK-celler fra BM til cirkulationssystemet in vivo .Immunceller gennemgår homøostatisk proliferation under lymfopeni induceret af visse virusinfektioner eller forårsaget af kemoterapi (Sun et al., 2011).

Selvom vi fandt ud af, at YTHDF2 er uundværlig for NK-celleproliferation ved en steadystate, observerede vi et signifikant fald i celleproliferation under MCMV-infektion (fig. 3, E-G). Vi undersøgte derfor YTHDF2's rolle i regulering af NK-celle homøostatisk proliferation i en lymfopenisk indstilling in vivo. Vi co-overførte et lige så stort antal milt-NK-celler fra CD45.2 Ythdf2ΔNK-mus eller CD45.1 medfødte mus intolymfocyt-deficiente Rag2-/-Il2rg-/- mus.

Resultaterne viste, at en større andel af NK-celler var afledt fra CD45.1WT kontrolmus end fra CD45.2 Ythdf2ΔNK mus på dag 3 efter celleoverførsel (Fig. S3 D). Yderligere analyse viste, at reduktionen af ​​NK-celler fra Ythdf2ΔNK-mus skyldtes svækket celleproliferation (Fig. S3 E), men ikke celleapoptose (Fig. S3 F), hvilket tyder på, at YTHDF2 driver NK-celle homøostatisk proliferation in vivo under lymfopeniske forhold.

Yderligere differentiering af murine NK-celler kan klassificeres i umodne (CD11b−CD27+), mellemmodne (CD11b+CD27+) og terminalmodne (CD11b+CD27−) stadier baseret på CD11b- og CD27-niveauer ( Chiossone et al., 2009; Geiger og Sun, 2016).

Vi fandt ud af, at Ythdf2-ekspression steg med modning, og at CD11b−CD27+, CD11b+CD27+ og CD11b+CD27− viste henholdsvis de laveste, mellemliggende og højeste udtryksniveauer af Ythdf2 (fig. S3 G) ), hvilket indikerer, at YTHDF2 kan være involveret i NK-cellemodning. Vi undersøgte derfor YTHDF2's rolle i NK-cellemodning defineret af celleoverflademarkørerne CD11b og CD27.

Vi fandt, at tab af Ythdf2 i NK-celler resulterede i et signifikant fald i frekvensen af ​​terminale modne NK-celler og/eller en stigning i umodne og mellemmodne NK-celler i milten, leveren, lungen og blodet, men ikke i BM (fig. 4 C og Fig. S3 H), hvilket indikerer, at YTHDF2 positivt regulerer terminal NK-cellemodning. I overensstemmelse med disse data var niveauerne af KLRG1, som er en terminal NK-cellemodningsmarkør, signifikant lavere i Ythdf2ΔNK-mus i milten, leveren og lungen, men ikke BM sammenlignet med den for Ythdf2WT-mus i de tilsvarende organer eller vævsrum (fig. 4 D).

For at bestemme, om det reducerede antal af modne NK-celler ved Ythdf2-mangel er iboende celler, skabte vi kimærer i Rag2-/-Il2rg-/- mus ved at injicere BM-celler fra CD45.1 WT og CD45.2 Ythdf2ΔNK-mus, blandet i en 1:1 forhold.

Som vist ved flowcytometri ved 8 uger efter transplantation blev en reduceret andel af terminale modne NK-celler afledt fra CD45.2 Ythdf2ΔNK BM-celler end dem fra CD45.1 WT-kontrolceller (fig. 4 E), hvilket tyder på, at NK-celleterminal modning kontrolleret af YTHDF2 er celle iboende.T-boks transkriptionsfaktorer Eomer og Tbet er kritiske for NK-cellemodning (Daussy et al., 2014; Gordon et al., 2012).

Intracellulær farvning afslørede en signifikant reduktion i proteinniveauerne af Eomes i NK-celler fra Ythdf2ΔNK-mus sammenlignet med Ythdf2WT-mus (fig. S3 I). Derudover fandt vi, at reduktionen af ​​protein- og mRNA-niveauer af Eomer specifikt forekom i terminale modne (CD11b+CD27−) NK-celler (fig. S3, J-L).

I modsætning til Eomes var ekspressionen af ​​Tbet imidlertid ækvivalent i NK-celler mellem Ythdf2ΔNK og Ythdf2WT-mus (fig. S3, I og K), hvilket indikerer, at YTHDF2 muligvis regulerer NK-celleterminalmodning ved at målrette mod Eomes.

YTHDF2 fremmer NK celle effektor funktion

Vores opdagelse af, at Ythdf2-mangel hæmmede NK-celle-homeostase og modning, motiverede os til at bestemme, om YTHDF2 også undertrykte NK-celle-effektorfunktionen. Den vigtigste mekanisme, der regulerer NK-cellefunktionen, er det relative bidrag fra hæmmende og aktiverende receptorer (Chan et al., 2014).

Vi kontrollerede derefter ekspressionsniveauerne af molekyler forbundet med NKcell-aktivering eller -hæmning. Vi fandt, at ekspressionsniveauerne for de aktiverende receptorer CD226 og NKG2D, men ikke CD69, var faldet i milt-NK-celler fra Ythdf2ΔNK-mus sammenlignet med dem fra Ythdf2WT-mus (fig. 5 A), hvorimod de hæmmende receptorer NKG2A, TIGIT, og receptorer 7}} var ens mellem Ythdf2ΔNK-mus og Ythdf2WT-mus (fig. 5 A og fig. S3 M).

Ythdf2ΔNK NK-celler producerede desuden signifikant færre IFN- end Ythdf2WT NK-celler, når de blev stimuleret med IL-12plus IL-18 eller med YAC-1 muselymfomceller (fig. 5, B og C) ).

Vi testede derefter den cytotoksiske evne af Ythdf2ΔNK NK-celler. Vi fandt, at Ythdf2ΔNK NK-celler havde signifikant reduceret cytotoksicitet mod MHC klasse I-deficiente muselymfomcellelinjer RMA-S (Fig. 5 D), men viste lignende cytotoksicitet mod MHC klasse I-tilstrækkelige RMA-celler (Fig. S3 N) som vist ved en 51Crassay . Tilsammen viser disse resultater, at YTHDF2 er essentiel for NK-celleeffektorfunktion.

For more information:1950477648nn@gmail.com