Unikke og delte miRNA'er af de tre exosomtyper

Dernæst undersøgte vi rollen af ​​de unikke miRNA'er fra de tre exosomtyper i signalregulering. Venn-diagrammet afslørede 16, 27 og 61 unikke miRNA'er i henholdsvis hESC-Exos, hiPSC-Exos og hUC-MSC-Exos og 70 delte miRNA'er (fig. 6A). Det regulatoriske netværk af miRNA-protein-interaktioner blev evalueret ved at målrette de unikke miRNA'er. I hESC-Exos blev de 16 unikke miRNA'er fundet at regulere autofagi, PI3K-AKT, Foxo, HIF-1, ErbB, mTOR, lang levetid, AMPK-vej osv. (Fig. 6B). For de 27 unikke miRNA'er i hiPSC-Exos afslørede KEGG-analyse flere signifikante ontologier, herunder metabolismen af ​​xenobiotika, AGE-RAGE-signalering, mTOR-signalering, retinolmetabolisme, cellulær senescens, MAPK-signalering, etc. (Fig. 6C). I hUC-MSC-Exos blev de 61 unikke miRNA'er fundet at deltage i reguleringen af ​​PI3K-AKT-signalering, human papillomavirusinfektion, cGMP-PKG-signalering, cellulær senescens, Ras-signalering, mTOR-signalering, JAK-STAT-signalering, NF-KB signalering osv. (fig. 6D).

Glycoside af cistanche kan også øge aktiviteten af ​​SOD i hjerte- og levervæv og signifikant reducere indholdet af lipofuscin og MDA i hvert væv, hvilket effektivt fjerner forskellige reaktive iltradikaler (OH-, H₂O₂ osv.) og beskytter mod DNA-skader forårsaget af OH-radikaler. Cistanche phenylethanoid glycosider har en stærk opfangningsevne af frie radikaler, en højere reducerende evne end C-vitamin, forbedrer aktiviteten af ​​SOD i spermsuspension, reducerer indholdet af MDA og har en vis beskyttende effekt på spermmembranfunktionen. Cistanche-polysaccharider kan øge aktiviteten af ​​SOD og GSH-Px i erytrocytter og lungevæv fra eksperimentelt senescent mus forårsaget af D-galactose, samt reducere indholdet af MDA og kollagen i lunge og plasma, og øge indholdet af elastin, har en god rensende effekt på DPPH, forlænge hypoksitiden hos senescent mus, forbedre aktiviteten af ​​SOD i serum og forsinke den fysiologiske degeneration af lunge hos eksperimentelt senescerende mus Med cellulær morfologisk degeneration har forsøg vist, at Cistanche har den gode antioxidantevne og har potentialet til at være et lægemiddel til at forebygge og behandle hudaldringssygdomme. Samtidig har echinacosid i Cistanche en betydelig evne til at opfange DPPH-frie radikaler og har evnen til at opfange reaktive oxygenarter og forhindre frie radikal-induceret kollagen-nedbrydning, og har også en god reparationseffekt på anionskader af thymin frie radikaler.

Klik på Cistanche Deserticola Supplement

【For mere information:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

MiRNA-komponenterne bidrager indirekte i høj grad til flere signalveje. For at undersøge interaktionen mellem de unikke miRNA-klynger og kanoniske veje udførte vi en regulatorisk netværksanalyse ved hjælp af IPA-databasen. IPA-resultater afslørede, at miRNA'er i toplæsningstallet (P<0.05, abundance>1000) i det regulatoriske netværk blev kortlagt til flere kanoniske signalveje. miRNA'er og deres tilsvarende veje er opført i yderligere fil 5. Ved at bruge hESC-Exos miRNA'er som eksempler kan flere miRNA'er med høj overflod, inklusive has-miR-95-3p, has-miR-30a{{8} }p, has-miR- 181-5p, has-miR-183-3p og has-miR-301a-3p, var involveret i AMPK, autofagi, ErbB, lang levetid regulering og FOXO-signalvejen, blandt andre. Cytoscape blev brugt til at tegne netværket af unikke miRNA'er fra de tre exosomtyper og deres regulerede signalveje (Yderligere fil 1: Fig. S11).

miRNA-profiler relateret til pluripotensregulering

To investigate the regulatory effect of exosome-derived miRNAs on the pluripotency of stem cells, we predicted the target genes and screened the miRNAs involved in regulating the above process. Pluripotency-related miRNAs (abundance>1000) i de tre exosomtyper er anført (fig. 7A-C). De tre bedste miRNA'er i de tre exosomtyper var has-miR-302b-3p, has-miR-302a-5p og has-miR{{9} }d-3p (hESC-Exos), has-miR-372-3p, has-miR-371a-5p og has-miR-221-3p (hiPSC-Exos), og has-miR-21-5p, has-miR-146a-5p og has-miR- 320a-3p ( hUC-MSC-Exos). Desuden beskrev vi det regulatoriske netværk af de ti bedste miRNA'er fra exosomer og deres målgener involveret i pluripotensregulering (fig. 7D-F). Venn-diagramanalyse afslørede 12 overlappende miRNA'er, hvilket indikerede, at de kunne være afgørende miRNA-sæt til at regulere stamcellernes pluripotens (fig. 7G-H).

Specifikke proteiner og miRNA'er i de tre exosomtyper

For yderligere at verificere den faktiske ekspression af specifikke proteiner i de tre exosomer udførte vi western blotting for at detektere kandidatproteiner i forskellige veje (fig. 8A og B). For cellecyklussen blev tre afgørende regulatoriske faktorer, MCM5, PCNA1 og CDK1, mere udtrykt i hESC-Exos og hiPSCExos end i hUC-MSC-Exos. PRKAA1, der tilhører ser/thr-proteinkinasefamilien, er en cellulær energi, konserveret faktor i alle eukaryote celler og viste en lignende belastning i de tre exosomer. SYK udtrykkes bredt i hæmatopoietiske celler og er involveret i koblingen af ​​aktiverede immunoreceptorer til nedstrøms signalbegivenheder. BTK spiller en afgørende rolle i B-celleudvikling og immunregulering. Proteinbelastningerne af SYK og BTK var forhøjet i hUC-MSCExos sammenlignet med dem i hESC-Exos eller hiPSC-Exos. Wnt5 er medlem af Wnt-genfamilien, som har været impliceret i udviklingsprocesser, herunder regulering af celleskæbne og mønsterdannelse under embryogenese. hESC-Exos var de mest berigede i Wnt5, efterfulgt af hiPSC-Exos og hUC-Exos. RHEB er afgørende for regulering af vækst og cellecyklusprogression givet dets rolle i mTOR/S6K-signalvejen. Western blotting indikerede, at de tre exosomtyper bar en lignende RHEB-belastning. EGFR er et celleoverfladeprotein, der binder den epidermale vækstfaktor og dermed inducerer receptordimerisering og tyrosin autophosphorylering, hvilket fører til celleproliferation. Både hESC-Exos og hUC-MSC-Exos havde højere EGFR-niveauer end hiPSC-Exos havde. ICAM2 er medlem af den intercellulære adhæsionsmolekyle (ICAM)-familie og medierer adhæsive interaktioner, der er vigtige for antigenspecifik immunrespons, NK-cellemedieret clearance, lymfocytrecirkulation og andre cellulære interaktioner, der er vigtige for immunrespons og overvågning. Blandt de tre exosomer havde hUC-MSC-Exos det højeste ICAM2-niveau. Derudover blev de fem øverste miRNA'er i de tre exosomtyper evalueret ved RT-qPCR, og deres ekspression var i overensstemmelse med RNA-sekventeringsresultaterne (fig. 8C).

Diskussion

EV'er er rige på forskellige biologisk aktive stoffer og er hovedsageligt sammensat af proteiner, nukleotider og lipider [3, 17]. I de seneste årtier har forskersamfundet indvarslet guldalderen for analytiske teknikker til protein-, nukleotid- og lipidomics. Blandt disse teknikker muliggør massespektrometri [14, 20] og high-throughput sekventering [6, 54] storskala screening og identifikation af EV-komponenter. To databaser, Vesiclepedia (https://microvesicles.org) [28] og Expedia (https://evpedia.info) [29], opdateres løbende og giver en oversigt over komponenterne i henholdsvis pattedyr og ikke-pattedyr elbiler. . Som EV'er adskiller exosomer sig fra MV'er med hensyn til deres biologiske oprindelse og fysiske dimensioner [46]. Med kontinuerlige fremskridt inden for elbiler bliver nye metoder konstant optimeret for at lette isoleringen og oprensningen af ​​exosomer, der opfylder den strenghed, der er nødvendig for sammenlignende analyse. For at genopbygge exosomdatabaserne og udvide omfanget af deres kliniske anvendelser beskriver vi i denne undersøgelse komponentrammen for exosomer fra hESC'er og hiPSC'er, som endnu ikke er blevet rapporteret. Vi sammenlignede også deres sammensætning og biologiske funktioner med dem af hUC-MSC-afledte exosomer. Til dette formål arresterede vi exosomer fra EV'er i anerkendte størrelser ved hjælp af ultracentrifugering kombineret med filtrering, undtagen MV'er og apoptotiske kroppe, hvilket lettede forfining af exosomkomponenter. Under den logaritmiske vækstfase af cellerne var de indsamlede CM'er klar til exosom-præparation. Partikelkoncentrationen af ​​hESC-Exos viste sig at være signifikant højere end den for hUC-MSC-Exos, men ligner den for hiPSC-Exos. Lignende resultater blev opnået ved sammenligning af proteinkoncentrationerne. I modsætning hertil udviste totale RNA'er et signifikant fald i gradienter fra hESC-Exos og hiPSC-Exos til hUC-MSC-Exos. Disse resultater indikerer, at hESC'er (H9) kan spille en central rolle i replikationsaktiviteten og har en stærkere evne til at udskille exosomer blandt de tre stamceller.

I tidligere undersøgelser har forskere fokuseret på tilgængeligheden af ​​exosomer [1, 11, 58], mens de er begrænset til deres forskningsfelt. Som følge heraf er der blevet lagt mindre opmærksomhed på forskelsanalyse mellem exosomer afledt af forskellige kilder. Selvom nogle EV-proteomik af de tre stamceller er blevet udført, har forskere endnu ikke forfinet dimensionen af ​​exosomer [19, 32, 59], og analysemetoden er generelt baseret på en enkelt massespektrometriteknik. I denne undersøgelse blev både TMT- og LFQ-metoder brugt til at måle og kvantificere proteinkomponenterne i de isolerede exosomer. Bioinformatik analyse afslørede, at højt belastede proteiner kunne koordinere processerne for udvikling, skadesreparation og metabolisme via intervenerende Wnt, AMPK, VEGF og cellecyklus signalveje, hvilket var i overensstemmelse med en tidligere rapport [19]. Tilsvarende kunne hiPSC-Exos også deltage i ovennævnte biologiske processer ved at påvirke sikkerhedssignalerne. Imidlertid viste EV-proteomikken af ​​hiPSC'er induceret fra HFF'er et andet genontologioverblik, der fokuserede mere på processerne med DNA-replikation og RNA-katabolisme [45]. Derfor udledte vi, at exosomer udskilt fra hiPSC'er afledt af forskellige væv kan have forskellige proteinprofiler. Med hensyn til hUC-MSCs-Exos blandede dets komponenter sig ind i mange immunmodulerende aktiviteter ved at regulere komplementsystemet, mikrobiel infektion, NF-KB-signalering og så videre og påvirkede flere metaboliske signaler, såsom kolesterolmetabolisme, phospholipase D-metabolisme og purin metabolisme, hvilket giver resultater svarende til dem i tidligere rapporter [1, 59].

I denne undersøgelse sammenlignede vi proteomerne af tre typer exosomer parvis og analyserede yderligere deres eksklusive proteiner med hensyn til funktionelle veje og regulatoriske netværk. HiPSC'erne er en type pluripotente stamceller, der kan genereres ved at omprogrammere somatiske celler for at efterligne pluripotensen af ​​hESC'er [48], hvilket viser, at disse celler ligner til en vis grad. Selvom deres exosomproteiner var meget overlappende, blev de af hESC-Exos beriget i udviklingsregulering og cellecyklusfunktioner, hvilket indikerer, at hESC-Exos kan have en stærkere evne til at regulere pluripotens end hiPSC-Exos i vores undersøgelse. Pluripotensen af ​​hUC-MSC'er er ringere end hiPSC'er og hESC'er, som afspejlet af deres bemærkelsesværdigt forskellige proteinprofiler. Proteomet af hUC-MSC-Exos adskilte sig fra hESC-Exos og hiPSC-Exos i immunregulering, idet det var beriget med proteiner, der regulerer aktiviteterne af naturlige dræberceller og komplementsystemet. Desuden afslørede bioinformatik af proteinerne, der deles af de tre exosomtyper, at opreguleringen af ​​hESC-Exos- eller hiPSC-Exos-proteiner fokuserede mere på metabolisme, udvikling og celleproliferationsfunktioner ved at interferere med klassiske signalveje såsom AMPK, Wnt, mTOR og cellecyklussen. Til sammenligning blev de opregulerede proteiner af hUC-MSC-Exos ikke kun beriget i immunrelateret signalering, herunder komplementsystemet, mikrobiel infektion, NF-KB-signalering og B-cellereceptorsignalering, men også i metaboliske processer såsom PPAR-signalering. , kolesterolmetabolisme og MAPK-signalering.

Eksosomlast er af unik vævs- og cellulær oprindelse og indeholder miRNA'er [16]. Den nuværende undersøgelse viste også, at exosomer isoleret fra CM'er produceret in vitro af hESC'er, hiPSC'er og hUC-MSC'er indeholdt karakteristiske og specifikke miRNA-signaturer. Vi fandt ud af, at hver exosomal miRNA havde et unikt landskab. miRNA-ekspression og interaktion med 3' eller 5' UTR af deres målgener er involveret i komplekse fysiologiske og patofysiologiske aktiviteter[18]. De topbelastede miRNA'er af de tre exosomtyper regulerer en række biologiske processer, herunder cellecyklussen og Hippo, Wnt, AMPK og TGF-signalering. Imidlertid havde miRNA-profilerne for hUC-MSC-Exos en stærkere immunmodulerende evne end den for hESC-Exos eller hiPSC-Exos med hensyn til adfærden af ​​B- og T-celler samt TNF-, JAK-STAT- og NF-KB-signalering. Især var de fleste unikke miRNA-profiler knyttet til reguleringen af ​​autofagi, lang levetid, PI3K-Akt, mTOR, AMPK og p53-signalering, hvilket indikerer, at disse miRNA-klynger kan modulere aldring, ældningsrelaterede sygdomme, vævsreparation efter skade og metabolisme . De unikke miRNA'er fra hiPSC-Exos regulerer mTOR-signalering, cellulær ældning, retinolmetabolisme og TNF-signalering, som også bidrager til ældning og metabolismeregulering. Ud over mTOR-signalering og celleældning regulerer de unikke miRNA'er af hUC-MSC-Exos Foxo-, Jak-STAT- og NF-KB-signalering, hvilket kan bidrage til at ombygge det metaboliske og immune mikromiljø. Analysen af ​​delte miRNA'er blandt de tre exosomtyper understøttede yderligere disse forskelle i signalregulering. Samlet set koordinerede miRNA-klyngerne i hESC-Exos eller hiPSC-Exos forekomsten af ​​flere hændelser, såsom udvikling, cellecyklus og celledifferentiering. MiRNA-sættet af hiPSC-Exos ser ud til at spille en mindre vigtig rolle i disse funktioner end hESC-Exos, men en vigtigere rolle end hUCMSC-Exos. Hvad angår hUC-MSC-Exos, indikerer de fundne miRNA-profiler deres overlegne evne til at regulere immunmiljøet, især i sår- og infektionsheling.

I udviklingsbiologi fremmer exosomer afledt af pluripotente stamceller opretholdelsen af ​​den pluripotente tilstand. Derfor bidrager miRNA'er, der kommer ind i cellemikromiljøet, væsentligt til opretholdelsen af ​​stamness [4, 32]. De tre exosomtyper i denne undersøgelse indeholdt forskellige miRNA-klynger, der regulerer pluripotent signalering. Ikke desto mindre kan de 12 miRNA'er, der deles mellem de tre exosomtyper, være afgørende for pluripotensregulering, herunder miR- 21-5p, miR-92a-3p og miR-221-3p. Denne hypotese mangler at blive testet, og flere stamcelletyper skal undersøges. Derudover kan de overlappende miRNA'er mellem hESC-Exos og hiPSC-Exos være involveret i celledifferentiering og omprogrammering, som indikeret af resultaterne af mere detaljerede analyser. For eksempel var miR-302-familien stærkt beriget med og eksklusiv for hESC-Exos og hiPSC-Exos og bidrog i høj grad til at påvirke stamcelleadfærd ved at modulere omprogrammering [33, 50]. Dette punkt matcher indirekte tidligere forskning vedrørende det unikke ved miR-302 i ESC'er hos mennesker og mus [33, 50]. Ekspressionsanalyse af miRNA-klynger, der var stærkt udtrykt i ESC'er under den indledende fase af omprogrammeringen, afslørede induktionen af ​​miR-17 [41] og miR-106a/106b [37]. Overekspression af miR-93 fremmede en stigning i koloniantallet af iPSC'er [35].

Signalnetværket etableret af exosomlaster driver intracellulære hændelser og griber yderligere ind i en række patologiske og fysiologiske processer [3]. Eksosomerne af hESC'er indeholder adskillige ladede proteiner og miRNA'er, der forudsiges at regulere landskabet af udvikling, metabolisme og anti-aldring via blanding i AMPK, mTOR og Wnt signalveje og regulere autofagi, levetid og cellecyklus. Flere undersøgelser har fremhævet funktionerne af hESCEV'er til at forynge den aldrende hippocampus [25, 26], knoglemarv [19] og endotelceller [10], samt lindre tilbagevendende slidgigt ved at levere specifikke proteiner eller miRNA'er [58]. Vores resultater understøtter også tidligere forskning, hvor ESC-afledte EV'er viste sig at have positive implikationer til at genoprette nedsat kardiovaskulær funktion [5]. ESC-afledte EV'er gjorde det muligt at bevare stilheden af ​​ESC'er og var således i stand til at omprogrammere [4], hvilket er i overensstemmelse med vores resultater for hESC-Exos-laster. I vores undersøgelse havde hiPSC'er omprogrammeret fra navlestrengsceller biologiske funktioner svarende til hESC-Exos; dog har ingen rapporter specifikt understøttet denne teori. Til sammenligning har hUC-MSC-Exos fået mere opmærksomhed, og forskellige prækliniske og kliniske forsøg har klarlagt deres terapeutiske effekt på flere sygdomme [51]. Selvom hUC-MSC-Exos bidrager til vævsregenerering og vævsremodellering, er disse evner ringere end hESC-Exos og hiPSC-Exos. Vores analyse afslørede, at hUC-MSC-Exos udviste fremragende immunreguleringsevne. Disse resultater danner grundlag for yderligere forskning i inflammationsrelaterede sygdomme såsom COVID-19 [2].

Konklusioner

Samlet set er hESC-Exos fremragende til at regulere udvikling, metabolisme og anti-aldring, hiPSC-Exos har lignende biologiske funktioner, men er ringere end hESC-Exos. Til sammenligning bidrager hUC-MSC-Exos mere til immunregulering. Vores analyse udvider anvendelsesomfanget af hESC-Exos, hiPSC'er og hUC-MSC-Exos og fremhæver deres respektive fordele ved intervention af sygdomsrelateret signalering. Så vidt vi ved, er denne undersøgelse den første til at rapportere en systematisk og omfattende analyse af exosom proteomics og miRNA-profiler af hESC'er, hiPSC'er og hUC-MSC'er. Vores undersøgelse beriger yderligere de nuværende EV-databaser, hvilket letter udvindingen af ​​mere værdifulde data til identifikation af passende acellulære terapier i kliniske omgivelser. Disse exosomer henvender sig også til lægemiddeludvikling som et alternativt leveringssystem til at erstatte virusleveringssystemer som adenovirus [7]. Selvom de nuværende forudsigelser mangler væsentlig validering, kan disse resultater afsløre yderligere individuelle eller fælles anvendelser af de tre exosomer i præklinisk eller klinisk forskning. Desuden kan fremtidig forskning også udføres via den integrerede differentielle analyse af exosomlaster med elbiler såvel som af selve cellernes komponenter.

Forkortelser

MSC: Mesenkymal stamcelle; hESC'er: Humane embryonale stamceller; hiPSCs: Human-inducerede pluripotente stamceller; hUC-MSC'er: Humane navlestrengs mesenkymale stamceller; TMT: Tandem massemærke; LFQ: Label-fri relativ peptid kvantificering; hESC-Exos: Humane embryonale stamceller-afledte exosomer; hiPSC-Exos: Humane embryonale stamcelle-afledte exosomer; hUC-MSC-Exos: Humane navlestrengs mesenkymale stamcelle-afledte exosomer; EV'er: Ekstracellulære vesikler; MV'er: mikrovesikler; Alix: Apoptose-linket gen 2-interagerer protein X; TSG101: Tumorfølsomhedsgen 101; HFF'er: Humane forhudsfibroblaster; CAM'er: Celleadhæsionsmolekyler; TEM: Transmissionselektronmikroskopi; PDI: polydispersitet; TEAB: Tetraethylammoniumbromid; DEP'er: Differentielt udtrykte proteiner; FDR: Falske opdagelser.

Anerkendelser

Vi er Xueke Tan, Zhongshuang Lv og Xixia Li taknemmelige for at have hjulpet med forberedelse af elektronmikroskopiprøver og optagelse af TEM-billeder på Center for Biologisk Imaging (CBI), Institute of Biophysics, Chinese Academy of Science. Forfatterne takker også Dr. Baohua Zou fra Institute of Biophysics Chinese Academy of Sciences for hendes venlige hjælp til afgørende læsning og forslag.

Forfatterbidrag

YB, YZ og JG udtænkte og designede eksperimenterne. YB og XQ udførte exosom-isolering og identifikation. YB, XQ, QL, SS, KZ, XQ, XZ, CJ, HW og ZY bidrog til bioinformatikanalysen. YB, YZ og JG skrev papiret. Alle forfattere har læst og godkendt manuskriptet.

Finansiering

Dette arbejde blev støttet af tilskud fra National Key Research and Development Project (2019YFA0110400 til GJ), National Foundation of Sciences and Technology (31971051, 31771562 til GJ) og Dalian kommunale Dengfeng Clinical Medicine Grant Support (2021024 til YZ).

Tilgængelighed af data og materialer

Alle datasæt, der anvendes og/eller analyseres under den aktuelle undersøgelse, er tilgængelige fra den tilsvarende forfatter efter rimelig anmodning. Alle forfattere har bekræftet, at et citat for tilgængelige data i referencesektionen var inkluderet.

Erklæringer

Etisk godkendelse og samtykke til deltagelse

Forfatterne erklærer ingen potentiel interessekonflikt.

Samtykke til offentliggørelse

Ikke anvendelig.

Forfatterdetaljer

1 Key Laboratory of Interdisciplinary Research, Institute of Biophysics, Chinese Academy of Sciences, Beijing 100101, Kina. 2 University of Chinese Academy of Sciences, Beijing 100049, Kina. 3 Afdeling for medicinsk onkologi, det andet tilknyttede hospital ved Dalian Medical University, Dalian 116023, Kina. 4 Sjette afdeling for leversygdom, Dalian Public Health Clinical Center, Dalian Medical University, Dalian 116023, Kina.

Referencer

1. Abbaszadeh H, Ghorbani F, Derakhshani M, Movassaghpour A, Yousef M. Human navlestreng mesenchymal stamcelle-afledte ekstracellulære vesikler: et nyt terapeutisk paradigme. J Cell Physiol. 2020;235(2):706–17.

2. Abdelgawad M, Bakry NS, Farghali AA, Abdel-Latif A, Lotfy A. Mesenchymal stamcelle-baseret terapi og exosomer i COVID-19: aktuelle tendenser og udsigter. Stamcelle Res Ther. 2021;12(1):469.

3. Abels ER, Breakefeld XO. Introduktion til ekstracellulære vesikler: biogenese, RNA-lastudvælgelse, indhold, frigivelse og optagelse. Cell Mol Neurobiol. 2016;36(3):301–12.

4. Baumann K. EV'er fremmer stemness. Nat Rev Mol Cell Biol. 2021;22(2):72– 3.

5. Bei Y, Das S, Rodosthenous RS, Holvoet P, Vanhaverbeke M, Monteiro MC, Monteiro VVS, Radosinska J, Bartekova M, Jansen F, Li Q, Rajasingh J, Xiao J. Ekstracellulære vesikler i kardiovaskulære terapier. Teranostik. 2017;7(17):4168–82.

6. Bellingham SA, Coleman BM, Hill AF. Små RNA dyb sekventering afslører en distinkt miRNA signatur frigivet i exosomer fra prion-inficerede neuronale celler. Nucleic Acids Res. 2012;40(21):10937–49.

7. Bi Y, Gu L, Wang J, Chang Y, Jin M, Mao Y, Wang H, Ji G. Et nyt system til simpel hurtig adenoviral vektorkonstruktion for at lette CRISPR/Cas9--medieret genomredigering. CRISPR J. 2021;4(3):381–91.

8. Bi Y, Guo X, Zhang M, Zhu K, Shi C, Fan B, Wu Y, Yang Z, Ji G. Knoglemarv afledt-mesenchymal stamcelle forbedrer diabetes-associeret fedtlever via mitokondrier transformation i mus. Stamcelle Res Ther. 2021;12(1):602.

9. Bissels U, Wild S, Tomiuk S, Holste A, Hafner M, Tuschl T, Bosio A. Absolut kvantificering af mikroRNA'er ved brug af en universel reference. RNA. 2009;15(12):2375–84.

10. Chen B, Sun Y, Zhang J, Zhu Q, Yang Y, Niu X, Deng Z, Li Q, Wang Y. Eksosomer afledt af humane embryonale stamceller fremmer heling af tryksår hos gamle mus ved at forynge senescerende endotelceller. Stamcelle Res Ther. 2019;10(1):142.

11. Chen L, Xiang B, Wang X, Xiang C. Exosomer afledt af humane menstruationsblod-afledte stamceller lindrer fulminant leversvigt. Stamcelle Res Ther. 2017;8(1):9.

12. Chiang HR, Schoenfeld LW, Ruby JG, Auyeung VC, Spies N, Baek D, Johnston WK, Russ C, Luo S, Babiarz JE, Blelloch R, Schroth GP, Nusbaum C, Bartel DP. Pattedyrs mikroRNA'er: eksperimentel evaluering af nye og tidligere kommenterede gener. Genes Dev. 2010;24(10):992-1009.

13. Choi DS, Choi DY, Hong BS, Jang SC, Kim DK, Lee J, Kim YK, Kim KP, Gho YS. Kvantitativ proteomik af ekstracellulære vesikler afledt af humane primære og metastatiske kolorektale cancerceller. J Ekstracelle-vesikler. 2012.

14. Choi DS, Kim DK, Kim YK, Gho YS. Proteomik af ekstracellulære vesikler: exosomer og exosomer. Mass Spectrum Rev. 2015;34(4):474–90.

15. Colombo M, Moita C, van Niel G, Kowal J, Vigneron J, Benaroch P, Manel N, Moita LF, Théry C, Raposo G. Analyse af ESCRT-funktioner i exosom biogenese, sammensætning og sekretion fremhæver heterogeniteten af ​​ekstracellulære vesikler. J Cell Sci. 2013;126(Pt 24):5553-65.

16. Colombo M, Raposo G, Théry C. Biogenese, sekretion og intercellulære interaktioner af exosomer og andre ekstracellulære vesikler. Annu Rev Cell Dev Biol. 2014;30:255–89.

17. Dai J, Su Y, Zhong S, Cong L, Liu B, Yang J, Tao Y, He Z, Chen C, Jiang Y. Exosomes: nøglespillere i cancer og potentiel terapeutisk strategi. Signal Transduct Target Ther. 2020;5(1):145.

18. Gangaraju VK, Lin H. MicroRNAs: nøgleregulatorer af stamceller. Nat Rev Mol Cell Biol. 2009;10(2):116–25.

19. Gong L, Chen B, Zhang J, Sun Y, Yuan J, Niu X, Hu G, Chen Y, Xie Z, Deng Z, Li Q, Wang Y. Menneskelige ESC-sEV'er afhjælper aldersrelateret knogletab ved at forynge ældende knoglemarvs-afledte mesenkymale stamceller. J Ekstracelle-vesikler. 2020;9(1):1800971.

20. Haraszti RA, Didiot MC, Sapp E, Leszyk J, Shafer SA, Rockwell HE, Gao F, Narain NR, DiFiglia M, Kiebish MA, Aronin N, Khvorova A. Højopløselig proteomisk og lipidomisk analyse af exosomer og mikrovesikler fra forskellige cellekilder. J Ekstracelle-vesikler. 2016;5:32570.

21. He C, Zheng S, Luo Y, Wang B. Exosome theranostics: biologi og translationel medicin. Teranostik. 2018;8(1):237–55.

22. Hessvik NP, Llorente A. Aktuel viden om exosom biogenese og frigivelse. Cell Mol Life Sci. 2018;75(2):193-208.

23. Hinna A, Steiniger F, Hupfeld S, Stein P, Kuntsche J, Brandl M. Filterekstruderede liposomer genbesøgt: en undersøgelse af størrelsesfordelinger og morfologier om lipidsammensætning og procesparametre. J Liposome Res. 2016;26(1):11–20.

24. Hsu C, Morohashi Y, Yoshimura S, Manrique-Hoyos N, Jung S, Lauterbach MA, Bakhti M, Grønborg M, Möbius W, Rhee J, Barr FA, Simons M. Regulation of exosome secret by Rab35 and its GTPase- aktiverende proteiner TBC1D10A-C. J Cell Biol. 2010;189(2):223–32.

25. Hu G, Xia Y, Chen B, Zhang J, Gong L, Chen Y, Li Q, Wang Y, Deng Z. ESC-sEV'er forynger aldrende hippocampale NSC'er ved at overføre SMAD'er til at regulere MYT1-Egln{ {3}}Sirt1-akse. Mol Ther. 2021;29(1):103–20.

26. Hu G, Xia Y, Zhang J, Chen Y, Yuan J, Niu X, Zhao B, Li Q, Wang Y, Deng Z. ESC-sEV'er forynger ældende hippocampale NSC'er ved at aktivere lysosomer for at forbedre kognitiv dysfunktion ved vaskulær demens. Adva Sci. 2020;7(10):1903330.

27. Huang H, Xiong Q, Wang N, Chen R, Ren H, Siwko S, Han H, Liu M, Qian M, Du B. Kisspeptin/GPR54-signalering begrænser antiviralt medfødt immunrespons gennem regulering af calcineurin-phosphatase-aktivitet. Sci Adv. 2018;4(8):9784.

28. Kalra H, Simpson RJ, Ji H, Aikawa E, Altevogt P, Askenase P, Bond VC, Borràs FE, Breakefeld X, Budnik V, Buzas E, Camussi G, Clayton A, Cocucci E, Falcon-Perez JM, Gabrielsson S, Gho YS, Gupta D, Harsha HC, Hendrix A, Hill AF, Inal JM, Jenster G, Krämer-Albers EM, Lim SK, Llorente A, Lötvall J, Marcilla A, Mincheva-Nilsson L, Nazarenko I, Nieuwland R , Nolte-'t Hoen EN, Pandey A, Patel T, Piper MG, Pluchino S, Prasad TS, Rajendran L, Raposo G, Record M, Reid GE, Sánchez-Madrid F, Schifelers RM, Siljander P, Stensballe A, Stoorvogel W, Taylor D, Thery C, Valadi H, van Balkom BW, Vázquez J, Vidal M, Wauben MH, Yáñez-Mó M, Zoeller M, Mathivanan S. Vesiclepedia: et kompendium for ekstracellulære vesikler med kontinuerlig fællesskabsannotation. PLoS Biol. 2012;10(12): e1001450.

29. Kim DK, Kang B, Kim OY, Choi DS, Lee J, Kim SR, Go G, Yoon YJ, Kim JH, Jang SC, Park KS, Choi EJ, Kim KP, Desiderio DM, Kim YK, Lötvall J, Hwang D, Gho YS. Expedia: en integreret database med high-throughput data til systemiske analyser af ekstracellulære vesikler. J Ekstracelle-vesikler. 2013.

30. Kim KI, van de Wiel MA. Effekter af afhængighed i højdimensionelle multiple testproblemer. BMC Bioinf. 2008;9:114.

31. Kingham E, Orefo RO. Embryonale og inducerede pluripotente stamceller: forståelse, skabelse og udnyttelse af nano-nichen til regenerativ medicin. ACS Nano. 2013;7(3):1867–81.

32. La Greca A, Solari C, Furmento V, Lombardi A, Biani MC, Aban C, Moro L, García M, Guberman AS, Sevlever GE, Miriuka SG, Luzzani C. Ekstracellulære vesikler fra pluripotente stamcelle-afledte mesenkymale stamceller erhverve et stromalt modulatorisk proteomisk mønster under differentiering. Exp Mol Med. 2018;50(9):1–12.

33. Li HL, Wei JF, Fan LY, Wang SH, Zhu L, Li TP, Lin G, Sun Y, Sun ZJ, Ding J, Liang XL, Li J, Han Q, Zhao RC. miR-302 regulerer pluripotens, teratomdannelse og differentiering i stamceller via en AKT1/OCT4-afhængig måde. Celledød Dis. 2016;7(1): e2078.

34. Li P, Kaslan M, Lee SH, Yao J, Gao Z. Fremskridt i exosom isolationsteknikker. Teranostik. 2017;7(3):789-804.

35. Li Z, Yang CS, Nakashima K, Rana TM. Lille RNA-medieret regulering af iPS-cellegenerering. EMBO J. 2011;30(5):823–34.

36. Liang G, Zhang Y. Embryonal stamcelle og induceret pluripotent stamcelle: et epigenetisk perspektiv. Cell Res. 2013;23(1):49–69.

37. Lüningschrör P, Hauser S, Kaltschmidt B. Kaltschmidt C (2013) MikroRNA'er i pluripotens, omprogrammering og celleskæbneinduktion. Biochim Biophys Acta. 1833;8:1894-903.

38. Maas SLN, Breakefeld XO, Weaver AM. Ekstracellulære vesikler: unikke intercellulære leveringsbærere. Trends Cell Biol. 2017;27(3):172–88.

39. Martínez-Greene JA, Hernández-Ortega K, Quiroz-Baez R, ResendisAntonio O, Pichardo-Casas I, Sinclair DA, Budnik B, Hidalgo-Miranda A, Uribe-Querol E, Ramos-Godínez MDP, Martínez-Martínez Kvantitativ proteomisk analyse af ekstracellulære vesikelundergrupper isoleret ved en optimeret metode, der kombinerer polymerbaseret præcipitation og størrelsesudelukkelseskromatografi. J Ekstracelle-vesikler. 2021;10(6): e12087.

40. Mathieu M, Martin-Jaular L, Lavieu G, Théry C. Specificiteter af sekretion og optagelse af exosomer og andre ekstracellulære vesikler til celle-til-celle kommunikation. Nat Cell Biol. 2019;21(1):9–17.

41. Mogilyansky E, Rigoutsos I. miR-17/92-klyngen: en omfattende opdatering af dens genomik, genetik, funktioner og stadig vigtigere og talrige roller inden for sundhed og sygdom. Celledød er forskellig. 2013;20(12):1603–14.

42. Nguyen HQ, Lee D, Kim Y, Bang G, Cho K, Lee YS, Yeon JE, Lubman DM, Kim J. Label-fri kvantitativ proteomisk analyse af serum ekstracellulære vesikler, der differentierer patienter med alkoholiske og ikke-alkoholiske fedtleversygdomme. J Proteomics. 2021; 245: 104278.

43. Pittenger MF, Discher DE, Péault BM, Phinney DG, Hare JM, Caplan AI. Mesenkymalt stamcelleperspektiv: cellebiologi til klinisk fremskridt. NPJ Regen Med. 2019;4:22.

44. Pocsfalvi G, Stanly C, Vilasi A, Fiume I, Capasso G, Turiák L, Buzas EI, Vékey K. Massespektrometri af ekstracellulære vesikler. Massespektrum rev. 2016;35(1):3–21.

45. Questa M, Romorini L, Blüguermann C, Solari CM, Neiman G, Luzzani C, Scassa MÉ, Sevlever GE, Guberman AS, Miriuka SGa. Generering af iPSC-linjen iPSC-FH2.1 under hypoxiske tilstande fra humane forhudsfibroblaster. Stamcelle Res. 2016;16(2):300–3.

46. ​​Raposo G, Stoorvogel W. Ekstracellulære vesikler: exosomer, mikrovesikler og venner. J Cell Biol. 2013;200(4):373–83.

47. Ela S, Mäger I, Breakefeld XO, Wood MJ. Ekstracellulære vesikler: biologi og nye terapeutiske muligheder. Nat Rev Drug Discov. 2013;12(5):347–57.

48. Shi Y, Inoue H, Wu JC, Yamanaka S. Induceret pluripotent stamcelleteknologi: et årti med fremskridt. Nat Rev Drug Discov. 2017;16(2):115–

49. Skotland T, Sandvig K, Llorente A. Lipider i exosomer: Aktuel viden og vejen frem. Prog Lipid Res. 2017;66:30–41.

50. Subramanyam D, Lamouille S, Judson RL, Liu JY, Bucay N, Derynck R, Blelloch R. Flere mål for miR-302 og miR-372 fremmer omprogrammering af humane fibroblaster til inducerede pluripotente stamceller. Nat Biotechnol. 2011;29(5):443–8.

51. Tang Y, Zhou Y, Li HJ. Fremskridt i mesenkymale stamcelle-eksosomer: en gennemgang. Stamcelle Res Ther. 2021;12(1):71.

52. Théry C, Witwer KW, Aikawa E, Alcaraz MJ, Anderson JD, Andriantsitohaina R, Antoniou A, Arab T, Archer F, Atkin-Smith GK, Ayre DC, Bach JM, Bachurski D, Baharvand H, Balaj L, Baldacchino S, Bauer NN, Baxter AA, Bebawy M, Beckham C, Bedina Zavec A, Benmoussa A, Berardi AC, Bergese P, Bielska E, Blenkiron C, Bobis-Wozowicz S, Boilard E, Boireau W, Bongiovanni A, Borràs FE, Bosch S, Boulanger CM, Breakefeld X, Breglio AM, Brennan M, Brigstock DR, Brisson A, Broekman ML, Bromberg JF, Bryl-Górecka P, Buch S, Buck AH, Burger D, Busatto S, Buschmann D, Bussolati B, Buzás EI, Byrd JB, Camussi G, Carter DR, Caruso S, Chamley LW, Chang YT, Chen C, Chen S, Cheng L, Chin AR, Clayton A, Clerici SP, Cocks A, Cocucci E, Cofey RJ, Cordeiro- da-Silva A, Couch Y, Coumans FA, Coyle B, Crescitelli R, Criado MF, D'Souza-Schorey C, Das S, Datta Chaudhuri A, de Candia P, De Santana EF, De Wever O, Del Portillo HA, Demaret T, Deville S, Devitt A, Dhondt B, Di Vizio D, Dieterich LC, Dolo V, Dominguez Rubio AP, Dominici M, Dourado MR, Driedonks TA, Duarte FV, Duncan HM, Eichenberger RM, Ekström K, El Andaloussi S , Elie-Caille C, Erdbrügger U, Falcón-Pérez JM, Fatima F, Fish JE, Flores-Bellver M, Försönits A, FreletBarrand A, Fricke F, Fuhrmann G, Gabrielsson S, Gámez-Valero A, Gardiner C, Gärtner K , Gaudin R, Gho YS, Giebel B, Gilbert C, Gimona M, Giusti I, Goberdhan DC, Görgens A, Gorski SM, Greening DW, Gross JC, Gualerzi A, Gupta GN, Gustafson D, Handberg A, Haraszti RA, Harrison P, Hegyesi H, Hendrix A, Hill AF, Hochberg FH, Hofmann KF, Holder B, Holthofer H, Hosseinkhani B, Hu G, Huang Y, Huber V, Hunt S, Ibrahim AG, Ikezu T, Inal JM, Isin M, Ivanova A, Jackson HK, Jacobsen S, Jay SM, Jayachandran M, Jenster G, Jiang L, Johnson SM, Jones JC, Jong A, Jovanovic-Talisman T, Jung S, Kalluri R, Kano SI, Kaur S, Kawamura Y, Keller ET, Khamari D, Khomyakova E, Khvorova A, Kierulf P, Kim KP, Kislinger T, Klingeborn M, Klinke DJ, Kornek M, Kosanović MM, Kovács ÁF, Krämer-Albers EM, Krasemann S, Krause M, Kurochkin IV, Kusuma GD, Kuypers S, Laitinen S, Langevin SM, Languino LR, Lannigan J, Lässer C, Laurent LC, Lavieu G, Lázaro-Ibáñez E, Le Lay S, Lee MS, Lee YXF, Lemos DS, Lenassi M, Leszczynska A , Li IT, Liao K, Libregts SF, Ligeti E, Lim R, Lim SK, Linē A, Linnemannstöns K, Llorente A, Lombard CA, Lorenowicz MJ, Lörincz ÁM, Lötvall J, Lovett J, Lowry MC, Loyer X, Lu Q, Lukomska B, Lunavat TR, Maas SL, Malhi H, Marcilla A, Mariani J, Mariscal J, Martens-Uzunova ES, Martin-Jaular L, Martinez MC, Martins VR, Mathieu M, Mathivanan S, Maugeri M, McGinnis LK , McVey MJ, Meckes DG Jr, Meehan KL, Mertens I, Minciacchi VR, Möller A, Møller Jørgensen M, Morales-Kastresana A, Morhayim J, Mullier F, Muraca M, Musante L, Mussack V, Muth DC, Myburgh KH, Najrana T, Nawaz M, Nazarenko I, Nejsum P, Neri C, Neri T, Nieuwland R, Nimrichter L, Nolan JP, Nolte-'t Hoen EN, Noren Hooten N, O'Driscoll L, O'Grady T, O' Loghlen A, Ochiya T, Olivier M, Ortiz A, Ortiz LA, Osteikoetxea X, Østergaard O, Ostrowski M, Park J, Pegtel DM, Peinado H, Perut F, Pfaf MW, Phinney DG, Pieters BC, Pink RC, Pisetsky DS , Pogge von Strandmann E, Polakovicova I, Poon IK, Powell BH, Prada I, Pulliam L, Quesenberry P, Radeghieri A, Rafai RL, Raimondo S, Rak J, Ramirez MI, Raposo G, Rayyan MS, Regev-Rudzki N, Ricklefs FL, Robbins PD, Roberts DD, Rodrigues SC, Rohde E, Rome S, Rouschop KM, Rughetti A, Russell AE, Saá P, Sahoo S, Salas-Huenuleo E, Sánchez C, Saugstad JA, Saul MJ, Schifelers RM, Schneider R, Schøyen TH, Scott A, Shahaj E, Sharma S, Shatnyeva O, Shekari F, Shelke GV, Shetty AK, Shiba K, Siljander PR, Silva AM, Skowronek A, Snyder OL 2nd, Soares RP, Sódar BW, Soekmadji C, Sotillo J, Stahl PD, Stoorvogel W, Stott SL, Strasser EF, Swift S, Tahara H, Tewari M, Timms K, Tiwari S, Tixeira R, Tkach M, Toh WS, Tomasini R, Torrecilhas AC, Tosar JP, Toxavidis V, Urbanelli L, Vader P, van Balkom BW, van der Grein SG, Van Deun J, van Herwijnen MJ, Van Keuren-Jensen K, van Niel G, van Royen ME, van Wijnen AJ, Vasconcelos MH, Vechetti IJ Jr. , Veit TD, Vella LJ, Velot É, Verweij FJ, Vestad B, Viñas JL, Visnovitz T, Vukman KV, Wahlgren J, Watson DC, Wauben MH, Weaver A, Webber JP, Weber V, Wehman AM, Weiss DJ, Welsh JA, Wendt S, Wheelock AM, Wiener Z, Witte L, Wolfram J, Xagorari A, Xander P, Xu J, Yan X, YáñezMó M, Yin H, Yuana Y, Zappulli V, Zarubova J, Žėkas V, Zhang JY, Zhao Z, Zheng L, Zheutlin AR, Zickler AM, Zimmermann P, Zivkovic AM, Zocco D, Zuba-Surma EK. Minimal information til undersøgelser af ekstracellulære vesikler 2018 (MISEV2018): en holdningserklæring fra det internationale samfund for ekstracellulære vesikler og en opdatering af MISEV2014-retningslinjerne. J Ekstracelle-vesikler. 2018;7(1):1535750.

53. Théry C, Zitvogel L, Amigorena S. Exosomes: sammensætning, biogenese og funktion. Nat Rev Immunol. 2002;2(8):569-79.

54. Tosar JP, Gámbaro F, Sanguinetti J, Bonilla B, Witwer KW, Cayota A. Vurdering af små RNA-sortering i forskellige ekstracellulære fraktioner afsløret ved high-throughput-sekventering af brystcellelinjer. Nucleic Acids Res. 2015;43(11):5601–16.

55. Trajkovic K, Hsu C, Chiantia S, Rajendran L, Wenzel D, Wieland F, Schwille P, Brügger B, Simons M. Ceramid udløser knopskydning af exosom-vesikler til multivesikulære endosomer. Videnskab. 2008;319(5867):1244-7.

56. Vader P, Mol EA, Pasterkamp G, Schifelers RM. Ekstracellulære vesikler til lægemiddellevering. Adv Drug Deliv Rev. 2016;106(Pt A):148–56.

57. van Niel G, D'Angelo G, Raposo G. Belysning af ekstracellulære vesiklers cellebiologi. Nat Rev Mol Cell Biol. 2018;19(4):213–28.

58. Wang Y, Yu D, Liu Z, Zhou F, Dai J, Wu B, Zhou J, Heng BC, Zou XH, Ouyang H, Liu H. Exosomer fra embryonale mesenkymale stamceller lindrer slidgigt gennem afbalancering af syntese og nedbrydning af brusk ekstracellulær matrix. Stamcelle Res Ther. 2017;8(1):189.

59. Wang ZG, He ZY, Liang S, Yang Q, Cheng P, Chen AM. Omfattende proteomisk analyse af exosomer afledt af menneskelig knoglemarv, fedtvæv og mesenkymale navlestrengsstamceller. Stamcelle Res Ther. 2020;11(1):511.

60. Xie C, Mao X, Huang J, Ding Y, Jianmin W, Dong S, Kong L, Gao G, Li CY, Wei L. KOBAS 2.0: en webserver til annotering og identifikation af berigede veje og sygdomme. Nucleic Acids Res. 2011;39(suppl_2): W316–22.

61. Xu R, Rai A, Chen M, Suwakulsiri W, Greening DW, Simpson RJ. Ekstracellulære vesikler i kræft: implikationer for fremtidige forbedringer i kræftbehandling. Nat Rev Clin Oncol. 2018;15(10):617–38.

62. Yáñez-Mó M, Siljander PR, Andreu Z, Zavec AB, Borràs FE, Buzas EI, Buzas K, Casal E, Cappello F, Carvalho J, Colás E, Cordeiro-da Silva A, Fais S, Falcon-Perez JM , Ghobrial IM, Giebel B, Gimona M, Graner M, Gursel I, Gursel M, Heegaard NH, Hendrix A, Kierulf P, Kokubun K, Kosanovic M, Kralj-Iglic V, Krämer-Albers EM, Laitinen S, Lässer C, Lener T, Ligeti E, Linē A, Lipps G, Llorente A, Lötvall J, Manček-Keber M, Marcilla A, Mittelbrunn M, Nazarenko I, Nolte-'t Hoen EN, Nyman TA, O'Driscoll L, Olivan M, Oliveira C, Pállinger É, Del Portillo HA, Reventós J, Rigau M, Rohde E, Sammar M, Sánchez-Madrid F, Santarém N, Schallmoser K, Ostenfeld MS, Stoorvogel W, Stukelj R, Van der Grein SG, Vasconcelos MH, Wauben MH, De Wever O. Biologiske egenskaber af ekstracellulære vesikler og deres fysiologiske funktioner. J Ekstracelle-vesikler. 2015;4:27066.

Forlagets note

Springer Nature forbliver neutral i forhold til jurisdiktionskrav i offentliggjorte kort og institutionelle tilknytninger.

【For mere information:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】